背景技術(shù)：

1、戈謝病(gaucher?disease，gd)為編碼β-葡萄糖腦苷脂酶的基因(gba)經(jīng)突變所導(dǎo)致的常染色體隱性溶酶體貯積癥。溶酶體中該酶的活性缺乏導(dǎo)致糖脂類葡萄糖腦苷脂在整個(gè)身體(但尤其在骨髓、脾及肝)中細(xì)胞內(nèi)積聚。雖然癥狀、發(fā)病年齡和嚴(yán)重程度在個(gè)體間有極大差異，但常見癥狀包括肝脾腫大、貧血、血小板減少癥和骨骼異常。

2、戈謝病存在三種主要的臨床亞型。最常見的1型與神經(jīng)系統(tǒng)無關(guān)，而2型(急性神經(jīng)病變)和3型(亞急性神經(jīng)病變)導(dǎo)致葡萄糖腦苷脂在腦中積聚，因此與神經(jīng)學(xué)并發(fā)癥相關(guān)。還已知該病癥的兩種不常見形式，包括圍產(chǎn)期致死性gd和心血管gd。

3、迄今為止，已開發(fā)出治療gd的兩種方法。針對(duì)gd的酶替代療法(ert)試圖通過靜脈內(nèi)輸注酶的重組形式來補(bǔ)償β-葡萄糖腦苷脂酶的活性缺乏。已批準(zhǔn)的針對(duì)1型gd的ert藥物的實(shí)例包括伊米苷酶(imiglucerase)及維拉苷酶α(velaglucerase?alfa)。盡管ert有效地減少gd的至少一些癥狀，但平均每兩周必須輸注一次，并且治療是終身的。另外，正在經(jīng)歷ert的gd患者產(chǎn)生針對(duì)外源供應(yīng)的gcase的中和抗體并不罕見，這降低了ert的功效或可能需要中止ert。最近開發(fā)的第二種方法，底物減少療法(srt)，涉及口服施用抑制glccer(gcase底物)生物合成的小分子藥物。已批準(zhǔn)的針對(duì)1型gd的srt藥物的實(shí)例包括依利格魯司特(eliglustat)及美格魯特(miglustat)。然而，srt僅批準(zhǔn)用于成人，而不準(zhǔn)用于兒科gd患者，與多種副作用有關(guān)，并且也需要終身治療以管理與gd相關(guān)的病程及癥狀。

4、鑒于與當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理相關(guān)的缺點(diǎn)，本領(lǐng)域需要經(jīng)改良的治療1型戈謝病的方法，特別是需要較少施用頻次的療法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決本領(lǐng)域中的需求，本披露提供用于表達(dá)β-葡萄糖腦苷脂酶(gcase)蛋白的經(jīng)改良的腺相關(guān)病毒(aav)載體，產(chǎn)生這樣的aav載體的方法，以及使用這樣的aav載體預(yù)防或治療受試者的疾病或病癥(特征在于gcase蛋白的數(shù)量不足和/或gcase蛋白的酶活性缺乏，包括但不限于1型戈謝病)的方法。

2、下文闡述了所披露的本發(fā)明的某些列舉的非限制性實(shí)施例(e)。這些實(shí)施例和相關(guān)實(shí)施例在包括實(shí)例和附圖的詳細(xì)說明中進(jìn)一步詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，或者將能夠僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)就確定本文所述的特定實(shí)施例的等同物。

