一種穩(wěn)定性強的肌酐苦味酸法檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設及一種穩(wěn)定性強的肌酢苦味酸法檢測試劑盒，屬于臨床體外檢測技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 肌酢（creatinine,Cre)是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，豐要由腎小球濾過排出體 夕F。當急、慢性腎小球腎炎等使腎小球濾過功能減退時，肌酢會在體內(nèi)蓄巧使血清肌醉的濃 度升高。檢測血清肌酢值升高時，表明腎臟代謝廢物的能力下降，對臨床檢測腎功能障礙患 者有極其重要的意義。
[0003] 肌酢的檢測方法主要分為2種，苦味酸法和酶法。苦味酸法雖然沒有酶法檢測的 精度高、線性范圍廣，但其檢測結(jié)果不影響臨床檢驗判斷、檢測成本比酶法低70%等優(yōu)點， 使其在中小型醫(yī)院仍是檢測肌酢的首選方法。
[0004] 目前，苦味酸法檢測肌酢的準確度已經(jīng)達到臨床檢測的要求，但試劑的穩(wěn)定性仍 然需要改進。其主要原因是由于R1的強堿體系不能夠持續(xù)。在開瓶實驗中，氨氧化鋼能夠 自發(fā)的吸收空氣中的二氧化碳，從而降低了體系的PH值，使測得的結(jié)果降低，影響了臨床 檢測判斷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性強的肌酢苦味酸檢測試 劑盒。
[0006] 本發(fā)明采用W下技術(shù)方案： 本發(fā)明的有益效果是： 1)本發(fā)明選擇使用了液體石蠟作為R1的液面保護劑，液體石蠟保證了R1中的氨氧化 鋼不能夠與空氣中的二氧化碳反應，提高了試劑的穩(wěn)定性。
[0007] 2)本發(fā)明試劑中添加了曲拉通-100,使液體石蠟能夠均勻平展的覆蓋在R1的表 面，使石蠟分布的更均勻。
[0008] 3)本發(fā)明中選取了新型的表面活性劑-壬基酪聚氧乙締醜，有效的控制了反應的 進度，從而保證了檢測結(jié)果的準確性。
【附圖說明】
[0009] 圖1是本發(fā)明實施例1-3與對照組7天37°C熱穩(wěn)定性試驗結(jié)果圖； 圖2是本發(fā)明實施例1-3與對照組15天試劑開瓶穩(wěn)定性試驗結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0010] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明。
[0011] 實施例1 一種穩(wěn)定性強的肌酢苦味酸法檢測試劑盒，所述試劑包括： R1 :氨氧化鋼 0. 32mol/L 碳酸鋼 0. 15mol/L 疊氮鋼 0. 5g/L 液體石蠟 100y1/L 曲拉通 100y1/L 將PH值調(diào)為13. 5; R2 :苦味酸 0. 04mol/L 王基驗塞氧乙締酸 0. 2g/L 將PH值調(diào)為5. 5。
[0012] 將上述各組分依次溶于1L蒸饋水中制備完成R1、R2。
[001引 實施例2 一種穩(wěn)定性強的肌酢苦味酸法檢測試劑盒，所述試劑包括： R1 :氨氧化鋼 0. 32mol/L 碳酸鋼 0. 15mol/L 疊氮鋼 0. 5g/L 曲拉通 100y1/L 將PH值調(diào)為13. 5; R2 :苦味酸 0. 04mol/L 王基驗塞氧乙締酸 0. 2g/L 將PH值調(diào)為5. 5。
[0014] 將上述各組分依次溶于1L蒸饋水中制備完成。
[001引實施例3 一種穩(wěn)定性強的肌酢苦味酸法檢測試劑盒，所述試劑包括： R1 :氨氧化鋼 0. 32mol/L 疊氮鋼 0. 5g/L 曲拉通 100y1/L 將PH值調(diào)為13. 5 ; R2 :苦味酸 0. 04mol/L 王基驗塞氧乙締酸 0. 2g/L 將PH值調(diào)為5. 5。
[0016] 將上述組分依次溶于1L蒸饋水中制備完成。
[0017] 將本發(fā)明實施例1-3所制得的試劑進行穩(wěn)定性試驗驗證。試驗分為15天開瓶穩(wěn) 定性驗證和7天37 °C熱穩(wěn)定性驗證試驗。
