一種多期多樣本法檢測(cè)光溫敏核不育水稻不育性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水稻雜種優(yōu)勢(shì)利用中新材料的安全應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及檢測(cè) 光溫敏核不育水稻不育性的兩個(gè)重要指標(biāo)即不育起點(diǎn)溫度和育性轉(zhuǎn)換敏感期。
【背景技術(shù)】
[0002] 具有穩(wěn)定不育性的光溫敏核不育水稻（S)的利用是兩系雜交水稻推廣的前提。光 溫敏核不育水稻對(duì)光溫條件敏感，一般長(zhǎng)日高溫下不育，短日低溫下可育，因?yàn)檫@種特殊的 育性轉(zhuǎn)換的特性，制種期間如育性敏感期遇到低于不育起點(diǎn)溫度的天氣，不育系會(huì)自交結(jié) 實(shí)從而造成雜交制種失敗，給生產(chǎn)照成巨大的損失。因而，準(zhǔn)確鑒定新選育的光溫敏核不育 水稻的育性穩(wěn)定性才能判斷它們是否具有實(shí)用價(jià)值或育性質(zhì)量是否達(dá)到實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)，這是降 低兩系法雜交水稻制種風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)鍵技術(shù)。
[0003] 對(duì)于光溫敏核不育水稻育性穩(wěn)定性的檢測(cè)，除了多點(diǎn)自然生態(tài)檢測(cè)外，目前主要 是利用人工氣候室(箱）或人工控溫冷水池進(jìn)行檢測(cè)。然而不論應(yīng)用人工氣候室(箱）還 是人工控溫冷水池，材料的處理方法和技術(shù)都有待進(jìn)一步完善和提高。目前檢測(cè)方法的 缺陷，主要表現(xiàn)在材料的處理時(shí)期判斷方法麻煩和一份材料只處理一個(gè)播期且只觀察處 理不育水稻穗發(fā)育V - VI的穗子的處理結(jié)果，另外，光溫敏核不育水稻的不育性具有兩個(gè) 重要指標(biāo)即不育起點(diǎn)溫度和育性轉(zhuǎn)換敏感期，目前只檢測(cè)其不育起點(diǎn)溫度，對(duì)不育性的另 一重要指標(biāo)即育性轉(zhuǎn)換敏感期的檢測(cè)沒(méi)有提及。如根據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 29371. 1-2012)頒布的兩系雜交水稻種子生產(chǎn)體系技術(shù)規(guī)范中，不育系材料處理時(shí)期，秈稻 為主莖幼穗分化進(jìn)入IV期末時(shí)，粳稻為主莖幼穗分化進(jìn)入III期末時(shí)，移入人工氣候箱進(jìn)行 處理，而這種處理方法，只能靠不斷的剝蘗目測(cè)法判斷穗發(fā)育進(jìn)程，比較麻煩；另外，在處理 結(jié)果部分，育性觀察對(duì)象是人工氣候箱結(jié)束時(shí)，掛牌標(biāo)記劍葉和倒二葉的葉枕距為〇cm-2cm 的稻穗，標(biāo)記穗始穗后取樣鏡檢，這種方法只檢查了穗發(fā)育V - VI的穗子溫度敏感性，忽略 了其他可能的育性敏感期。光溫敏核不育水稻育性穩(wěn)定性檢測(cè)時(shí)往往不止一份材料，因而， 要想盡可能準(zhǔn)確檢測(cè)光溫敏核不育水稻的不育性，必須處理好何時(shí)開(kāi)始處理，并且要把不 同材料的育性敏感期盡可能的涵蓋在處理時(shí)間內(nèi)。本發(fā)明即是對(duì)光溫敏核不育水稻育性穩(wěn) 定性的檢測(cè)方法進(jìn)一步改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了實(shí)現(xiàn)對(duì)光溫敏核不育水稻不育性的檢測(cè)更加準(zhǔn)確和全面，本發(fā)明提供一種多 期多樣本法檢測(cè)光溫敏核不育水稻不育性的方法。
