本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別是涉及一種自組裝液晶納米粒前體微粒及其制備方法。

背景技術(shù)：

大部分具有藥物活性的化合物都面臨溶解度低的問題，研究表明，40％的上市藥物和70％的在研藥物都是難溶性藥物。難溶性藥物溶出速率慢和溶出程度低，從而導(dǎo)致藥物的生物利用度低，不能達(dá)到理想的臨床療效。藥物須以一定的速度傳遞到治療部位并達(dá)到治療濃度才能及時發(fā)揮療效，這個過程需要借助藥物制劑的手段來提高藥物的溶出速率和溶解度，從而提高藥物的生物利用度，改善臨床療效。藥物從制劑中溶出釋放的速率和程度主要由藥物載體調(diào)控。

溶致液晶是一種新型脂質(zhì)藥物載體，因其獨(dú)特的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)而具有良好的藥物控釋性能，近年來在國內(nèi)外引起了藥學(xué)界的研究興趣。溶致液晶體是由兩親性脂質(zhì)分散在水性環(huán)境中自發(fā)形成各種幾何形態(tài)構(gòu)成的一個中介相形態(tài)(Mesophase)，因其獨(dú)特的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)而具有良好的藥物控釋性能，同時能夠保護(hù)被包裹藥物的穩(wěn)定性。其三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)主要由親水域中的雙連續(xù)水通道和親脂域中的脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的晶格單元在空間上延伸折疊，堆疊成具有三維，循環(huán)排列和最小表面積特點(diǎn)的緊密結(jié)構(gòu)。難溶性藥物具有較強(qiáng)的疏水性，與脂質(zhì)結(jié)構(gòu)極性相近，在親脂域中具有較高的溶解度，因而傾向于以穩(wěn)定的無定型的分子態(tài)分散在晶格單元的脂質(zhì)雙分子層。由Noyes-Whitney方程可知，藥物顆粒大小，藥物與溶出介質(zhì)的接觸面積，以及溶出層與介質(zhì)之間的藥物濃度差是影響難溶性藥物溶出速率的關(guān)鍵參數(shù)。藥物包載進(jìn)液晶結(jié)構(gòu)中后，藥物由晶體顆粒轉(zhuǎn)變成無定型的分子態(tài)，均勻分布于親脂域中，雙連續(xù)水通道與脂質(zhì)雙分子層的巨大交界面積顯著增加了藥物的溶出表面積。同時藥物在親脂域中有較大的溶解度，在溶出層和介質(zhì)之間形成較大的藥物濃度差，可進(jìn)一步增大藥物的溶出速率。

此外，研究表明液晶的晶格結(jié)構(gòu)對包載的敏感藥物具有很強(qiáng)的保護(hù)作用。溶致液晶的晶格結(jié)構(gòu)由雙連續(xù)的納米水通道和脂質(zhì)雙分子層在三維空間交叉堆疊而成，具有強(qiáng)極性的親水域，具有極性較弱的親脂域和極性中等的親水親脂交界面，對親水性，疏水性和兩親性的藥物都有強(qiáng)的包載作用。將敏感性藥物包載在液晶晶格結(jié)構(gòu)內(nèi)部，可以減少藥物與外界破壞性因素(比如生物酶，液晶制備過程中高溫、高能、機(jī)械剪切作用等)的接觸，避免藥物在溶媒介質(zhì)或生物體內(nèi)被水解而失去生物活性，隔離外界高溫，高能和機(jī)械剪切作用對藥物結(jié)構(gòu)的破壞，有效保持藥物結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及相應(yīng)的藥理活性。

液晶載體的應(yīng)用形式主要分為三種：前體溶液、凝膠和納米粒。前體溶液尚未形成液晶晶格單元，凝膠和納米粒因其獨(dú)特三維結(jié)構(gòu)特性而在增加難溶性藥物的溶出度和保護(hù)易敏感藥物的活性方面表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢，是液晶藥物載體的重要應(yīng)用形式。液晶納米粒通常是由溶致液晶的大體積凝膠經(jīng)高能高壓或者機(jī)械力分散得到的納米級粒子，具有更高的膜表面積并且仍然保持溶致液晶規(guī)則的晶格結(jié)構(gòu)，因此其增溶效果顯著優(yōu)于液晶凝膠。液晶納米粒兼具溶致液晶和納米粒的載藥特性，有增溶、包封、保護(hù)藥物和促進(jìn)藥物吸收的作用，具有生物相容性和黏附性,且可生物降解而成為備受關(guān)注的藥物傳遞系統(tǒng)。

盡管目前有大量關(guān)于液晶納米粒載體的研究報(bào)道，但目前仍然沒有液晶納米粒的上市制劑。液晶納米粒制劑的工業(yè)化和商品化發(fā)展主要受限于兩個瓶頸問題：一個是缺乏高效可行的產(chǎn)業(yè)化制備方法，另一個是液晶納米粒分散體系的穩(wěn)定性問題。目前液晶納米粒的制備方法主要是由大到小法(top-down)，可分為高速剪切法，高壓均質(zhì)法和超聲波破碎法。由于液晶材料接觸水時能夠自發(fā)形成液晶凝膠，所以由大到小法通常是先將熔融的液晶材料、助溶劑和穩(wěn)定劑混勻，再分散在水中形成液晶凝膠的粗分散體，隨后用高速剪切，高壓均質(zhì)和超聲波破碎等高能或機(jī)械力分散的方法進(jìn)一步分散，得到液晶納米粒的水分散體系。液晶納米粒巨大的比表面積使這一分散體系極其不穩(wěn)定，容易發(fā)生沉淀和聚集。同時，制備過程中使用到的高速剪切，高能高壓輸入進(jìn)一步增大了納米粒的表面勢能，增加了納米粒體系的動力學(xué)不穩(wěn)定性，進(jìn)一步加劇液晶納米粒發(fā)生的聚集和沉淀。此外，制備過程中的高能高壓還有可能破壞藥物活結(jié)構(gòu)，尤其當(dāng)原本包裹在晶格單元中的藥物受到高能高壓及強(qiáng)機(jī)械作用力而發(fā)生泄露分散到大體積水相介質(zhì)中時，溶液中的游離藥物失去了液晶結(jié)構(gòu)的保護(hù)后更容易受到高能高壓的破壞。傳統(tǒng)制備方法中引入的高能，高壓，機(jī)械剪切的破壞作用會在放大生產(chǎn)中放大至成千上萬倍。這種高溫高能破壞作用使現(xiàn)有制備方法無法實(shí)現(xiàn)納米粒分散體系的工業(yè)化生產(chǎn)，而僅止步于實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)研究。

