Aphanalide M在制備治療胃癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及化合物A地analideM的新用途，具體設(shè)及A地analideM在制備治療 胃癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] YaoZhang等人首次分離純化出化合物AphanalideM，并將成果發(fā)表在著名天然 產(chǎn)物雜志JournalofNaturalProductJl(BioactiveTerpenoidsfromtheFruitsof Aphanamixisgrandifolia，J.Nat.Prod.，2013, 76,1191-1195)。
[0003] 目前尚未有該化合物關(guān)于治療胃癌的活性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種AphanalideM的醫(yī)藥用途。 陽0化]上述目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0006]AphanalideM在制備治療胃癌藥物中的應(yīng)用，所述AphanalideM化學(xué)結(jié)構(gòu)式如 下，
[0007]
[0008] 進(jìn)一步地，所述胃癌為胃癌SGC-7901。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。
[0010] 實(shí)施例1:AphanalideM的分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0011] AphanalideM的制備方法同文獻(xiàn)報(bào)道的制備方法度ioactiveTe;rpenoidsfrom theFruitsofAphanamixisgrandifolia，J.Nat.Prod.，2013,76,1191-1195)。
[0012] 結(jié)構(gòu)確證：白色無定形粉末，分子式為C34H41NO1。，不飽和度為15。核磁共振氨譜 數(shù)據(jù) 5h(卵m，DMS0-de，500MHz) 85,d，J= 7.W，H-2(2. 72,dd，J= 16. 0,7.W， H-2 (3. 44,d，J= 16. 0)，H-5 (2. 43,Si即aloverlapped)，H-6(1. 62,m)，H-6(1. 85,Si即al overlapped)，H_7(3.26，Si即aloverlapped)，H_9(2. 77，d，J= 3.0)，H-11 (3.69，dt，J =6. 0, 3. 0)，H-12 巧.20,d，J=6. 0)，H-15 (3. 48,s)，H-16 (1. 82,Si即aloverlapped)， H-16(1.88,Si即aloverlapped)，H-17 (2. 69,t，J= 11. 0)，H-18(1. 08,s)，H-19 (1. 36,s)， H-21 (7. 07,s)，H-22 巧.98,d，J= 1. 0)，H-23 (7. 19,t，J= 1. 5)，H-28 (1. 24,s)，H-29 (1. 35， s)，H-30(1.06，s)，H-3,（8.68,d，J= 2.0)，H-5,（8.69,dd，J= 5.0,2. 0)，H-6,（7.44,ddd， J= 8.0,5. 0,2.0)，H-7' (7.96,dt，J= 8.0,2. 0)，7-0H(4.81，d，J= 4.0)，11-OH巧.24， d，J= 3. 0)，1-OAc(1. 75,s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) 5c(卵m，DMSO-de，12甜z) :71.6(CH，1-C)， 34. 4 (細(xì)2, 2-C)，169. 5 (C，3-C)，85. 2 (C，4-C)，43. 0 (CH，5-C)，29. 7 (邸2, 6-C)，70. 2 (CH， 7-C)，41. 1 (C，8-C)，39. 1 (CH，9-C)，44. 3(C，10-C)，72. 7(CH，11-C)，87. 1 (CH，12-C)， 44. 4 (C，13-C)，71.8(C，14-C)，55. 2 (CH，15-C)，33. 0 (邸2,16-C)，39. 3 (CH，17-C)，15. 1 (CH3， 18-C)，16. 5 (細(xì)3, 19-C)，122.6(C，20-C)，140. 1 (CH，21-C)，111. 3 (CH，22-C)，141. 9 (CH， 23-C)，33. 7 佩，28-C)，22.8佩，29-C)，17. 9 佩，30-C)，164. 1 (C，1' -C)，125.8(C， 2' -C)，149. 2(CH，3' -C)，153. 0(CH，5' -C)，123. 3(CH，6' -C)，136. 1(CH，7' -C)，168. 9(C， 1-OAc)，20. 2 (CH3,1-OAc)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，因此可W確定本發(fā)明制備的化 合物即為文獻(xiàn)報(bào)道的A地analideM。 陽01引實(shí)施例2:AphanalideM的藥理作用試驗(yàn)
[0014] 一、材料和儀器
