一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的hplc測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的HPLC測(cè)定方法，屬于HPLC（高效液相色譜）分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明方法采用固相萃取凈化技術(shù)進(jìn)行樣品前處理，降低了基質(zhì)干擾，同時(shí)結(jié)合高靈敏度的HPLC（高效液相色譜）方法測(cè)定土壤、玉米、玉米植株三種不同基質(zhì)中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的含量。本發(fā)明檢測(cè)線性范圍為0.01～10ug/mL；檢出限0.01ug/L，定量限0.05ug/L。平均回收率81.1～103.3%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.3％～2.3％，具有操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的HPLC測(cè)定方法簡(jiǎn)便、靈敏、選擇性高，可為農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)測(cè)和環(huán)境行為評(píng)價(jià)提供科學(xué)的技術(shù)手段。
【專利說明】
-種±壤、玉米及玉米植株中氯氣郵氧乙酸異辛醋及氯氣口比 氧乙酸的HPLC測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的測(cè)定方法，更具體地設(shè)及 一種±壤、玉米及玉米植株中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的HPLC(高效液相色譜） 測(cè)定方法，屬于HPLC(高效液相色譜)分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氯氣化氧乙酸異辛醋及其代謝物氯氣化氧乙酸，是由美國(guó)陶氏益農(nóng)公司（Dow Agro Sciences Company)開發(fā)生產(chǎn)的有機(jī)雜環(huán)類選擇性內(nèi)吸傳導(dǎo)型苗后除草劑，適用于防 除小麥、大麥、玉米等禾本科作物田中各種闊葉雜草，施藥后可W很快被植物吸收，使敏感 植物出現(xiàn)典型激素類除草劑的反應(yīng)，植株崎形、扭曲，最終枯死，對(duì)小麥、大麥、元麥、玉米田 間及果園等多種一年生或多年生闊葉雜草有較好的防除效果，現(xiàn)已國(guó)產(chǎn)化。根據(jù)我國(guó) GB2673-2014氯氣化氧乙酸異辛醋及其代謝物氯氣化氧乙酸在玉米中的最大允許限量 (MRL)值均為0.05 mg/kg。
[0003] 氯氣化氧乙酸雖然為氯氣化氧乙酸異辛醋的代謝物，但是二者的性質(zhì)差別較大， 所W提取、分離，檢測(cè)的方法都不同。目前氯氣化氧乙酸異辛醋國(guó)內(nèi)外報(bào)道的主要提取方法 為如E化ERS方法，活性炭柱凈化;檢測(cè)方法為氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用法。氯氣化氧 乙酸具有酸性，多采用酸堿中和法、QuE化邸S方法;檢測(cè)方法為氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用、液相 色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法。但是運(yùn)些方法都不能同時(shí)測(cè)定不同基質(zhì)中的氯氣化氧乙酸異辛醋及 其代謝物氯氣化氧乙酸殘留量，并且前處理繁瑣，回收率差耗時(shí)長(zhǎng)，不利于大批量樣品的測(cè) 試工作。
[0004] 因此，一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確，能夠同時(shí)測(cè)定不同基 質(zhì)中的氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸殘留量的檢測(cè)方法亟待開發(fā)出來。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種±壤、玉米及玉米植株中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣 化氧乙酸的HPLC(高效液相色譜）測(cè)定方法，前處理采用固相萃取凈化技術(shù)，降低了基質(zhì)干 擾，同時(shí)結(jié)合高靈敏度的HPLC(高效液相色譜)方法測(cè)定±壤、玉米、玉米植株中氯氣化氧乙 酸異辛醋及氯氣化氧乙酸殘留量，方法簡(jiǎn)便、靈敏、選擇性高，可為農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)測(cè)和環(huán)境 行為評(píng)價(jià)提供科學(xué)的技術(shù)手段。
[0006] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為： 一種±壤、玉米及玉米植株中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的HPLC(高效液相 色譜)測(cè)定方法，其特征是包括W下步驟： (1)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的提?。?準(zhǔn)確稱制備好的待測(cè)樣品（精確到0.Olg)于離屯、管中，加入乙臘和無水硫酸鋼，縱滿 Imin后超聲提取，過濾;濾渣再用乙臘提取，過濾;合并濾液，加入氯化鋼劇烈振蕩后靜置； 將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā)至近干，殘?jiān)眉状既芙?，待凈化?(2)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的凈化： 將步驟(1)制備的樣品依次用5mL、10mL、10mL二氯甲燒：甲醇(95:5)溶劑溶解，依次過 GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.2化m 有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氣化氧乙酸異辛醋含量； 將步驟(1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MAX固相萃取柱，當(dāng) 溶劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱后，再用 SmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用SmL含2%甲酸的甲 醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.2化m濾膜過濾，待色譜分析氯氣 化氧乙酸含量。