藥物泄露失活和納米粒聚集沉淀問題在液晶納米粒存儲過程中同樣存在，乃至更嚴(yán)重。液晶納米粒的主要材料為兩親性的脂質(zhì)材料和乳化劑，均為粘性較大的材料，因此液晶納米粒很容易發(fā)生粘連聚集乃至沉淀。同時液晶納米粒溶液在長期存儲過程中液晶材料、乳化劑和溶劑有可能發(fā)生相分離，完全喪失液晶的三維晶格結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)有方法制備的納米粒需要較高含量的穩(wěn)定劑和大體積的分散介質(zhì)(比如水)來分散納米粒，使其均勻分散，避免納米粒聚集沉淀。因此納米粒分散系中納米粒以及藥物的含量很低，實(shí)際產(chǎn)率較低。

缺乏高效可行的產(chǎn)業(yè)化制備方法以及存儲過程中納米粒聚沉和藥物泄露等問題使液晶納米粒藥物載體的應(yīng)用一直停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段，無法進(jìn)一步進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)來實(shí)現(xiàn)其在藥物傳遞系統(tǒng)中的使用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明提供了一種液晶納米粒前體微粒的制備方法，在制備的過程中避免了形成不穩(wěn)定的液晶納米粒的分散溶液，制備得到的液晶納米粒前體微粒在制備和存儲過程中穩(wěn)定性良好，遇水后可自組裝形成原位液晶納米粒，解決了傳統(tǒng)方法制備的液晶納米粒藥物泄露、包封率低，分散體系不穩(wěn)定等問題。

具體技術(shù)方案如下。

一種液晶納米粒前體微粒的制備方法，包括以下步驟：

制備液晶前體溶液：將藥物溶解于溶劑中，得藥物溶液，在藥物溶液中加入熔融的液晶材料和稀釋劑，混勻，得到均一的前體溶液；

干燥：將前體溶液進(jìn)行干燥，即可得到固化的液晶納米粒前體微粒；

所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為0.5-20wt％；

所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1-7：40-150；

所述稀釋劑選自聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆(Poloxamer)、高分子量的聚乙二醇(PEG)、羥丙甲基纖維素(HPMC)、甲基纖維素(MC)、乙基纖維素(EC)、乳糖(Lactose)和殼聚糖(Chitosan)中的至少一種。

在其中一些實(shí)施例中，所述液晶材料選自單油酸甘油酯(GMO)、油酸雙甘油酯(GDMO)、甘油單亞油酸酯(GMLO)、二甘油油酸酯(DGMO)、磷脂酰乙醇胺(PE)、二亞油酰磷脂酰乙醇胺(DLPE)、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿(POPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、植烷三醇(PYT)和脫水山梨醇酯(SMO)中的至少一種。

在其中一些實(shí)施例中，所述溶劑選自乙醇(EtOH)、丙二醇(PG)、二甲基亞砜(DMSO)、聚乙二醇300(PEG300)，聚乙二醇400(PEG400)、2-吡咯烷酮(2-pyrrolidinone)、乙酸乙酯(EA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAC)和水(H₂O)中的至少一種。

在其中一些實(shí)施例中，所述熔融的液晶材料的溫度為30～65℃。

在其中一些實(shí)施例中，所述干燥的方法為噴霧干燥法、冷凍噴霧干燥法、研磨分散法或流化床干燥法。

在其中一些實(shí)施例中，所述干燥的方法為噴霧干燥法；所述噴霧干燥的工藝參數(shù)如下：霧化壓力為12-20kPa,進(jìn)風(fēng)速度為0.6-1.3m³/min,進(jìn)風(fēng)溫度為50-85℃，出風(fēng)溫度為45-70℃，液晶前體溶液的攪拌速度為500-1500rpm，泵液流速為0.5-3.4mL/min。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物為難溶性的藥物或易水解的藥物。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物為羥基喜樹堿(HCPT)、多西紫杉醇(DTX)、塞來昔布(CLX)、酮洛芬(KET)、兩性霉素B(AmB)、地西泮(DZP)、甲硝唑(MTZ)。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物為羥基喜樹堿；所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為1-15wt％；所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1-3：40-100；所述液晶材料為植烷三醇和油酸雙甘油酯中的至少一種；所述稀釋劑為聚乙烯吡咯烷酮和甲基纖維素中的至少一種；所述溶劑為N,N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的至少一種。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為1-10wt％；所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1-2：95-100；所述液晶材料為植烷三醇；所述稀釋劑為聚乙烯吡咯烷酮；所述溶劑為N,N-二甲基乙酰胺。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為8-10wt％。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為1-3wt％；所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1-2：60-80；所述液晶材料為質(zhì)量比為1:11-14的油酸雙甘油酯和植烷三醇的混合物；所述稀釋劑為質(zhì)量比為1:28-30的甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮的混合物；所述溶劑為N-甲基吡咯烷酮。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物為多西紫杉醇；所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為1-10wt％；所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1-6：60-130；所述液晶材料為單油酸甘油酯、磷脂酰乙醇胺和植烷三醇中的至少一種；所述稀釋劑為聚乙烯吡咯烷酮和乙基纖維素中的至少一種。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為3-6wt％；所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1.5-4：60-85；所述液晶材料為單油酸甘油酯；所述稀釋劑為聚乙烯吡咯烷酮，所述溶劑為乙醇。

