一種受體抗體融合蛋白的藥物組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種包含TNFR:Fc的藥物組合物、該組合物的制備方法、給藥方法以 及治療用途。
【背景技術】
[0002] 腫瘤壞死因子（TNF)是一種涉及炎癥和急性期反應的多肽細胞因子。TNF-a大量 存在于患有類風濕性關節(jié)炎或克羅恩病的人中。通過生物制劑進行TNF-a的直接抑制在 類風濕性關節(jié)炎的治療中已經(jīng)取得顯著進步，并且這種促炎細胞因子的細胞外抑制已經(jīng)被 確認為一種有效的治療。一種這樣的生物制劑是依那西普。
[0003] 依那西普（TNFR :Fc)是一種二聚體融合蛋白，該二聚體融合蛋白由連接到人IgG 的Fc部分的人75千道爾頓（p75)腫瘤壞死因子受體（TNFR)的細胞外配體結合部分組成。 依那西普的Fc組分由CH2結構域、CH3結構域以及鉸鏈區(qū)組成，而CHl結構域是缺乏的。它 是在中國倉鼠卵巢哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中通過重組DNA技術產(chǎn)生的。它由934個氨基酸 組成，并且具有大致150千道爾頓的表觀分子量。
[0004] 通常，蛋白質具有非常短的半壽期，并且在暴露于各種因素(如不適宜溫度、 水-氣界面、高壓、物理/機械應力、有機溶劑和微生物污染)之后經(jīng)歷變性(如聚集、解離和 吸附在容器表面)。因此，變性蛋白失去內在的理化性質和生理活性。蛋白質的變性通常是 不可逆的，因此蛋白質一旦變性，它們的天然性質可能不會恢復到初始狀態(tài)。
[0005] 在生物制藥行業(yè)中，使用重組DNA技術制備的蛋白質在水性制劑中的長期儲存通 常是一項困難的任務。為了克服水性制劑中的蛋白質的穩(wěn)定性問題，通過凍干(冷凍干燥） 制備了更加穩(wěn)定的治療性蛋白產(chǎn)品。凍干產(chǎn)品通常伴隨有用于復原的無菌水性介質。在復 原之后，這些制劑典型地具有短的有效貯存壽命，即使在低溫(例如，5°C )下保存時也是如 此。在市場上可得到的呈凍干形式的TNF-a抑制劑的實例包括Enbrei?和Remieade?,并 且這兩種組合物應當在使用之前復原。
[0006] 針對治療用途，蛋白質藥物如單克隆抗體或受體抗體融合蛋白（如TNFR:Fc)以高 濃度使用，可以通過靜脈內輸注遞送至患者，也可以優(yōu)選配制該蛋白質治療藥用于皮下注 射。然而，用于皮下注射的藥物溶液的體積比靜脈內輸注體積小得多，從而蛋白質必然以更 高的濃度存在。在每毫升數(shù)十毫克的高的治療性蛋白質濃度上，維持治療性蛋白質穩(wěn)定溶 解持續(xù)延長的時間段是重要的。高濃度的蛋白質溶液增加了有利于聚集的蛋白質-蛋白質 相互作用的可能性；防止聚集已經(jīng)變成蛋白質藥物配制的重要事項。聚集造成許多問題， 包括活性蛋白的生物利用率減少，藥物代謝動力學改變和不想要的免疫原性。（Frokjaer， S?和 Otzen，D. E ?，Nat. Rev. Drug. Discov. 4:298_306 (2005) Jiskoot，W?和 Crommelin, D. J. A. , EJHP Practiced ：2〇-21 (2006)) 〇
[0007] 防止聚集仍主要是經(jīng)驗性的，因為聚集過程的分子細節(jié)總體上未知。常見 策略是添加穩(wěn)定劑、聚集抑制劑、表面活性劑等賦形劑至蛋白質溶液。常使用的賦 形劑包括糖、鹽、游離氨基酸如L-精氨酸和L-谷氨酰胺（Golovanov，A.P.等人， J.Am.Chem.Soc. 126:8933_8939 (2004))、多元醇（Singh，S Sci.Tech4 :1-9 (2003) ;Mishra，R.等人，J. Biol. Chem. 280 :15553-15560 (2005))、 聚乙二醇（PEG)和可以減少蛋白質-蛋白質相互作用的其他聚合物，如聚山梨酯 (polysorbates)或泊洛沙姆（Frokjaer 和 Otzen，見上文；Lee，R. C.等人，Ann. Biomed. Eng. 34 ： 1190-1200(2006) ； (Nema, S.'A, PDAJournal of Pharmaceutical Science and Technology51:166-171(1997))。
[0008] PVP是基本上由線性聚合的I-乙烯基-2-吡咯烷酮（乙烯基吡咯烷酮）組成的合 成聚合物，其聚合度導致具有各種分子量的聚合物。聚乙烯吡咯烷酮的同義詞包括PVP、聚 (1-乙烯基-2-吡咯烷酮)、聚維酮和Kollidon。PVP是生物學惰性的并且口服和局部用途 徑無毒。分子量低于25000道爾頓的PVP通過腎小球濾過作用從體循環(huán)中移除并且因此預 期不在身體中堆積。
