本發(fā)明涉及化合物，其抑制zeste增強(qiáng)子同源物2(ezh2)并且因此用于在癌細(xì)胞中抑制增殖和/或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

背景技術(shù)：

表觀遺傳修飾在許多細(xì)胞過(guò)程(包括細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞存活)的調(diào)節(jié)中起著重要作用?？傮w表觀遺傳修飾在癌癥中是常見(jiàn)的，且包括導(dǎo)致致癌基因、腫瘤抑制基因和信號(hào)通路的異?；罨蚴Щ畹膁na和/或組蛋白甲基化的總體變化、非編碼rna的失調(diào)以及核小體重構(gòu)。但是，不像癌癥中出現(xiàn)的基因突變，這些表觀遺傳變化可通過(guò)選擇性抑制所參與的酶而被逆轉(zhuǎn)。已知參與組蛋白或dna甲基化的多個(gè)甲基化酶在癌癥中失調(diào)。因此，特定甲基化酶的選擇性抑制劑將有用于治療增殖性疾病，例如癌癥。

ezh2(人ezh2基因：cardoso，c，等人；europeanjofhumangenetics，第8卷，第3期，174-180頁(yè)，2000)為多梳抑制復(fù)合物2(polycombrepressorcomplex2，prc2)的催化亞單位，其功能是通過(guò)將組蛋白h3的賴(lài)氨酸27三甲基化(h3k27me3)來(lái)使靶基因沉默。組蛋白h3是參與真核細(xì)胞染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的五種主要組蛋白之一。以主要球狀結(jié)構(gòu)域和長(zhǎng)的n末端尾為特征的組蛋白涉及核小體結(jié)構(gòu)，即'串珠'結(jié)構(gòu)。雖然組蛋白被高度地翻譯后修飾，但組蛋白h3是五種組蛋白中被最廣泛修飾的。單獨(dú)的術(shù)語(yǔ)“組蛋白h3”是有意模糊的，因?yàn)樗鼪](méi)有區(qū)分序列變體或修飾狀態(tài)。組蛋白h3是表觀遺傳學(xué)(epigenetics)新領(lǐng)域中的重要蛋白，其中其序列變體和可變的修飾狀態(tài)被認(rèn)為在基因的動(dòng)力學(xué)和長(zhǎng)期調(diào)節(jié)中發(fā)揮著作用。

已經(jīng)在許多實(shí)體瘤(包括前列腺、乳腺、皮膚、膀胱、肝、胰腺、頭和頸的腫瘤)中觀測(cè)到了增加的ezh2表達(dá)并且所述增加的ezh2表達(dá)與癌癥進(jìn)攻性、轉(zhuǎn)移性和不良預(yù)后有關(guān)(varambally等人，2002；kleer等人，2003；breuer等人，2004；bachmann等人，2005；weikert等人，2005；sudo等人，2005；bachmann等人，2006)。例如，在具有高ezh2水平的乳腺癌患者中，存在在前列腺切除術(shù)后表達(dá)高水平ezh2的腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移增加、無(wú)疾病生存期縮短和死亡增加的風(fēng)險(xiǎn)(varambally等人，2002；kleer等人，2003)。最近，在utx(ubiquitouslytranscribedtetratricopeptiderepeatsx，泛轉(zhuǎn)錄的三十四肽重復(fù)x)(即h3k27去甲基化酶，其與ezh2的功能相反)中的失活突變已經(jīng)在多個(gè)實(shí)體瘤和血液腫瘤類(lèi)型(包括腎腫瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、食管腫瘤、乳腺腫瘤、結(jié)腸腫瘤、非小細(xì)胞肺腫瘤、小細(xì)胞肺腫瘤、膀胱腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤和慢性髓樣白血病腫瘤)中得以證實(shí)，且低utx水平與乳腺癌中低存活有關(guān)，意味著utx功能的喪失導(dǎo)致h3k27me3的增加和靶基因的抑制(wang等人，2010)。總而言之，這些數(shù)據(jù)表明，在許多腫瘤類(lèi)型中，增加的h3k27me3水平導(dǎo)致癌癥的惡化，并且ezh2活性的抑制可提供治療益處。