在其中一些實(shí)施例中，所述藥物在所述液晶納米粒前體微粒中的含量為5-7wt％；所述液晶材料與所述稀釋劑與所述溶劑的質(zhì)量比為1：1-2：60-80；所述液晶材料為質(zhì)量比為1:6-8的磷脂酰乙醇胺和植烷三醇的混合物；所述稀釋劑為質(zhì)量比為1:10-12的乙基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮的混合物；所述溶劑為乙醇。

在其中一些實(shí)施例中，所述噴霧干燥的工藝參數(shù)如下：霧化壓力為16-20kPa,進(jìn)風(fēng)速度為0.7-0.9m³/min,進(jìn)風(fēng)溫度為60-70℃，出風(fēng)溫度為50-60℃，液晶前體溶液的攪拌速度為800-1200rpm，泵液流速為1.8-2.3mL/min。

本發(fā)明還提供了一種液晶納米粒前體微粒。該液晶納米粒前體微粒在制備和存儲過程中穩(wěn)定性良好，遇水后可自組裝形成原位液晶納米粒，解決了傳統(tǒng)方法制備的液晶納米粒藥物泄露、包封率低，分散體系不穩(wěn)定等問題。

具體技術(shù)方案如下。

一種液晶納米粒前體微粒，由上述制備方法制備得到。

本發(fā)明還提供了一種自組裝液晶納米粒。該自組裝液晶納米粒相比傳統(tǒng)方法制備的液晶納米粒包封率高，分散體系更穩(wěn)定。

具體技術(shù)方案如下。

一種自組裝液晶納米粒，由以下方法制備得到：將上述液晶納米粒前體微粒與水發(fā)生水合作用，液晶納米粒前體微裂解、自組裝，即得。

在其中一些實(shí)施例中，所述自組裝液晶納米粒為層狀液晶納米粒、六角液晶納米粒和立方液晶納米粒中的至少一種。

本發(fā)明的液晶納米粒前體微粒、自組裝液晶納米粒及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

巨大比表面積是液晶納米粒的突出優(yōu)勢同時也是它的致命缺點(diǎn)。納米粒繁復(fù)堆疊的晶格結(jié)構(gòu)顯著地增大了藥物溶出表面積，使其對難溶性藥物的增溶效果明顯優(yōu)于液晶凝膠。但是巨大的比表面也賦予納米粒巨大的表面勢能，使其熱力學(xué)穩(wěn)定性差，易于發(fā)生聚集和沉淀，甚至發(fā)生液晶材料/乳化劑/溶劑相分離。

經(jīng)發(fā)明人大量實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，將液晶材料、稀釋劑、藥物以及溶劑以一定比例混合成均一溶致液晶前體溶液再經(jīng)干燥，可得到液晶納米粒前體微粒，該液晶納米粒前體微粒中的液晶材料和稀釋劑相互分散，微粒與水發(fā)生水合作用時，微粒中的大部分稀釋劑溶解，同時稀釋劑還起到崩解的作用，分散的液晶材料與水發(fā)生自組裝即可形成具有三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的液晶納米粒，調(diào)節(jié)藥物釋放行為。單個的液晶納米粒前體微粒能夠裂解出數(shù)個液晶納米粒，并且其粒徑可從微米級轉(zhuǎn)換到納米級。

本發(fā)明的發(fā)明人在其大量實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，創(chuàng)新性地將液晶納米粒制備成前體微粒的形式，在制備的過程中避免形成不穩(wěn)定的液晶納米粒的分散溶液，克服了液晶納米粒分散溶液熱力學(xué)穩(wěn)定性差，易于發(fā)生聚集和沉淀或者存在相分離的問題。液晶納米粒前體微粒在制備和存儲過程中穩(wěn)定性良好，使用時前體微粒裂解為液晶納米粒，比表面積迅速增大，依然保持液晶納米粒對難溶性藥物的增溶優(yōu)勢。液晶納米粒前體微粒在制備過程中不需要使用高能高壓和強(qiáng)機(jī)械作用，對藥物尤其是敏感型藥物的損害較小，成品制劑為固體形式，不存在藥物泄露到分散介質(zhì)的問題，提高了藥物的包封率，也不會因藥物泄露到介質(zhì)而導(dǎo)致藥物失活，有效增加難溶性藥物的溶出度的同時保護(hù)了敏感性藥物的藥理活性。

由本發(fā)明的液晶納米粒前體微粒自組裝形成的液晶納米粒的粒徑范圍在120-700nm之間，粒徑均一，PDI均小于0.3，屬于穩(wěn)定分散體系，不需要使用額外的穩(wěn)定劑，熱力學(xué)穩(wěn)定性優(yōu)于傳統(tǒng)方法制備的普通液晶納米粒，且能夠有效的調(diào)節(jié)藥物釋放行為，減少藥物突釋，并能提高藥物的完全釋放程度。

本發(fā)明的液晶納米粒前體微粒的制備方法工藝簡單，采用干燥制粒法一步成型，包封率高，生產(chǎn)成本較低，制備和存儲穩(wěn)定性高，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的液晶納米粒前體微粒同時可作為制劑中間體，進(jìn)一步制備成片劑，膠囊和干粉吸入劑等多種劑型，適用于多種給藥途徑，具有良好的應(yīng)用前景，推進(jìn)液晶納米的工業(yè)化發(fā)展。

附圖說明

圖1為液晶納米粒前體微粒和自組裝液晶納米粒的制備示意圖；

圖2為實(shí)施例1的液晶納米粒前體微粒的掃描電鏡圖；

圖3為實(shí)施例1的液晶納米粒前體微粒的粒徑分布圖；

圖4為實(shí)施例2的液晶納米粒前體微粒的掃描電鏡圖；其中GMO/PVP K30/DTX的比例分別為A：4/6/0.04；B:3/7/0.04；C:2/8/0.04；