3、e1.一種重組腺相關(guān)病毒(aav)載體基因組，該重組腺相關(guān)病毒載體基因組包含編碼β-葡萄糖腦苷脂酶(gcase)蛋白的核苷酸序列。

4、e2.如e1所述的aav載體基因組，其中所述gcase蛋白包含分泌信號(hào)肽序列和成熟多肽序列。

5、e3.如e1至e2所述的aav載體基因組，其中所述gcase蛋白的成熟多肽序列來自野生型人gcase蛋白。

6、e4.如e1至e3所述的aav載體基因組，其中所述gcase蛋白的成熟多肽序列包含seqid?no:40的氨基酸序列，基本上由其組成或由其組成。

7、e5.如e1至e4所述的aav載體基因組，其中所述分泌信號(hào)肽序列來自野生型人gcase蛋白。

8、e6.如e5所述的aav載體基因組，其中所述分泌信號(hào)肽序列包含seq?id?no:39的氨基酸序列。

9、e7.如e1至e4所述的aav載體基因組，其中所述分泌信號(hào)肽序列來自除gcase以外的蛋白質(zhì)。

10、e8.如e7所述的aav載體基因組，其中所述分泌信號(hào)肽序列來自免疫球蛋白蛋白質(zhì)。

11、e9.如e8所述的aav載體基因組，其中所述分泌信號(hào)肽序列包含seq?id?no:38的氨基酸序列。

12、e10.如e1至e4所述的aav載體基因組，其中所述gcase蛋白的氨基酸序列由seq?idno:16的氨基酸序列提供。

13、e11.如e1至e10所述的aav載體基因組，其中編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的所述核苷酸序列是野生型核苷酸序列。

14、e12.如e1至e10所述的aav載體基因組，其中編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的所述核苷酸序列是經(jīng)密碼子優(yōu)化的核苷酸序列。

15、e13.如e12所述的aav載體基因組，其中與編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的野生型核苷酸序列相比，該經(jīng)密碼子優(yōu)化的核苷酸序列具有數(shù)量減少的cpg二核苷酸。

16、e14.如e13所述的aav載體基因組，其中與編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的野生型核苷酸序列相比，該編碼gcase蛋白的核苷酸序列減少1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5個(gè)cpg二核苷酸。

17、e15.如e13至e14所述的aav載體基因組，其中編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的所述野生型核苷酸序列由seq?id?no:28、seq?id?no:29、seq?id?no:30、seq?id?no:31或seq?id?no:32的核苷酸序列組成。

18、e16.如e13所述的aav載體基因組，其中編碼gcase蛋白的該核苷酸序列不含任何cpg二核苷酸。

19、e17.如e1至e13所述的aav載體基因組，其中編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的該核苷酸序列與seq?id?no:13的核苷酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％同一性。

20、e18.如e1至e13所述的aav載體基因組，其中編碼所述gcase蛋白的成熟多肽序列的該核苷酸序列與seq?id?no:13的核苷酸序列相同。

21、e19.如e1至e13所述的aav載體基因組，其中編碼所述gcase蛋白的該核苷酸序列與seq?id?no:41的核苷酸序列相同。

22、e20.如e1至e19所述的aav載體基因組，其中所述基因組包含至少一個(gè)aav反向末端重復(fù)序列(itr)。

23、e21.如e20所述的aav載體基因組，其中所述itr的核苷酸序列是野生型的。

24、e22.如e20所述的aav載體基因組，其中所述itr的核苷酸序列是經(jīng)修飾的。

25、e23.如e22所述的aav載體基因組，其中所述itr的核苷酸序列經(jīng)修飾以降低或消除該itr進(jìn)行末端解鏈的能力。

26、e24.如e22所述的aav載體基因組，其中所述itr的核苷酸序列經(jīng)修飾以使末端解鏈位點(diǎn)失活。

27、e25.如e22所述的aav載體基因組，其中所述itr的核苷酸序列經(jīng)修飾以降低或消除itr支持包裝于衣殼中的能力。

28、e26.如e22所述的aav載體基因組，其中所述itr的核苷酸序列經(jīng)修飾以使d區(qū)失活。

29、e27.如e20至e21所述的aav載體基因組，其中所述itr是aav2itr。

30、e28.如e27所述的aav載體基因組，其中所述aav2itr是截短的。

31、e29.如e20所述的aav載體基因組，其中所述itr包含seq?id?no:7、seq?id?no:15、seq?id?no:18或seq?id?no:19的核苷酸序列或所述序列中的每一者的互補(bǔ)序列或反向互補(bǔ)序列，基本上由其組成或由其組成。

32、e30.如e20至e21所述的aav載體基因組，其中所述itr是除aav2itr以外的itr。

33、e31.如e1至e30所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組包含位于其5'末端的第一aav?itr和位于其3'末端的第二aav?itr。

