一種枸杞多糖的快速檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及用比色法測定來測試材料，尤其是一種枸杞多糖的快速檢測方法。
【背景技術】
[0002] 杞多糖是枸杞的主要有效成分，它是一種由酸性雜多糖與多肽或蛋白質(zhì)構(gòu)成的復 合多糖，其分子量大、結(jié)構(gòu)組成極為復雜，具有抗菌、抗腫瘤、抗衰老、保肝護肝的功效，同時 也是枸杞子降血糖、降血壓、降脂、抗炎等的活性物質(zhì)。
[0003] 枸杞多糖在枸杞子中含量為3~5%，水溶性良好，又不被樹脂吸附，所以工業(yè)生產(chǎn) 上枸杞多糖的富集和精制比較困難，而枸杞多糖又由于其提高免疫力和保健功效，價格遠 遠高于其它植物多糖產(chǎn)品，市場上出現(xiàn)了用淀粉、麥芽糊精或其它低價植物多糖冒充枸杞 多糖的現(xiàn)象。目前，對于枸杞多糖的檢測傳統(tǒng)采用硫酸蒽酮法，其是利用糖在濃硫酸作用 下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮 反應生成藍綠色糠醛衍生物，進行比色測定糖的含量，故可用于糖的定量。但是，其水解多 糖時間長達2h，不利于大批量檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有的硫酸蒽酮法檢測枸杞多糖存在水解多糖時間長、不利于大批量檢 測的不足，本發(fā)明提供一種多糖水解時間短、檢測速度快、利于大批量檢測的枸杞多糖的快 速檢測方法。
[0005] 本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案為：一種枸杞多糖的快速檢測方法，其 特征在于：其經(jīng)過下列工藝步驟： (1) 繪制標準曲線：準確吸取葡聚糖標準應用液〇. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00ml置比色 管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酚溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混勻，沸水浴2min，冷卻后用 分光光度計在485nm處測光密度值；以試劑空白為參比，以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐 標繪制標準曲線； (2) 多糖提?。悍Q取待測樣品1. 0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去離子水混勻，沸 水浴中加熱lh，冷卻至室溫后定容至200ml，混勾后過濾，收集濾液； (3) 乙醇沉淀多糖：將步驟（2)中得到的濾液置于燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻后加 入無水乙醇40ml，靜置15min，將溶液轉(zhuǎn)移至離心管中，離心，棄上清液，沉淀用80%乙醇洗 滌3次后供測定用； (4) 樣品測定：將步驟（3)中得到的沉淀用2. 0ml、1. 8mol/L硫酸溶解并定容至25ml ; 準確吸取1. 〇ml置于比色管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酸溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混 勻，沸水浴2min，冷卻后在分光光度計上在485nm處測光密度值，以公式
進行計算，得枸杞多糖含量； 其中：在計算公式中， X -試樣中枸杞多糖含量，g/lOOg ; \ 一樣品提取時定容體積，ml ; V2-提取多糖物質(zhì)取液量，ml ; C 一從標準曲線上查的樣品測定管中葡聚糖含量，mg; V3 -測定葡聚糖定容體積，ml ; V4 -樣品比色管取樣液體積，ml ; m -試樣質(zhì)量，g。 所述的離心管的轉(zhuǎn)速控制為3500rpm，離心時間5min。
[0006] 本發(fā)明的檢測方法中，先是利用水提醇沉法提取多糖物質(zhì)，再與苯酚-硫酸反應 生成有色物質(zhì)進行比色測定含量，與傳統(tǒng)方法比較，本發(fā)明利用乙醇沉淀多糖物質(zhì)將檢測 時間從2h減少到lh，本方法縮短了樣品水解時間，提高了實驗效率，利于大批量檢測。
【附圖說明】
[0007] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0008] 圖1是本發(fā)明不同水解時間對枸杞多糖含量測定結(jié)果的影響曲線圖。
【具體實施方式】 實施例