圖5為實(shí)施例3中自組裝液晶納米粒的透射電鏡圖及液晶結(jié)構(gòu)示意圖；其中，A:液晶納米粒前體微粒自組裝為液晶納米粒的透射電鏡圖；B:單個液晶納米粒前體微粒裂解出大量液晶納米粒過程的透射電鏡圖；

圖6為實(shí)施例2的液晶納米粒前體微粒的粒徑分布圖；

圖7為實(shí)施例2的自組裝液晶納米粒(GMO/PVP/DTX＝4/6/0.04)的粒徑和對比例2的普通液晶納米粒的粒徑變化對比圖；A:自組裝液晶納米粒的粒徑圖(A1:剛制備時；A2：靜置4h后；A3：靜置12h后)；B:普通液晶納米粒的粒徑圖(B1:剛制備時；B2：靜置4h后；B3：靜置12h后)；

圖8為實(shí)施例5中的自組裝液晶納米粒的偏光顯微鏡圖，其中樣品含水量分別為A:5％；B:15％；C:20％；

圖9為實(shí)施例5中的樣品含水量為20％的自組裝液晶納米粒的小角散射圖譜；

圖10為羥基喜樹堿包載在自組裝液晶納米粒(B)和普通液晶納米粒(A)中時的液相色譜圖；

圖11為載有多西紫杉醇的自組裝液晶納米粒和普通液晶納米粒的藥物體外釋放曲線。

具體實(shí)施方式

以下通過具體實(shí)施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制。

本發(fā)明的液晶納米粒前體微粒和自組裝液晶納米粒的制備示意圖如圖1所示。液晶材料，稀釋劑和藥物溶解在溶劑中，得到液晶前體溶液，經(jīng)干燥制粒得到液晶納米粒前體微粒。液晶納米粒前體微粒與水發(fā)生水合作用后自組裝為分散的液晶納米粒。所得液晶納米粒具有三維晶格網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)和水脂通道，能夠包載不同極性的藥物。

實(shí)施例1：載有羥基喜樹堿的液晶納米粒前體微粒的制備

(1)制備液晶前體溶液

稱取三份二甲基乙酰胺(DMAC)，每份39.0g，分別加入0.01g、0.05g、0.10g難溶性藥物羥基喜樹堿(即所得液晶納米粒前體微粒中藥物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1％，5％和10％)，得到三份藥物溶液；在每份藥物溶液中加入0.4g的50℃下熔融的PYT和0.6g稀釋劑PVPVA64(即所得液晶納米粒前體微粒中PYT/PVPVA64的比例為4/6)，渦旋混勻，即得三份流動性良好的液晶前體溶液。

(2)制備液晶納米粒前體微粒

采用噴霧干燥法將均一的液晶前體溶液固化分散為液晶納米粒前體微粒。所述噴霧干燥的技術(shù)參數(shù)為：霧化壓力18kPa,進(jìn)風(fēng)速度0.8m³/min,進(jìn)風(fēng)溫度為65℃，出風(fēng)溫度為58℃，液晶前體溶液的攪拌速度為1200rpm，泵液流速為2.1mL/min，在樣品收集瓶收集液晶納米粒前體微粒。

將本實(shí)施例制備的載有羥基喜樹堿的液晶納米粒前體微粒置于貼有導(dǎo)電膠帶的金屬載物臺上，噴金制成掃描電鏡樣本，在掃描電鏡下觀察微球外形(結(jié)果見圖2)。掃描電鏡結(jié)果顯示：所得液晶納米粒前體微粒為規(guī)則的球形微粒，平均粒徑約為10μm，本發(fā)明方法可以將粘稠的蠟狀半固體脂質(zhì)液晶材料固化分散，制備成分散性良好的溶質(zhì)液晶納米粒前體微粒。

采用激光粒度分析儀(Mastersizer2000)對本實(shí)施例制備的載有羥基喜樹堿的液晶納米粒前體微粒進(jìn)行粒徑及分布的測量(結(jié)果見圖3)。結(jié)果表明，本發(fā)明所制備的載有羥基喜樹堿的液晶納米粒前體微粒粒徑均一，呈現(xiàn)正態(tài)分布，粒徑跨距小，具體參數(shù)為d_(0.1)＝6.857μm，d_(0.5)＝9.746μm，d_(0.9)＝13.525μm。按下式計(jì)算粒徑跨距Span：Span＝[d(0.9)-d(0.1)]/d(0.5)，得到Span＝0.684。

采用破乳法測定本實(shí)施例的液晶納米粒前體微粒的載藥量，精密稱取本實(shí)施例所制備的載有羥基喜樹堿的液晶納米粒前體微粒2mg置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并定容至標(biāo)定刻度線；將樣品渦旋或超聲至完全溶解后，用0.22μm濾膜過濾，采用高效液相色譜色譜法測定樣品中羥基喜樹堿的含量。高效液相色譜系統(tǒng)為島津SIL-20A色譜系統(tǒng)；固定相為PhenomenexGemini-NX5μC18110A(250×4.60mm)；流動相：甲醇-0.02M磷酸鹽緩沖液(磷酸調(diào)節(jié)pH至5.5)(55：45)；柱溫：35℃；檢測波長266nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL。再按下式計(jì)算藥物包封率(EE)：

EE＝(W測-W投)/W投×100％

式中，W投：液晶納米粒前體微粒制備中的投藥量；W測：液晶納米粒前體微粒中實(shí)際測得的含藥量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)施例1所制備的載有羥基喜樹堿的液晶納米粒前體微粒中羥基喜樹堿的包封率分別達(dá)到96.02±0.43％、95.78±0.98％、97.56±0.64％(n＝3)。