[0015] 人胃癌細(xì)胞株SGC-7901購于賽爾試劑公司。A地analideM自制，HPLC歸一化純 度大于98%。PDTC、膜蛋白酶、MTT、二甲基亞諷值MS0)、瓊脂糖、冰醋酸購于美國Sigma公 司。RPMI-1640培養(yǎng)基、PBS憐酸鹽緩沖溶液購于美國GIBC0公司。胎牛血清購于山東銀香 偉業(yè)公司。臺(tái)吩藍(lán)（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），TU肥L試劑盒（凱基生物科技發(fā)展 有限公司），DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物公司），甲醒（美國Fisher公司），過氧化 氨酶（天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中屯、）。
[0016] WD-9403C紫外分析儀（德國Biometra公司），梯度PCR儀（德國Biometra公 司），凝膠成像分析系統(tǒng)（上海天能公司），電泳儀（北京六一），電子天平（上海精密儀器 儀表有限公司），服1-1002型二氧化碳培養(yǎng)箱（日本化emoto公司），超凈工作臺(tái)（蘇州凈 化實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），超速離屯、機(jī)（北京醫(yī)療器械廠），低速離屯、機(jī)（北京醫(yī)療器械廠）， WilovertS型倒置顯微鏡（日本Olympus公司），立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊實(shí)業(yè)有限 公司），細(xì)胞計(jì)數(shù)板（上海精密儀器公司），超純水純水器（英國PURELABU口RAGE肥TIC)。
[0017] 二、試驗(yàn)方法
[0018] 1、胃癌細(xì)胞SGC-7901的培養(yǎng)
[0019] 1.1細(xì)胞復(fù)蘇
[0020] (1)從液氮罐中取出細(xì)胞凍存管，迅速置于37°C~42°C，75%酒精中，然后移至同 溫水浴鍋中；（2)輕輕晃動(dòng)1~3min凍存管，使凍存液融化，迅速移至超凈臺(tái)中；(3)將含有 細(xì)胞的凍存液吸入無菌離屯、管，加入適量RPIM-1640培養(yǎng)基；(4)吹打混勻后放入低速離屯、 機(jī)，800rpm/min離屯、3分鐘，去除上清液；（5)加入適量培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液依據(jù)濃度接 種到lOmL培養(yǎng)皿中；(6)置于含5%二氧化碳、37°C飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0021] 1.2細(xì)胞傳代
[0022] (1)待培養(yǎng)皿中的細(xì)胞貼壁約80%時(shí)，在超凈臺(tái)中用移液管吸取舊的培養(yǎng)基吹打 數(shù)次培養(yǎng)皿中細(xì)胞，W吹掉死亡細(xì)胞；（2)用移液管吸去舊培養(yǎng)基，加入適量0. 25 %膜酶消 化細(xì)胞，置于3(TC培養(yǎng)箱中消化；（3)約3min后將培養(yǎng)皿置于倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞周 邊發(fā)亮、回縮變圓后則說明細(xì)胞已經(jīng)從壁上脫離；（4)迅速于超凈臺(tái)中吸去膜酶。加入適量 培養(yǎng)基反復(fù)吹打細(xì)胞，使細(xì)胞完全脫離培養(yǎng)皿；（5)將細(xì)胞懸液按濃度分別接種至不同的 培養(yǎng)皿中，補(bǔ)足培養(yǎng)基；(6)重新置于含5%C02、37°C飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 陽〇2引 2、細(xì)胞計(jì)數(shù)
[0024] (1)準(zhǔn)備好細(xì)胞計(jì)數(shù)板及蓋玻片，二者均用酒精擦拭干凈，將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板 上；（2)待酒精揮發(fā)后，吸出適量細(xì)胞懸液，滴加在蓋玻片邊緣，使懸液充滿蓋玻片和計(jì)數(shù) 板之間，注意不要溢出蓋玻片及兩側(cè)的玻璃槽，靜置后計(jì)數(shù)；（3)在顯微鏡下找到4個(gè)大格， 每個(gè)大格又分為16個(gè)小格，分別計(jì)數(shù)4個(gè)大格中的細(xì)胞數(shù)，取平均值。壓線細(xì)胞計(jì)左側(cè)和 上方的，不計(jì)右側(cè)和下方的；(4)細(xì)胞濃度（個(gè)/mL)=每個(gè)方格的平均細(xì)胞數(shù)X10000 ; (5) 將細(xì)胞懸液稀釋成實(shí)驗(yàn)所需濃度。 陽0巧]3、細(xì)胞活力測定 陽0%] (1)取待測定的SGC-7901胃癌細(xì)胞懸液0. 9血；（2)向細(xì)胞懸液中加入臺(tái)吩藍(lán)吹 打混勻；（3)采用細(xì)胞計(jì)數(shù)板盲法計(jì)數(shù)至少200個(gè)細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察；