34、e32.如e31所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含第三aav?itr。

35、e33.如e32所述的aav載體基因組，其中所述第三itr經(jīng)修飾以使末端解鏈位點(diǎn)失活。

36、e34.如e1至e33所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含轉(zhuǎn)錄控制區(qū)，該轉(zhuǎn)錄控制區(qū)與編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列可操作地連接。

37、e35.如e34所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)具有組成性。

38、e36.如e34所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)具有誘導(dǎo)性。

39、e37.如e34所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)具有組織特異性。

40、e38.如e37所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)具有肝組織特異性。

41、e39.如e34至e38所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包含啟動(dòng)子序列。

42、e40.如e39所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)進(jìn)一步包含增強(qiáng)子序列。

43、e41.如e40所述的aav載體基因組，其中所述增強(qiáng)子序列位于該啟動(dòng)子的5'。

44、e42.如e40所述的aav載體基因組，其中所述增強(qiáng)子序列位于該啟動(dòng)子的3'。

45、e43.如e39所述的aav載體基因組，其中所述啟動(dòng)子序列具有肝組織特異性。

46、e44.如e40所述的aav載體基因組，其中所述增強(qiáng)子序列具有肝組織特異性。

47、e45.如e40所述的aav載體基因組，其中所述啟動(dòng)子序列和增強(qiáng)子序列中的每一者均具有肝組織特異性。

48、e46.如e39所述的aav載體基因組，其中所述啟動(dòng)子序列衍生自人白蛋白(alb)基因。

49、e47.如e40所述的aav載體基因組，其中所述增強(qiáng)子序列衍生自人白蛋白(alb)基因或α-1-微球蛋白/尿抑胰酶素前體(ambp)基因。

50、e48.如e46所述的aav載體基因組，其中所述啟動(dòng)子序列包含seq?id?no:10的核苷酸序列、或其啟動(dòng)子功能性子序列、修飾或變體，基本上由其組成或由其組成。

51、e49.如e47所述的aav載體基因組，其中所述增強(qiáng)子序列分別包含seq?id?no:9或seq?id?no:8的核苷酸序列、或其增強(qiáng)子功能性子序列、修飾或變體，基本上由其組成或由其組成。

52、e50.如e1至e49所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列。

53、e51.如e50所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列是聚腺苷酸化(聚(a))信號(hào)序列。

54、e52.如e51所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列衍生自牛生長激素(bgh)基因。

55、e53.如e52所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列包含seq?id?no:14的核苷酸序列、或其轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)功能性子序列、修飾或變體，基本上由其組成或由其組成。

56、e54.如e1至e53所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含內(nèi)含子序列。

57、e55.如e54所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列位于編碼所述gcase蛋白的核苷酸序列內(nèi)且中斷該核苷酸序列。

58、e56.如e54所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列不中斷編碼所述gcase蛋白的核苷酸序列。

59、e57.如e56所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列位于編碼所述gcase蛋白的核苷酸序列的5'。

60、e58.如e57所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列位于啟動(dòng)子的3'、以及編碼所述gcase蛋白的核苷酸序列的5'。

61、e59.如e54至e58所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列衍生自人β球蛋白(hbb)基因。

62、e60.如e59所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列包含seq?id?no:11的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成。

63、e61.如e1至e60所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)元件(pre)序列。

64、e62.如e61所述的aav載體基因組，其中所述pre序列位于編碼所述gcase蛋白的核苷酸序列的3'、以及該轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列的5'。

65、e63.如e61至e62所述的aav載體基因組，其中所述pre序列是wpre序列或hpre序列。

66、e64.如e63所述的aav載體基因組，其中所述pre序列包含seq?id?no:27的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成。

67、e65.如e1至e64所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含微小rna(mirna)的結(jié)合位點(diǎn)。

68、e66.如e65所述的aav載體基因組，其中所述mirna結(jié)合位點(diǎn)位于編碼所述gcase蛋白的核苷酸序列的3'、以及該轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列的5'。

69、e67.如e1至e64所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含具有足夠長度的填充核苷酸序列或填料核苷酸序列，使得所述aav載體基因組的全長為約4.5至5.0千堿基。

