一種利用超高效合相色譜快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用超高效合相色譜快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯的方法，屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，其特征在于：手性乳酸乙酯包括L?乳酸乙酯和D?乳酸乙酯；酒樣經(jīng)乙酸乙酯萃取后，使用氮?dú)獯蹈?，用甲醇溶解，采取ACQUITY UPC2Trefoil CEL1,2.5μm專用手性色譜柱為分離柱，以二氧化碳(A)+甲醇(B)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；樣品經(jīng)超高效合相色譜(UPC2)分離后，采用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單快捷，能夠準(zhǔn)確地對(duì)白酒中的乳酸乙酯進(jìn)行定性、定量，為白酒中兩種手性乳酸乙酯的準(zhǔn)確判定、快速檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。
【專利說(shuō)明】
一種利用超高效合相色譜快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯的 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種利用超高效合相色譜串接二極管陣列 檢測(cè)器同時(shí)快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯（L-乳酸乙酯，D-乳酸乙酯）的方法，屬于分析技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著分析檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，特別是高效毛細(xì)管氣相色譜、液相色譜以及氣質(zhì)、 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，結(jié)合白酒的感官品嘗、探明白酒中骨架成分的種類以及含量， 研究其組成特點(diǎn)，有可能逐步揭開各類名酒"獨(dú)特風(fēng)味"的奧秘。眾多研究人員在試圖努力 采用最新技術(shù)去識(shí)別未曾認(rèn)識(shí)的白酒中微量成分甚至痕量成分，以對(duì)白酒的風(fēng)格特色做出 判定區(qū)別。
[0003] 乳酸乙酯是白酒中的骨架成分，在白酒4大酯中是比較重要的一種，含量較高，約 為40-200mg/100mL，它與己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯以及苯乙醇構(gòu)成濃香、醬香、米香 以及兼香型白酒的主體香氣成分。在濃香型白酒中要求降低乳酸乙酯的含量，但含量過(guò)低， 酒味寡淡;含量過(guò)高則增加酒的澀味。從分子結(jié)構(gòu)來(lái)看，乳酸乙酯含有一個(gè)手性碳原子，存 在一對(duì)手性對(duì)映體即L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯。手性對(duì)應(yīng)體化合物具有相同的分子式，分 子之間原子連接的順序也完全相同，只是分子中原子在空間中的排列順序不同。對(duì)映體的 物理性質(zhì)以及化學(xué)性質(zhì)也相同，但是最重要的特點(diǎn)是生理效能表現(xiàn)不同，例如左旋煙堿比 右旋煙堿的毒性更大。在白酒中，L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯可能會(huì)引起不同的感官反應(yīng)，在 白酒風(fēng)味和口感方面起著非常重要的作用。因此，研究白酒中L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯的 含量及比例非常重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種利用超高效合相色譜儀串接二極管陣列檢測(cè)器同時(shí) 快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯(L-乳酸乙酯，D-乳酸乙酯）的方法，旨在實(shí)現(xiàn)白酒中手性乳 酸乙酯檢測(cè)的準(zhǔn)確判定、快速檢測(cè)。
[0005] 本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明利用超高效合相色譜同時(shí)快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯的方法，其特點(diǎn)在 于：
[0007] 所述手性乳酸乙酯包括L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯；
[0008] 所用儀器為:配有二極管陣列檢測(cè)器的超高效合相色譜儀，ACQUITY UPC2Trefoil CEL1，2.5mi色譜柱(纖維素3-(3,5_二甲基苯基氨基甲酸酯））；渦旋儀;移液槍；
[0009] 所述方法包括如下步驟：
[0010] (1)對(duì)待測(cè)白酒酒樣進(jìn)行前處理：
[0011] 移取5mL待測(cè)白酒酒樣于10mL比色管中，加入2mL乙酸乙酯，禍旋lmin，移取上層溶 液吹干，使用2mL甲醇溶解，注入2mL樣品瓶，待進(jìn)樣；
[0012] (2)設(shè)定超高效合相色譜儀的條件為：
[0013] 色譜柱:ACQUITY UPC2Trefoil CEL1，2.5_色譜柱(纖維素3-(3,5_二甲基苯基氨 基甲酸酯））；柱溫為30~50°C;
[0014] 樣品室溫度：10~20°C