對比例1：載有羥基喜樹堿的普通液晶納米粒的制備

稱取0.05g羥基喜樹堿溶于5g二甲基乙酰胺(DMAC)中，再加入0.40g50℃下熔融的PYT和0.60g PVPVA64,渦旋混勻，得到均一的前體溶液。將所得前體溶液加入35mL水中，10000rpm高速剪切2min，得到液晶的粗分散體系。再將所得液晶粗分散體系進(jìn)行高壓均質(zhì)，均質(zhì)參數(shù)為500Bar,6個循環(huán)，即可得到液晶納米粒的水分散體系(用此top-down法制備的液晶納米粒以下皆稱“普通液晶納米?！?，用本發(fā)明的制備方法制備的液晶納米粒稱為自組裝液晶納米粒，以示區(qū)別)。

采用超濾離心法測定本對比例的普通液晶納米粒的包封率，取對比例1的液晶納米粒適量，置于超濾管(100M,Minipore)中離心30min,轉(zhuǎn)速為3000r/min，取續(xù)濾液適量，HPLC法測定羥基喜樹堿的含量；另取對比例1的液晶納米粒適量，以甲醇破乳并稀釋一定倍數(shù),測定羥基喜樹堿的總量,按下式計(jì)算包封率(E E)：

EE＝(W總-W游)/W總×100％

式中，W總：普通液晶納米粒的總含藥量；W游：普通液晶納米粒中的游離藥物量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對比例1的液晶納米粒包封率為76.0±0.28％(n＝3)。

因藥物在自組裝液晶納米粒和普通液晶納米粒體系中的包載狀態(tài)不同，故采用了不同的方法分別測定藥物在這兩種體系中的包載率。在前體微粒自組裝體系中藥物除了在前體溶液干燥形成微粒過程中可能損失極少量藥物外，大部分藥物被包載在前體微粒中，制劑為固體形式，故無游離藥物分散在介質(zhì)(比如水)中，因此可以采用破乳法測定藥物的包封率。而在普通納米粒體系中，分散介質(zhì)(比如水)和納米粒體積相差很大，藥物大部分包封在納米粒中，但仍有較大的一部分分散在介質(zhì)中，故采用超濾離心法測定藥物的包封率。因?yàn)檫@兩種制劑形式不一樣，一種是固體制劑另一種是液體制劑，故無法采用相同的方法測定藥物的包載率，只能采用對應(yīng)其制劑形式的方法來測定藥物的包封率。這兩種方法測定的結(jié)果無法用來直接比較，但是可以分別評價(jià)其制劑形式對藥物的利用效率，可作為間接的參考。

實(shí)施例2：載有多西紫杉醇的液晶納米粒前體微粒的制備

(1)制備液晶前體溶液

稱取三份無水乙醇，每份為24.0g，分別加入0.04g難溶性藥物多西紫杉醇(即所得液晶納米粒前體微粒中藥物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4％)，得到三份藥物溶液；在三份藥物溶液中分別加入0.4g、0.3g、0.2g的47℃下熔融的GMO和0.6g、0.7g以及0.8g的稀釋劑PVP K30(即所得液晶納米粒前體微粒中GMO/PVP K30的比例為4/6，3/7和2/8)，渦旋混勻，即得三份流動性良好的液晶前體溶液。

(2)制備液晶納米粒前體微粒

采用噴霧干燥法將均一的液晶前體溶液固化分散為液晶納米粒前體微粒。所述噴霧干燥的技術(shù)參數(shù)為：霧化壓力16kPa,進(jìn)風(fēng)速度0.8m³/min,進(jìn)風(fēng)溫度為60℃，出風(fēng)溫度為54℃，液晶前體溶液的攪拌速度為800rpm，泵液流速為2.2mL/min，在樣品收集瓶收集所得液晶納米粒前體微粒。

采用掃描電鏡觀察實(shí)施例2制備的載有多西紫杉醇的液晶納米粒前體微粒的表觀形態(tài)(方法同實(shí)施例1)。掃描電鏡結(jié)果(結(jié)果見圖4)顯示，所得液晶納米粒前體微粒為球形微粒，平均粒徑約為7-12μm，本發(fā)明方法可以將粘稠的蠟狀半固體脂質(zhì)液晶材料固化分散，制備成溶質(zhì)液晶納米粒前體微粒，所得液晶納米粒前體微粒的形態(tài)和分散性與液晶材料和分散劑的比例相關(guān)，分散劑的比例增大，前體的微粒的形態(tài)呈更規(guī)則的球形，分散性更好。液晶材料和分散劑的比例在2:8-4:6范圍內(nèi)，液晶納米粒前體微粒的成型性良好。

采用破乳法測定本實(shí)施例的液晶納米粒前體微粒的藥物包封率，其中采用高效液相色譜法分析多西紫杉醇的含量，液相色譜系統(tǒng)為島津SIL-20A色譜系統(tǒng)；固定相為Phenomenex Gemini-NX 5μC18110A(250×4.60mm)；流動相：甲醇-水(70：30)；柱溫：35℃；檢測波長230nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示前體微粒(GMO/PVP K30/DTX的比例為4/6/0.04，3/7/0.04和2/8/0.04)的藥物包封率分別為96.98±1.29％，95.78±0.98％，98.56±0.66％(n＝3)。

對比例2：載有多西紫杉醇的普通液晶納米粒的制備

稱取0.04g多西紫杉醇溶于4g乙醇,再加入0.40g的50℃下熔融的GMO和0.60g分散劑PVP K30,渦旋混勻，得到均一的前體溶液。將所得前體溶液加入20mL水中，10000rpm高速剪切2min，得到液晶的粗分散體系。再將所得液晶粗分散體系進(jìn)行高壓均質(zhì)，均質(zhì)參數(shù)為500Bar,6個循環(huán)，即可得到液晶納米粒的水分散體系。