70、e68.如e1至e64所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組包含第一aav?itr、與編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列可操作地連接的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)、轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列、和第二aav?itr。

71、e69.如e68所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組按照5'至3'次序包含所述第一aav?itr、與編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列可操作地連接的所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)、所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列、和所述第二aav?itr。

72、e70.如e69所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包含位于編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列的5'的啟動(dòng)子、以及位于所述啟動(dòng)子的5'的增強(qiáng)子。

73、e71.如e68至e70所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含位于所述啟動(dòng)子和編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列之間的內(nèi)含子。

74、e72.如e68至e70所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含位于編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列內(nèi)并且中斷所述核苷酸序列的內(nèi)含子。

75、e73.如e68至e72所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含位于編碼gcase蛋白的所述核苷酸序列和所述聚(a)信號(hào)序列之間的pre。

76、e74.如e68至e73所述的aav載體基因組，其中所述第一aav?itr位于所述載體基因組的5'末端，以及所述第二aav?itr位于所述載體基因組的3'末端。

77、e75.如e74所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組進(jìn)一步包含位于所述第一和第二aav?itr之間的第三aav?itr。

78、e76.如e75所述的aav載體基因組，其中所述第三aav?itr的末端解鏈位點(diǎn)被滅活。

79、e77.如e68至e76所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)具有肝組織特異性。

80、e78.如e77所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包含ambp基因增強(qiáng)子序列的第一拷貝、ambp基因增強(qiáng)子序列的第二拷貝、alb基因增強(qiáng)子序列、和alb基因啟動(dòng)子序列。

81、e79.如e78所述的aav載體基因組，其中ambp基因增強(qiáng)子序列的所述第一拷貝和第二拷貝中的每一者均包含seq?id?no:8的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成，所述alb基因增強(qiáng)子序列包含seq?id?no:9的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成，以及所述alb基因啟動(dòng)子序列包含seq?id?no:10的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成。

82、e80.如e71至e79所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列衍生自該人β球蛋白(hbb)基因。

83、e81.如e80所述的aav載體基因組，其中所述內(nèi)含子序列包含seq?id?no:11的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成。

84、e82.如e68至e81所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列衍生自牛生長激素(bgh)基因。

85、e83.如e82所述的aav載體基因組，其中所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列包含seq?id?no:14的核苷酸序列、或其轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)功能性子序列、修飾或變體，基本上由其組成或由其組成。

86、e84.如e68至e83所述的aav載體基因組，該aav載體基因組進(jìn)一步包含位于所述轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列的3'、和所述第二aav?itr的5'的經(jīng)修飾的tbp內(nèi)含子2序列。

87、e85.如e1至e4所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組按照5'至3'次序包含：

88、(a)第一aav2itr；

89、(b)ambp基因增強(qiáng)子序列的第一拷貝；

90、(c)ambp基因增強(qiáng)子序列的第二拷貝；

91、(d)alb基因增強(qiáng)子序列；

92、(e)alb基因啟動(dòng)子序列；

93、(f)人β球蛋白(hbb)基因內(nèi)含子序列；

94、(g)編碼人gcase蛋白的核苷酸序列，該核苷酸序列與ambp增強(qiáng)子的所述第一拷貝和第二拷貝、所述alb增強(qiáng)子和所述alb啟動(dòng)子可操作地連接，其中所述gcase蛋白包含分泌信號(hào)肽序列和成熟多肽序列；

95、(h)牛生長激素(bgh)基因轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列；

96、(i)經(jīng)修飾的tbp內(nèi)含子2序列；以及

97、(j)第二aav2itr。

98、e86.如e85所述的aav載體基因組，其中ambp基因增強(qiáng)子序列的所述第一拷貝和第二拷貝中的每一者均包含seq?id?no:8的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成；所述alb基因增強(qiáng)子序列包含seq?id?no:9的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成；所述alb基因啟動(dòng)子序列包含seq?id?no:10的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成；人β球蛋白(hbb)基因內(nèi)含子序列包含seq?id?no:11的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成；編碼人gcase蛋白的核苷酸序列包含seq?id?no:41的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成；以及所述牛生長激素(bgh)基因轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列包含seq?id?no:14的核苷酸序列，基本上由其組成或由其組成。

