本發(fā)明屬于微生物肥料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種防病促生的復(fù)合微生物菌肥及其制備方法。
背景技術(shù)：
：長期不合理地施用化肥、農(nóng)藥，造成資源浪費(fèi)和生產(chǎn)成本增加，環(huán)境嚴(yán)重污染，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量下降。國際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易的綠色壁壘只是農(nóng)產(chǎn)品出口難度增加，農(nóng)民面臨增產(chǎn)不增收的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。近年來，隨著環(huán)保與健康意識的提高，全國范圍內(nèi)掀起了“綠色食品”熱。同時，隨著對外貿(mào)易的迅速發(fā)展，國際市場對無污染食品的需求也與日俱增。一些發(fā)達(dá)國家為了保護(hù)自國的農(nóng)業(yè)，采取綠色貿(mào)易壁壘。即大量使用化肥和農(nóng)藥的農(nóng)產(chǎn)品被拒之門外。因此，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，具有重要經(jīng)濟(jì)效益，環(huán)境效益和社會效益的是開辟新的微生物藥肥以減少甚至不用化肥與農(nóng)藥，生產(chǎn)出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的農(nóng)產(chǎn)品，提高國際競爭力，促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展。微生物菌肥是一種環(huán)境友好型肥料，也是未來農(nóng)林業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要方向之一，能維持與提高土壤肥力，有利于微生物優(yōu)勢種的繁殖，保持生態(tài)平衡，減少環(huán)境污染，能源消耗低，運(yùn)輸量少，施用量少且使用方便等優(yōu)點(diǎn)。因此，微生物肥料越來越受人類青睞。目前國內(nèi)對于微生物肥料的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。但是，存在的主要問題也是制約微生物肥料發(fā)展的關(guān)鍵。主要有，一、品種單一，目前應(yīng)用較多的有固氮菌、解磷菌、解鉀菌等，很多微生物菌肥是單一菌種發(fā)酵，其應(yīng)用效果受到限制。二、菌肥中微生物含量低。這是制約微生物菌肥發(fā)展的關(guān)鍵因素。目前國內(nèi)生產(chǎn)水平在發(fā)酵液活菌總數(shù)1-5億個/mL左右，發(fā)酵液中活菌數(shù)低是導(dǎo)致生產(chǎn)菌肥中微生物含量不足的瓶頸。三、生產(chǎn)工藝落后。四、市場混亂，魚目混珠。等等。另外，作物連作在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中及其普遍，由此引起的土傳病害非常嚴(yán)重，在設(shè)施栽培中土傳病害尤為突出，而這些問題無法通過化肥或普通微生物肥料的施用加以克服。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為了彌補(bǔ)化肥和目前微生物肥料的上述不足，突破連作障礙，克服土傳病害問題，根據(jù)以菌治菌的原理選擇不同功效的優(yōu)良菌種的組合，研制出具有營養(yǎng)、抗生和促生等功能的微生物菌肥。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，制備該復(fù)合微生物菌肥的原料按重量份為：渾圓鏈霉菌粉20-60份，環(huán)狀芽孢桿菌Bacilluscirculans與崛越氏芽孢桿菌Bacillushorikoshii混合發(fā)酵菌粉20-60份，多孢木霉菌粉20-40份，巴氏梭菌菌粉20-40份，氨基酸原粉10-20份，黃腐酸鉀10-20份，棉粕粉10-20份；本發(fā)明選用了五個菌種組合。其中有的固氮，解磷，解鉀，可以促進(jìn)作物生長的菌株，也有分泌抗生素物質(zhì)來抑制土壤中病原菌生長的菌株。與普通的化學(xué)肥料和化學(xué)農(nóng)藥不同，微生物菌肥并不是直接給作物提供營養(yǎng)，而是利用微生物菌肥里含有的活微生物的生命活動來改善作物根際生態(tài)環(huán)境，轉(zhuǎn)化土壤中作物不可直接利用的營養(yǎng)元素為作物可利用的速效營養(yǎng)，菌株還可以分泌促生物質(zhì)來刺激作物生長。在治病方面，微生物菌肥采用以菌治菌的原理，利用拮抗菌株分泌的抗生物質(zhì)來抑制土壤中病原菌的生長，使病原菌在土壤中無法達(dá)到致病數(shù)量，從而無法侵染作物，使作物發(fā)病。經(jīng)過大規(guī)模田間試驗，結(jié)果表明該微生物菌肥在煙草，水稻、草莓和瓜類作物上，不但可以提高產(chǎn)量、改善品質(zhì)，還可以很好地防治農(nóng)作物的土傳病害，在設(shè)施農(nóng)業(yè)方面的功效更為顯著。