包封率(EE)的測定方法同對比例1，多西紫杉醇含量測定的方法同實(shí)施例2。本對比例的普通液晶納米粒的包封率為67.91±0.94％(n＝3)。

實(shí)施例3：載有多西紫杉醇的液晶納米粒前體微粒進(jìn)行溶蝕裂解和自組裝制備液晶納米粒

稱取0.01g液晶納米粒前體微粒(GMO/PVP/DTX＝4/6/0.04,制備方法同實(shí)施例2)，與0.05g水渦旋混勻，當(dāng)液晶納米粒前體微粒與水接觸時，液晶納米粒前體微粒即開始溶蝕裂解，同時液晶材料與水發(fā)生水合作用開始自組裝形成分散的液晶納米粒。

將本實(shí)施例所得的新制混懸液進(jìn)行透射電鏡掃描，觀察液晶納米粒前體微粒溶蝕裂解和自組裝得到液晶納米粒過程中的結(jié)構(gòu)變化。用移液槍滴加一滴混懸液于銅網(wǎng)之上，靜置吸附后，用濾紙將多余液體吸干；再滴加一滴1％磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上對樣品進(jìn)行染色，靜置吸附后，用濾紙將多余液體吸干；帶銅網(wǎng)完全干燥后，采用透射電鏡JEM100B對液晶納米粒前體微粒自組裝過程中的結(jié)構(gòu)形態(tài)進(jìn)行觀察。透射電鏡結(jié)果(圖5)顯示前體微粒能夠發(fā)生溶蝕裂解，釋放出大量自組裝的液晶納米粒，體系粒徑由微米級別轉(zhuǎn)換到納米級，液晶藥物載體的比表面積劇增，藥物與溶出介質(zhì)的接觸面積增大，藥物從液晶載體基質(zhì)擴(kuò)散到介質(zhì)的路徑減小，能夠增大藥物的溶出速率和溶出程度，有利于提高液晶載體對藥物的傳遞效率。

實(shí)施例4：液晶納米粒前體微粒，自組裝液晶納米粒和普通液晶納米粒的粒徑對比及其穩(wěn)定性對比

采用激光粒度分析儀(Mastersizer2000)對實(shí)施例2制備的載有多西紫杉醇的液晶納米粒前體微粒進(jìn)行粒徑及分布的測量(結(jié)果見圖6)。結(jié)果表明，本發(fā)明所制備的載有多西紫杉醇的液晶納米粒前體微粒粒徑均一，呈現(xiàn)正態(tài)分布，d(0.1)＝4.296μm，d(0.5)＝6.490μm，d(0.9)＝9.467μm。Span＝0.797(計(jì)算方法同實(shí)施例1)。

稱取0.01g液晶納米粒前體微粒(GMO/PVP/DTX＝4/6/0.04,制備方法同實(shí)施例2)，與2g水渦旋混勻,使液晶納米粒前體微粒與過量的水發(fā)生充分的水合作用，自組裝成液晶納米粒。

分別取適量上述自組裝液晶納米粒和對比例2的普通液晶納米粒，采用動態(tài)光散射法(Nanosizer 2000)測定液晶納米粒剛制備好時(0h)和靜置4h、12h后的粒徑。結(jié)果如圖7和表1所示。

液晶納米粒前體微粒粒徑(圖6中位粒徑為6.490μm)和自組裝液晶納米粒粒徑(圖7平均粒徑約200nm)的對比顯示出從微米級到納米級的粒徑驟減。這是由于液晶納米粒前體微粒解構(gòu)，組裝成了大量的液晶納米粒子，發(fā)生結(jié)構(gòu)改變。這個結(jié)果與實(shí)施例3的結(jié)構(gòu)電鏡圖相互印證，證明液晶納米粒前體微?？梢园l(fā)生溶蝕裂解，組裝出大量的液晶納米粒。自組裝液晶納米粒的粒徑結(jié)果(圖7A1)顯示，自組裝液晶納米粒的平均粒徑約為200nm，PDI(Polydispersity Index，多分散系數(shù))＜0.2,粒徑均一，呈正態(tài)分布。外觀呈均勻分散，無可見微粒的淡藍(lán)色溶液。自組裝液晶納米粒靜置4h(圖7A2)和12h(圖7A3)后，粒徑未發(fā)現(xiàn)明顯變化，粒徑約為200nm，粒徑圖呈對稱單峰分布，與新制備的自組裝液晶納米粒粒徑相比無明顯差異，說明本發(fā)明的方法制備的自組裝液晶納米粒動態(tài)學(xué)穩(wěn)定性良好，自組裝后仍可穩(wěn)定存儲12h。這主要是因?yàn)楸景l(fā)明方法采用液晶納米粒前體微粒解構(gòu)自組裝方式制備得到液晶納米粒時，不需要使用高速剪切，高壓均質(zhì)和高能超聲的納米化處理程序來獲取液晶納米粒，因此所得自組裝液晶納米粒未受到高能高壓和強(qiáng)機(jī)械作用的破壞，穩(wěn)定性良好。同時液晶納米粒前體微粒中的稀釋劑也有助于維持納米粒的穩(wěn)定性，在液晶納米粒前體微粒解構(gòu)組裝為液晶納米粒時，大部分稀釋劑也逐漸溶解。這些稀釋劑中含有分子聚合物，溶于水后能夠形成均勻分散的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)框架，可作為液晶納米粒的立體分散介質(zhì)，降低體系自由能，維持液晶納米粒的動力學(xué)穩(wěn)定性，不需要添加額外的穩(wěn)定劑。