[0007] (3)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制： 將不含氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、 (2)處理，得樣品提取凈化液，用空白提取凈化液配制成至少5個(gè)濃度的氯氣化氧乙酸異辛 醋或氯氣化氧乙酸的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0008] (4)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的的檢測(cè)： 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用HPLC(高效液相色譜)測(cè)定不同濃度的氯 氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，W氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的 標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的樣品液進(jìn)行HPLC(高效液相色譜)測(cè)定，測(cè)得 樣品液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液 中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得 到樣品中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量。
[0009] 優(yōu)選的，所述步驟(4)的色譜條件為： 流動(dòng)相為0.1%乙酸(A)和乙臘(B);梯度洗脫程序:0 min,30% B;0~17 min,30%~90% B， 17~27 min ,90% B，27~30min，90%~30%之后進(jìn)行系統(tǒng)平衡。流速1.0血/min;柱溫30 °C，進(jìn)樣 量20 uL。色譜柱：Agela Venusil MP C18 150A(250 mmX4.6 mm，5ym)。
[0010] 優(yōu)選的，包括W下步驟： (1)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的提取： 準(zhǔn)確稱取10.Og待測(cè)樣品（精確到0.Olg)于IOOmL離屯、管中，加入20血乙臘和IOg無水 硫酸鋼，縱滿Imin后超聲提取30min，過濾;濾渣再用20mL乙臘提取30min，過濾;合并濾液， 加入2g氯化鋼，劇烈振蕩后，靜置;將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā)至近干，殘?jiān)?2ml甲醇溶解，待凈化。
[0011] (2)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的凈化： 將步驟(1)制備的樣品依次用5mL、10mL、10mL二氯甲燒：甲醇(95:5)溶劑溶解，依次過 GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.2化m 有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氣化氧乙酸異辛醋含量； 將步驟(1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MX固相萃取柱，當(dāng)溶 劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱后，再用 SmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用SmL含2%甲酸的甲 醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.2化m濾膜過濾，待色譜分析氯氣 化氧乙酸含量。
[0012] (3)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品〇.〇lg(精確至0.OOlg),用甲醇 溶解并定容至10.0 mL，配成標(biāo)準(zhǔn)母液（1000.0 ug/mL)氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。用甲醇依次稀釋成10.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.0 lug/mL的氯氣化氧乙酸異辛醋 或氯氣化氧乙酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0013] (4)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的的檢測(cè)： 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用HPLC(高效液相色譜)測(cè)定不同濃度的氯 氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，W氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的 標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的樣品液進(jìn)行HPLC(高效液相色譜法)測(cè)定，測(cè) 得樣品液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品 液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算 得到樣品中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量。
[0014] 本發(fā)明的有益效果： (1)本發(fā)明前處理采用了固相萃取凈化技術(shù)，降低了基質(zhì)干擾，同時(shí)結(jié)合靈敏度的HPLC (高效液相色譜)技術(shù)建立了能夠同時(shí)分析不同基質(zhì)中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙 酸的分析方法。
[0015] (2)本發(fā)明過活性碳固相萃取柱和離子柱固相萃取柱進(jìn)行凈化，對(duì)樣品進(jìn)行處 理，干擾背景最小，且回收率高，能夠測(cè)定不同基質(zhì)(±壤、玉米巧粒、玉米植株）中氯氣化氧 乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量。
[0016] (3)本發(fā)明采用HPLC(高效液相色譜)法定性定量測(cè)定測(cè)定不同基質(zhì)（±壤、玉米 巧粒、玉米植株）中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量，線性范圍為0.01~10 Ug/ mL，平均回收率為81.1~103.3%，350為0.3%~2.3%。本發(fā)明檢出限0.0111邑/1，定量限0.05 Ug /L，靈敏度高、重復(fù)性好，為保障我國(guó)人民食品安全及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力 的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0017] 附圖1為氯氣化氧乙酸異辛醋的最大吸收光譜； 附圖2為氯氣化氧乙酸的最大紫外光譜； 附圖3為±壤基質(zhì)中氯氣化氧乙酸異辛醋和氯氣化氧乙酸的液相色譜圖（其中15.543 是氯氣化氧乙酸，25.420為氯氣化氧乙酸異辛醋）； 附圖4為玉米基質(zhì)中氯氣化氧乙酸異辛醋和氯氣化氧乙酸的液相色譜圖（其中13.685 是氯氣化氧乙酸，24.121為氯氣化氧乙酸異辛醋）； 附圖5為玉米植株中氯氣化氧乙酸異辛醋和氯氣化氧乙酸的液相色譜圖（其中15.362 是氯氣化氧乙酸，25.341為氯氣化氧乙酸異辛醋）。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的 內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例，實(shí)施例不應(yīng)視作對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0019] 實(shí)施例中使用的儀器： 日本島津LC-20AT型高效液相色譜儀，配2487型紫外檢測(cè)器，Waters C18固相萃取小 柱(MAXK 3cc，60mg );T25BS2型高速分散勻漿機(jī)(德國(guó)IKA公司）；3K30型高速離屯、機(jī)(美國(guó) Sigma公司）；Labo;rota4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)Heidol地公司）；AE-240型電子天平（瑞：t Mettler-Toledo公司）〇Agela Venusil MP C18 150A 4.6X250mm。