[0015] 流動(dòng)相:A相為二氧化碳，B相為甲醇;流速為2~3mL/min;洗脫方式為梯度洗脫;進(jìn) 樣量為1~5此;檢測(cè)所用時(shí)間為5min;ABPR壓力為1885~2200psi;梯度洗脫的具體步驟為： 初始時(shí)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比為98% :2% ;由Omin到3.0min這一時(shí)間段內(nèi)，流動(dòng) 相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比從98% :2%逐漸變化為96% :4% ;由3min到4.0min這一時(shí)間段 內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比從96% :4%逐漸變化為95% :5% ;由4.0min到5.0min 這一時(shí)間段內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比從95% :5%逐漸變化為98% :2%。梯度洗 脫各時(shí)間的的變化曲線均選擇所用儀器中的曲線6。
[0016]二極管陣列檢測(cè)器PDA的條件設(shè)定為：
[0017] 3D 通道為 200nm-410nm;
[0018] 分離度為1.2~2. Onm;
[0019]采樣速率為20~50點(diǎn)/秒 [0020] (3)待測(cè)白酒酒樣的檢測(cè)
[0021]將待測(cè)白酒酒樣按步驟（1)的方式進(jìn)行前處理后，按步驟(2)的條件作UPC2檢測(cè)，， 采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定，用保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性與定量。具體方式為：
[0022] (31)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0023] 取L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯配制質(zhì)量濃度范圍在12.5~300yg/L的混合系列標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液，然后按照（2)所設(shè)定的條件取1.5mL各標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，作超高效合相色譜檢 測(cè)，以待測(cè)物的峰面積對(duì)其所相應(yīng)的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，獲得兩種手性乳酸乙酯的線 性回歸方程，各線性回歸方程所對(duì)應(yīng)的曲線，即為相應(yīng)手性乳酸乙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0024] 具體的，兩種手性乳酸乙酯對(duì)應(yīng)的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2見表1。
[0025] 表1:兩種乳酸乙酯的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限
[0027] (32)待測(cè)白酒酒樣的檢測(cè)
[0028] 將待測(cè)白酒酒樣按步驟（1)的方式進(jìn)行前處理后，取1.5mL按步驟（2)的條件作 UPC2檢測(cè)，通過(guò)使用3D波長(zhǎng)掃描，獲得待測(cè)樣品的色譜圖，對(duì)待測(cè)白酒酒樣根據(jù)保留時(shí)間進(jìn) 行定性分析，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)白酒酒樣進(jìn)行定量分析。
[0029] 對(duì)本發(fā)明方法作如下靈敏度測(cè)試：靈敏度測(cè)試包括儀器的靈敏度與方法的靈敏 度，儀器的靈敏度用儀器的檢出限表示，取信噪比多3的手性乳酸乙酯的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的最 小濃度為儀器檢出限;方法的靈敏度用方法的定量限表示，取信噪比多6的手性乳酸乙酯混 合標(biāo)準(zhǔn)溶液的最小濃度為方法定量限。所得的相關(guān)數(shù)據(jù)見表1。
[0030] 對(duì)本發(fā)明方法作如下準(zhǔn)確性及重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn):選用同一個(gè)白酒樣品經(jīng)前處理后作為 空白樣品，分為3份，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收率;選取1個(gè)白 酒樣品按照同一前處理方法處理6個(gè)，分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過(guò)計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)的范 圍來(lái)判斷分析方法的重現(xiàn)性。方法的準(zhǔn)確性用回收率來(lái)表示，見表2;方法的重現(xiàn)性用相對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)來(lái)表示，見表3?？梢钥闯龌厥章试?0~120%，RSD〈 10%。
[0031] 表2:兩種乳酸乙酯的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)
[0033]表3:兩種乳酸乙酯的重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)
[0035]本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)如下：
