本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的涉及一種檢測(cè)方法，利用核磁共振方法判斷IL-12對(duì)因放射產(chǎn)生的骨髓損傷的修復(fù)情況。
背景技術(shù)：
：目前，對(duì)于腫瘤癌癥等的治療過(guò)程中，化學(xué)治療和放射治療已經(jīng)成為主要的輔助治療手段，傳統(tǒng)的常規(guī)治療腫瘤或癌癥的方法一般是手術(shù)后切除腫瘤，再進(jìn)行放療或化療。但是，由于在放射治療中，需要應(yīng)用穿透力極強(qiáng)的γ射線或β射線等，難以避免的產(chǎn)生副作用，從而對(duì)人體造成損害，其中最主要的傷害就是對(duì)人體骨髓中的造血干細(xì)胞的損害。另一方面，在對(duì)急性輻射損傷研究實(shí)驗(yàn)中，人們發(fā)現(xiàn)，急性輻射損傷常表現(xiàn)為多系統(tǒng)性損傷，其中骨髓造血功能抑制是常見的病理病變，而且貫穿于放射損傷的始終，是造成患者死亡的主要原因。傳統(tǒng)的公知常識(shí)中已經(jīng)明確：人體的骨髓主要分為紅骨髓和黃骨髓兩種，其中黃骨髓主要由脂肪填充構(gòu)成，而只有紅骨髓由于其含有造血干細(xì)胞起到了主要的造血作用。正常成年人在成年之后，體內(nèi)的紅骨髓逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)辄S骨髓，而只有在盆腔和脊柱中還保留一部分紅骨髓。而急性輻射或放療所引起的人體組織的損傷，統(tǒng)稱為放射病。目前，人們?cè)谥委煼派洳r(shí)，最根本的是為了能夠讓病人生存下去。在對(duì)放射病病理學(xué)研究中顯示，輻射對(duì)人體骨髓傷害的主要原因是影響骨髓中的紅骨髓，當(dāng)病人因輻射所引起的放射病情嚴(yán)重時(shí)，骨髓中的紅骨髓完全轉(zhuǎn)變?yōu)榧t骨髓，從而失去造血功能，引起感染和出血，甚至導(dǎo)致死亡。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外有許多關(guān)于放射病研究的報(bào)道，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一系列細(xì)胞因子，如IL-3、G-CSF、GM-CSF、M-CSF、SCF和FL等，可作用于各分化發(fā)育階段的造血細(xì)胞，在輻射所致的造血功能抑制的恢復(fù)中均具有一定的作用。在《細(xì)胞因子與急性輻射損傷的防護(hù)和治療》一文中，人們發(fā)現(xiàn)，IL-12能協(xié)同其他因子刺激造血干細(xì)胞的生長(zhǎng)，保護(hù)放、化療中的造血干細(xì)胞，即將骨髓中已經(jīng)變成黃骨髓的那部分骨髓協(xié)同轉(zhuǎn)化為紅骨髓，從而保護(hù)骨髓中的紅骨髓免受輻射的傷害，達(dá)到治療和救命的目的。在臨床應(yīng)用中，這一研究結(jié)果已經(jīng)被廣泛接受并成功的應(yīng)用。但是，目前在檢測(cè)IL-12對(duì)因輻射所造成的骨髓損傷的修復(fù)的方法，一般是根據(jù)外周血細(xì)胞的恢復(fù)情況來(lái)判斷的，即需要定時(shí)的抽取病人的骨髓或血液樣本進(jìn)行檢查。一方面使病人產(chǎn)生極大的痛苦，另一方面外周血細(xì)胞的觀察并不能準(zhǔn)確客觀的反映骨髓的修復(fù)情況。另一方面，在放射治療宮頸癌過(guò)程中，人們發(fā)現(xiàn)，核磁共振能夠清晰的觀察出骨髓的變化情況。但在現(xiàn)有技術(shù)中，沒(méi)有報(bào)道過(guò)將核磁共振應(yīng)用于判斷IL-12對(duì)輻射損傷中骨髓的修復(fù)的檢測(cè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的其中一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)IL-12對(duì)輻射損傷中骨髓的修復(fù)情況的方法。