許多研究報(bào)道，通過(guò)sirna或shrna直接敲除ezh2或通過(guò)sah水解酶抑制劑3-去氮腺嘌呤a(deazaneplanocina，dznep)的治療間接消耗ezh2均降低癌細(xì)胞系在體外的增殖與侵入并降低體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)(gonzalez等人，2008，gbm2009)。雖然不知道異常ezh2活性導(dǎo)致癌癥進(jìn)展的確切機(jī)理，但是許多ezh2靶基因是腫瘤抑制劑，意味著腫瘤抑制劑功能的喪失是關(guān)鍵機(jī)理。此外，ezh2在永生化或原代上皮細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)促進(jìn)無(wú)貼壁依賴(lài)性生長(zhǎng)和侵入且需要ezh2催化活性(kleer等人，2003；cao等人，2008)。

因此，有力的證據(jù)顯示，ezh2活性的抑制降低了細(xì)胞增殖和侵入。因此，抑制ezh2活性的化合物將可用于治療癌癥。

發(fā)明概述

本發(fā)明涉及式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中：

x和y各自獨(dú)立地為ch、c或n；其中

當(dāng)x為n，y為ch時(shí)，為單鍵；

當(dāng)y為n，x為ch時(shí)，為單鍵；

當(dāng)x和y各為ch時(shí)，為單鍵；和

當(dāng)x為c，y為c時(shí)，為雙鍵；

z為ch或n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為(c1-c4)烷基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為(c1-c3)烷基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基、嘧啶基、噁唑基甲基、和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

條件是所述化合物不是n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-((4-(二甲基氨基)環(huán)己基)(乙基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺、5-((4-(二甲基氨基)環(huán)己基)(乙基)氨基)-4-甲基-n-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)噻吩-3-甲酰胺、n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺、n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺、n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)環(huán)己基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(4-(乙基(甲基)氨基)環(huán)己基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或各個(gè)這些化合物的立體異構(gòu)體或其混合物。

本發(fā)明的另一方面涉及在實(shí)體瘤的癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；治療實(shí)體腫瘤的方法。

本發(fā)明的另一方面涉及包含式(i)化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物制劑。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，在制備用于治療由ezh2介導(dǎo)的病癥(例如通過(guò)誘導(dǎo)癌細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡)的藥物中的用途。

在另一方面，本發(fā)明提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療由ezh2介導(dǎo)的疾病中的用途。本發(fā)明還提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性治療物質(zhì)在治療由ezh2介導(dǎo)的疾病中的用途。

在另一方面，本發(fā)明提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療由ezh2介導(dǎo)的病癥。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療細(xì)胞增殖疾病。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于治療癌癥，包括治療實(shí)體瘤，例如腦癌(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、白血病、淋巴瘤、bannayan-zonana綜合征、考登病、lhermitte-duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威爾姆斯腫瘤、尤因肉瘤、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、腎臟癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨細(xì)胞腫瘤和甲狀腺癌。

在另一方面，提供了共同給藥本發(fā)明的式(i)化合物與其他活性成分的方法。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種抗腫瘤藥的組合，其用于治療由ezh2介導(dǎo)的病癥。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種抗腫瘤藥的組合，其用于治療細(xì)胞增殖疾病。

在另一方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種抗腫瘤藥的組合，其用于治療癌癥，包括治療實(shí)體瘤，例如腦癌(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、白血病、淋巴瘤、bannayan-zonana綜合征、考登病、lhermitte-duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威爾姆斯腫瘤、尤因肉瘤、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、腎臟癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨細(xì)胞腫瘤和甲狀腺癌。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及如上定義的式(i)化合物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中x和y各自獨(dú)立地為ch或n，其中x和y中至少一個(gè)為ch，和為單鍵。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中x為n，y為ch，和為單鍵。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中y為n，x為ch，和為單鍵。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中x和y各為ch，和為單鍵。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中x和y各為c，和為雙鍵。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中x為ch或c和y為ch，c或n，其中當(dāng)y為n，x為ch時(shí)，為單鍵，當(dāng)x和y各為ch時(shí)，為單鍵，且當(dāng)x為c，y為c時(shí)，為雙鍵。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中z為ch。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中z為n。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r¹和r²各為甲基。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r³和r⁴各為氫。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁵為甲基。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁶為乙基。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為鹵代(c1-c4)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為-n((c1-c4)烷基)2。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為二甲基氨基。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為羥基。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中z為n，和r⁷為-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中z為n，和r⁷為-c(＝n-cn)nhch3。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷選自：2-氟丙基、2-氟-2-甲基丙基、2,2-二氟乙基、2,2-二氟丙基、2,2,2-三氟乙基、羥基、二甲基氨基、嘧啶-2-基、噁唑-2-基甲基和-c(＝n-cn)nhch3。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷選自：2-氟-2-甲基丙基、2,2-二氟丙基、2,2,2-三氟乙基、羥基、二甲基氨基、嘧啶-2-基和噁唑-2-基甲基。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷選自：2-氟-2-甲基丙基、2,2-二氟丙基和2,2,2-三氟乙基。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為2-氟-2-甲基丙基。還在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中r⁷為2,2-二氟丙基。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中當(dāng)r⁷為-n((c1-c4)烷基)2時(shí)，以下條件中至少一個(gè)必須滿足：