為了達(dá)到上述目的，所述的一種復(fù)合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：、渾圓鏈霉菌粉的制備取出渾圓鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天，在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為渾圓鏈霉菌種子液；二級種子擴(kuò)培：將上述制備的渾圓鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌液體二級種子培養(yǎng)基上，500L的發(fā)酵罐裝液量為350L，通氣量為每分鐘液氣比為1：0.8，28-30℃培養(yǎng)36-48小時，待菌體含量達(dá)到80g/L時，即可作為渾圓鏈霉菌二級種子液；發(fā)酵：將上述制備的渾圓鏈霉菌二級種子液以20%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與渾圓鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過后空氣濕度保持為40%-50%，發(fā)酵4-6天，檢測其孢子含量不低于40億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到渾圓鏈霉菌菌粉；其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補(bǔ)足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的渾圓鏈霉菌二級液體種子培養(yǎng)基：棉粕粉2%，玉米粉2%，氯化鈉0.2%，碳酸鈣1%，硫酸鎂0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基：啤糟渣80%，棉粕5%，玉米粉1%，石粉6%，麩皮8%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉崛越氏芽孢桿菌種子液的制備取出崛越氏芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時，在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前10小時通氣量為200L/min，10小時后通氣量為320L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時，待總菌含量不低于20億cfu/ml，即可作為崛越氏芽孢桿菌種子液；環(huán)狀芽孢桿菌種子液的制備取出環(huán)狀芽孢桿菌保藏管，用無氮固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時，在平板下挑取單個菌落接種至裝有無氮固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前10小時通氣量為200L/min，10小時后通氣量為350L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時，待總菌含量不低于10億cfu/ml，即可作為環(huán)狀芽孢桿菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的崛越氏芽孢桿菌種子液與環(huán)狀芽孢桿菌種子液以1：3-1：1的比例混勻，然后以總接種量的10%-20%的接種量加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，在淺盤上發(fā)酵，堆料厚度為5-10cm，控制發(fā)酵溫度為30-40℃，發(fā)酵36-48小時，待芽孢含量不低于100億cfu/g，其中環(huán)狀芽孢桿菌的芽孢含量不低于40億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，即得到環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉；其中，所述無氮固體培養(yǎng)基：蔗糖5g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.1g，碳酸鈣5g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2；其中，所述液體種子培養(yǎng)基：糖蜜35g/L，豆粕粉20g/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，碳酸鈣5.0g/L，pH7.0；其中，所述的芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基：甘蔗渣57%，麩皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、多孢木霉菌粉的制備多孢木霉種子液的制備：取出多孢木霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)6天，在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為多孢木霉種子液；發(fā)酵：將上述制備的多孢木霉種子液以3%的接種量接種至滅菌的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與多孢木霉固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-10cm，控溫28-32℃，濕度保持為60%-75%，發(fā)酵4-6天，檢測其總孢子含量不低于30億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到多孢木霉菌粉；其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、巴氏梭菌菌粉的制備取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有999mLRCM培養(yǎng)基的厭氧瓶中，37℃條件下靜態(tài)厭氧活化64h，將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過菌的99L巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