多粘菌素脂質(zhì)納米顆粒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及包含至少一種來自多粘菌素家族的抗生素的脂質(zhì)納米顆粒，包含所述 納米顆粒的藥物組合物，及所述納米顆粒在預(yù)防和/或治療呼吸樹感染(respiratory tree infection)中的應(yīng)用。 現(xiàn)有技術(shù)
[0002] 對(duì)由多藥抗性革蘭氏陰性細(xì)菌的（MDRGNB)引起、例如由銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)引起的慢性感染及復(fù)發(fā)性感染具有最大影響的疾病之一是囊 性纖維化。運(yùn)種細(xì)菌的持久性，除其他原因外，與其在生物膜上的生長(zhǎng)有關(guān)，所述生物膜由 附在表面的細(xì)菌群體結(jié)構(gòu)組成，被由細(xì)菌自身分泌的保護(hù)層包被，且提供更有效地抵抗殺 蟲劑和抗生素的能力，承受相當(dāng)高劑量的抗菌產(chǎn)品，并造成肺功能損害。
[0003] 用于治療運(yùn)些感染的某些抗生素具有副作用，所W使用微米系統(tǒng)或者納米系統(tǒng)施 用所述抗生素值得特別關(guān)注。文獻(xiàn)描述了包含某些所述抗生素的運(yùn)種系統(tǒng)的不同應(yīng)用，如 文件US2009169635,其描述了用于全身施用的聚醋型生物降解性聚合納米顆粒。
[0004] 鑒于抗菌或者抗生素制劑在肺中局部濃度是成功清除細(xì)菌的最重要的因素，肺泡 和支氣管上皮似乎是用于藥物釋放最令人感興趣的位置。
[0005] 通過施用氣溶膠和粉末將抗生素直接施用到下呼吸樹具有潛在的優(yōu)勢(shì)，從而通過 在感染發(fā)生的肺泡位置的沉積可W獲得更高的局部濃度，所W吸入的藥物可W減少系統(tǒng)不 良反應(yīng)的發(fā)生，因?yàn)槭┯玫膭┝繙p少。
[0006] 多粘菌素是抗生素家族，其在20世紀(jì)50年代和20世紀(jì)60年代上市但隨后被棄用， 因其副作用和其他特異性針對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抗生素的出現(xiàn)(Shedding light on the use of colistin : sti 11 gaps to be filled.Enfermedades Infecciosas y Microbiolog化Cl化ica，2011，第29卷，第4期）。近年來，由于由MDRGNB細(xì)菌引起的感染的增 加與治療藥替代物的缺乏，來自多粘菌素家族的抗生素的使用再次增長(zhǎng)。然而，關(guān)于其功效 和安全性的極少可得的臨床數(shù)據(jù)，使其難W保證現(xiàn)今使用的劑量方案是否是最適合的。
[0007] 鑒于此數(shù)據(jù)，因此，有必要開發(fā)克服現(xiàn)有技術(shù)狀況缺陷的用于治療呼吸樹感染的 藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明開發(fā)了包含至少一種來自多粘菌素家族的抗生素的脂質(zhì)納米顆粒，該脂質(zhì) 納米顆粒可W附著至呼吸道粘膜層或由細(xì)菌本身產(chǎn)生的生物膜，或者與呼吸道粘膜層或由 細(xì)菌本身產(chǎn)生的生物膜相互作用，運(yùn)有利于W較低的抗生素治療劑量獲得最優(yōu)的最小抑菌 濃度結(jié)果。
[0009] 本發(fā)明的納米顆粒免受過早降解，并且進(jìn)一步表現(xiàn)出抗生素持續(xù)釋放至肺泡和支 氣管上皮細(xì)胞。
[0010] 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一種脂質(zhì)納米顆粒，所述脂質(zhì)納米顆粒包含至少 一種來自多粘菌素家族的抗生素、包含一種或多種脂質(zhì)的脂質(zhì)部分（lipid fraction)，所 述脂質(zhì)選自甘油一醋和/或甘油二醋和/或甘油=醋和/或脂肪酸和/或其混合物。