[0018] 試驗所用校準品和質(zhì)控品分別為： 校準品：朗道復合標準（909UN)，其中CREA的含量為135ymol/L。
[0019] 質(zhì)控品：朗道復合質(zhì)控（950UN)其中CREA的祀值為121ymol/L，祀值范圍： 96.7-145ymol/L。
[0020] 試劑穩(wěn)定性驗證試驗的具體操作方法： 將本發(fā)明實施例1-3中所得檢測試劑作為試驗組，取一種市售肌酢苦味酸法檢測試劑 盒（品牌：寧波美康，產(chǎn)品編號：H305)作為對照組，試驗組與對照組試劑每組各自取相同的 兩份，一份做15天開瓶穩(wěn)定性試驗，將試劑開瓶放置在儀器的2-8°C冷藏箱中（15天不取 出)，作為巧天開瓶穩(wěn)定性檢測；另一份做37〇C熱穩(wěn)定性檢測試驗，封閉放置在37〇C恒溫水 浴鍋中（每天僅在檢測的時候取出，檢測完畢后，依然封口放回37°C水浴鍋中，連續(xù)7天)， 作為7天37°C熱穩(wěn)定性驗證。將試劑同時在東芝-120全自動生化分析儀器上，按照如下 表1方法進行檢測，并在儀器上建立標準曲線。取朗道的凍干粉質(zhì)控品，溶解均勻后，各自 平均分成15份，-2(TC儲存，每天取值質(zhì)控各取一個，并且跟蹤檢測結(jié)果，其跟蹤監(jiān)測趨勢 如附圖1和附圖2。
首先在主波長505nm/輔助波長600皿下，讀取試劑R2加入后20s時的吸光度值A(chǔ)1，再 讀取R2加入后80s時的吸光度A2。計算肌酢的含量為： 肌酢的含量（ymol/L) = (AA測定/min~^AA標準/min)XC標準。
[002引通過附圖1和附圖2的比較可W看出，該試劑主要受開瓶的影響，而試劑的抗熱穩(wěn) 定性較強。試劑R1中加入碳酸鋼和液體石蠟后會明顯使試劑的穩(wěn)定性提高且新發(fā)明的試 劑優(yōu)于一般市場上現(xiàn)有的產(chǎn)品，有利于臨床推廣使用。運主要是由于本發(fā)明試劑中所加入 的液體石蠟起到了隔離空氣中二氧化碳的作用，另外試劑中也加入了碳酸鋼，使碳酸根離 子的濃度處于飽和狀態(tài)，運使試劑不能再吸收空氣中的二氧化碳。另外從附圖2中還可W 得到，液體石蠟在保持試劑的開瓶穩(wěn)定性中起了關(guān)鍵作用。
【主權(quán)項】
1. 一種穩(wěn)定性強的肌酐苦味酸法檢測試劑盒，由RU R2雙試劑組成 其特征在于： Rl :氫氧化鈉 0? 32 mol/L 碳酸鈉 0? 15 mol/L 疊氮鈉 0. 5 g/L 液體石錯 100 y 1/L 曲拉通 100 y 1/L 將PH值調(diào)為13. 25 ; R2 :苦味酸 0? 04 mol/L 千基酚聚氣乙燔醚 〇? 2 g/L 將PH值調(diào)為5. 5。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑Rl和試劑R2在使用時的比例 為 Rl:R2 = 200 :100。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定性強的肌酐苦味酸法檢測試劑盒，屬于臨床體外檢測技術(shù)領(lǐng)域。此肌酐苦味酸法檢測試劑盒，由R1、R2雙試劑組成。R1為：氫氧化鈉0.32mol/L，碳酸鈉0.15mol/L，疊氮鈉0.5g/L，液體石蠟100μl/L，曲拉通100μl/L，混勻后PH值調(diào)為13.25；R2為：苦味酸0.04mol/L，壬基酚聚氧乙烯醚0.2g/L，混勻后PH值調(diào)為5.5。本發(fā)明使用液體石蠟作為R1液面保護劑，提高試劑穩(wěn)定性。試劑中添加曲拉通-100，使液體石蠟能均勻覆蓋在R1表面，分布更均勻。選取新型表面活性劑-壬基酚聚氧乙烯醚，有效控制反應進度，保證檢測結(jié)果準確性。
【IPC分類】G01N21/31
【公開號】CN105115915
【申請?zhí)枴緾N201510426300
【發(fā)明人】甘宜梧, 趙民, 謝清華, 譚柏清, 趙新
【申請人】山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年7月20日