)64h~126h，芽孢含量超過30億CFU/ml，即可加入輕質(zhì)碳酸鈣，噴霧干燥，調(diào)節(jié)巴氏梭菌芽孢含量30億CFU/g，即為巴氏梭菌菌粉；其中，所述的RCM培養(yǎng)基：胰蛋白陳10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化鈉5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，醋酸鈉3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min，其中，所述的巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基：:酵母膏20g/L，牛肉膏10g/L，KH2PO42g/L硫酸鎂1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽1g/L，NaHCO31g/L，CaCO31g/L，葡萄糖20g/L，PH7.0，121℃滅菌20min。、將上述步驟中的渾圓鏈霉菌粉20-60份，環(huán)狀芽孢桿菌Bacilluscirculans與崛越氏芽孢桿菌Bacillushorikoshii混合發(fā)酵菌粉20-60份，多孢木霉菌粉20-40份，巴氏梭菌菌粉20-40份，氨基酸原粉10-20份，黃腐酸鉀10-20份，棉粕粉10-20份混勻，檢測總菌含量不低于30億CFU/g，包裝即為復(fù)合微生物菌肥。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有渾圓鏈霉菌，能產(chǎn)生灰霉素與白霉素的復(fù)合物等抗菌素，對植物病原菌有特別強(qiáng)大的抑制效果。鏈霉菌是產(chǎn)生抗生素的主要微生物來源。鏈霉菌的抗生作用體現(xiàn)在次級代謝產(chǎn)物即抗生素對病原菌直接的抑制和致死作用。抗生素對病原菌細(xì)胞和大分子物質(zhì)合成的影響表現(xiàn)在抑制蛋白質(zhì)、核酸和質(zhì)膜的合成，或者干擾病原菌的代謝系統(tǒng)，從而抑制其生長。并且，渾圓鏈霉菌能產(chǎn)生磷酸酶，增溶土壤中的P元素，更好地促進(jìn)植物吸收。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌；芽孢桿菌是一種較理想的生物肥料添加菌株，具有抗逆性強(qiáng)、營養(yǎng)簡單、繁殖速度快，有效活菌數(shù)量高、性能穩(wěn)定，儲存期長等優(yōu)勢而成為近年來的研究熱點(diǎn)。此外，多數(shù)菌種具有防病、促生、解磷、解鉀、固氮作用，對于發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)，具有重要的現(xiàn)實意義。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有的環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌，可在作物表面、植株內(nèi)部或土壤中繁殖生長的同時必定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長和抑制病菌等綜合功能。崛越氏芽孢桿菌能夠防治植物病害源于其能夠產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，包括脂肽類、肽類、磷脂類、多烯類、氨基酸類和核酸類等多種化合物,這些抗菌物質(zhì)能抑制真菌、細(xì)菌、病毒和菌原體等的正常生長。崛越氏芽孢桿菌在自然生長和發(fā)酵培養(yǎng)后期產(chǎn)生的脂肽類抗生素是其最重要的抗菌物質(zhì)。脂肽類抗生素包括伊枯草菌素(iturins)、泛革素(fengycins)和表面活性素(surfactin),其中伊枯草菌素和泛革素具有很強(qiáng)的抗真菌活性，而表面活性素對病毒、腫瘤、支原體都有很高的抑制活性。長期以來，根瘤菌和自生固氮菌等雖具有較強(qiáng)的固氮能力，但抗逆性低，不耐貯存，不利于我國生物固氮菌肥的商品化和推廣使用。自1958年Hin首次在口本分離得到一株具有高固氮活性的芽抱桿菌后，土壤中新發(fā)現(xiàn)的具有固氮作用的芽抱桿菌越來越多。具有固氮作用的芽孢桿菌添加到生物肥料中，可使生物肥料耐酸、耐鹽、耐高溫和耐高壓，為生物固氮肥料的研發(fā)、推廣和應(yīng)用將起著重要作用。本發(fā)明中的環(huán)狀芽孢桿菌具有較強(qiáng)的固氮作用，并且具有明顯的根跡促生作用。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有兩類固氮菌，一類為好氧性的固氮菌--環(huán)狀芽孢桿菌，其能夠快速固定分子氮，為植物利用。另一類厭氧固氮菌—巴氏梭菌，也具有較強(qiáng)的固氮能力，能在土壤較深層的土壤中進(jìn)行固氮（10-30cm）。環(huán)狀芽孢桿菌在發(fā)酵過程中會產(chǎn)生大量的多糖物質(zhì)以及巴氏梭菌會產(chǎn)生大量的酸性物質(zhì)，其會降解土壤中固定的磷素與鉀素原素；增加土壤中可溶性磷與鉀，減少磷鉀肥的施入。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有多孢木霉，多孢木霉在重寄生過程中產(chǎn)生立了一系列病原菌菌絲細(xì)胞壁的水解酶。木霉菌在侵入或穿透寄主菌絲細(xì)胞時，產(chǎn)生了幾丁質(zhì)酶(chitinases)、葡聚糖酶、纖維素酶(cellulases)、木聚糖酶(xylanaes)以及蛋白酶((proteinases)、脂酶等一系列水解酶類，來消解病原菌的細(xì)胞壁。它們大都由多糖和真菌細(xì)胞壁誘導(dǎo)，并受代謝降解物，如高濃度葡萄糖的阻遏。