一種檢測動物肌肉組織中替米考星的前處理試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種動物肌肉組織中替米考星檢測的前處理試劑盒，本發(fā)明前處理試劑盒主要由盒體、試劑管A、試劑袋B、試劑管C、試劑瓶D、試劑瓶E、試劑袋F。盒體內(nèi)分為a、b、c、d 4個區(qū)，a和b區(qū)為適合試劑管A和試劑管C放置的孔區(qū)，c區(qū)放試劑袋B和試劑袋F的凹槽，d區(qū)放試劑瓶D和試劑瓶E的凹槽。本發(fā)明還提供了一種測定動物性食品肌肉組織的超高效液相色譜法，該方法包括：流動相組成E和F；梯度洗脫程序等。
【專利說明】
一種檢測動物肌肉組織中替米考星的前處理試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]
本發(fā)明屬于食品安全分析技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種檢測動物肌肉組織中替米考星(tilmicisin，TLM)的前處理試劑盒，同時還涉及一種動物肌肉組織中替米考星殘留量檢測的方法，本試劑盒及檢測方法適用于鮮活動物(魚、蝦、豬、雞)肌肉組織中替米考星殘留量檢測的樣品前處理及檢測。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]
目前，檢測動物肌肉組織中替米考星的前處理方法，提取過程復(fù)雜，消耗有機(jī)溶劑量大，凈化過程多采用固相萃取小柱(SPE柱)，不僅增加了工作量，而且增加了檢測的成本。在對前處理好的樣品進(jìn)行替米考星檢測所用的流動相(液相)組分復(fù)雜，且配制過程繁瑣、耗時，所用添加劑對色譜柱有較大的損害。
[0004]
動物肌肉組織中替米考星用傳統(tǒng)的前處理及檢測方法費(fèi)時、費(fèi)錢且操作過程復(fù)雜不易掌握。為提高對動物肌肉組織中替米考星殘留檢測的效率，節(jié)約檢測成本，研制動物肌肉組織中TLM檢測的前處理試劑盒及檢測方法具有非常重要的經(jīng)濟(jì)和社會意義。目前，國內(nèi)外均未見有動物肌肉組織中替米考星檢測前處理試劑盒的報道。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]
本發(fā)明目的是在于提供了一種檢測鮮活動物肌肉組織中替米考星(tilmicisin，TLM)的樣品前處理試劑盒，樣品前處理所用試劑價格便宜，容易獲得，且用量小，樣品處理無需用固相萃取小柱進(jìn)行樣品凈化，從而大大節(jié)約了檢測成本;該試劑盒操作方便快捷，適于大量鮮活動物肌肉樣品的處理，從而大大提高了樣品前處理的效率;該試劑盒將所需試劑整合于一個前處理試劑盒內(nèi)便于攜帶和儲存。
[0007]
本發(fā)明的另一個目的是在于提供了一種經(jīng)本前處理試劑盒處理后的樣品中替米考星殘留量的檢測方法，該檢測方法流動相配制簡單，用量少，且所用試劑對色譜柱無損害;該檢測方法所用時間短，且在較短的時間內(nèi)能將替米考星的2種同分異構(gòu)體(順式異構(gòu)體和反式異構(gòu)體)分離，從而大大節(jié)約了檢測時間和檢測成本。從使用該前處理試劑盒和檢測方法的效果來看，樣品處理干凈，在色譜圖上無雜質(zhì)峰干擾且能將替米考星的2種同分異構(gòu)體較好分離。該方法是一種能夠快速、準(zhǔn)確、靈敏地檢測利用本前處理試劑盒處理的樣品的超高效液相色譜法(UPLC)。
[0008]
為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施:
一種動物肌肉組織中替米考星檢測的前處理試劑盒，本發(fā)明前處理試劑盒主要由盒體、試劑管A、試劑袋B、試劑管C、試劑瓶D、試劑瓶E、試劑袋F。盒體內(nèi)分為a、b、c、d 4個區(qū)，a和b區(qū)為適合試劑管A和試劑管C放置的孔區(qū)，c區(qū)放試劑袋B和試劑袋F的凹槽，d區(qū)放試劑瓶D和試劑瓶E的凹槽。
[0009]
優(yōu)選的，所述的試劑管A中是乙酸乙酯、丙酮中任一種液體試劑。
