去分化植物細(xì)胞的美容用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于美容領(lǐng)域，涉及薔薇屬（Rosa sp.)植物的去分化植物細(xì)胞作為活性劑 對(duì)皮膚和毛發(fā)的美學(xué)護(hù)理的用途。
[0002] 本發(fā)明還涉及來(lái)源于蘭蔻薔薇叢（Lanc6merosebush)的去分化植物細(xì)胞的細(xì) 胞系，所述去分化植物細(xì)胞能夠且有效地修復(fù)皮膚的再生能力。
[0003] 特別地，本發(fā)明涉及來(lái)源于蘭蔻品種的薔薇叢的去分化植物細(xì)胞的細(xì)胞系，所述 去分化植物細(xì)胞能夠且有效地修復(fù)具有低的再生潛力的重建皮膚的模型的再生能力，并 且對(duì)來(lái)源于人體皮膚活體組織檢查（頭皮和包皮）的真皮干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞（SKP)的庫(kù) (reservoir)的自我更新能力有效。
【背景技術(shù)】
[0004] 皮膚是一種在個(gè)體的整個(gè)生命中持續(xù)地自我更新的組織。這種自我更新能力通過(guò) 存在于表皮基底層中的角質(zhì)形成細(xì)胞得以保持。這種細(xì)胞群，一方面，包括干細(xì)胞，所述干 細(xì)胞是一種稀有細(xì)胞，其特征是具有非?？捎^的長(zhǎng)期的擴(kuò)增潛能以及自我更新能力，另一 方面，包括被稱作祖細(xì)胞的細(xì)胞，當(dāng)祖細(xì)胞向角質(zhì)層迀移時(shí)，增殖活躍并且可能分化。
[0005] 對(duì)于毛囊，已知上皮隔室和真皮隔室的相互作用對(duì)毛發(fā)的形態(tài)發(fā)生和再生長(zhǎng)以及 維持毛囊周期是必不可少的。這兩個(gè)隔室功能的維持依賴于各種干細(xì)胞庫(kù)的存在和活性。 上皮干細(xì)胞的第一庫(kù)已經(jīng)在嚙齒類(lèi)動(dòng)物的被稱作"隆突"的區(qū)域被確認(rèn)（Cotsarelis等， Cell，1990,61 :1329)。自從該第一次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，角質(zhì)成形細(xì)胞干細(xì)胞的其他庫(kù)已經(jīng)被確認(rèn)， 并且，在人類(lèi)中，出現(xiàn)多個(gè)更活躍或較不活躍的庫(kù)，其嵌入毛囊的外跟鞘（ORS)中（Rochat 等，Ce 11，1994, 76 :1063 ;Commo 等，Differentiation，2000,66 :157 ; Jaks 等，Nature Genetics, 2008,40 :1291)〇
[0006] 至于真皮隔室，容納在真皮乳頭及結(jié)締組織鞘中的被稱作SKP(皮膚源性前體細(xì) 胞）的細(xì)胞，已經(jīng)被確認(rèn)在小鼠的毛發(fā)生長(zhǎng)誘導(dǎo)及皮膚修復(fù)中作為多能細(xì)胞（Biernaskie 等，Cell Stem Cell，2009,5:310)。數(shù)個(gè)團(tuán)隊(duì)已經(jīng)證明SKP存在于人體組織中，尤其在毛囊 的真皮乳頭中（Toma 等，Stem Cells，2005, 23:727 ;Hunt 等，Stem Cells，2008, 26:163)。
[0007] 尤其通過(guò)外皮表面的大量變型、膚色暗沉以及表面不均一性（平滑外觀喪失）、彈 性喪失、出現(xiàn)皺紋、創(chuàng)傷后的修復(fù)/愈合減緩、表皮變薄和/或毛發(fā)脫落和/或變白、毛發(fā)密 度減小等，來(lái)顯不皮膚室的老化。
[0008] 在皮膚和毛發(fā)上的所有這些可見(jiàn)的變化表明皮膚隔室的再生能力的改變。它們也 表明確保這些組織的內(nèi)穩(wěn)態(tài)和自我更新的基本的生物學(xué)功能隨著年齡增長(zhǎng)被損害。
[0009] 現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明，隨著年齡增長(zhǎng)，表皮中的再生細(xì)胞數(shù)量不會(huì)減少（Giangreco等， Aging Cell，2008, 7 :250)，但是它們的功能性顯示出極大地受控制基底層再生能力的微環(huán) 境的改變的影響。因此，與年齡相關(guān)的皮膚質(zhì)量的下降呈現(xiàn)出與這些細(xì)胞的改變的再生能 力關(guān)聯(lián)。在細(xì)胞的微環(huán)境的關(guān)鍵組分中，可以提到細(xì)胞間相互作用、基底室的物理約束、以 及周?chē)?xì)胞和真皮隔室的常駐型細(xì)胞分泌的旁分泌因子。