在這些細(xì)胞壁降解酶中，幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶被公認(rèn)為是影響生防真菌重寄生能力的重要因子，并具有協(xié)同作用。幾丁質(zhì)酶包括內(nèi)切酶和外切酶兩類，其中外切酶為N一乙酰-氨基葡萄糖普酶(N-acetylglucosaminidase)和幾丁二糖酶(chitobiosidase)。這兩類酶對植物病原真菌的細(xì)胞壁有強(qiáng)烈的水解作用，從而抑制病原菌孢子萌發(fā)并引起菌絲以及抱子的消解，而且這兩類酶之問具有協(xié)同作用，同時也具有與殺菌劑及細(xì)菌等生防因子協(xié)同作用的功效。許多木霉菌株產(chǎn)生揮發(fā)性或非揮發(fā)性的抗菌素類物質(zhì)，如木霉素(trichoderlnin)、膠霉素(gliotoxin)、綠木霉素(viridin)、抗菌肽((peptideantibiotic)等。多孢木霉可產(chǎn)生的多種抗生物質(zhì)，這些物質(zhì)包括抗生素和一些酶類。這些抗生物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)各不相同，包括了戊酮、辛酮、類菇、多膚和氨基酸衍生物等幾大類。這些代謝物可以破壞菌絲細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外滲，引起立枯絲核菌菌絲的原生質(zhì)凝聚，菌絲斷裂解體，對病原菌菌落有不同程度的抑制作用，由于抗生物質(zhì)的種類，化學(xué)性質(zhì)以及作用方式的差異，病原菌往往難以發(fā)展抗藥性。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明中的渾圓鏈霉菌，環(huán)狀芽孢桿菌，崛越氏芽孢桿菌，多孢木霉，巴氏梭菌，五種菌是從500多株微生物菌株中篩選得到的能共生共存，能在植株的根，莖，葉以及土壤中能夠生長繁殖，能產(chǎn)生多種抗菌素如灰霉素與白霉素的復(fù)合物等來抑制植物病原菌；本發(fā)明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內(nèi)的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，以及通過次級代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性，增強(qiáng)其防病效果；再次，本發(fā)明中所使用的這5株菌株都是可從土壤中直接分離得到，具有固氮，解磷，解鉀與根跡促生作用，可在作物表面、植株內(nèi)部或土壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長起到肥料的效果；本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥對人、畜安全，屬于環(huán)境友好型，利用本發(fā)明方法防治植物病害不易產(chǎn)生抗藥性，本發(fā)明制備方法穩(wěn)定、成本低、使用簡單。本菌肥中的固氮菌環(huán)狀芽孢桿菌與巴氏梭菌—能自動固定空氣中的氮?dú)?，轉(zhuǎn)化為農(nóng)作物必需的氮肥。同時它們通過產(chǎn)酸與多糖物質(zhì)能將大量沉積于土壤中的不可溶性磷鉀,分解成農(nóng)作物可以再吸收利用的磷肥和鉀肥。渾圓鏈霉菌與多孢木霉菌抗病菌可使病菌受到抑制,可減少病害的發(fā)生；還可利用微生物,削減、凈化土壤中重金屬或降低重金屬毒性,并且微生物肥料施入土壤后使有益微生物增加,有害微生物明顯減少。下面結(jié)合試驗說明本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥的田間效果。（下面簡稱菌肥）一、復(fù)合微生物菌肥在煙草上的應(yīng)用效果1．試驗地點(diǎn)：湖南省隆回縣灘頭鎮(zhèn)龍竹村某農(nóng)戶種植地；試驗時間：2015年3-8月。2．試驗方法：烤煙品種：中煙99-10-1，烤煙移栽苗時，用菌肥500倍稀釋液灌根一次；緩苗后20天用菌肥250倍液噴施第一次，然后連續(xù)每隔20天噴施第二次和第三次（總共每畝用菌肥4公斤）。對照區(qū)在每次用菌肥250倍液噴施的同時，用同樣用量的清水噴灑。3．試驗結(jié)果：施用復(fù)合微生物菌肥后，株高、莖圍、節(jié)距、有效葉數(shù)、最大葉面積均大于噴施清水的對照，說明可以有效改善煙株的農(nóng)藝性狀，促進(jìn)煙株健壯生長。施用的煙株發(fā)病率和發(fā)病程度顯著降低，可以有效提高煙株的抗病性，特別對花葉病有很好的控制效果；從表1可以看出，根據(jù)田間調(diào)查的主要病害發(fā)生情況，黑脛病的發(fā)病率和病情指數(shù)明顯降低；青枯病在處理區(qū)上沒有發(fā)現(xiàn)，在對照上僅有少量發(fā)生；花葉病發(fā)病率和病情指數(shù)處理區(qū)非常的低，僅為5.3%和1.1，達(dá)到極顯著的控制效果。表1復(fù)合微生物菌肥對煙草病防治效果施用復(fù)合微生物菌肥后煙草提早成熟、提高品質(zhì)，很大程度上提高煙葉的產(chǎn)量、均價、產(chǎn)值、上中等煙比例。從表可以分析得出，試驗示范區(qū)煙葉產(chǎn)量、產(chǎn)值、均價分別比對照區(qū)域高出58.1公斤/畝、1923.1元/畝、4.18元/公斤。減去增加的成本430元（其中人工310元），可凈增1493.1元/畝。表2復(fù)合微生物菌肥對煙草產(chǎn)量產(chǎn)值增收效果。處理產(chǎn)量（公斤/畝）產(chǎn)值（元/畝）均價（元/公斤）對照區(qū)208.22902.313.94處理區(qū)266.34825.418.12二、復(fù)合微生物菌肥在水稻上的試驗效果1．試驗地點(diǎn)：湖南省隆回縣灘頭鎮(zhèn)龍竹村某農(nóng)戶良田2．