一種三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生理生態(tài)學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及葉片氣孔觀察的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]葉片是植物進(jìn)行光合作用和蒸騰作用的主要器官，葉片光合作用所需要CO2是通過氣孔從大氣中進(jìn)人葉片內(nèi)部的。與此同時(shí)，植物體內(nèi)的水分通過葉片的蒸騰作用從氣孔散失到大氣中，因此，葉表皮氣孔的形態(tài)、數(shù)量以及分布與葉片的生理功能密切相關(guān)。另外，也與植物的生長環(huán)境密切相關(guān)。
[0003]在種質(zhì)資源的評(píng)價(jià)中，氣孔作為重要的植物學(xué)性狀之一，可作為觀察記載項(xiàng)目。氣孔是在自然選擇和人工選擇下保留下來的重要器官，具有較大的穩(wěn)定性，因而它可以用來研究植物的親緣關(guān)系、演化過程、生態(tài)型、染色體特性和地理起源。同屬不同種的植物間一般氣孔密度及氣孔長度的變化相對(duì)較小，而不同屬的植物則變化較大。氣孔密度、氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)目與倍性相關(guān)。由此可見，氣孔觀察方法的研究是植物學(xué)研究中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。
[0004]在植物研究中，經(jīng)常進(jìn)行葉片氣孔的觀察。而觀察的方法有多種，一是印模法，即用火棉膠涂到葉背面，使其形成一層薄膜，待膜干燥后用鑷子將其撕下，至于顯微鏡下進(jìn)行觀察。另一種方法是用鑷子直接將其背面的下表皮組織撕下，經(jīng)一定處理后即可進(jìn)行觀察。此外，還有吡啶溶液法，將葉片浸入吡啶溶液中，然后取出進(jìn)行觀察。以上幾種方法，在進(jìn)行三葉橡膠葉片氣孔觀察時(shí)，火棉膠印模法雖然可看到氣孔，但膜容易破碎且雨天不能進(jìn)行，橡膠葉的表皮往往花費(fèi)很長時(shí)間才能取下，浪費(fèi)人力時(shí)間。吡啶溶液法，雖然也能看到氣孔，但圖像不夠清晰，又不能進(jìn)行拍攝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與缺陷，本發(fā)明提供了一種在田間試驗(yàn)活體條件下，可以實(shí)現(xiàn)無損傷、大量取樣的研究橡膠樹氣孔特征的技術(shù)方法。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案:
一種三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，包括下列步驟:
O取樣；取下采樣葉片，并放入水中；
2)堿液處理；按照質(zhì)量比為1:1?2分別稱取氫氧化鈉和無水碳酸鈉，再將它們?nèi)谌胨兄瞥?°/『7.5%的堿液，待混合物溶解完畢，得到混合溶液，將混合溶液加熱至沸騰后將采樣葉片放入，繼續(xù)加熱，待表皮開始浮離，將采樣葉片撈起放入清水中；
3)觀察；用鑷子夾住經(jīng)過堿液處理的采樣葉片的下表皮在水中來回?cái)[動(dòng)或者用自來水沖洗，即得表皮薄膜，將表皮薄膜經(jīng)過染色處理后放在載玻璃上攤平，然后在顯微鏡下觀察氣孔。
[0007]對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，所述步驟(2)中繼續(xù)加熱的過程中，采樣葉片的葉色由綠轉(zhuǎn)黃，葉內(nèi)氣泡鼓起，10?15min后表皮開始浮離。
[0008]對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，所述表皮薄膜經(jīng)過以下步驟染色處理:
1)在醋酸洋紅中染色8?12min；
2)在70%酒精中浸0.5?2min ；
3)在90%酒精中浸0.5?2min ；
4)在無水酒精中浸0.5?2min ；
5)在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸I?2min ;
6)在正丁醇中浸0.5?2min。
[0009]對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，在堿液處理前將采樣葉片剪成1X2厘米大小。
[0010]對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，所述采樣葉片為向陽、生長正常的倒數(shù)第二蓬葉的中間葉片。
[0011]在堿液處理的加熱過程中，火力不可太猛，否則葉片上下翻滾過甚引起表皮脫落，分不清是上表皮還是下表皮，影響到工作效率。
[0012]所述表皮薄膜經(jīng)過染色處理使圖像更加清晰，便于拍攝。
[0013]本發(fā)明中若要制成永久片，則應(yīng)將表皮組織切成約0.5X0.5厘米的小塊，然后用正丁醇樹膠封片。封片注意勿使氣泡進(jìn)入，以免影響片的質(zhì)量。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
1.通過本發(fā)明方法處理的葉塊有多大，獲得的表皮就有多大，便于選擇最清晰的部位進(jìn)行觀察。
[0015]2.采用本發(fā)明方法不受到時(shí)間和天氣的限制，無論晴天、雨天以及上下午均可進(jìn)行，更加方便、靈活。
[0016]3.采用本發(fā)明方法可連續(xù)作業(yè)，提高工作效率，操作簡單，易于掌握。
[0017]4.本發(fā)明方法可以用于生物生態(tài)學(xué)、植物生理學(xué)、植物種質(zhì)資源學(xué)、育種學(xué)、栽培學(xué)等領(lǐng)域的研究與實(shí)踐，應(yīng)用廣泛靈活。
【附圖說明】
[0018]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1三葉橡膠樹氣孔觀察圖。
[0019]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2三葉橡膠樹(染色透明處理)氣孔觀察圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說明。