[0011] 本發(fā)明的另一方面設(shè)及藥物組合物，該藥物組合物包含W上定義的脂質(zhì)納米顆粒 與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
[0012] 本發(fā)明的另一方面設(shè)及制備W上定義的脂質(zhì)納米顆粒的方法，所述方法包括W下 步驟：
[0013] a)在有機(jī)溶劑中制備具有脂質(zhì)部分W及至少一種抗生素的溶液/混合物。
[0014] b)制備具有一種或多種表面活性劑的水溶液。
[0015] C)混合油相a)和水相b)，W獲得乳液。
[0016] d)使溶劑蒸發(fā)。
[0017] e)利用離屯、和/或超濾沖洗所獲得的納米顆粒。
[0018] 本發(fā)明的另一方面設(shè)及W上定義的脂質(zhì)納米顆粒，其用作藥物。
[0019] 本發(fā)明的另一方面設(shè)及制備W上定義的脂質(zhì)納米顆粒的方法，所述方法包括W下 步驟：
[0020] a)通過加熱至略高于固體脂質(zhì)的烙點(diǎn)的溫度而制備脂質(zhì)和至少一種抗生素的混 合物。
[0021 ] b)制備具有一種或多種表面活性劑的水溶液。
[0022] C)加熱水溶液b)至與油相a)相同的溫度。
[0023] d)將水相b)添加至油相a)并且混合W獲得乳液。
[0024] e)保持在5°C±3°C的溫度，直至脂質(zhì)再結(jié)晶，產(chǎn)生納米顆粒。
[0025] f)利用離屯、和/或超濾沖洗W獲得納米顆粒。
[0026] 本發(fā)明的脂質(zhì)納米顆?？捎糜谥委煾腥?，特別是呼吸樹感染。因此，本發(fā)明的另一 方面設(shè)及W上定義的脂質(zhì)納米顆粒，其用作藥物。
[0027] 本發(fā)明的另一方面設(shè)及W上定義的脂質(zhì)納米顆粒，其用于治療和/或預(yù)防呼吸樹 感染。因此運(yùn)一方面設(shè)及W上定義的脂質(zhì)納米顆粒在制備用于治療和/或預(yù)防感染的藥物 中的應(yīng)用，所述感染優(yōu)選為呼吸樹感染，優(yōu)選為由銅綠假單胞菌和/或相關(guān)物種和/或?qū)Χ?粘菌素敏感的微生物引起。
[0028] 本發(fā)明的另一方面設(shè)及治療和/或預(yù)防感染的方法，所述感染優(yōu)選為呼吸樹感染， 優(yōu)選為由銅綠假單胞菌和/或相關(guān)物種和/或?qū)Χ嗾尘孛舾械奈⑸镆?，所述方法包?對(duì)需要所述治療和/或預(yù)防的受試對(duì)象(包括人類)施用治療有效量的W上定義的脂質(zhì)納米 顆粒，與藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
[0029] 在此意義上，發(fā)明人進(jìn)行的研究已經(jīng)證明了所述脂質(zhì)納米顆粒，W及藥物組合物 和/或包括所述納米顆粒的藥物的下述能力：：
[0030] -獲得具有持續(xù)和/或受調(diào)節(jié)的釋放效果的抗生素的穩(wěn)定脂質(zhì)納米顆粒，
[0031] -保護(hù)抗生素免受過早降解，
[0032] -獲得適合施用于呼吸樹的顆粒大小，
[0033] -具有穿透由細(xì)菌自身產(chǎn)生的生物膜的能力，及
[0034] -獲得比游離的抗生素更好的安全性和功效。
[0035] 基于本發(fā)明的附圖和詳細(xì)描述，本發(fā)明運(yùn)些優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)和其他優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)更 加明顯。
【附圖說明】：
[0036] 圖1:顯示加載有抗生素的脂質(zhì)納米顆粒的圖形描述，其中脂質(zhì)部分包括室溫下為 固體的脂質(zhì)。
[0037] 圖2:顯示裝載有抗生素的脂質(zhì)納米顆粒的圖形描述，其中脂質(zhì)部分包括室溫下為 固體的脂質(zhì)和室溫下為液體的脂質(zhì)。
[0038] 圖3:顯示本發(fā)明的脂質(zhì)納米顆粒的實(shí)施方式的顯微圖像。
[0039] 圖4:顯示脂質(zhì)納米顆粒的抗生素經(jīng)時(shí)釋放曲線。
[0040] 圖5:顯示對(duì)CDl小鼠施用后，巧光微球的肺部分布圖像。