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：IL-12在修復(fù)因放療產(chǎn)生的骨髓損傷的用途中，IL-12用于修復(fù)因放療產(chǎn)生的骨髓損傷，利用核磁共振方法檢測(cè)脊椎骨T1WI和T2WI的強(qiáng)度，判斷骨髓損傷恢復(fù)情況。其中，所述的檢測(cè)方法可以用于檢測(cè)IL-12在修復(fù)因不同劑量的放療產(chǎn)生的骨髓損傷。所述檢測(cè)方法可以用于檢測(cè)IL-12在修復(fù)因不同劑量的放療產(chǎn)生的骨髓損傷之前，之中和之后。優(yōu)選的，所述IL-12可以為重組人白細(xì)胞介素-12。本發(fā)明的有益效果是：1.采用核磁共振的方法，能夠直觀準(zhǔn)確的觀察IL-12對(duì)放射病患者骨髓的修復(fù)情況，減輕治療中因其他方法帶來(lái)的痛苦。2.采用本發(fā)明的檢測(cè)方法，不會(huì)對(duì)放射病人產(chǎn)生其他額外的副作用。3.本發(fā)明所采用的檢測(cè)方法，更加直觀，更加準(zhǔn)確，在IL-12治療因放療產(chǎn)生的輻射損傷時(shí)，凡是能夠通過(guò)核磁共振癌癥部位，都可以采用本發(fā)明方法進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)用范圍更加廣泛。附圖說(shuō)明圖1.受照食蟹猴30天內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量變化；圖2.受照食蟹猴30天內(nèi)血小板數(shù)量變化，注：與照射對(duì)照組比較，*，P<0.05。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：急性放射骨髓損傷模型的建立食蟹猴40只，體重4.0～6.0kg，健康雄性，動(dòng)物檢疫合格，由軍科院動(dòng)物中心大動(dòng)物室提供。照射劑量5.0Gy、雙側(cè)照射。實(shí)施例2：rhIL-12對(duì)放射病的治療將實(shí)施例1中的40只動(dòng)物，分為3組，正常對(duì)照組8只、照射對(duì)照組8只、rhIL-12(重組人白細(xì)胞介素-12)治療組24只。正常對(duì)照組：不照射注射滅菌注射用水；照射對(duì)照組：照射后注射滅菌注射用水；rhIL-12治療組，分三個(gè)劑量，每劑量8只，照射后24h單次皮下分別注射188、250、333ng/kg。照射后觀察時(shí)間為30天。照射后動(dòng)物一般活動(dòng)良好，照射后第3天動(dòng)物活動(dòng)減少，各輻照組動(dòng)物均出現(xiàn)不同程度的腹瀉、稀便等消化道癥狀。死亡情況見表1。表1.各組動(dòng)物死亡情況rhIL-12治療組與照射對(duì)照組比較，P＝0.002，表明rhIL-12治療組30天生存率和生存時(shí)間顯著優(yōu)于照射對(duì)照組。結(jié)果顯示出rhIL-12對(duì)治療急性放射性損傷的有效性。比較例1：急性放射組動(dòng)物檢測(cè)方法的選擇(1)骨髓抽取方法：骨髓有核細(xì)胞(BMNC)造血集落培養(yǎng)正常對(duì)照組、照射對(duì)照組、rhIL-12治療組實(shí)驗(yàn)猴在輻射后第29天分別采集2只猴的骨髓液，麻醉后抽取股骨端骨髓液2ml，無(wú)菌條件下常規(guī)方法制備單個(gè)核細(xì)胞，計(jì)數(shù)細(xì)胞后配制成細(xì)胞懸液，鋪24孔板中，0.55ml/孔，細(xì)胞終濃度為1×105個(gè)/孔，邊緣孔填充0.55ml無(wú)菌生理鹽水，于37℃，5％CO2培養(yǎng)6-12天，倒置顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)各系造血細(xì)胞的集落(CFU)生成情況,包括CFU-E(紅細(xì)胞集落生成單位)、CFU-GM(粒細(xì)胞-單核細(xì)胞集落生成單位)以及CFU-mix(混合集落生成單位)，結(jié)果見表2。