[0010]
優(yōu)選的，所述的試劑袋B中是氯化鈉、碳酸鈉、硝酸鉀、磷酸氫二鉀中任一種試劑。
[0011]
優(yōu)選的，所述試劑管C中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈中任一種液體試劑。
[0012]
優(yōu)選的，所述試劑瓶D中是氯化鈉、碳酸鈉、硝酸鉀中任一種試劑的溶液。
[0013]
優(yōu)選的，所述試劑瓶E中是乙酸乙酯、丙酮中任一種液體試劑。
[0014]
優(yōu)選的，所述試劑試劑袋F中是磷酸二氫銨、硫酸鈉鉀或硫酸鎂中任一種試劑。
[0015]
試劑D的溶液的配制方法:取試劑D 2-20g，溶于200mL的蒸餾水中溶解配制成濃度為1%-10%的試劑D的溶液。
[0016]
試劑F的溶液的配制方法為:取試劑F 0.6-3g，溶于500mL蒸餾水中，配制成濃度為10mM-50mM的試劑F的溶液。
[0017]
優(yōu)選的液體試劑E和試劑F的溶液的體積比E:F= 1:9-1:1。
[0018]
一種動物肌肉組織中替米考星檢測前處理試劑盒的使用方法，其步驟是:
A、取動物肌肉組織2.0g于50mL塑料離心管中，加入試劑A 5-1OmL，振蕩30s ；所述試劑A可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑。
[0019]
B、再加入試劑試劑B2-10g，振蕩30s，5000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，
450C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干;所述試劑B可以是氯化鈉、碳酸鈉硫酸鈉或硫酸鎂中任一種試劑。
[0020]
C、向雞心瓶中加入試劑C2-10mL，將其轉(zhuǎn)移至15mL離心管中；所述試劑C可以是乙酸乙酯、丙酮中任一種液體試劑。
[0021]
D、再向其中加入試劑溶液Dl-5mL，振蕩30s，5000r/min離心5min，將上層液體取出置于15mL離心管中，置45°C氮吹儀吹至干;所述試劑溶液D可以是氯化鈉、磷酸二氫銨、硫酸鈉鉀或硫酸鎂中任一種試劑的溶液。
[0022]
發(fā)明提供了一種動物肌肉組織中替米考星前處理方法，該方法包括:可以提取動物肌肉組織中替米考星的液體試劑A，用于動物肌肉組織樣品凈化的試劑B，用于溶解濃縮樣品殘渣的液體試劑C，用于凈化溶解殘渣樣品的試劑溶液D，用于溶解經(jīng)凈化處理的樣品濃縮物的液體試劑E和試劑F的溶液的混合物。
[0023]
一種用于檢測經(jīng)本前處理試劑盒處理的動物肌肉組織樣品的方法，本檢測方法包括:流動相組成液體試劑E和試劑F的溶液;色譜條件及梯度洗脫程序。
[0024]
本發(fā)明還提供了一種測定動物性食品肌肉組織的超高效液相色譜法，該方法包括:流動相組成E和F;梯度洗脫程序等。
[0025]
優(yōu)選的，所述的液體試劑E是乙酸乙酯、丙酮、乙腈中任一種液體試劑。
[0026]
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果:
(1)操作過程簡單、快速、所用試劑量少。
[0027]
(2)無需用固相萃取小柱進(jìn)行樣品凈化，節(jié)約檢測成本，節(jié)約樣品前處理時間。
[0028]
(3)優(yōu)選的試劑處理鮮活動物肌肉組織效果好，價格低廉。
[0029]
(4)流動相配制簡單，所用試劑對色譜柱無損害。
[0030]
(5)檢測方法消耗試劑少，分析時間短，目標(biāo)物附件無干擾峰，且能將替米考星2種同分異構(gòu)體分離開。
[0031]
【具體實(shí)施方式】
[0032]—種動物肌肉組織中替米考星檢測的前處理試劑盒，本發(fā)明前處理試劑盒主要由盒體1、試劑管A2、試劑袋B3、試劑管C4、試劑瓶D5、試劑瓶E6、試劑袋F7。盒體內(nèi)分為a、b、c、d4個區(qū)，a和b區(qū)為適合試劑管A2和試劑管C4放置的孔區(qū)，c區(qū)放試劑袋B3和試劑袋F7的凹槽，d區(qū)放試劑瓶D5和試劑瓶E6的凹槽。