【具體實(shí)施方式】
[0041] 發(fā)明人開發(fā)的脂質(zhì)納米顆粒包含至少一種來自多粘菌素家族的抗生素、包含一種 或多種脂質(zhì)的脂質(zhì)部分和一種或多種表面活性劑，所述脂質(zhì)部分選自由甘油一醋和/或甘 油二醋和/或甘油=醋和/或脂肪酸和/或其混合物組成的組。
[0042] 在本發(fā)明的情況下，術(shù)語"脂質(zhì)納米顆粒"指包括脂質(zhì)和/或親脂核的母體 (ma化ix)，優(yōu)選為固體脂質(zhì)核，其可W包含含有液態(tài)脂質(zhì)的納米小室（nanocompadment)， 由包封裝核屯、的親水相包圍。
[0043] 包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的納米顆粒包括在室溫下的固體脂質(zhì)（也被稱為固體脂質(zhì) 納米顆粒），W及納米結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)載體，其包含室溫下為固體的脂質(zhì)和為液體的脂質(zhì)的混合 物。
[0044] 在【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明的納米顆粒的特征在于具有的平均大小為約IOnm~約 1 OOOnm，優(yōu)選為約1 OOnm~約500nm。
[0045] "平均大小"理解為本發(fā)明的脂質(zhì)納米顆粒群體的平均直徑。平均大小可W通過本 領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量并且例如描述于下述實(shí)施例部分。
[0046] 顆粒大小是決定抗生素持續(xù)釋放的因素之一。通常，位于納米顆粒表面的抗生素 是首先被釋放的。納米顆粒大小越小，其具有比相互作用表面越大，所W會(huì)有更大的初始抗 生素釋放。
[0047] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，納米顆粒具有表面電荷(根據(jù)Zeta電位測(cè)量），其量度可為 約-30mV~約-5mV，優(yōu)選為-30mV~-16mV。通常，表面電荷是影響脂質(zhì)納米顆粒穩(wěn)定性的參 數(shù)之一。它們帶負(fù)電或者正電的事實(shí)將會(huì)有利于納米顆粒之間的排斥力W預(yù)防結(jié)塊，表現(xiàn) 出更好的分散性質(zhì)。
[0048] 考慮到存在于由細(xì)菌自身產(chǎn)生的生物膜和/或存在在肺粘膜上的細(xì)菌膜的脂多糖 的正電荷，本發(fā)明的納米顆粒的表面負(fù)電荷有利于納米顆粒-細(xì)菌結(jié)合，優(yōu)化在作用部位的 納米顆粒的保留和粘附，有利于抗生素更好的持續(xù)和治療效果。
[0049] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的納米顆粒具有的多分散指數(shù)(polydispersity index，PDI)值等于或者小于0.5。所述指數(shù)提供一種關(guān)于存在于混合物中的納米顆粒大小 的多樣性的思路。它越接近于零，納米顆粒越均勻，其指示生產(chǎn)批次的均勻大小分布。
[0050] 納米顆粒的平均大小，Zeta電位和PDI值主要受脂質(zhì)成分的量、受表面活性劑的量 和受制備方法的參數(shù)影響，所述制備方法參數(shù)如攬拌的強(qiáng)度和類型，兩相的溫度或者混合 相的持續(xù)時(shí)間。
[0051] 脂質(zhì)部分
[0052] 在【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明的脂質(zhì)納米顆粒包含形成納米顆粒核的一部分的至少 一種室溫下為固體的脂質(zhì)作為脂質(zhì)部分。
[0053] 出于本發(fā)明的目的，室溫為20-25°C。然而，在本發(fā)明的背景下，"室溫下為固體的 脂質(zhì)"理解為脂質(zhì)在45°C下依然保持固體形式，可W是飽和的或不飽和的。該定義可W包 括，但不限于，甘油立醋(例如立硬脂酸甘油醋），和/或甘油一醋或甘油二醋(例如甘油一醋