Virosaine A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有預(yù)防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的四氨P比略基和嗎嘟基衍生物的組合物在預(yù)防 或治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 膜腺纖維化是各種原因所致慢性膜腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學(xué)特點(diǎn)，表現(xiàn)為大量成纖維細(xì)胞增生和富含連接組織的細(xì)胞外基質(zhì)。是多種原因?qū)е履?腺損傷修復(fù)的結(jié)果，近期發(fā)現(xiàn)膜腺星狀細(xì)胞和多種細(xì)胞因子與膜腺纖維化有關(guān)，膜腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗膜腺纖維化藥物。
[0003] 膜腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中 尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明設(shè)及的化合物I是一個2012年發(fā)表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096- 3099)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物HI和化 合物IV，并用化合物ΠΙ和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗膜腺纖維化活性進(jìn)行了 評價，其具有抗膜腺纖維化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物ΙΠ 和化合物IV組成，該組合物 中化合物ΠI和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為75 %和25 %。
[0006]
[0007]本發(fā)明公開的組合物可W制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[000引藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗膜腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué) 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] W下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加 W限定。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1化合物Virosaine A的制備
[0011] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Bing- Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B, Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法。
[0012]
[0013] 實(shí)施例2 Virosaine A的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(235mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四下基漠化錠（TBAB) (0.08邑），1，2-二漠乙燒(3.760邑，20.00臟〇1)和51^的50%氨氧化鋼溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攬拌化。她之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲燒萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后 對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗涂3次，再用無水硫酸鋼干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油酸/丙酬=100:1.0，v/v)，收 集棟色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棟色粉末(26Img，78% )。
[001 引 iHMffi(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d J = 9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0016] "C 醒R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s)，106.71(s)，79.95(s)，74.33(s)，69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+扣+calcd for Cm出7BrN04:342.0:341;found 342.0:343.
[001 引
[0019] 實(shí)施例3 Virosaine A的0-(四氨化咯基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II(17Img，0.5mmo 1)溶于15mL乙臘當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鐘(345mg， 2.5mmo 1)，艦化鐘(84mg，0.5mmo 1)和化咯燒（1420mg，20mmo 1)，混合物加熱回流化。反應(yīng)結(jié) 束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲燒萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水 洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品 用硅膠柱層析純化(流動相為:石油酸/丙酬=100:1.5，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(四氨化咯基）乙基衍生物（III)的淡黃色膠狀固體(111.6mg，67% )。 [00別]1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)S5.92(s，lH)，4.11(s，lH)，3.66(s，lH)，3.53(s，2H), 3.45(d J = 66.9Hz，lH)，2.64(s，2H)，2.52(s，4H)，2.29(s，lH)，1.71(s，4H)，1.64(s，2H), 1.61(s,lH),1.50(s,2H).
[0022] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.83(s)，106.73(s)，79.97(s)，74.35(s)，66.72(d, J = 9.2Hz)，54.42(d J = 17.1Hz)，44.23(s)，35.58(s)，25.86(s)，25.23(s)，21.90(s).
[0023] HRMS化SI):m/z[M+H]+calcd for Cl姐化化〇4:333.1814;found:333.1811。
[0024]
[00巧]實(shí)施例4 Virosaine A的0-(嗎嘟基）乙基衍生物的合成
[0026] 將化合物II(17Img，0.5mmo 1)溶于15mL乙臘當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鐘(345mg， 2.5mmo 1)，艦化鐘（84mg，0.5mmo 1)和嗎嘟（1742mg，20mmo 1)，混合物加熱回流比。反應(yīng)結(jié)束 后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取Ξ次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油酸/丙酬= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(嗎嘟基）乙基衍生物的黃色固體（IV) (125.3mg，72% )。
[0027] 1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)S5.95(s，lH),4.12(s，lH),3.68(s，lH),3.63(d，J= 8.4Hz，lH)，3.61(s，4H)，3.57-3.26(m，3H)，2.61(s，2H)，2.56(s，2H)，2.51-2.03(m，5H), 1.70(d J = 3.1Hz，lH)，1.65(d J = 25.6Hz，lH)，1.52(s，2H).