[0020] 實(shí)施例中使用藥品及標(biāo)準(zhǔn)品： 氯氣化氧乙酸異辛醋標(biāo)準(zhǔn)品：純度97.8%，上海市農(nóng)藥研究所有限公司；氯氣化氧乙酸 標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%，百靈威科技有限公司。甲醇(色譜純，德國(guó)Meck公司），乙臘(色譜純，賽默 飛世兒科技（中國(guó)）有限公司）；乙酸（色譜純，美國(guó)Sigma公司），其他試劑為分析純；實(shí)驗(yàn)用 水為去離子水。
[0021] 樣品：普通玉米田±壤、玉米巧粒及玉米植株。
[0022] 實(shí)施例1 :±壤中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的HPLC測(cè)定： (1)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的提?。?準(zhǔn)確稱取上壤樣品10.Og樣品（精確到0.Olg)于IOOmL離屯、管中，加入20血乙臘和IOg 無水硫酸鋼，縱滿Imin后超聲提取30min，過濾;濾渣再用20mL乙臘提取30min，過濾;合并濾 液，加入2g氯化鋼，劇烈振蕩后，靜置;將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā)至近干，殘 渣用2ml甲醇溶解，待凈化。
[0023] (2)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的凈化： 將步驟(1)制備的樣品依次用5mL、10mL、10mL二氯甲燒：甲醇(95:5)溶劑溶解，依次過 GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.2化m 有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氣化氧乙酸異辛醋含量； 將步驟(1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MAX固相萃取柱，當(dāng) 溶劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱后，再用 SmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用SmL含2%甲酸的甲 醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.2化m濾膜過濾，待色譜分析氯氣 化氧乙酸含量。
[0024] (3)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品〇.〇lg(精確至0.OOlg),用甲醇 溶解并定容至10.OmL,配成標(biāo)準(zhǔn)母液（1000.Oug/血）氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸 標(biāo)準(zhǔn)溶液。用甲醇依次稀釋成1〇.〇、1.〇、〇.5、0.2、0.1、0.01雌/1111的氯氣化氧乙酸異辛醋 或氯氣化氧乙酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0025] (4)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的的檢測(cè)： 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用HPLC(高效液相色譜)測(cè)定不同濃度的氯 氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，W氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的 標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的樣品液進(jìn)行HPLC(高效液相色譜法)測(cè)定，測(cè) 得樣品液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品 液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算 得到樣品中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量。
[00%] 色譜條件為:流動(dòng)相為0.1%乙酸(A)和乙臘(B);梯度洗脫程序:O min,30% B;O~17 min,30%~90% B，17~27 min,90% B，27~30min，90%~30%之后進(jìn)行系統(tǒng)平衡。流速 1.0 mL/ min;柱溫30°C，進(jìn)樣量20 uL。色譜柱：Agela Venusil MP C18 150A(250 mmX4.6 mm，5y m)〇
[0027] W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在 0.01~0.5mg/kg范圍內(nèi)，氯氣化氧乙酸異辛醋、氯氣化氧乙酸的質(zhì)量濃度與其峰面積呈良 好的線性關(guān)系，其回歸方程分別為y=114177x-1286.3，y=161455x+4044.2，相關(guān)系數(shù)為r = 0.9998,0.9998。
[002引加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含氯氣化氧乙酸異辛醋、氯氣化氧乙酸的±壤中加入0.0 Img/kg、0.05mg/kg和0.1 mg/kg 3個(gè)濃度的添加水平，按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加 濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平平行測(cè)定5次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定 結(jié)果見表1、表2。
[0029] 表1實(shí)施例1中氯氣化氧乙酸異辛醋的回收率和重復(fù)性(n = 5)
由表1可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氯氣化氧乙酸異辛醋的平均回收率為86.7%~ 103.3 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.3 %~0.8 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[0030] 表2實(shí)施例1中氯氣化氧乙酸的回收率和重復(fù)性(n = 5)
由表2可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氯氣化氧乙酸異辛醋的平均回收率為84.0%~ 93.4%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.1 %~1.6 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[0031] 實(shí)施例2:玉米中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的HPLC測(cè)定： (1)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的提?。?準(zhǔn)確稱取玉米樣品10.Og樣品（精確到0.Olg)于IOOmL離屯、管中，加入20血乙臘和IOg 無水硫酸鋼，縱滿Imin后超聲提取30min，過濾;濾渣再用20mL乙臘提取30min，過濾;合并濾 液，加入2g氯化鋼，劇烈振蕩后，靜置;將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā)至近干，殘 渣用2ml甲醇溶解，待凈化。