[0005] -種多期多樣本法檢測(cè)光溫敏核不育水稻不育性的具體操作步驟如下： (1)將光溫敏核不育水稻種子分三期以上播種，相鄰兩期播種之間間隔7~15天； (2)催芽、田間播種、5~6葉秧齡移栽于大田，當(dāng)水稻進(jìn)入穗發(fā)育，選取連續(xù)3~4個(gè) 播期長(zhǎng)勢(shì)均勻、健壯的植株移栽于盆缽，每期1~2盆，每盆4~7株苗，按常規(guī)技術(shù)管理， 得到水稻盆栽植株； (3) 當(dāng)選取的首個(gè)播種期的水稻盆栽植株進(jìn)入花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期（即俗稱(chēng)的葉枕 平時(shí)期）時(shí)，將水稻盆栽植株于平均溫度21~25°C條件下，在人工氣候室或人工控溫冷水 池內(nèi)培育3~10天，得到控溫培育植株，記載控溫培育植株的控溫培育結(jié)束日期； (4) 待控溫培育植株抽穗時(shí)，取3個(gè)以上單穗為樣本，套袋，記載抽穗日期，鏡檢花粉育 性，待套袋單穗成熟時(shí)，考察其自交結(jié)實(shí)率； (5) 根據(jù)3個(gè)以上單穗的控溫培育結(jié)束日期至單穗抽穗日期之間的天數(shù)、鏡檢花粉育 性結(jié)果和自交結(jié)實(shí)率，結(jié)合水稻穗分化發(fā)育進(jìn)程判斷方法，確定光溫敏核不育水稻不育性 的兩個(gè)重要指標(biāo)即不育起點(diǎn)溫度和育性轉(zhuǎn)換敏感期。
[0006] 同時(shí)檢測(cè)兩種以上品種的光溫敏核不育水稻不育性的具體操作步驟如下： (1) 將兩種以上的光溫敏核不育水稻種子分別分三期以上播種，相鄰兩期播種之間間 隔7~15天； (2) 催芽、田間播種、5~6葉秧齡移栽于大田，當(dāng)兩種以上的水稻進(jìn)入穗發(fā)育，分別選 取穗發(fā)育相近的兩種以上的水稻3~4個(gè)播期長(zhǎng)勢(shì)均勻、健壯的植株移栽于盆缽，每期1~ 2盆，每盆4~7株苗，按常規(guī)技術(shù)管理，得到水稻盆栽植株； (3) 當(dāng)選取的每種水稻盆栽植株的首個(gè)播種期的盆栽植株進(jìn)入花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期 (即俗稱(chēng)的葉枕平時(shí)期）時(shí)，將水稻盆栽植株于平均溫度21~25°C條件下，在人工氣候室或 人工控溫冷水池內(nèi)培育3~10天，得到控溫培育植株，記載控溫培育植株的控溫培育結(jié)束 日期； (4) 待控溫培育植株抽穗時(shí)，取每種水稻3個(gè)以上單穗為樣本，套袋，記載抽穗日期，鏡 檢花粉育性，待套袋單穗成熟時(shí)，考察其自交結(jié)實(shí)率； (5) 根據(jù)每種水稻3個(gè)以上單穗的控溫培育結(jié)束日期至單穗抽穗日期之間的天數(shù)、鏡 檢花粉育性結(jié)果和自交結(jié)實(shí)率，結(jié)合水稻穗分化發(fā)育進(jìn)程判斷方法，確定每種光溫敏核不 育水稻不育性的兩個(gè)重要指標(biāo)即不育起點(diǎn)溫度和育性轉(zhuǎn)換敏感期。