由7B1可見，新鮮制備的普通液晶納米粒粒徑約為300nm,大部分納米粒的粒徑集中在300nm處附近并呈單峰分布，僅有少量微粒的粒徑分布在1000nm處。外觀呈均勻分散，無可見微粒的淡藍(lán)色溶液。該普通液晶納米粒靜置4h后，平均粒徑增大為350nm，粒徑分布圖上原本位于300nm處的單峰變?yōu)?00nm和620nm處的雙峰(圖7B2)，說明該普通液晶納米粒發(fā)生了一定程度的聚集。外觀仍舊均勻分散，無可見微粒，溶液的顏色略深于剛制備的普通液晶納米粒溶液。12h后該普通液晶納米粒體系的粒徑進(jìn)一步增大，4h粒徑圖上的雙峰遷移至620nm和2300nm處(圖7B3)，表明該體系中的普通液晶納米?；径及l(fā)生了聚集。這主要是由于液晶納米粒經(jīng)高能高壓和強(qiáng)機(jī)械作用處理后，表面能巨大，納米粒傾向于聚集成團(tuán)以降低表面勢能，因此普通液晶納米粒的常規(guī)制備中常常需要加入大量的穩(wěn)定劑以提高液晶納米粒分散體系的動力學(xué)穩(wěn)定性。

表1自組裝液晶納米和普通液晶納米粒的粒徑對比和穩(wěn)定性

實(shí)施例5：自組裝液晶納米粒的晶相

稱取適量的液晶納米粒前體微粒(制備方法同實(shí)施例2，所得前體微粒組成：GMO/PVP K30/DTX＝4/6/0.04)，分別與5％，10％，15％，20％，30％，50％，80％的水(w/w,水的質(zhì)量與樣品總質(zhì)量的百分比)混合，密封24h，使液晶納米粒前體微粒與水發(fā)生充分的水合作用，自組裝形成液晶納米粒并達(dá)到穩(wěn)定的晶相平衡。采用偏光顯微鏡(Mshot MP40)對樣品的晶相進(jìn)行初步的判斷。層狀以及六角液晶在分子排列上具有各向異性，在偏光顯微鏡下有雙折射現(xiàn)象，前者在偏光顯微鏡下呈現(xiàn)出十字花紋、油紋或兩者并存，后者呈現(xiàn)扇形或相互鑲嵌的六角錐形，而立方液晶分子排列為各向同性，不具有雙折射性，呈現(xiàn)暗視野。結(jié)果如圖8所示(其中A、B、C分別是5％，15％，20％含水量樣品對應(yīng)的偏光圖片)，A視野下呈現(xiàn)規(guī)則的扇形花紋，是六角液晶的典型偏光紋理，由此可以鑒定為六角液晶納米粒。B部分區(qū)域?yàn)榘岛谝曇?，部分區(qū)域含有扇形花紋，可初步判斷為六角液晶和立方液晶的混合相。C為完全的暗黑視野，可初步判斷為立方液晶，需要使用小角散射法(SAXS)進(jìn)行進(jìn)一步的晶相確認(rèn)。液晶納米粒前體微粒自組裝的液晶納米粒主要由液晶材料和水組成，屬于溶致液晶。溶致液晶的晶相會隨著液晶材料的濃度變化而變化，其晶格單元的結(jié)構(gòu)和晶格堆積方式也隨之改變。當(dāng)含水量較低(5％，10％)時，液晶材料的濃度較大，主要形成六角液晶；當(dāng)含水量較高(≥20％，本實(shí)施例中含水量具體為20％，30％，50％，80％)時，主要形成立方液晶。當(dāng)含水量為10-20％時，則形成六角液晶和立方液晶的過渡混合相。

采用小角散射(SAXS)法對本實(shí)施例中含水量為20％，30％，50％，80％的樣品進(jìn)行進(jìn)一步的確認(rèn)。SAXS(AntonPaar)測量的工作條件為：40kV電壓，50mA電流，CuKα輻射源，0.1542nm X-射線的波長。X射線散射圖譜顯示，20％，30％，50％，80％含水量的樣品的散射峰位置相同，散射峰位置比為(圖9)，與體心型立方液晶晶格的衍射圖譜吻合。表明液晶納米粒前體微粒自組裝得到的液晶納米粒體系中的水含量超過20％時即可形成立方液晶納米粒，晶格結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，可與過量的水共存。

偏光顯微鏡和小角散射的晶相研究結(jié)果表明，本發(fā)明制備的液晶納米粒前體微粒可以自組裝為液晶納米粒，自組裝液晶納米粒為層狀液晶，六角液晶，立方液晶中的一種或一種以上。

實(shí)施例6：羥基喜樹堿在自組裝液晶納米粒和普通液晶納米粒中的結(jié)構(gòu)形態(tài)

羥基喜樹堿在E環(huán)上的羥基內(nèi)酯環(huán)是活性的必需基團(tuán)，但其內(nèi)酯結(jié)構(gòu)在溶液中容易開環(huán)，活性降低。羥基喜樹堿難溶于水，臨床上用的注射液以開環(huán)的羧酸鹽形式進(jìn)行給藥。本發(fā)明將對水敏感的藥物羥基喜樹堿包裹在液晶納米粒前體微粒中，在制備和存儲過程中避免藥物和水溶液的接觸，增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性。當(dāng)液晶納米粒前體微粒自組裝成液晶納米粒時，難溶性藥物羥基喜樹堿包裹在液晶納米粒的親脂域中，減少藥物與水的接觸，同時降低藥物的疏水性，增大藥物的溶解度。

由于羥基喜樹堿內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)和開環(huán)結(jié)構(gòu)的極性不同，故經(jīng)液相色譜柱洗脫的保留時間也不同，可采用高效液相色譜法分離鑒定不同結(jié)構(gòu)形態(tài)的羥基喜樹堿。

