一種高效利用知母的提取精制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥及天然藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從知母中同時(shí)提取精制高純 度知母黃酮苷（芒果苷、新芒果苷）、知母總皂苷及知母總多糖的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 知母為百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides)的根莖，具有滋陰降火，潤 燥滑腸的功效。作為一種常用的中藥，知母資源越來越寶貴，因此針對(duì)知母的高效綜合利用 是保護(hù)其資源的有效途徑之一。
[0003] 現(xiàn)代化學(xué)研究表明，知母中主要含有黃酮苷類成分（新芒果苷、芒果苷等）和甾體 皂苷類成分（知母皂苷A II、知母皂苷A III、知母皂苷B II、知母皂苷B III等），此外知母中 還含有多糖類成分。
[0005] 現(xiàn)代藥理研究表明，知母具有抗病原微生物、抗血小板聚集、降血糖、解熱、抗炎、 降低轉(zhuǎn)氨酶等多種藥理活性。其中，知母皂苷類成分具有降血糖、治療老年性癡呆、抗血 凝、抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗骨質(zhì)疏松等藥理作用，經(jīng)水解后還形成的菝葜皂苷元，亦是一種十 分重要天然藥物成分，可用于激素等藥物合成的原料藥。而知母中黃酮類成分芒果苷及新 芒果苷等具有降血糖的作用，可用于治療非胰島素依賴型糖尿病，其作用機(jī)制為：保護(hù)、修 復(fù)胰島內(nèi)分泌細(xì)胞而增加血清胰島素濃度，并競(jìng)爭(zhēng)性地抑制小腸上皮a -葡萄糖苷酶的活 性，從而延緩腸道對(duì)糖的吸收，起到降糖的作用；還可能通過增加靶細(xì)胞胰島素受體數(shù)目， 改善靶細(xì)胞對(duì)胰島素敏感性，減輕胰島素抵抗，等途徑降低血糖；并且對(duì)白內(nèi)障、高血脂等 糖尿病并發(fā)癥有防治作用。而知母多糖有文獻(xiàn)報(bào)道，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎等多種活性。
[0006] 目前，已有專利"知母化學(xué)成分群提取物及其制備工藝"（【申請(qǐng)?zhí)枴?201310430996. 5)，公開了一種同時(shí)分離制備知母三種化學(xué)成分群提取物的制備工藝，采用 溶劑法提取后，再經(jīng)大孔樹脂富集、酸水解、有機(jī)溶劑萃取及醇沉等方法進(jìn)行知母總皂苷、 知母阜苷元及知母多糖成分的分離制備。但該方案在實(shí)施時(shí)存在一個(gè)缺陷：由于知母中除 了知母皂苷、知母多糖外，還含有大量的黃酮苷（芒果苷、新芒果苷等），且這些黃酮苷的極 性和知母皂苷相近，都屬中等極性成分，因此，方案中采用75~95%乙醇加熱回流提取時(shí)， 極性相近的知母黃酮苷和知母皂苷均會(huì)被提取出來，在大孔樹脂上也能同時(shí)被吸附和解吸 附，因而采用這一方案分離制備獲得的知母總皂苷中必會(huì)含有大量的黃酮苷類成分，從而 影響知母總皂苷的純度。同時(shí)，在實(shí)施過程中還采用氯仿或乙酸乙酯萃取，有毒有機(jī)溶劑的 使用會(huì)帶來溶劑殘留而影響其品質(zhì)。
[0007] 專利"一種知母總黃酮提取物及其同時(shí)制備知母總黃酮提取物及總皂苷提取物的 方法"（申請(qǐng)?zhí)?01310332999. 5)也公開了一種知母綜合制備方法，與上述制備工藝類似， 采用溶劑回流提取，再通過大孔樹脂分離純化。但實(shí)際上，知母黃酮苷和知母皂苷的極性接 近，30%~90%乙醇提取后，采用單一樹脂大孔樹脂（或聚酰胺）為吸附劑，以一定濃度范 圍的乙醇溶液洗脫，獲得知母總黃酮或知母總皂苷或兩者的混合部位。這一方法主要存在 以下兩個(gè)問題，一是浪費(fèi)了知母多糖活性部位，二是知母黃酮苷和知母總皂苷在單一樹脂 上的分離專屬性較差，不能夠獲得真正純度好的有效部位或成分。
[0008] 綜上，目前已有的報(bào)道或?qū)＠麑?shí)施方案中，均沒有解決高效綜合利用知母的提取 精制方法，方案僅針對(duì)其中的一類或兩類成分進(jìn)行制備，或者分離方案未有考慮到其成分 結(jié)構(gòu)的特殊性，無法達(dá)到各部位（活性成分）的高效分離。因此，如何通過綠色、便捷、有效 的方案，綜合制備獲得知母藥材中主要活性部位或成分，是解決知母資源高效利用的關(guān)鍵。
[0009] 從成分極性上看，知母中的三類活性成分具有一定的差異，知母多糖為大極性類 成分，而知母黃酮苷（芒果苷、新芒果苷等）及知母皂苷類成分極性相似，均為中等極性成 分，因此僅從極性上來進(jìn)行分離顯然是具有一定的困難。但這三類成分的結(jié)構(gòu)差異較大：黃 酮苷類成分含酚羥基，可以與聚酰胺形成氫鍵而被特異性吸附；黃酮苷和皂苷均為糖苷類 成分，可被大孔樹脂吸附；而多糖類成分不具有以上兩類特征，聚酰胺及大孔樹脂均無法將 其吸附。因此，考慮到知母中各類成分的特性及不同樹脂的性質(zhì)，若采用單一樹脂（大孔樹 脂）進(jìn)行分離，其分離效果往往不太理想，因此可采用聚酰胺_大孔樹脂聯(lián)用分離技術(shù)對(duì)知 母中各類型成分進(jìn)行精制分離，從而獲得不同的活性部位，實(shí)現(xiàn)知母資源的綜合利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題，是提供一種綜合利用知母的提取精制方法。