表2rhIL-12對(duì)受照射損傷后的猴骨髓造血干/祖細(xì)胞的集落形成作用(n＝2，)由以上結(jié)果可知，rhIL-12治療組與照射對(duì)照組比較，rhIL-12治療組對(duì)造血細(xì)胞的集落生成情況優(yōu)于照射對(duì)照組，結(jié)果顯示出rhIL-12能夠有效的促進(jìn)造血功能的恢復(fù)。(2)抽血檢測(cè)方法：白細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化三個(gè)輻照實(shí)驗(yàn)組食蟹猴的白細(xì)胞(WBC)總數(shù)在受照后第3天均明顯降低，在第6天已下降至低點(diǎn)并維持于較低水平，持續(xù)到第20天，其后逐漸開始恢復(fù)。各治療組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖1。三個(gè)輻照實(shí)驗(yàn)組血小板(PLT)計(jì)數(shù)在照后的第8天快速下降。在第18天，rhIL-12188ng/kg治療組的血小板水平明顯高于照射對(duì)照組，P值均小于0.05。見圖2。由圖2可知，rhIL-12治療組與照射對(duì)照組比較，rhIL-12治療組對(duì)血小板的恢復(fù)顯著優(yōu)于照射對(duì)照組，結(jié)果顯示出rhIL-12能夠有效的促進(jìn)血小板的恢復(fù)。(3)核磁共振檢測(cè)方法：核磁共振在骨髓放射損傷中的應(yīng)用常規(guī)方法麻醉實(shí)驗(yàn)猴，進(jìn)行核磁共振檢查，檢查的目標(biāo)是脊椎骨，結(jié)果見表3。MRI(磁共振成像)檢查采用1.5T單位(GEMedicalSystems，Milwaukee，Wis)，包括T1、T2加權(quán)像、STIR(shorttimeinversionrecovery)，短時(shí)間反轉(zhuǎn)恢復(fù)序列，與FLAIR(fluidattenuatedinversionrecovery)同為MRI成像技術(shù)的序列技術(shù)中的反轉(zhuǎn)恢復(fù)序列。層厚5mm，層間距2.5mm，矩陣256*192，F(xiàn)OV36cm。以肌肉信號(hào)為參照，信號(hào)低于肌肉的為低信號(hào)，與肌肉相同的為等信號(hào)，高于肌肉且低于脂肪組織的為高信號(hào)，等于或高于脂肪組織的為明顯高信號(hào),結(jié)果見表3。表3輻射猴rhIL-12治療前后脊椎骨T1WI、T2WI強(qiáng)度變化實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前健康觀察期治療后7-15天治療后21-30天照射對(duì)照組低高高rhIL-12188ng/kg低高低rhIL-12250ng/kg低高低rhIL-12333ng/kg低高低由以上三種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果可以看出，三種檢測(cè)方法均能反應(yīng)rhIL-12對(duì)治療急性放射性損傷的有效性，因此表明采用核磁共振的方式檢測(cè)骨髓放射損傷具有指導(dǎo)意義，而與抽血檢測(cè)方法和骨髓抽取方法相比，采用核磁共振的方式能夠更直觀準(zhǔn)確的觀察IL-12對(duì)放射病患者骨髓的修復(fù)情況，同時(shí)不會(huì)對(duì)放射病人產(chǎn)生其他額外的副作用。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也應(yīng)被視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3