(i)z為n；

(ii)r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；或

(iii)x和y各為c，和為雙鍵。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中當(dāng)r⁷為-n((c1-c4)烷基)2時(shí)，z為n。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中當(dāng)r⁷為-n((c1-c4)烷基)2時(shí)，r³和r⁴一起表示-ch2ch2-。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)化合物，其中當(dāng)r⁷為-n((c1-c4)烷基)2時(shí)，x和y各為c，和為雙鍵。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及式(ia)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中z、r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶和r⁷根據(jù)式(i)定義，條件是所述化合物不是n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-((4-(二甲基氨基)環(huán)己基)(乙基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺、5-((4-(二甲基氨基)環(huán)己基)(乙基)氨基)-4-甲基-n-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)噻吩-3-甲酰胺或n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(4-(乙基(甲基)氨基)環(huán)己基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或各個(gè)這些化合物的立體異構(gòu)體或其混合物。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ia)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ia)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ia)化合物，其中：

z為ch或n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及式(ib)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中z、r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶和r⁷根據(jù)式(i)定義，條件是所述化合物不為n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或這些化合物的立體異構(gòu)體或其混合物。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib)化合物，其中：

z為ch或n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib)化合物，其中：

z為ch；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷為-n((c1-c4)烷基)2；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及式(ib2)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中z、r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶和r⁷根據(jù)式(i)定義，條件是所述化合物不為n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或這些化合物的立體異構(gòu)體或其混合物。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib2)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib2)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib2)化合物，其中：

z為ch或n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ib2)化合物，其中：

z為ch；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷為-n((c1-c4)烷基)2；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及式(ic)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中z、r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶和r⁷根據(jù)式(i)定義，條件是所述化合物不為n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)環(huán)己基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或其立體異構(gòu)體或混合物。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ic)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ic)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及式(ic2)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中z、r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶和r⁷根據(jù)式(i)定義，條件是所述化合物不為n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-(二甲基氨基)環(huán)己基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺或其立體異構(gòu)體或混合物。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ic2)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(ic2)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及式(id)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中z、r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶和r⁷根據(jù)式(i)定義。

在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(id)化合物，其中：

z為n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

或r³和r⁴一起表示-ch2ch2-；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2、羥基和-c(＝n-cn)nh(c1-c4)烷基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(id)化合物，其中：

z為ch或n；

r¹和r²各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或正丁基；

r³和r⁴各為氫；

r⁵和r⁶各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基或異丙基；和

r⁷選自：鹵代(c1-c4)烷基、-n((c1-c4)烷基)2和羥基；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明的具體化合物包括：

5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺；

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

(s)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-羥基哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)丙基)噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(噁唑-2-基甲基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺；

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(嘧啶-2-基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺；

5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

2-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮；

5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮；

n'-氰基-4-(1-(5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)-n-甲基哌啶-1-甲脒；

5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；和

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

典型地，但不是絕對(duì)地，本發(fā)明的鹽是藥學(xué)上可接受的鹽。含有堿性胺官能團(tuán)或其他堿性官能團(tuán)的所公開(kāi)的化合物的鹽可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備，包括用無(wú)機(jī)酸處理游離堿，所述無(wú)機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或用有機(jī)酸處理游離堿，所述有機(jī)酸諸如乙酸、三氟乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖基酸諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羥基酸諸如檸檬酸或酒石酸、氨基酸諸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸諸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸諸如對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽(propiolate)、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、扁桃酸鹽和磺酸鹽諸如二甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1磺酸鹽和萘-2磺酸鹽。