[0021]實(shí)例I
選取向陽面正常光合功能葉(第二蓬葉的中間葉片)，先用刀子取下功能葉片后，隨即插入水中。將葉片剪成1X2厘米大小，然后放入已沸騰堿液中，所述堿液為按照質(zhì)量比為I:1分別稱取氫氧化鈉和無水碳酸鈉，再將它們?nèi)谌胨兄瞥?%的堿液，繼續(xù)加熱lOmin，等表皮開始浮離后，將葉片撈起放入清水中，用鑷子夾住下表皮在水中來回?cái)[動(dòng)，取得一塊表皮薄膜，放在載玻片上攤平，在200倍顯微鏡上觀察。觀察結(jié)果如圖1所示。
[0022]實(shí)例2
與實(shí)施例1不同之處在于，所述在表皮薄膜觀察前先后在醋酸洋紅中染色lOmin、在70%酒精中浸lmin、在90%酒精中浸lmin、在無水酒精中浸lmin、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸Imin和在正丁醇中浸lmin。觀察結(jié)果如圖2所示。
[0023]實(shí)例3
與實(shí)施例1不同之處在于，所述堿液為按照質(zhì)量比為1:1分別稱取氫氧化鈉和無水碳酸鈉，再將它們?nèi)谌胨兄瞥?%的堿液。
[0024]實(shí)例4
與實(shí)施例2不同之處在于，所述所述堿液為按照質(zhì)量比為1:1.5分別稱取氫氧化鈉和無水碳酸鈉，再將它們?nèi)谌胨兄瞥?%的堿液，繼續(xù)加熱12min，等表皮開始浮離后，將葉片撈起放入清水中，用鑷子夾住下表皮在水中來回?cái)[動(dòng)，取得一塊表皮薄膜，然后將表皮薄膜先后在醋酸洋紅中染色8min、在70%酒精中浸1.5min、在90%酒精中浸1.5min、在無水酒精中浸1.5min、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸1.5min和在正丁醇中浸
1.5min后，放在載玻片上攤平，在200倍顯微鏡上觀察。
[0025]實(shí)例5
與實(shí)施例2不同之處在于，所述所述堿液為按照質(zhì)量比為1:2分別稱取氫氧化鈉和無水碳酸鈉，再將它們?nèi)谌胨兄瞥?.5%的堿液。繼續(xù)加熱14min，等表皮開始浮離后，將葉片撈起放入清水中，用鑷子夾住下表皮在水中來回?cái)[動(dòng)，取得一塊表皮薄膜，然后將表皮薄膜先后在醋酸洋紅中染色12min、在70%酒精中浸2min、在90%酒精中浸2min、在無水酒精中浸2min、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸2min和在正丁醇中浸2min后，放在載玻片上攤平，在200倍顯微鏡上觀察。
[0026]實(shí)例6
與實(shí)施例2不同之處在于，所述表皮薄膜觀察前先后在醋酸洋紅中染色12min、在70%酒精中浸2min、在90%酒精中浸2min、在無水酒精中浸2min、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸2min和在正丁醇中浸2min。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，其特征在于:包括下列步驟: (1)取樣；取下采樣葉片，并放入水中； (2)堿液處理；按照質(zhì)量比為1:1?2分別稱取氫氧化鈉和無水碳酸鈉，再將它們?nèi)谌胨兄瞥?°/『7.5%的堿液，待混合物溶解完畢，得到混合溶液，將混合溶液加熱至沸騰后將采樣葉片放入，繼續(xù)加熱，待表皮開始浮離，將采樣葉片撈起放入清水中； (3)觀察；用鑷子夾住經(jīng)過堿液處理的采樣葉片的下表皮在水中來回?cái)[動(dòng)或者用自來水沖洗，即得表皮薄膜，將表皮薄膜經(jīng)過染色處理后放在載玻璃上攤平，然后在顯微鏡下觀察氣孔。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，其特征在于:所述步驟(2)中繼續(xù)加熱的過程中，采樣葉片的葉色由綠轉(zhuǎn)黃，葉內(nèi)氣泡鼓起，10?15min后表皮開始浮離。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，其特征在于:所述表皮薄膜經(jīng)過以下步驟染色處理: (1)在醋酸洋紅中染色8?12min； (2)在70%酒精中浸0.5?2min ； (3)在90%酒精中浸0.5?2min ； (4)在無水酒精中浸0.5?2min ； (5)在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸I?2min ; (6)在正丁醇中浸0.5?2min。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，其特征在于:在堿液處理前將采樣葉片剪成1X2厘米大小。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，其特征在于:所述采樣葉片為向陽、生長正常的倒數(shù)第二蓬葉的中間葉片。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種三葉橡膠葉片氣孔觀察的方法，通過采樣、堿液處理、觀察等步驟可獲得較好的觀察樣本。通過本發(fā)明處理的葉塊有多大，獲得的表皮就有多大，便于選擇最清晰的部位進(jìn)行觀察。同時(shí)，不受到時(shí)間和天氣的限制，無論晴天、雨天以及上下午均可進(jìn)行。此外，此法可連續(xù)作業(yè)，提高工作效率，操作簡單，易于掌握?？梢杂糜谏锷鷳B(tài)學(xué)、植物生理學(xué)、植物種質(zhì)資源學(xué)、育種學(xué)、栽培學(xué)等領(lǐng)域的研究與實(shí)踐。
【IPC分類】G01N1/28, G01N21/84
【公開號(hào)】CN105067620
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510457298
【發(fā)明人】韋優(yōu), 周婧, 盧艷春, 楊志強(qiáng), 趙靜, 羅培四, 黃麗君, 王文林, 陸海生, 盧美瑛, 韋持章, 徐冬英, 蔣娟娟, 孔方南, 李文硯
【申請(qǐng)人】廣西南亞熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年7月30日