[0009] 一種枸杞多糖的快速檢測方法，其經(jīng)過下列工藝步驟： (1) 繪制標準曲線：準確吸取葡聚糖標準應用液0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00ml置比色 管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酚溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混勻，沸水浴2min，冷卻后用 分光光度計在485nm處測光密度值；以試劑空白為參比，以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐 標繪制標準曲線； (2) 多糖提?。悍Q取待測樣品1. 0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去離子水混勻，沸 水浴中加熱lh，冷卻至室溫后定容至200ml，混勾后過濾，收集濾液； (3) 乙醇沉淀多糖：將步驟（1)中得到的濾液置于燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻后加 入無水乙醇40ml，靜置15min，將溶液轉(zhuǎn)移至離心管中，控制離心管的轉(zhuǎn)速為3500rpm，離心 時間5min，棄上清液，沉淀用80%乙醇洗滌3次后供測定用； (4) 樣品測定：將步驟（2)中得到的沉淀用2. 0ml、1. 8mol/L硫酸溶解并定容至25ml ; 準確吸取1. 〇ml置于比色管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酸溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混 勻，沸水浴2min，冷卻后在分光光度計上在485nm處測光密度值，以公式
進行計算，得枸杞多糖含量；其中， 在計算公式中， X -試樣中枸杞多糖含量，g/l〇〇g ; \ 一樣品提取時定容體積，ml ; V2-提取多糖物質(zhì)取液量，ml ; C 一從標準曲線上查的樣品測定管中葡聚糖含量，mg; v3 -測定葡聚糖定容體積，ml ; V4 -樣品比色管取樣液體積，ml ; m -試樣質(zhì)量，g。 本發(fā)明在多糖提取時，不同水解時間對枸杞多糖含量測定結(jié)果的影響如下表：
其多糖提取時，不同水解時間對枸杞多糖含量測定結(jié)果的影響曲線，如圖1所示。
[0010] 由圖1及附表結(jié)果可知，沸水浴提取多糖的時間0. 5h與2. Oh結(jié)果相差較大，而 1. 0h，1. 5h和2. Oh結(jié)果相差很小，為節(jié)省時間，選擇1. Oh水解時間。
[0011] 本發(fā)明克服了硫酸蒽酮法檢測枸杞多糖水解時長的問題，縮短檢測時間，利于大 批量檢測。
【主權(quán)項】
1. 一種枸杞多糖的快速檢測方法，其特征在于：其經(jīng)過下列工藝步驟： (1) 繪制標準曲線：準確吸取葡聚糖標準應用液0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. OOml置比色 管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酚溶液I. 0ml，濃硫酸IOml混勻，沸水浴2min，冷卻后用 分光光度計在485nm處測光密度值；以試劑空白為參比，以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐 標繪制標準曲線； (2) 多糖提取：稱取待測樣品1.0 g置于200ml容量瓶中，加入100mL去離子水混勻，沸 水浴中加熱lh，冷卻至室溫后定容至200ml，混勾后過濾，收集濾液； (3) 乙醇沉淀多糖：將步驟（2)中得到的濾液置于燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻后加 入無水乙醇40ml，靜置15min，將溶液轉(zhuǎn)移至離心管中，離心，棄上清液，沉淀用80%乙醇洗 滌3次后供測定用； (4) 樣品測定：將步驟（3)中得到的沉淀用2. 0ml、I. 8mol/L硫酸溶解并定容至25ml ; 準確吸取1.0 ml置于比色管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酸溶液I. 0ml，濃硫酸IOml混 勻，沸水浴2min，冷卻后在分光光度計上在485nm處測光密度值，以公式進行計算，得枸杞多糖含量； 其中：在計算公式中， X -試樣中枸杞多糖含量，g/l〇〇g ; V1 一樣品提取時定容體積，ml ; V2-提取多糖物質(zhì)取液量，ml ; C 一從標準曲線上查的樣品測定管中葡聚糖含量，mg; V3 -測定葡聚糖定容體積，ml ; V4 -樣品比色管取樣液體積，ml ; m -試樣質(zhì)量，g。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枸杞多糖的快速檢測方法，其特征在于：所述的離心管 的轉(zhuǎn)速控制為3500rpm，離心時間5min。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種枸杞多糖的快速檢測方法。其主要解決現(xiàn)有硫酸蒽酮法檢測枸杞多糖存在水解多糖時間長的問題。其經(jīng)過下列工藝步驟：吸取葡聚糖標準應用液補水，加入苯酚溶液、濃硫酸混勻，沸水浴，冷卻后在485nm處以試劑空白溶液為對照繪制標準曲線；待測樣品沸水浴水解并定容，過濾，收集濾液；濾液加熱濃縮，冷卻后加入無水乙醇，靜置，離心，沉淀加入乙醇洗滌后供測定；沉淀用硫酸溶解并定容；吸取樣品補水，加入苯酚溶液、濃硫酸混勻，沸水浴，冷卻后在485nm處測光密度值，計算得出枸杞多糖含量。本發(fā)明的方法水解時間縮短，檢測效率高，利于大批量檢測。
【IPC分類】G01N21/78, G01N21/31
【公開號】CN105352952
【申請?zhí)枴緾N201510819156
【發(fā)明人】王麗娜, 侯進森, 張偉
【申請人】威海百合生物技術股份有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月23日