[0007] 本發(fā)明的原理為：光溫敏核不育水稻育性轉(zhuǎn)換敏感期即不育水稻的育性表達(dá)對(duì)環(huán) 境溫度與光周期敏感的時(shí)期，光溫敏核不育水稻育性檢測(cè)時(shí)最重要的條件是必須在不育水 稻的育性轉(zhuǎn)換敏感期進(jìn)行光溫處理才可達(dá)到準(zhǔn)確檢測(cè)不育系不育起點(diǎn)溫度的目的。據(jù)研 究，秈型光溫敏核不育水稻的育性轉(zhuǎn)換敏感期一般在幼穗發(fā)育的IV - VE期，最敏感期為VI 期，粳型光溫敏核不育水稻的育性轉(zhuǎn)換敏感期一般在III - VE期，最敏感期為IV - VI期，且育 性敏感期比較復(fù)雜，不同材料有時(shí)是不同的，如何通過(guò)有限的幾天處理達(dá)到準(zhǔn)確的檢測(cè)光 溫敏核不育水稻不育穩(wěn)定性的目的是必須考慮的。
[0008] 另外，水稻穗發(fā)育進(jìn)程有一定相對(duì)穩(wěn)定的形態(tài)和時(shí)間指標(biāo)可依循，一般從穗發(fā)育 至抽穗揚(yáng)花約30天左右，幼穗分化第6期即花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期時(shí)水稻株葉外觀形態(tài)上 表現(xiàn)為倒1葉與倒2葉的葉耳對(duì)齊，即俗稱(chēng)葉枕平時(shí)期，這個(gè)時(shí)期不需要?jiǎng)兲Y，直接從水稻 的外觀上可以觀察到，水稻穗分化發(fā)育進(jìn)程具體的形態(tài)和時(shí)間指標(biāo)見(jiàn)表1。
[0009] 其次，同一品種同期播種不同單穗生育期相差一般為0-7天，相隔10天左右播種， 相鄰兩期，穗發(fā)育進(jìn)程一般情況下會(huì)相差5-7天，如此同一材料依次相隔10天播3期，生 育期最大相差可達(dá)21天，另外，材料待處理第一個(gè)播期為穗發(fā)育六期時(shí)，距離抽穗還有10 天左右(見(jiàn)表1 )，這樣如材料第一個(gè)播期為穗發(fā)育六期時(shí)開(kāi)始處理，一起處理連續(xù)3期的材 料，可保證待處理材料從穗發(fā)育II - VE期都有單穗經(jīng)過(guò)處理，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。
[0010]目前檢測(cè)光溫敏核不育水稻不育性通用的材料處理方法是把所有待鑒定不育水 稻種子分期播種，以保證不同不育水稻發(fā)育進(jìn)度相同，能夠同時(shí)處理，后移栽于大田，通過(guò) 不斷的剝蘗目測(cè)法觀察幼穗發(fā)育進(jìn)度，選取一個(gè)合適的播期進(jìn)行處理，根據(jù)剝蘗法重點(diǎn)處 理穗發(fā)育V -VI的單穗，基本只考察V -VI幼穗處理結(jié)果并據(jù)此判定不育水稻的不育起點(diǎn) 溫度這1個(gè)不育性指標(biāo)。這種處理方法的弊端是一份材料只處理一個(gè)播期且重點(diǎn)只觀察 V -VI的幼穗，忽略了不育水稻其他可能的育性敏感期，不準(zhǔn)確，另外用剝蘗法判斷材料開(kāi) 始處理時(shí)間，比較麻煩，判斷上也可能有一定的失誤，不準(zhǔn)確也不方便。
[0011] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果體現(xiàn)在以下方面： 1.本發(fā)明把以前一個(gè)光溫敏核不育水稻只選取一個(gè)播期進(jìn)行處理的方式改變?yōu)橐粋€(gè) 光溫敏核不育水稻選取相鄰的3-4個(gè)播期作為處理對(duì)象，處理結(jié)束后，