[0033]
[0034]
優(yōu)選的，所述的試劑管A2中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑。所述試劑A可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑，加入試劑A的量為5-10mL。
[0035]
優(yōu)選的，所述的試劑袋B3中是氯化鈉、碳酸鈉、硝酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、硫酸鈉或硫酸鎂中任一種試劑。所述試劑B可以是氯化鈉、碳酸鈉、硝酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、硫酸鈉或硫酸鎂中任一種試劑，加入試劑B的量為2-10g。
[0036]
優(yōu)選的，所述試劑管C4中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑。所述試劑C可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑，加入試劑C2-1OmL0
[0037]
優(yōu)選的，所述試劑瓶D5中是氯化鈉、碳酸鈉、硝酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫銨、硫酸鈉鉀或硫酸鎂中任一種試劑的溶液。試劑D的溶液的配制方法:取試劑D 2-20 g，溶于200mL的蒸餾水中溶解配制成濃度為1%-10%的試劑D的溶液。
[0038]優(yōu)選的，所述試劑瓶E6中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑。
[0039]優(yōu)選的，所述試劑袋F7中是氯化鈉、碳酸鈉、硝酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫銨、硫酸鈉鉀或硫酸鎂中任一種試劑。試劑F的溶液的配制方法為:取試劑F 0.6-3g，溶于500mL蒸餾水中，配制成濃度為10mM-50mM的試劑F的溶液，液體試劑E和試劑F的溶液兩者的體積比E: F = 1:9-1:1。
【主權(quán)項】
1.一種檢測動物肌肉組織中替米考星檢測的前處理試劑盒，本發(fā)明前處理試劑盒主要由盒體、試劑管A、試劑袋B、試劑管C、試劑瓶D、試劑瓶E、試劑袋F，盒體內(nèi)分為a、b、c、d 4個區(qū)，a和b區(qū)為適合試劑管A和試劑管C放置的孔區(qū)，c區(qū)放試劑袋B和試劑袋F的凹槽，d區(qū)放試劑瓶D和試劑瓶E的凹槽，一種動物肌肉組織中替米考星檢測前處理試劑盒的使用方法，其步驟是: A、取動物肌肉組織2.0g于50mL塑料離心管中，加入試劑A5_10mL，振蕩30s;所述試劑A可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一種液體試劑； B、再加入試劑試劑B2-10g，振蕩30s，5000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，450C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干;所述試劑B可以是氯化鈉、碳酸鈉硫酸鈉或硫酸鎂中任一種試劑； C、向雞心瓶中加入試劑C2-10mL，將其轉(zhuǎn)移至15mL離心管中；所述試劑C可以是乙酸乙酯、丙酮中任一種液體試劑； D、再向其中加入試劑溶液Dl-5mL，振蕩30s，5000r/min離心5min，將上層液體取出置于15mL離心管中，置45°C氮吹儀吹至干;所述試劑溶液D可以是氯化鈉、磷酸二氫銨、硫酸鈉鉀或硫酸鎂中任一種試劑的溶液。
【文檔編號】G01N30/06GK106053683SQ201610398364
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月7日
【發(fā)明人】黃爭上
【申請人】紹興圣康生物科技有限公司