[0036] 1、本發(fā)明建立了一種利用超高效合相色譜串接二極管陣列檢測(cè)器同時(shí)快速檢測(cè) 白酒中手性乳酸乙酯的方法，能夠準(zhǔn)確地對(duì)白酒中的乳酸乙酯進(jìn)行定性、定量，為白酒中兩 種手性乳酸乙酯的準(zhǔn)確判定、快速檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。
[0037] 2、本發(fā)明超高效合相色譜串接二極管陣列檢測(cè)器操作簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確可靠、重復(fù) 性好。
[0038] 3、本發(fā)明專用手性柱ACQUITY UPC2Trefoil CEL1，2.5_(纖維素3-(3,5_二甲基 苯基氨基甲酸酯））與C02+甲醇流動(dòng)相的選擇對(duì)白酒中兩種手性乳酸乙酯的分離達(dá)到了優(yōu) 異的分離效果。
[0039] 4、本發(fā)明的前處理操作步驟少，從而降低了實(shí)驗(yàn)誤差并提高了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
[0040] 5、本發(fā)明的檢測(cè)方法是一項(xiàng)環(huán)保的"綠色"技術(shù)。分析中采用的主要流動(dòng)相二氧化 碳來(lái)自于其它工業(yè)釋放的回收二氧化碳，實(shí)驗(yàn)中的使用二氧化碳不會(huì)再產(chǎn)生新的溫室氣 體。使用此方法時(shí)，每次進(jìn)樣所消耗的改性劑（甲醇)僅為〇. 9mL，與同類檢測(cè)方法相比，降低 了95%的有機(jī)溶劑使用量。
[0041] 6、本發(fā)明通過(guò)減少實(shí)驗(yàn)室消耗品的使用，進(jìn)而可以節(jié)約成本。
【附圖說(shuō)明】
[0042]圖1為濃度為12.5yg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0043] 為闡明對(duì)本發(fā)明的理解，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。
[0044] 本實(shí)施例按如下步驟對(duì)白酒中的手性乳酸乙酯進(jìn)行檢測(cè)：
[0045] 所用儀器為:配有二極管陣列檢測(cè)器的超高效合相色譜儀，ACQUITY UPC2Trefoil CEL1，2.5mi色譜柱(纖維素3-(3,5_二甲基苯基氨基甲酸酯））；渦旋儀;移液槍；
[0046] 具體步驟為：
[0047] (1)對(duì)待測(cè)白酒酒樣進(jìn)行前處理：
[0048] 移取5mL待測(cè)白酒酒樣于10mL比色管中，加入2mL乙酸乙酯，渦旋lmin，移取上層溶 液吹干，使用2mL甲醇溶解，注入2mL樣品瓶，待進(jìn)樣；
[0049] (2)設(shè)定超高效合相色譜儀的條件為：
[0050] 色譜柱:ACQUITY UPC2Trefoil CELl，2.5wii色譜柱，色譜柱填料為纖維素3-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）；柱溫為45 °C ;
[0051 ] 樣品室溫度：15°C
[0052]流動(dòng)相:A相為二氧化碳，B相為甲醇;流速為2.5mL/min;洗脫方式為梯度洗脫;進(jìn) 樣量為2此;檢測(cè)所用時(shí)間為5min; ABPR壓力為2000psi ;梯度洗脫的具體步驟為:初始時(shí)，流 動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比為98% :2% ;由Omin到3.Omin這一時(shí)間段內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng) 相B的體積分?jǐn)?shù)比從98% :2%逐漸變化為96% :4% ;由3min到4.0min這一時(shí)間段內(nèi)，流動(dòng)相 A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比從96% :4%逐漸變化為95% :5% ;由4.0min到5.0min這一時(shí)間段 內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比從95% :5%逐漸變化為98% :2%。梯度洗脫各階段的 變化曲線均選擇所用儀器中的曲線6。
[0053]二極管陣列檢測(cè)器PDA的條件設(shè)定為：
[0054] 3D 通道為 200nm-410nm;
[0055] 分離度為1.8nm;
[0056]采樣速率為20點(diǎn)/秒；
[0057] (31)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0058] 取L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯配制質(zhì)量濃度為12.5yg/L、50yg/L、100yg/L、200yg/ L、300iig/L的混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，然后按照（2)所設(shè)定的條件取1.5mL各標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 進(jìn)樣，作超高效合相色譜檢測(cè)（12.5yg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的譜圖如圖1所示），以待測(cè)物的峰面 積對(duì)其所相應(yīng)的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，獲得兩種手性乳酸乙酯的線性回歸方程，各線性 回歸方程所對(duì)應(yīng)的曲線，即為相應(yīng)手性乳酸乙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線；L-乳酸乙酯的出峰時(shí)間為 1.24min;D_乳酸乙酯的出峰時(shí)間為1.58min。