[002引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.85(s)，106.73(s)，79.95(s)，74.34(s)，66.75(t, J=4.細(xì)z)，54.46(s)，52.93(s)，44.22(s)，35.55(s)，25.88(s)，21.89(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Cl姐化化05:349.1763;found:：M9.1761。
[0030]
[0031 ]實(shí)施例5組合物抗膜腺纖維化活性 [0032] 1 材料
[0033] 1.1動物Wistar大鼠，雄性，體重180-200邑。
[0034] 1.2 組合物劑量:0.9mg/kg。
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的75mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的25mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿輪攬拌儀混合即得到lOOmg組合物， 使用時用水溶解運(yùn)1 OOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0037] 2.1造模方法:Wistar大鼠 W腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現(xiàn) 膜臟腺細(xì)胞減少，間質(zhì)內(nèi)脂肪及結(jié)締組織的增生。
[0038] 2.2分組及給藥方法
[0039] 模型大鼠隨機(jī)分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設(shè)空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0040] 2.3檢測指標(biāo)
[0041] 2.3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)束時取膜臟稱重。
[00創(chuàng) 2.3.2膜臟翔捕氨酸含量測定取lOOmg樣本在水中勻漿，110°C 10N肥1中水解20小 時。HC1用氮?dú)鈸]發(fā)，水解產(chǎn)物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml構(gòu)祿酸憐酸緩沖液 (0.15M構(gòu)祿酸加0.6M憐酸氨二鋼)和0.5ml溶于9M憐酸的1M過艦酸混合。加1.75ml提取緩沖 液巧份甲苯:5份2-甲基-1-丙醇：2份1-丙醇），震蕩30min，離屯、。組織相(0.6ml)與mirlich， S試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-徑-1-脯氨酸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，含量 Wug/g組織表示。
[0043] 2.3.3組織學(xué)檢查膜臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[0044] 蛹果
[0045] 3.1組合物對大鼠膜臟臟器系數(shù)的影響
[0046] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和膜臟重并計算其與體重的比值(膜臟 臟器系數(shù)），結(jié)果見表1。組合物對膜臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物ΙΠ 和化合物IV對膜臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0047]表 1
[004引
[0049] *表示於0.05,與模型組比較
[0050] 3.2膜臟徑脯氨酸含量測定
[0051] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，對各組大鼠進(jìn)行肺部徑脯氨酸含量測定，結(jié)果如表2。組合物對徑脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異?；衔铴唉┖突衔颕V對徑脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0052] 表 2 [00531
[0化4] *表示於0.05,與模型組比較
[0化5] 3.3組織學(xué)檢查
[0056] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將大鼠處死、解剖;標(biāo)本常規(guī)包埋、固定、肥染色，鏡檢。
[0057] 結(jié)果:模型組第60天可見膜導(dǎo)管周圍嚴(yán)重炎癥反應(yīng);嗜中粒細(xì)胞核淋己細(xì)胞浸潤， 間質(zhì)水腫，出血W及偶見膜泡細(xì)胞壞死;膜泡細(xì)胞消失位置及膜泡間出現(xiàn)纖維化。
[0058] 組合物可減少炎癥反應(yīng)和纖維化。評分結(jié)果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0化9] 表3
[0060]
[0061 ] *表示p<0.05，與模型組比較;空白對照組的炎癥細(xì)胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0062] 結(jié)論:本發(fā)明通過組合物對大鼠膜腺纖維化的影響，證實(shí)了組合物具有抗膜腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗膜腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗膜腺纖維化的藥物。
[0063] 實(shí)施例6本發(fā)明所設(shè)及組合物片劑的制備
[0064] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0065] 實(shí)施例7本發(fā)明所設(shè)及組合物膠囊的制備
[0066] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為75%和25%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為75 %和25 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的胰臟臟器系數(shù)下降。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的羥脯氨酸含量升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的炎癥細(xì)胞浸潤升高。
【文檔編號】A61K31/5377GK105878252SQ201610278597
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】蔣登旭
【申請人】鎮(zhèn)江瑪珂蕘生物醫(yī)藥科技有限公司