Virosaine A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在抗炎藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開一種Virosaine A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在抗炎藥物中的應(yīng)用,本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗炎藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有抗炎的作用，具有開發(fā)抗炎藥物的價(jià)值。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在抗炎 藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 炎癥發(fā)生在局部，同時(shí)也可影響全身。局部臨床特征是紅、熱、腫、痛和功能障礙。 紅、熱是由于炎癥局部血管擴(kuò)張、血流加快所致。腫是由于局部炎癥性充血、血流成分滲出 引起。研發(fā)具有抗炎作用的藥物對(duì)于緩解驗(yàn)證、減輕痛苦有重要意義。
[0003] 炎癥的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化 合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價(jià) 值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（Ayumi Ohsaki et al.， 2011 .Salviskinone A，a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii .Tetrahedron Letters 52(2011)1375-1377)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行 了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV 制備了組合物并對(duì)該組合物抗炎癥活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗炎癥活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為65%和35%。

[0008] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0009] 本發(fā)明的目的是提供組合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。所述的炎癥為無菌性炎 癥。
[0010] 本發(fā)明組合物在制備抗炎藥物中應(yīng)用的有益效果如下：
[0011] 首先證明了本發(fā)明組合物具有有效抗炎作用。采用了經(jīng)典的二甲苯所致的小鼠耳 腫脹模型以及大鼠瓊脂性足腫脹模型，觀察本發(fā)明組合物在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗炎 作用。研究表明：
[0012] 1、本發(fā)明組合物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯抑制作用。
[0013] 2、本發(fā)明組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹有明顯抑制作用。
[0014] 以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1化合物Virosaine A的制備
[0016] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法 D
[0018] 實(shí)施例2 Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0019] 將化合物I(235mg，1 .OOmmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攪拌Shdh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后 對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0020] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d，J=9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0021] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s)，79.95(s)，74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0022] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0025] 實(shí)施例3 Virosaine A的0_(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的合成
[0026] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2.5mmo 1)，碘化鉀(84mg，0.5mmo 1)和吡略燒（1420mg，20mmo 1)，混合物加熱回流lh。反應(yīng)結(jié) 束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水 洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品 用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮=100:1.5，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的淡黃色膠狀固體(111.6mg，67% )。
[0027] MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.92(s，lH)，4.11(s，lH)，3.66(s，lH)，3.53(s，2H)， 3.45(d,J=66.9Hz,lH),2.64(s,2H),2.52(s,4H),2.29(s,lH),1.71(s,4H),1.64(s,2H), 1.61(s,lH),1.50(s,2H).
[0028] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.83(s)，106.73(s)，79.97(s)，74.35(s)，66.72(d, J = 9.2Hz),54.42(d ,J = 17.1Hz),44.23(s),35.58(s),25.86(s),25.23(s),21.90(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H].calcd for Ci8H25N2〇4:333.1814;found:333.1811。
[0031] 實(shí)施例4 Virosaine A的0_(嗎啉基）乙基衍生物的合成
[0032] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 ? 5mmo 1)，碘化鉀(84mg，0 ? 5mmo 1)和嗎啉（1742mg，20mmo 1)，混合物加熱回流lh。反應(yīng)結(jié)束 后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(嗎啉基）乙基衍生物的黃色固體(IV) (125.3mg，72% )。
[0033] 咕 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.95(s，lH)，4.12(s，lH)，3.68(s，lH)，3.63(d，J= 8.4Hz，lH)，3.61(s，4H)，3.57-3.26(m，3H)，2.61(s，2H)，2.56(s，2H)，2.51-2.03(m，5H)， 1.70(d，J = 3.1Hz，lH)，1.65(d，J = 25.6Hz，lH)，1.52(s，2H).
[0034] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.85(s)，106.73(s)，79.95(s)，74.34(s)，66.75(t， J=4.6Hz),54.46(s),52.93(s),44.22(s),35.55(s),25.88(s),21.89(s).