含有羧酸官能團(tuán)或其他酸性官能團(tuán)的所公開(kāi)的化合物的鹽可通過(guò)與合適的堿反應(yīng)制備。所述藥學(xué)上可接受的鹽可用提供藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子的堿制得，所述鹽包括堿金屬鹽(尤其是鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(尤其是鈣鹽和鎂鹽)、鋁鹽和銨鹽，以及所述藥學(xué)上可接受的鹽可從生理學(xué)可接受的有機(jī)堿制得，所述有機(jī)堿諸如三甲基胺、三乙基胺、嗎啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二環(huán)己基胺、n,n’-二芐基乙二胺、2-羥基乙基胺、雙-(2-羥基乙基)胺、三-(2-羥基乙基)胺、普魯卡因、二芐基哌啶、去氫樅胺(dehydroabietylamine)、n,n’-去氫樅胺、二葡萄糖胺、n-甲基葡萄糖胺、三甲基吡啶、奎寧、喹啉，和堿性氨基酸諸如賴(lài)氨酸和精氨酸。

不是藥學(xué)上可接受的其他鹽可用于制備本發(fā)明化合物，并且這些應(yīng)被視為本發(fā)明的另一方面。這些鹽諸如草酸鹽或三氟乙酸鹽，盡管它們本身不是藥學(xué)上可接受的，但是可用于制備在獲得本發(fā)明化合物和它們的藥學(xué)上可接受的鹽時(shí)用作中間體的鹽。

式(i)化合物或其鹽可按立體異構(gòu)形式存在(例如，其含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)碳原子)。單獨(dú)的立體異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體)和這些異構(gòu)體的混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。同樣地，應(yīng)理解式(i)的化合物或鹽可按不同于該式中所示的互變異構(gòu)形式存在，并且這些也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。應(yīng)理解，本發(fā)明包括上文定義的具體組的所有組合和亞類(lèi)。本發(fā)明的范圍包括立體異構(gòu)體的混合物以及純化的對(duì)映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體/非對(duì)映異構(gòu)體富集的混合物。應(yīng)理解，本發(fā)明包括上文定義的具體組的所有組合和亞類(lèi)。

本發(fā)明還包括同位素標(biāo)記的化合物，其除以下事實(shí)外與式(i)所述的那些化合物相同：一個(gè)或多個(gè)原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于天然常見(jiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子代替?？梢氡景l(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，諸如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹⁵n、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i和¹²⁵i。

含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本發(fā)明的化合物和所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽在本發(fā)明范圍內(nèi)。同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物，例如引入了放射性同位素諸如³h或¹⁴c的那些化合物，用于藥物和/或底物組織分布測(cè)定。氚代的即³h和碳-14即¹⁴c同位素由于其易于制備及可檢測(cè)性而是特別優(yōu)選的。¹¹c和¹⁸f同位素特別用于pet(正電子發(fā)射斷層掃描術(shù))，以及¹²⁵i同位素特別用于spect(單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描)，所有這些都用于腦成像。此外，用較重的同位素諸如氘即²h取代可提供某些導(dǎo)致更大的代謝穩(wěn)定性的治療益處，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量需求減小，由此在一些情況中是優(yōu)選的。通?？赏ㄟ^(guò)進(jìn)行下文的方案和/或?qū)嵤├信兜牟僮鳎ㄟ^(guò)用容易獲得的同位素標(biāo)記的試劑代替非同位素標(biāo)記的試劑來(lái)制備同位素標(biāo)記的式(i)化合物和本發(fā)明的以下化合物。

本發(fā)明還提供了藥物組合物(也稱(chēng)為藥物制劑)，其包含式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一或多種賦形劑(在制藥領(lǐng)域也稱(chēng)為載體和/或稀釋劑)。所述賦形劑在與該制劑的其他成分相容且對(duì)其接受者(即，患者)無(wú)毒方面是可接受的。

合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑將根據(jù)所選具體的劑型而變化。此外，可根據(jù)在組合物中所起的具體功能來(lái)選擇合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。例如，可根據(jù)促進(jìn)制備均一劑型的能力來(lái)選擇某些藥學(xué)上可接受的賦形劑?？筛鶕?jù)促進(jìn)制備穩(wěn)定的劑型的能力來(lái)選擇某些藥學(xué)上可接受的賦形劑?？筛鶕?jù)在給藥至患者后促進(jìn)本發(fā)明化合物從身體的一個(gè)器官或部分?jǐn)y帶或運(yùn)輸至身體的另一器官或部分的能力來(lái)選擇某些藥學(xué)上可接受的賦形劑。某些藥學(xué)上可接受的賦形劑可根據(jù)其提高患者順應(yīng)性的能力進(jìn)行選擇。