[0009] PVP已經(jīng)在制藥工業(yè)中廣泛用作片劑包衣助劑并且在眼用和局部用制品中用作增 黏劑。PVP也已經(jīng)最初作為血漿增容劑用于腸胃外施用并且隨后在可注射制劑(例如，抗生 素、激素、鎮(zhèn)痛藥）中用來產(chǎn)生黏度。這些制劑限于通常小于500道爾頓的小分子化合物或 小蛋白如激素。含有PVP的當前可用藥品包括Bici 11 in C-R? (Wyeth) ,Wycillin?(Wyeth) 和PfiZerpen?(PfiZer)，它們均含有小分子青霉素G，以及非常低濃度（彡0. 6%)的PVP。 Dep〇-SubQProveral04?(Pharmacia and Upjohn)含有 5%PVP 連同小分子醋酸甲輕孕麗。 Bexxar?(Glaxo Smith Kline)含有放射性標記的抗CD20抗體連同4.4-6. 6%PVP。在Bexxar 的例子中，PVP特異地用作放射防護劑以減少放射性標記的抗體因所附著放射性同位素而 自輻射分解（美國專利號5, 961，955和美國專利號6, 338, 835)。PVP和聚乙二醇也被生物 化學家用來沉淀溶解的蛋白質(美國專利號5, 525, 519)。
[0010] 因此，令人希望的是提供在冷藏下具有增強的穩(wěn)定性并且在正常室溫下具有至少 中等的穩(wěn)定性的TNFR:Fc的藥物組合物，從而避免來自復原程序的不便和錯誤的可能性。

【發(fā)明內容】

[0011] 本發(fā)明的藥物組合物包括一種純化的多肽、緩沖劑、聚集抑制劑、滲透壓調節(jié)劑、 穩(wěn)定劑、表面活性劑、螯合劑、以及任選地防腐劑，它們呈適當?shù)慕M合。
[0012] 在一個方面，在藥物組合物中需要聚集抑制劑來使產(chǎn)品保持在天然狀態(tài)并且是具 有生物活性的，具有延長的保質期和增強的儲存條件。本發(fā)明重點考察了 PVP的作用。還有 包括如天冬氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、丙氨酸、組氨酸以及賴氨酸等氨基酸聚集抑制劑，同樣 可降低多肽形成聚集體的趨向，可以長時間地減少制劑中的含有Fc結構域的多肽的聚集。
[0013] 在另一個方面，需要緩沖劑來維持制劑的pH值。本發(fā)明的緩沖系統(tǒng)包括磷酸緩 沖劑、碳酸氫鹽緩沖劑、丁二酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、氨基酸類、以及 Tris緩沖劑，它們單獨地或者以適當?shù)慕M合而使用，提供所希望的從5. . 5到7. 5范圍的pH 值。
[0014] 在本發(fā)明中，表面活性劑用來防止TNFR = Fc吸附在小瓶、安瓿瓶、圓柱狀管 (carpoule)、藥筒、或注射器的表面上。表面活性劑降低蛋白質溶液的表面張力，從而防止 其吸附或聚集在一個疏水表面上。適用于本發(fā)明制劑的表面活性劑包括但不限于聚山梨 酯(例如聚山梨酯20或80);帕洛沙姆(例如帕洛沙姆188或168);山梨坦酯及其衍生物； Triton ;十二烷基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；十二烷基、十四烷基、亞油酰-或硬脂酰-磺基甜 菜堿；十二烷基、十四烷基、亞油?；蛴仓?肌氨酸；亞油酰_、十四烷基或十六烷基-甜 菜堿；月桂酰胺丙基_、椰油酰胺丙基_、亞油酰胺丙基_、肉豆蘧酰胺丙基_、棕櫚酰胺丙 基-或異硬脂酰胺丙基甜菜堿(例如月桂酰胺丙基）；肉豆蘧酰胺丙基_、棕櫚酰胺丙基-或 異硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲基椰油?；；撬徕c或甲基油?；M酸二鈉；和M0NAQUAT? 系列（Mona Industries, Inc.，Paterson, N.J.);聚乙二醇，聚丙醇以及乙二醇和丙二醇的 共聚物(例如，Pluronics, PF68等)。它們單獨地或組合使用。
[0015] 在一個實施方案中，在本發(fā)明中使用的穩(wěn)定劑選自下組，該組由以下各項組成：氨 基酸類，如甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、賴氨酸、脯氨酸、絲氨酸，等等以及其他們的鹽，它們單 獨地或組合使用；單糖，如葡萄糖和甘露糖以及它們的類似物，它們單獨地或組合使用；二 糖類，如蔗糖、海藻糖、麥芽糖和它們的類似物，它們單獨地或組合使用；糖醇類，如甘露糖 醇、山梨