99、e87.如e85至e86所述的aav載體基因組，其中所述第一和第二aav2itr中的每一者均包含seq?id?no:7、seq?id?no:15、seq?id?no:18或seq?id?no:19的核苷酸序列或所述序列中的每一者的互補(bǔ)序列或反向互補(bǔ)序列，基本上由其組成或由其組成。

100、e87.如e85至e87所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組的核苷酸序列包含seq?id?no:17的核苷酸序列或其反向互補(bǔ)序列，基本上由其組成或由其組成。

101、e88.如e1至e87所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組的長度等于或小于5千堿基。

102、e89.一種aav載體，該aav載體包含aav衣殼和如e1至e88所述的aav載體基因組，其中所述載體基因組由所述衣殼包封。

103、e90.如e89所述的aav載體，其中所述aav衣殼具有親肝性。

104、e91.如e89至e90所述的aav載體，其中所述aav衣殼選自由以下組成的組：aav2、aav3b、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav13、aavrh.74、aavrh.10、aav-dj、aav-lk03、aav-kp1、aav-hu.lvr01、aav-hu.lvr02、aav-hu.lvr03、aav-hu.lvr04、aav-hu.lvr05、aav-hu.lvr06、aav-hu.lvr07、aav-anc80、aav-np40、aav-np59、aav-np84、aav-hu.37、aav-rh.8、aav-rh.64r1、rhm4-1、rhm15-1、rhm15-2、rhm15-3/rhm15-5、rhm15-4、和rhm15-6、aavhsc7、aavhsc15、和aavhsc17。

105、e92.如e89至e90所述的aav載體，其中所述aav衣殼包含vp1蛋白，該vp1蛋白包含選自由以下組成的組的氨基酸序列、或由其組成：seq?id?no:1和seq?id?no:4。

106、e93.如e89至e92所述的aav載體，其中所述載體基因組是單鏈dna基因組。

107、e94.如e89至e92所述的aav載體，其中所述載體基因組是自身互補(bǔ)的dna基因組。

108、e95.如e93至e94所述的aav載體，其中所述載體基因組呈正極性。

109、e96.如e93至e94所述的aav載體，其中所述載體基因組呈負(fù)極性。

110、e97.一種包含aav3b衣殼和aav載體基因組的aav載體，其中所述載體基因組的核苷酸序列包含seq?id?no:17的核苷酸序列或其反向互補(bǔ)序列，或由其組成，并且其中所述載體基因組由所述衣殼包封。

111、e98.一種藥物組合物，該藥物組合物包含如e89至e97所述的aav載體、和藥學(xué)上可接受的賦形劑。

112、e99.一種增加診斷患有g(shù)case酶活性缺乏的人受試者的外周血單核細(xì)胞(pbmc)中的活性gcase蛋白的數(shù)量、或降低所述受試者的血清中的葡萄糖基鞘氨醇的數(shù)量的方法，該方法包括向所述受試者施用一定量的如e1至e98所述的aav載體或組合物，其有效地增加活性pbmc?gcase蛋白的數(shù)量或減少血清葡萄糖基鞘氨醇的數(shù)量。

113、e100.如e99所述的方法，其中所述方法有效地增加所述受試者的pbmc中的活性gcase蛋白的數(shù)量，達(dá)到健康人的pbmc中的活性gcase蛋白的數(shù)量的至少或約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％。

114、e101.如e100所述的方法，其中健康人的pbmc中的活性gcase蛋白的數(shù)量在約20至130皮克/百萬(pg/1e6)個(gè)細(xì)胞范圍內(nèi)或平均值為約70pg/1e6個(gè)細(xì)胞。

115、e102.如e99所述的方法，其中與所述受試者在施用所述aav載體或組合物之前的pbmc中的活性gcase蛋白的平均數(shù)量相比，所述方法使所述受試者的pbmc中的活性gcase蛋白的數(shù)量有效地增加至少25％、50％、75％、100％、125％、150％、175％、200％、225％、250％、300％、400％、或500％。

116、e103.如e99所述的方法，其中所述方法有效地增加所述受試者的pbmc中的活性gcase蛋白的數(shù)量，達(dá)到至少或約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、140或150pg/1e6個(gè)細(xì)胞。