[0032] (2)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的凈化： 將步驟(1)制備的樣品依次用5mL、10mL、10mL二氯甲燒：甲醇(95:5)溶劑溶解，依次過 GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.2化m 有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氣化氧乙酸異辛醋含量； 將步驟(1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MAX固相萃取柱，當(dāng) 溶劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱后，再用 SmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用SmL含2%甲酸的甲 醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.2化m濾膜過濾，待色譜分析氯氣 化氧乙酸含量。
[0033] (3)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品〇.〇lg(精確至0.OOlg),用甲醇 溶解并定容至10.0 mL，配成標(biāo)準(zhǔn)母液（1000.Oug/mL)氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。用甲醇依次稀釋成10.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.01 ug/mL的氯氣化氧乙酸異辛 醋或氯氣化氧乙酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0034] (4)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的的檢測(cè)： 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用HPLC(高效液相色譜)測(cè)定不同濃度的氯 氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，W氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的 標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的樣品液進(jìn)行HPLC(高效液相色譜法)測(cè)定，測(cè) 得樣品液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品 液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算 得到樣品中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量。
[0035] 色譜條件為： 流動(dòng)相為0.1%乙酸(A)和乙臘(B);梯度洗脫程序:0 min,30% B;0~17 min,30%~90% B， 17~27 min ,90% B，27~30min，90%~30%之后進(jìn)行系統(tǒng)平衡。流速1.0血/min;柱溫30 °C，進(jìn)樣 量20 uL。色譜柱：Agela Venusil MP C18 150A(250 mmX4.6 mm，5ym)。
[0036] W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在 0.01~0.5mg/kg范圍內(nèi)，氯氣化氧乙酸異辛醋、氯氣化氧乙酸的質(zhì)量濃度與其峰面積呈良 好的線性關(guān)系，其回歸方程分別為y=114177x-1286.3，y=161455x+4044.2，相關(guān)系數(shù)為r = 0.9998,0.9998。
[0037] 加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含氯氣化氧乙酸異辛醋、氯氣化氧乙酸的玉米中加入〇.〇lmg/kg、0.05mg/kg和0.1 mg/kg 3個(gè)濃度的添加水平，按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加 濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平平行測(cè)定5次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定 結(jié)果見表3、表4。
[0038] 表3實(shí)施例2中氯氣化氧乙酸異辛醋的回收率和重復(fù)性(n = 5)
由表3可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氯氣化氧乙酸異辛醋的平均回收率為88.0%~ 97.6 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.6 %~2.3 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[0039] 表4實(shí)施例2中氯氣化氧乙酸的回收率和重復(fù)性(n = 5)
由表4可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氯氣化氧乙酸異辛醋的平均回收率為81.1 %~ 95.8 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.6 %~0.8 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[0040] 實(shí)施例3:玉米植株中氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的HPLC測(cè)定： (1)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的提?。?準(zhǔn)確稱取玉米植株樣品10.0 g樣品（精確到0.01 g)于1 OOmL離屯、管中，加入20mL乙臘 和IOg無水硫酸鋼，縱滿Imin后超聲提取30min，過濾;濾渣再用20mL乙臘提取30min，過濾； 合并濾液，加入2g氯化鋼，劇烈振蕩后，靜置;將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā)至近 干，殘?jiān)?ml甲醇溶解，待凈化。
[0041] (2)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的凈化： 將步驟(1)制備的樣品依次用5mL、10mL、10mL二氯甲燒：甲醇(95:5)溶劑溶解，依次過 GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.2化m 有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氣化氧乙酸異辛醋含量； 將步驟(1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MAX固相萃取柱，當(dāng) 溶劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱后，再用 SmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用SmL含2%甲酸的甲 醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.2化m濾膜過濾，待色譜分析氯氣 化氧乙酸含量。