合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑包括下列賦形劑類(lèi)型：稀釋劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、粒化劑、包衣劑、潤(rùn)濕劑、溶劑、共溶劑、助懸劑、乳化劑、增甜劑、矯味劑、掩味劑、著色劑、防結(jié)塊劑、保濕劑、螯合劑、增塑劑、增粘劑、抗氧化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和緩沖劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，某些藥學(xué)上可接受的賦形劑可以以多于一種功能和以替代性功能來(lái)使用，取決于所述賦形劑在制劑中存在多少和在制劑中存在何種其它成分。

具有本領(lǐng)域的知識(shí)和技術(shù)的技術(shù)人員能夠選擇出以適當(dāng)量用于本發(fā)明的合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。此外，有許多本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的資源，這些資源描述了藥學(xué)上可接受的賦形劑且其可用于選擇合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。實(shí)例包括remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)，thehandbookofpharmaceuticaladditives(gowerpublishinglimited)，和thehandbookofpharmaceuticalexcipients(theamericanpharmaceuticalassociationandthepharmaceuticalpress)。

本發(fā)明的藥物組合物使用本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員已知的技術(shù)和方法制備。通常用于本領(lǐng)域的一些方法描述在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)中。

藥物組合物可為每個(gè)劑量單位含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式。所述單位可含有治療有效劑量的式(i)化合物或其鹽，或一定比例的治療有效劑量的式(i)化合物或其鹽，從而在給定的時(shí)間可給予多個(gè)單位劑量形式以達(dá)到期望的治療有效劑量。優(yōu)選的單位劑量制劑是本申請(qǐng)上文所述的含有活性成分的每日劑量或亞劑量或其適當(dāng)?shù)谋壤哪切?。此外，所述藥物組合物可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。

藥物組合物可適應(yīng)于通過(guò)任何適當(dāng)?shù)耐緩浇o藥，例如，經(jīng)口服(包括口腔或舌下)、直腸、鼻、局部(包括口腔、舌下或經(jīng)皮)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))途徑給藥。所述組合物可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域已知的任何方法制備，例如，通過(guò)使活性成分與一種或多種賦形劑結(jié)合。

當(dāng)適應(yīng)于口服給藥時(shí)，藥物組合物可為離散單位諸如片劑或膠囊劑、粉末或顆粒、于水性或非水性液體中的溶液或懸浮液、可食用泡沫或攪打劑(whip)，或水包油型液體乳液或油包水型乳液。本發(fā)明的化合物或其鹽或本發(fā)明的藥物組合物也可被摻入到糖果、薄片劑(wafer)和/或條型(tonguetape)制劑中，用于作為“快速溶解”的藥物給藥。

例如，就以片劑或膠囊劑形式進(jìn)行的口服給藥而言，可將活性藥物組分與口服的無(wú)毒的藥學(xué)上可接受的惰性載體如乙醇、甘油、水等混合。粉末劑或顆粒劑如下制備：將化合物研磨至合適的微細(xì)尺寸，然后與經(jīng)類(lèi)似研磨的藥物載體如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。也可存在矯味劑、防腐劑、分散劑和著色劑。

膠囊劑如下制備：如上所述制備粉末混合物，然后填充到成形的明膠或非明膠殼中?？蓪⒅鲃┖蜐?rùn)滑劑如膠體二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加到粉末混合物中，然后進(jìn)行填充操作。也可加入崩解劑或增溶劑如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉以改善膠囊劑被攝入時(shí)的藥物利用度。

此外，當(dāng)期望或需要時(shí)，也可將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑摻到混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然膠和合成膠如阿拉伯膠、西黃蓍膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。在這些劑型中使用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。

片劑如下配制：例如制備粉末混合物，制粒或預(yù)壓片，加入潤(rùn)滑劑和崩解劑，然后壓制成片劑。粉末混合物如下制備：將經(jīng)合適研磨的化合物與上述稀釋劑或基質(zhì)以及任選的粘合劑(如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、凝膠或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延遲劑(solutionretardant)(如石蠟)、吸收促進(jìn)劑(如季胺鹽)和/或吸收劑(如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣)混合。粉末混合物可如下制粒：潤(rùn)濕粘合劑如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠液、纖維素溶液或聚合物溶液，然后擠壓過(guò)篩。作為可選擇的制粒方法，粉末混合物可通過(guò)壓片機(jī)來(lái)處理，導(dǎo)致不完全成形的預(yù)壓片破裂成顆粒?？赏ㄟ^(guò)加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油的方式來(lái)對(duì)顆粒進(jìn)行潤(rùn)滑以防止與片劑成形模粘連。然后將經(jīng)潤(rùn)滑的混合物壓制成片劑。本發(fā)明的化合物或鹽也可與自由流動(dòng)的惰性載體組合，并在不經(jīng)歷制?；蝾A(yù)壓片步驟的情況下直接壓制成片劑?？商峁┩该鞯幕虿煌该鞯谋Ｗo(hù)性包衣，所述包衣由以下包衣層構(gòu)成：由蟲(chóng)膠形成的隔離包衣層、由糖或聚合物形成的包衣層和由蠟形成的光亮包衣層?？蓪⑷玖霞拥竭@些包衣中以區(qū)分不同的劑量。