[0035] HRMS(ESI):m/z[M+H].calcd for Ci8H25N2〇5:349.1763;found:349.1761。
[0037]實(shí)施例5組合物抗炎藥效學(xué)研究 [0038] 試驗(yàn)材料
[0039] 1.昆明(KM)種小鼠：雄性，6周，18.5-22.5g，由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0040] 2.大鼠(Wistar):雄性，體質(zhì)量140~160g，由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[00411 3.組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的65mg化合物III的粉末和研磨之后過 200目網(wǎng)的35mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合 物，使用時(shí)用水溶解這1 00mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0042]試驗(yàn)方法
[0043] 1.灌胃組合物對(duì)小鼠耳部炎癥的作用：取體質(zhì)量18.5~22.5g健康雄性小鼠50只， 隨機(jī)分成5組，每組10只。分組為：組合物2.5mg ? kg_\化合物III 2.5mg ? kg_\化合物IV 2.5mg ? kg'阿司匹林組(200mg ? kg<)、空白對(duì)照組(生理鹽水）。各組分別灌胃給藥，連續(xù) 7d，第七天灌胃后lh，3組小鼠均在小鼠右耳前、后面均勻涂二甲苯0.02mL，制備耳廓炎癥模 型。lh后后頸脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm打孔器分別在兩耳的同一部 位打下圓耳片，稱重精確到O.OOOlg。立即用電子天平分別稱質(zhì)量，以左右兩耳質(zhì)量差作為 腫脹度，并計(jì)算其腫脹度。
[0044] 腫脹度=右耳片重一左耳片重
[0045] 2.灌胃組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹的作用：取體質(zhì)量140~160g健康雄性Wistar 大鼠40只，隨機(jī)分成5組。組合物2.5mg ? kg-\化合物III 2.5mg ? kg-\化合物IV 2.5mg ? kg'阿司匹林組(200mg ? kg，、空白對(duì)照組(生理鹽水）。分別灌胃給藥，連續(xù)7d，第七天灌 胃后lh，大鼠的右后足跎皮下注射10g/L瓊脂O.lmL制備足腫急性炎癥模型，用大鼠足容量 測(cè)量?jī)x測(cè)其右后足正常容積。致炎后l、5、8h分別測(cè)量各鼠右后足容積，并計(jì)算腫脹度。
[0046] 腫脹度=右后足容積一左后足容積
[0047] 試驗(yàn)結(jié)果
[0048] 1、組合物對(duì)小鼠耳部炎癥的影響
[0049] 致炎后，各組小鼠右耳立刻出現(xiàn)高度紅腫現(xiàn)象。阿司匹林組和組合物組對(duì)二甲苯 所致的小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用，而化合物III和化合物IV則對(duì)二甲苯所致的小鼠耳 腫脹沒有顯著抑制作用，結(jié)果見表1。
[0050]表1組合物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響
[0053] 與模型組比較*P〈0.01
[0054] 2、組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹的影響
[0055] 注射瓊脂后，各組大鼠足爪均有一定程度的腫脹現(xiàn)象。在肉眼觀察下，模型組腫脹 發(fā)紅最明顯，阿司匹林組稍有腫脹無明顯發(fā)紅現(xiàn)象，組合物組有腫脹無明顯發(fā)紅現(xiàn)象。組合 物對(duì)大鼠足腫有顯著抑制作用，而化合物III和化合物IV則對(duì)大鼠足腫無顯著抑制作用，見 表2。
[0056] 表2組合物對(duì)大鼠瓊脂性足趾腫脹度的影響
[0058] 與模型組比較*P〈0.05
[0059]結(jié)論:組合物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯抑制作用；組合物對(duì)大鼠瓊脂性 足腫脹有明顯抑制作用。而化合物III和化合物IV則對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹無明顯抑 制作用;化合物III和化合物IV則對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹無明顯抑制作用。組合物可以用于制 備抗炎藥物，化合物III和化合物IV不能用于制備抗炎藥物。
[0060] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0061] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0062] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0063] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為65%和35%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為65 %和35 %充分混合。3. 如權(quán)利要求1所述的組合物在抗炎癥藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗炎癥藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述炎癥為無菌性炎 癥。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在抗炎癥藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述無菌性炎癥為化 學(xué)品刺激引起的。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗炎癥藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述化學(xué)品為二甲 苯。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗炎癥藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述化學(xué)品為瓊脂。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK105853435SQ201610278687
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】王卓婷
【申請(qǐng)人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司