[0042] (3)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品〇.〇lg(精確至0.OOlg),用甲醇 溶解并定容至10.0 mL，配成標(biāo)準(zhǔn)母液（1000.Oug/mL)氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。用甲醇依次稀釋成10.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.01 ug/mL的氯氣化氧乙酸異辛 醋或氯氣化氧乙酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0043] (4)氯氣化氧乙酸異辛醋及氯氣化氧乙酸的的檢測(cè)： 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用HPLC(高效液相色譜)測(cè)定不同濃度的氯 氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，W氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙 酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸標(biāo)品的 標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的樣品液進(jìn)行HPLC(高效液相色譜法)測(cè)定，測(cè) 得樣品液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品 液中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算 得到樣品中氯氣化氧乙酸異辛醋或氯氣化氧乙酸殘留量。
[0044] 色譜條件為:流動(dòng)相為0.1%乙酸(A)和乙臘(B);梯度洗脫程序:0 min,30% B;0~17 min,30%~90% B，17~27 min,90% B，27~30min，90%~30%之后進(jìn)行系統(tǒng)平衡。流速 1.0 mL/ min;柱溫30°C，進(jìn)樣量20 uL。色譜柱：Agela Venusil MP C18 150A(250 mmX4.6 mm，5y m)〇
[0045] W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在 0.01~0.5mg/kg范圍內(nèi)，氯氣化氧乙酸異辛醋、氯氣化氧乙酸的質(zhì)量濃度與其峰面積呈良 好的線性關(guān)系，其回歸方程分別為y=114177x-1286.3，y=161455x+4044.2，相關(guān)系數(shù)為r = 0.9998,0.9998。
[0046] 加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含氯氣化氧乙酸異辛醋、氯氣化氧乙酸的玉米植株中加入〇.〇lmg/kg、0.05mg/kg 和0.1 mg/kg 3個(gè)濃度的添加水平，按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理 論添加濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏 差，測(cè)定結(jié)果見表5、表6。
[0047] 表5連施巧13中氯氣冊(cè)氧乙酸異宰酷的回收率和重復(fù)性(n = 5)
由表5可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氯氣化氧乙酸異辛醋的平均回收率為96.5%~ 99.7 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.7 %~1.4 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[004引表6實(shí)施例3中氯氣化氧乙酸的回收率和重復(fù)性(n = 5)
由表6可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氯氣化氧乙酸異辛醋的平均回收率為95.9%~ 97.4 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.4 %~2.2 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[0049]檢出限:將不同濃度的氯氣化氧乙酸異辛醋及其代謝物氯氣化氧乙酸基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工 作溶液注入儀器，W定量離子色譜峰3倍信噪比所對(duì)應(yīng)的最低濃度為檢出限化OD)，的檢出 限均為0.01 ug/mL (S/N>3);W10倍信噪比所對(duì)應(yīng)的最低濃度為定量檢出限化OQ)，定量 檢出限均為 〇.〇5yg/mL(S/N>10)。
[0050]顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì) 于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可W做出其它不同形式的變化或 變動(dòng)。運(yùn)里無需也無法對(duì)所有的實(shí)施方式予W窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或 變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的HPLC測(cè)定方 法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的提取:準(zhǔn)確稱取制備好的待測(cè)樣品（精確到 0.Olg)于離心管中，加入乙腈和無水硫酸鈉，漩渦Imin后超聲提取，過濾;濾渣再用乙腈提 取，過濾;合并濾液，加入氯化鈉劇烈振蕩后靜置;將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā) 至近干，殘?jiān)眉状既芙?，待凈化? 2) 氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的凈化:將步驟1)制備的樣品依次用5mL、 IOmLUOmL二氯甲烷：甲醇（95: 5)溶劑溶解，依次過GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾 液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.22μπι有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氟吡氧乙酸異 辛酯含量;將步驟1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MAX固相萃取 柱，當(dāng)溶劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱 后，再用3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用8mL含2%甲 酸的甲醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.22μπι濾膜過濾，待色譜分 析氯氟吡氧乙酸含量； 3)氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:將不含氯氟吡氧乙酸 