[0010]同樣地，與脫發(fā)或者自然老化相關(guān)的毛發(fā)數(shù)量的減少和/或毛發(fā)質(zhì)量的降低也表 明變化的再生能力。事實(shí)上，已經(jīng)證明：與未脫發(fā)頭皮的毛囊相比，脫發(fā)頭皮的毛囊長(zhǎng)度收 縮，并且具有較少的增殖的角質(zhì)形成細(xì)胞（Ashrafussaman等，Acta Histochem Cytochem， 2010,43 :9)。此外，近來(lái)研宄表明缺乏表皮干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為祖細(xì)胞在雄激素源性脫發(fā)中起著 重要作用（Garza等，J Clin Invest，2010)。在真皮隔室中，體外培養(yǎng)中來(lái)源于脫發(fā)頭皮的 真皮乳頭的細(xì)胞增殖緩慢，并且，相較于來(lái)源于未脫發(fā)頭皮的細(xì)胞，顯示出過(guò)早老化（Bahta 等，J Invest Dermatol，2008,128 :1088)，隨著年齡增長(zhǎng)，SKP的數(shù)量減少已經(jīng)在人體組織 中發(fā)現(xiàn)（Gago等，Stem Cells，2009,27 :1164)。所有這些觀察結(jié)果暗示毛囊隔室的再生能 力的改變與脫發(fā)和/或自然老化有關(guān)。
[0011] 因此，為了找到抵制皮膚和毛發(fā)與年齡關(guān)聯(lián)的改變的解決辦法，應(yīng)尤其關(guān)注再生 細(xì)胞，或甚至是皮膚和毛發(fā)的干細(xì)胞。
[0012] 去分化植物細(xì)胞起源于Haberland在1902年的研宄。在過(guò)去的40年中，植物細(xì) 胞培養(yǎng)物已經(jīng)被用于感興趣的代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)以及完全一樣的植株的增殖（體細(xì)胞胚胎 發(fā)生）。這種植物生物技術(shù)是基于細(xì)胞全能性的概念："任何一個(gè)植物細(xì)胞能夠去分化并且 再生成另一個(gè)與所述細(xì)胞來(lái)源相同的新個(gè)體。"去分化植物細(xì)胞是來(lái)源于器官（葉、莖、根、 花瓣等）的植物細(xì)胞，其經(jīng)過(guò)培養(yǎng)、再次生成它的去分化形式，即失去了它的葉、莖、根、花 瓣的特異性，能夠再次生成完整的植株。
[0013] 未分化植物細(xì)胞相當(dāng)于源自植物分生組織細(xì)胞的真正的植物干細(xì)胞，并且不具有 器官特異性的生物學(xué)歷史。
[0014] WO 2009/151302 和 KR 2009-0118877 描述了含有來(lái)源于人參（Panax ginsen)的 形成層或者紅豆杉屬（Taxus genus)植物的未分化植物細(xì)胞的抗老化或抗氧化的組合物。
[0015] EP 1 985 280描述了來(lái)源于薔薇科（Rosaceae)植物、尤其是來(lái)源于蘋(píng)果樹(shù) (Malus domestica，蘋(píng)果）的去分化植物細(xì)胞的用途，用來(lái)保護(hù)面對(duì)各種內(nèi)在和外在壓力的 皮膚的干細(xì)胞，尤其用來(lái)治療與年齡相關(guān)的皮膚和毛發(fā)的損害。
[0016] EP 1 699 423描述了來(lái)源于嗜鹽植物的去分化植物細(xì)胞的凍干物的用途，用于復(fù) 原皮膚表面。
[0017] DE-A-102 009 027 361和EP 2 266 529描述了去分化植物細(xì)胞的用途，尤其是 來(lái)源于蘋(píng)果屬（Malus genus)植物的去分化植物細(xì)胞的用途，用于處理毛發(fā)角蛋白纖維、尤 其保護(hù)它們免受紫外線輻射，或者用于治療老化的皮膚。
[0018] EP 0 909 556描述了一種薔薇科植物提取物的用途，特別是薔薇的提取物，可選 地從未分化植物細(xì)胞中獲得，作為緩激肽拮抗劑用于處理各種病癥、尤其是皮膚病癥。
[0019] W02011121051描述了來(lái)源于阿干（argania)樹(shù)的去分化的、非誘導(dǎo)細(xì)胞的培養(yǎng)物 的制劑，該制劑用于治療老化皮膚、炎癥和癥痕的用途，以及該制劑的生產(chǎn)。
[0020] W0200482643描述了一種包含乳香、乳香（Boswelia)或黃荊（Negundo)的去分化、 誘導(dǎo)植物細(xì)胞并且顯示提神作用的美容組合物。
[0021] EP2436759描述了來(lái)源于前科（Solanaceae)植物的形成層并且顯示抗老化作用 的未分化細(xì)胞系。
[0022] EP2436758描述了來(lái)源于銀杏科（Ginkgoaceae)植物的形成層并且顯示增強(qiáng)的抗 氧化作用的未分化細(xì)胞系。