試驗方法：⑴．用100倍復(fù)合微生物菌肥稀釋液浸種6-8小時；⑵．在秧苗期、分蘗期、孕穗期分別用1kg/畝的復(fù)合微生物菌肥施入水田中；3．試驗結(jié)果：⑴.對水稻發(fā)芽率的影響效果最好.能促進(jìn)種子發(fā)芽、生根、提高發(fā)芽勢和發(fā)芽率，發(fā)芽勢增幅在10.78%，發(fā)芽率增幅為8.2%，發(fā)芽快而整齊，根系發(fā)達(dá)，粗白根多，成秧率高；⑵.對水稻育秧和大田生長發(fā)育、提高單產(chǎn)均有明顯效果，尤其對提高秧苗素質(zhì)，高成活秧，提高千粒重等有顯著作用。小區(qū)試驗隨著施用時期不同，每畝可增產(chǎn)稻谷88千克，增產(chǎn)幅度為15%，增加收益176元，扣除成本90元，畝凈增收益86元；⑶．提高水稻的抗旱、抗病、抗倒伏等抗逆性，對各種土傳病害與細(xì)菌性病害，尤其對稻瘟病、紋枯病、立枯病等病害的發(fā)生有較強(qiáng)的抑制和預(yù)防的作用。三、復(fù)合微生物菌肥在草莓上試驗效果1．試驗地點(diǎn)：湖南省隆回縣桃洪鎮(zhèn)某種植戶2．試驗方法：在定植期，將苗栽好，用菌肥500倍稀釋液灌根1次，在草莓生長期間，葉面噴施1：250倍菌肥，10d（天）1次，連噴3次；3．試驗結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提前開花結(jié)果，果實大而飽滿，結(jié)果數(shù)多，異形果少，口感好，著色鮮亮，草莓（豐香）的單株產(chǎn)量平均為127．26g，較對照（不噴菌肥）提高28．17％而且噴用菌肥后草莓果實的可溶性固形物含量達(dá)10.22％，較對照相對高14.2％，同時，施用菌肥后，酸含量降低，Vc含量提高，果實的風(fēng)味和品質(zhì)得到明顯改善，并且耐儲存，比不使用菌肥的草莓多儲存10天以上，草莓根部肥壯，消滅了草莓的白粉病和根腐病。使用菌肥的地塊比對照區(qū)提高產(chǎn)量28%，糖度比對照區(qū)提高2-3度。四、復(fù)合微生物菌肥在西紅柿的應(yīng)用效果1．試驗時間：2011年6月-9月2．試驗地點(diǎn)：河北省滄縣杜林鄉(xiāng)某種植戶3．試驗方法：在移植前將幼苗用200倍菌肥稀釋液沾根30分種，在定植后10天后，用菌肥500倍稀釋液灌根1次，在西紅柿生長期間，葉面噴施1：250倍菌肥，20天1次，連噴3次；4．試驗結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提前開花結(jié)果，果實大而飽滿，結(jié)果數(shù)多，異形果少，口感好，著色鮮亮，西紅柿平均株高較對照（不噴菌肥）提高11％，產(chǎn)量比對照增高23%，相比對照，可以有效地預(yù)防由缺鈣引起的西紅柿果實臍腐病。具體實施方式實施例1一種復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，制備該復(fù)合微生物菌肥的原料按重量份為：渾圓鏈霉菌粉40份，環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉40份，多孢木霉菌粉30份，巴氏梭菌菌粉30份，氨基酸原粉15份，黃腐酸鉀15份，棉粕粉15份；為了達(dá)到上述目的，該復(fù)合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：、渾圓鏈霉菌粉的制備取出渾圓鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為渾圓鏈霉菌一級種子液；二級種子擴(kuò)培：將上述制備的渾圓鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌液體二級種子培養(yǎng)基上，500L的發(fā)酵罐裝液量為350L，通氣量為每分鐘液氣比為1：0.8，28-30℃培養(yǎng)36-48小時，待菌體含量達(dá)到80g/L時，即可作為渾圓鏈霉菌二級種子液；發(fā)酵：將上述制備的渾圓鏈霉菌二級種子液以20%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與渾圓鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過后空氣濕度保持為40%-50%，發(fā)酵5天，檢測其孢子含量為48億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到渾圓鏈霉菌菌粉；其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補(bǔ)足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的渾圓鏈霉菌二級液體種子培養(yǎng)基：棉粕粉2%，玉米粉2%，氯化鈉0.2%，碳酸鈣1%，硫酸鎂0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基：啤糟渣80%，棉粕5%，玉米粉1%，石粉6%，麩皮8%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉崛越氏芽孢桿菌種子液的制備取出崛越氏芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前10小時通氣量為200L/min，10小時后通氣量為320L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時，待總菌含量不低于20億cfu/ml，即可作為崛越氏芽孢桿菌種子液；環(huán)狀芽孢桿菌種子液的制備取出環(huán)狀芽孢桿菌保藏管，用無氮固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有無氮固