[0059] (32)待測(cè)白酒酒樣的檢測(cè)
[0060] 將待測(cè)白酒酒樣按步驟（1)的方式進(jìn)行前處理后，取1.5mL按步驟（2)的條件作 UPC2檢測(cè)，通過(guò)使用3D波長(zhǎng)掃描，獲得待測(cè)樣品的色譜圖，對(duì)待測(cè)白酒酒樣根據(jù)保留時(shí)間進(jìn) 行定性分析，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)白酒酒樣進(jìn)行定量分析。
[0061] 計(jì)算出L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯的含量之比并進(jìn)行分析，可以獲得兩者之比的大 小與白酒風(fēng)味口感的關(guān)系。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用超高效合相色譜快速檢測(cè)白酒中手性乳酸乙酯的方法，其特征在于： 所述手性乳酸乙酯包括L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯； 所用儀器為:配有二極管陣列檢測(cè)器的超高效合相色譜儀;渦旋儀;移液槍； 所述方法包括如下步驟： (1) 對(duì)待測(cè)白酒酒樣進(jìn)行前處理： 移取5mL待測(cè)白酒酒樣于IOmL比色管中，加入2mL乙酸乙酯，渦旋Imin，移取上層溶液吹 干，使用2mL甲醇溶解，注入2mL樣品瓶，待進(jìn)樣； (2) 設(shè)定超高效合相色譜儀的條件為： 色譜柱:ACQUITY UPC2 Trefoil CELl，2·5μπι色譜柱，色譜柱填料為纖維素3-(3,5-二 甲基苯基氨基甲酸酯）；柱溫為30~50°C ; 樣品室溫度：10~20 °C 流動(dòng)相:A相為二氧化碳，B相為甲醇;流速為2~3mL/min;洗脫方式為梯度洗脫;進(jìn)樣量 為1~5yL;檢測(cè)所用時(shí)間為5min;ABPR壓力為1885~2200psi; 二極管陣列檢測(cè)器PDA的條件設(shè)定為： 3D 通道為 200nm-410nm; 分離度為1.2~2.Onm; 采樣速率為20~50點(diǎn)/秒； (3) 待測(cè)白酒酒樣的檢測(cè) 將待測(cè)白酒酒樣按步驟（1)的方式進(jìn)行前處理后，按步驟(2)的條件作UPC2檢測(cè)，，采用 外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定，用保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性與定量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)中所述的梯度洗脫的方法為： 初始時(shí)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比為98% :2% ;由Omin到3.Omin，流動(dòng)相A和流 動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)比從98% :2%逐漸變化為96% :4% ;由3min到4.Omin，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B 的體積分?jǐn)?shù)比從96 % : 4%逐漸變化為95 % : 5 % ;由4. Omin到5. Omin，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的 體積分?jǐn)?shù)比從95 % : 5 %逐漸變化為98 % : 2 %。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)的具體方式為： (31) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取L-乳酸乙酯和D-乳酸乙酯配制質(zhì)量濃度范圍在12.5~300yg//L的混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作 溶液，然后按照(2)所設(shè)定的條件取1.5mL各標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，作超高效合相色譜檢測(cè)，以 待測(cè)物的峰面積對(duì)其所相應(yīng)的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，獲得兩種手性乳酸乙酯的線性回歸 方程，各線性回歸方程所對(duì)應(yīng)的曲線，即為相應(yīng)手性乳酸乙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線； (32) 待測(cè)白酒酒樣的檢測(cè) 將待測(cè)白酒酒樣按步驟（1)的方式進(jìn)行前處理后，取1.5mL按步驟（2)的條件作UPC2檢 測(cè)，通過(guò)使用3D波長(zhǎng)掃描，獲得待測(cè)樣品的色譜圖，對(duì)待測(cè)白酒酒樣根據(jù)保留時(shí)間進(jìn)行定性 分析，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)白酒酒樣進(jìn)行定量分析。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105891375SQ201610447206
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年6月17日
【發(fā)明人】王銀輝, 湯有宏, 劉國(guó)英, 沈小梅, 馬雷
【申請(qǐng)人】安徽瑞思威爾科技有限公司