[0023] EP2436757描述了來(lái)源于菊科（Asteraceae)植物的形成層并且顯示增強(qiáng)的抗炎 作用的未分化細(xì)胞系。
[0024] W02010137879描述了來(lái)源于楊柳科（Salicaceae)植物的形成層并且顯示增強(qiáng)的 抗炎作用的去分化細(xì)胞系。
[0025] EP1064932描述了顯示除臭作用的去分化細(xì)胞的用途。
[0026]EP1244464描述了火絨草屬（Leontopodium genus)的去分化植物細(xì)胞的提取物 作為抗紫外線的遮蔽劑的用途。
[0027] 因此，據(jù)申請(qǐng)人所知，沒(méi)有文獻(xiàn)提及獲取具有如本說(shuō)明書(shū)所述的特定的美容性能 的薔薇叢的去分化細(xì)胞系。
[0028] 需要確定技術(shù)方案，用于提高再生細(xì)胞（包括皮膚和毛發(fā)的干細(xì)胞）的功能性和 /或活性，用于在個(gè)體的整個(gè)生命期中保持皮膚質(zhì)量和功能、以及毛發(fā)質(zhì)量、密度和形狀，以 及尤其用于預(yù)防和/或治療與年齡關(guān)聯(lián)的皮膚和毛發(fā)外觀的影響。
[0029] 特別地，需要提供新型的活性劑，用于抵制皮膚或毛發(fā)的組織再生中的缺陷，尤其 用于減輕表皮變薄、提高皮膚外觀、消除皺紋、減緩和/或阻止脫發(fā)、或者減緩和/或阻止毛 發(fā)變白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0030] 本發(fā)明的目的尤其是滿足這些需求。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明涉及薔薇屬植物的、尤其是蘭蔻薔薇叢的植物的 去分化的植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍干物作為用來(lái)護(hù)理老化的皮膚或老化的毛 發(fā)的活性劑的美容用途。
[0032] 出乎意料地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)薔薇的去分化植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍干 物已經(jīng)被證明：在體外尤其能夠且有效地修復(fù)由幾乎不存在上皮干細(xì)胞和祖細(xì)胞的角質(zhì)形 成細(xì)胞群形成的重建皮膚的模型的再生能力。在包括處理兩周的三周培養(yǎng)后，已經(jīng)觀察到 上皮細(xì)胞厚度的增加以及形態(tài)質(zhì)量（基底層的組織、成層和分化，等）的非常明顯的改進(jìn)。
[0033] 發(fā)明人已表明，薔薇去分化植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍干物，通過(guò)優(yōu)化 表皮和真皮之間的通訊，至少部分地產(chǎn)生促再生（pro-regenerating)效應(yīng)。事實(shí)上，發(fā)明 人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用本發(fā)明的薔薇去分化植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍干物處理具有 降低的再生潛能的重建皮膚，誘導(dǎo)許多可擴(kuò)散的生物因子的表達(dá)，尤其是，對(duì)表皮再生具有 有益效果而被熟知的KFG(角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子）的表達(dá)。因此，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，薔薇 去分化植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍干物，已經(jīng)被證明特別地能夠且有效地誘導(dǎo) 皮膚產(chǎn)生恢復(fù)包含干細(xì)胞和祖細(xì)胞的基底層的再生能力的生理因子。
[0034] 出乎意料地，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，薔薇去分化植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍 干物，已經(jīng)被證明對(duì)于刺激來(lái)自于人體活組織檢查（頭皮和包皮）的真皮干細(xì)胞、SKP的庫(kù) 的自我更新能力特別有效。因此，可以觀察到，在處理10天后，SKP的自我更新能力提高了 約65%。這種活性劑評(píng)價(jià)研宄可以得到結(jié)論：在體外，SKP的自我更新能力可以受到使用薔 薇去分化植物細(xì)胞、或者所述細(xì)胞的提取物或凍干物的處理的積極影響。
[0035] 出人意料地，發(fā)明人也示出，薔薇去分化植物細(xì)