異辛酯或氯氟吡氧乙酸的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟1)、2)處理，得樣品提取凈化液， 用空白提取凈化液配制成至少5個(gè)濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸的系列混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液； 4)氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的的檢測(cè)：將步驟3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液用HPLC測(cè)定不同濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，以 氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氟吡氧 乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟2)中凈化后的樣品液進(jìn) 行HPLC測(cè)定，測(cè)得樣品液中氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn) 曲線，得到樣品液中氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表 試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸殘留量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡 氧乙酸的HPLC測(cè)定方法，其特征在于:所述步驟4)中色譜條件為:流動(dòng)相為0.1%乙酸(A)和 乙腈（B);梯度洗脫程序：0 min，30% Β;0~17 min，30%~90% Β，17~27 min，90% Β，27~30min， 90%~30%之后進(jìn)行系統(tǒng)平衡；流速1.0 mL/min ;柱溫30 °C，進(jìn)樣量20 uL;色譜柱：Agela Venusil MP C18 150AC250 mmX4.6 mm，5ym)〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡 氧乙酸的HPLC測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟4)中氯氟吡氧乙酸異辛酯的回歸方程為y= 114177χ-1286·3,相關(guān)系數(shù)為 r =0.9998。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡 氧乙酸的HPLC測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟4)中氯氟吡氧乙酸的回歸方程為y = 161455χ+4044·2,相關(guān)系數(shù)為 r =0.9998。5. 根據(jù)權(quán)利要求1~4任一所述的一種土壤、玉米及玉米植株中氯氟吡氧乙酸異辛酯及 氯氟吡氧乙酸的HPLC測(cè)定方法，其特征在于包括以下步驟： 1)氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的提取:準(zhǔn)確稱取10.Og待測(cè)樣品（精確到 0.01 g)于IOOmL離心管中，加入20mL乙腈和IOg無水硫酸鈉，漩禍Imin后超聲提取30min，過 濾;濾渣再用20mL乙腈提取30min，過濾;合并濾液，加入2g氯化鈉，劇烈振蕩后，靜置;將有 機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，在45°C下蒸發(fā)至近干，殘?jiān)?ml甲醇溶解，待凈化； 2)氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的凈化:將步驟1)制備的樣品依次用5mL、 IOmLUOmL二氯甲烷：甲醇（95: 5)溶劑溶解，依次過GCB活性炭固相萃取柱凈化后，收集濾 液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入2ml甲醇定容，過0.22μπι有機(jī)濾膜，待色譜分析氯氟吡氧乙酸異 辛酯含量;將步驟1)制備的樣品用2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液活化過MAX固相萃取 柱，當(dāng)溶劑液面流至吸附填料表面時(shí)，立即加入樣品濃縮液，將樣品液全部轉(zhuǎn)移至萃取柱 后，再用3mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氨水溶液淋洗，棄去淋出液;先用3mL甲醇洗脫，再用8mL含2%甲 酸的甲醇溶液洗脫，收集溜出液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?mL，0.22μπι濾膜過濾，待色譜分 析氯氟吡氧乙酸含量； 3)氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:準(zhǔn)確稱取氯氟吡氧乙 酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品〇.〇lg(精確至〇.OOlg)，用甲醇溶解并定容至10.0 mL，配 成標(biāo)準(zhǔn)母液(1000.Oug/mL)氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液;用甲醇依次稀 釋成10.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.01耶/1^的氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸系列標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液； 4)氯氟吡氧乙酸異辛酯及氯氟吡氧乙酸的的檢測(cè)：將步驟3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液用HPLC測(cè)定不同濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)品的吸收曲線，以 氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制氯氟吡氧 乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸標(biāo)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線;在相同條件下將步驟2)中凈化后的樣品液進(jìn) 行HPLC測(cè)定，測(cè)得樣品液中氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn) 曲線，得到樣品液中氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸的含量，然后根據(jù)樣品液所代表 試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中氯氟吡氧乙酸異辛酯或氯氟吡氧乙酸殘留量。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105954425SQ201610462791
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月23日
【發(fā)明人】梁京蕓, 陳子雷, 董嶄, 毛江勝, 李增梅, 李慧冬, 方麗萍, 杜紅霞, 官帥
【申請(qǐng)人】山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所