[0011] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0012] -種高效利用知母的提取精制方法，它包括如下步驟：
[0013] a.取知母藥材，經(jīng)0~50%乙醇提取，減壓回收提取液，再加水使藥液中每毫升含 生藥量〇. 1~I. 〇g，調(diào)節(jié)藥液PH至2~6,依次通過聚酰胺色譜柱和大孔樹脂色譜柱；
[0014] b.知母總多糖制備：收集通過大孔樹脂后的流出液，減壓濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度 為1. 08~1. 22,加乙醇至醇濃度為50~90%，放置，析出沉淀，濾過，干燥，即得知母總多 糖；
[0015] c.芒果苷和新芒果苷的制備：聚酰胺色譜柱先以1~3倍柱體積去離子水洗脫， 再依次以1~3倍柱體積的10~30%乙醇和40~80%乙醇洗脫，收集10~30%乙醇洗 脫液，減壓回收乙醇，〇~l〇°C冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集40~80%乙醇洗脫液， 減壓回收乙醇，0~KTC冷藏放置，析晶，即得芒果苷；
[0016] d.知母總皂苷制備：大孔樹脂色譜柱先以1~3倍柱體積去離子水洗脫，再以2~ 6倍柱體積的50~90%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，干燥，即得知母總皂苷。
[0017] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，所用聚酰胺的規(guī)格為30-100目，與知 母藥材的重量比為3 :1~4 ;所用大孔樹脂的類型為非極性或弱極性型大孔樹脂，與知母藥 材的重量比為2 :1~4。
[0018] 以上所述的高效利用知母的提取精制方法，芒果苷和新芒果苷的制備方法為：聚 酰胺色譜柱先以2倍柱體積去離子水洗脫，再依次以2倍柱體積20 %乙醇和60 %乙醇洗 脫，收集20%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至洗脫液10%體積，4°C冷藏放置，析晶，即 得新芒果苷；收集60%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，4°C冷藏放置，析晶，即得芒果苷。
[0019] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，知母總皂苷的制備方法為：大孔樹脂 色譜柱先以2倍柱體積去離子水洗脫，再以4倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 減壓回收乙醇，干燥，即得知母總皂苷。
[0020] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，所述減壓回收乙醇的條件為：壓力 為-0? 01 ~-0? 12MPa，溫度為 60 ~80°C。
[0021] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，聚酰胺與知母藥材的重量比為2 :1 ; 大孔樹脂與知母藥材的重量比為1 :1。
[0022] 有益效果：本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0023] (1)本發(fā)明的特點(diǎn)在于充分考慮了知母所含化學(xué)成分類型特征，并利用聚酰胺對(duì) 知母黃酮苷吸附的專屬性、大孔樹脂對(duì)知母皂苷的吸附特性以及各類樹脂對(duì)知母多糖均不 能吸附的性質(zhì)，建立了知母綜合利用提取分離和精制方案，工藝過程中避免了有毒試劑的 使用，與現(xiàn)有技術(shù)相比更為簡(jiǎn)單、綠色和安全。
[0024] (2)本發(fā)明聚酰胺及大孔樹脂可重復(fù)使用，因此成本相對(duì)較低，適宜于規(guī)?；?產(chǎn)，可大大提高知母的綜合利用度，節(jié)省中藥資源，產(chǎn)生良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
[0025] (3)本發(fā)明工藝路線綠色、簡(jiǎn)單，適宜于規(guī)模化生產(chǎn)，所制備的知母黃酮苷（芒果 苷、新芒果苷）、知母總皂苷和知母總多糖的含量較高。
[0026] (4)為了更好地理解本發(fā)明的有益效果，下面用聚酰胺和大孔樹脂吸附實(shí)驗(yàn)作為 進(jìn)一步的說明。
[0027] a.聚酰胺對(duì)不同pH知母提取液中知母黃酮苷、知母皂苷及知母多糖類成分的靜 態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)
[0028] 目的：聚酰胺吸附的原理主要是氫鍵吸附