分別取實(shí)施例1的載有5％羥基喜樹堿的自組裝液晶納米粒和對比例1的載有羥基喜樹堿的普通液晶納米粒適量，加入甲醇破乳，所得樣品經(jīng)0.22μm濾頭過濾后，采用高效液相色譜法(液相條件同實(shí)施例1)檢測樣品中的羥基喜樹堿的保留時間來鑒定它的結(jié)構(gòu)形態(tài)。HPLC方法驗(yàn)證開環(huán)形式的HCPT經(jīng)流動相稀釋后，半小時內(nèi)檢測，HCPT開環(huán)/閉環(huán)結(jié)構(gòu)在該條件下維持率在95％以上，羥基喜樹堿開環(huán)峰的保留時間為3.9min，閉環(huán)峰保留時間為7.0min，兩者能有效的分離，峰型良好。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖10)顯示，自組裝液晶納米粒經(jīng)甲醇溶解后立即進(jìn)樣，色譜圖上僅在6.9min時出峰(B)，說明藥物羥基喜樹堿在樣品中是以閉環(huán)形式存在的。普通納米粒經(jīng)甲醇溶解后立即進(jìn)樣，色譜圖上除在6.9min時出峰，在3.9min也有藥物峰(A)，說明羥基喜樹堿的開環(huán)結(jié)構(gòu)和內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)同時存在。這是因?yàn)樗幬镌谄胀ㄒ壕Ъ{米粒中的包封率比較低，有較大部分的藥物未被包載在液晶納米粒中，只能游離分散在水中，進(jìn)而水解為開環(huán)結(jié)構(gòu)，活性降低。而自組裝液晶納米粒中，藥物羥基喜樹堿首先被包裹在液晶鈉米粒前體微粒中，隨后被包載在液晶納米粒的親脂性區(qū)域，減少了藥物與水溶液的接觸而不被水解，保持藥物內(nèi)酯環(huán)的活性結(jié)構(gòu)。

上述結(jié)果表明：自組裝液晶納米粒能成功裝載羥基喜樹堿并維持其閉環(huán)形式，保證了藥物的活性。

實(shí)施例7：載有多西紫杉醇的自組裝液晶納米粒和普通液晶納米粒的溶出實(shí)驗(yàn)

載有多西紫杉醇的自組裝液晶納米粒和普通液晶納米粒體外釋放度測定按中國藥典2015年版(二部)附錄XC第三法進(jìn)行，以pH 7.4磷酸鹽緩沖液200mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100r/min，溫度為37±0.5℃，基于多西紫杉醇能自由通過透析袋，納米粒不能通過透析袋，精密稱取適量的載有多西紫杉醇的自組裝立方液晶納米粒(GMO/PVP/DTX＝4/6/0.04，制備方法同實(shí)施例2)和載有多西紫杉醇的普通立方液晶納米粒(處方組成和制備方法同對比例2)(分別含多西紫杉醇約4mg)置于透析袋(截留分子量14000)中，立即扎緊，以線圈寬松纏繞在攪拌槳下端，于不同時間點(diǎn)：0.5、1、2、4、6、8、12、24h取樣5mL，并迅速補(bǔ)加同溫新鮮介質(zhì)，經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液20μL進(jìn)樣，高效液相色譜法(液相條件同實(shí)施例2)測定多西紫杉醇含量，計(jì)算多西紫杉醇累積釋放百分率，繪制體外釋放曲線(圖11)。

釋放結(jié)果表明，相比普通液晶納米粒，自組裝液晶納米粒能夠達(dá)到更完全的藥物釋放，累積釋放率可達(dá)到95％以上。同時自組裝液晶納米粒能夠調(diào)節(jié)藥物釋放行為，而普通液晶納米粒則在釋放初期表現(xiàn)出一定程度的突釋。這是由于普通液晶納米粒包封率較低，有較多的藥物游離于分散水相介質(zhì)，而后迅速擴(kuò)散到釋放介質(zhì)中，造成藥物突釋。而由液晶納米粒前體微粒自組裝的液晶納米粒能夠?qū)⑺幬锿耆匕谄溆H水/親脂三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中，能夠有效的控釋藥物，并提高藥物的完全釋放程度。

實(shí)施例8：載有各種藥物的液晶納米粒前體微粒的制備

液晶材料，稀釋劑，溶劑和藥物的種類和含量見表2。液晶前體溶液的制備方法同實(shí)施例1。將所得液晶前體溶液按照相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)(采用噴霧干燥法:霧化壓力12-20kPa,進(jìn)風(fēng)速度0.6-1.3m³/min,進(jìn)風(fēng)溫度為50-85℃，出風(fēng)溫度為45-70℃，前體溶液的攪拌速度為500-1500rpm，泵液流速為0.5-3.4mL/min)進(jìn)行干燥制粒，得到載有各種藥物的均一分散的液晶納米粒前體微粒。

表2液晶納米粒前體微粒的原料配方表

按上述處方和實(shí)驗(yàn)參數(shù)制備得到的液晶納米粒前體微粒成形性良好，分散性佳。采用動態(tài)光散射測定所得液晶納米粒前體微粒的粒徑，粒徑范圍為4-300μm(粒徑大小與各處方的組成相關(guān))，各處方所得液晶納米粒前體微粒的粒徑均一，各處方的液晶納米粒前體微粒的PDI(多分散系數(shù))均小于0.3(請見表3)。

分別取1-2mg上述液晶納米粒前體微粒，分散在10mL的水中，渦旋10min,液晶納米粒前體微粒逐漸溶蝕裂解，完全裂解時間為10min-48h,裂解時間取決分散介質(zhì)的種類和比例。完全裂解后得到的自組裝液晶納米粒體系外觀為淡藍(lán)色溶液，具有丁達(dá)爾現(xiàn)象。采用動態(tài)光散射法測定自組裝液晶納米粒的粒徑，自組裝形成的液晶納米粒粒徑范圍為120-700nm(粒徑大小與各處方組成相關(guān))，各處方所得自組裝液晶納米粒的粒徑均一，各處方所得自組裝液晶納米粒的的PDI均小于0.3，屬于穩(wěn)定分散體系，不需要使用額外的穩(wěn)定劑(請見表3)。

表3

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實(shí)施例中的各個技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。