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前10小時通氣量為200L/min，10小時后通氣量為350L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時，待總菌含量不低于10億cfu/ml，即可作為環(huán)狀芽孢桿菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的崛越氏芽孢桿菌種子液與環(huán)狀芽孢桿菌種子液以1：2的比例混勻，然后以總接種量的15%的接種量加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，在淺盤上發(fā)酵，堆料厚度為5-10cm，控制發(fā)酵溫度為30-40℃，發(fā)酵44小時，檢測芽孢含量為115億cfu/g，其中環(huán)狀芽孢桿菌的芽孢含量為48億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，即得到環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉；其中，所述無氮固體培養(yǎng)基：蔗糖5g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.1g，碳酸鈣5g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2；其中，所述液體種子培養(yǎng)基：糖蜜35g/L，豆粕粉20g/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，碳酸鈣5.0g/L，pH7.0，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；其中，芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基：甘蔗渣57%，麩皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、多孢木霉菌粉的制備多孢木霉種子液的制備：取出多孢木霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)6天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為多孢木霉種子液；發(fā)酵：將上述制備的多孢木霉種子液以3%的接種量接種至滅菌的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與多孢木霉固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-10cm，控溫28-32℃，濕度保持為60%-75%，發(fā)酵5天，檢測其總孢子含量為44億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到多孢木霉菌粉；其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、巴氏梭菌菌粉的制備取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有999mLRCM培養(yǎng)基的厭氧瓶中，37℃條件下靜態(tài)厭氧活化64h。將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過菌的99L巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基中。37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)116h，檢測其芽孢含為40億CFU/ml，即可加入輕質(zhì)碳酸鈣，噴霧干燥，調(diào)節(jié)巴氏梭菌芽孢含量35億CFU/g，即為巴氏梭菌菌粉；其中，所述的RCM培養(yǎng)基：胰蛋白陳10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化鈉5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，醋酸鈉3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min，其中，所述的巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基：:酵母膏20g/L，牛肉膏10g/L，KH2PO42g/L硫酸鎂1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽1g/L，NaHCO31g/L，CaCO31g/L，葡萄糖20g/L，PH7.0，121℃滅菌20min。、將上述步驟中的渾圓鏈霉菌粉40份，環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉40份，多孢木霉菌粉30份，巴氏梭菌菌粉30份，氨基酸原粉15份，黃腐酸鉀15份，棉粕粉15份混勻，檢測其總菌含量為45億CFU/g，包裝即為復(fù)合微生物菌肥。根據(jù)上述說明書的揭示和教導(dǎo)，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員還可以對上述實施方式進(jìn)行變更和修改。因此，本發(fā)明并不局限于上面揭示和描述的具體實施方式，對本發(fā)明的一些修改和變更也應(yīng)當(dāng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。此外，盡管本說明書中使用了一些特定的術(shù)語，但這些術(shù)語只是為了方便說明，并不對本發(fā)明構(gòu)成任何限制。當(dāng)前第1頁1 2 3