117、e104.如e99所述的方法，其中與所述受試者在施用所述aav載體或組合物之前的血清葡糖神經(jīng)酰胺或葡萄糖基鞘氨醇的平均數(shù)量相比，所述方法使所述受試者的血清中的葡糖神經(jīng)酰胺或葡萄糖基鞘氨醇的數(shù)量有效地降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、或90％。

118、e105.如e99所述的方法，其中所述方法有效地降低所述受試者的血清中的葡糖神經(jīng)酰胺或葡萄糖基鞘氨醇的數(shù)量，達(dá)到不超過約200、175、150、125、100、75、50、25或10納克/毫升血清。

119、e106.如e99至e105所述的方法，其中所述受試者的pbmc中所述活性gcase蛋白數(shù)量的增加或血清中葡糖神經(jīng)酰胺或葡萄糖基鞘氨醇數(shù)量的降低在施用所述aav載體或組合物后的10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或60天內(nèi)發(fā)生。

120、e107.一種降低人受試者由于gcase酶活性缺乏導(dǎo)致的至少一種癥狀或體征的嚴(yán)重程度的方法，該方法包括向所述受試者施用一定量的如e1至e98所述的aav載體或組合物，其有效地降低這樣的癥狀或體征的嚴(yán)重程度的數(shù)量。

121、e108.如e107所述的方法，其中該癥狀或體征選自由以下組成的組：肝脾腫大、肝腫大、脾腫大、貧血、白血球嗜中性粒細(xì)胞減少癥、全血細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、單克隆高丙球蛋白血癥、多克隆高丙球蛋白血癥、厭食癥、慢性疲勞、無血管性骨壞死、骨痛、骨質(zhì)溶解、骨壞死、和骨質(zhì)減少。

122、e109.如e99至e108所述的方法，其中所述受試者中的gcase酶活性缺乏由編碼gcase蛋白的基因中的純合突變或雜合突變導(dǎo)致，相對(duì)于gba基因未突變的健康人中的gcase蛋白的平均數(shù)量或活性，該純合突變或雜合突變降低從該基因表達(dá)的gcase蛋白的數(shù)量或酶活性。

123、e110.如e99至e109所述的方法，其中所述受試者經(jīng)診斷患有1型戈謝病。

124、e111.一種預(yù)防或治療人受試者的1型戈謝病的方法，該方法包括向所述受試者施用預(yù)防或治療有效量的如e1至e98所述的aav載體或組合物，其有效預(yù)防或治療所述受試者的1型戈謝病。

125、e112.如e99至e111所述的方法，其中所述aav載體的有效量是范圍在每千克受試者體重1×1010至1×1015個(gè)載體基因組(vg/kg)的劑量。

126、e113.如e99至e112所述的方法，其中向所述受試者靜脈內(nèi)施用所述aav載體或組合物。

127、e114.如e1至e97所述的aav載體在制造用于治療或預(yù)防人受試者的1型戈謝病的藥物中的用途。

128、e115.一種dna質(zhì)粒，該dna質(zhì)粒包含如e1至e88所述的aav載體基因組的核苷酸序列。

129、e116.一種用于aav載體產(chǎn)生的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包含如e115所述的dna質(zhì)粒。

130、e117.如e116所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是hek293細(xì)胞。

131、e118.如e116至e117所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞進(jìn)一步包含編碼aav?rep蛋白的基因，諸如該基因包含在dna質(zhì)粒中。

132、e119.如e116至e118所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞進(jìn)一步包含編碼aav?vp1衣殼蛋白的基因，諸如該基因包含在dna質(zhì)粒中。

133、e120.如e116至e119所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞進(jìn)一步包含編碼病毒輔助因子的基因，諸如該基因包含在dna質(zhì)粒中。

134、e121.一種制備aav載體的方法，該方法包括：在足以允許aav載體產(chǎn)生的條件下孵育如e120所述的宿主細(xì)胞，以及純化由此所產(chǎn)生的aav載體。

135、e122.一種aav載體，該aav載體由如e121所述的方法產(chǎn)生。