口服流體如溶液劑、糖漿劑和酏劑可按劑量單位形式來(lái)制備，從而使給定的量含有預(yù)定量的活性成分物。糖漿劑可通過(guò)將本發(fā)明的化合物或其鹽溶于經(jīng)合適矯味的水溶液中來(lái)制備，而酏劑通過(guò)使用無(wú)毒的含醇媒介物來(lái)制備。懸浮劑可通過(guò)將本發(fā)明的化合物或其鹽分散在無(wú)毒的媒介物中來(lái)制備。也可加入增溶劑和乳化劑(如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(如薄荷油、天然甜味劑、糖精或其它人造甜味劑)等。

當(dāng)適當(dāng)時(shí)，可對(duì)用于口服給藥的劑量單位制劑進(jìn)行微囊化。也可例如通過(guò)將顆粒物質(zhì)包衣或包埋到聚合物、蠟等中來(lái)制備制劑以延長(zhǎng)或維持釋放。

在本發(fā)明中，對(duì)于遞送藥物組合物而言，片劑和膠囊劑是優(yōu)選的。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了制備藥物組合物的方法，其包括將式(i)化合物或其鹽與至少一種賦形劑混合(或摻合)。

本發(fā)明還提供了在哺乳動(dòng)物，尤其是人中的治療方法。本發(fā)明的化合物和組合物用于治療細(xì)胞增殖性疾病。可通過(guò)本文提供的方法和組合物得到治療的疾病包括，但不限于，癌癥(下文進(jìn)一步討論)、自身免疫性疾病、真菌病癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、炎性腸病、醫(yī)療程序(medicalprocedure)后誘導(dǎo)的增殖，所述醫(yī)療程序包括，但不限于，手術(shù)、血管成形術(shù)等。應(yīng)理解，在一些情況下，細(xì)胞可能并不在高增殖或低增殖狀態(tài)(異常狀態(tài))但仍需要進(jìn)行治療。例如，在傷口愈合過(guò)程中，盡管細(xì)胞可能是“正?！痹鲋车模钥赡苄枰鲋硰?qiáng)化。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括施用至患有或即將患有任一這些疾病或病癥的細(xì)胞或個(gè)體。

本文提供的組合物和方法尤其被認(rèn)為是用于治療癌癥，包括腫瘤，例如前列腺癌、乳腺癌、腦癌、皮膚癌、宮頸癌、睪丸癌等。它們尤其用于治療轉(zhuǎn)移性或惡性腫瘤。更具體地，可通過(guò)本發(fā)明的組合物和方法得到治療的癌癥包括，但不限于以下腫瘤類(lèi)型，例如星形細(xì)胞癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、食道癌、胃癌、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、喉癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、前列腺癌和甲狀腺癌和肉瘤。更具體地，這些化合物可用于治療：心臟：肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支氣管癌(鱗狀上皮細(xì)胞癌、未分化小細(xì)胞癌、未分化大細(xì)胞癌、腺癌)、肺泡(細(xì)支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯(cuò)構(gòu)瘤、間皮瘤；胃腸道：食道(鱗狀上皮細(xì)胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導(dǎo)管腺癌、胰島瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、類(lèi)癌瘤、舒血管腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類(lèi)癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯(cuò)構(gòu)瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：腎(腺癌、威爾姆斯腫瘤(wilm'stumor)(腎胚細(xì)胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀上皮細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細(xì)胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質(zhì)細(xì)胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝細(xì)胞癌)、膽管癌、肝母細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞性腺瘤、血管瘤；膽道：膽囊癌、壺腹癌、膽管癌；骨：成骨性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨細(xì)胞瘤脊索瘤、骨軟骨瘤(骨軟骨外生骨疣(osteocartilaginousexostose))、良性軟骨瘤、軟骨母細(xì)胞瘤、軟骨粘液纖維瘤(chondromyxofibroma)、骨樣骨瘤和巨細(xì)胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)：頭骨(骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃色瘤、畸形性骨炎)、腦膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤(meningiosarcoma)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤病)、腦(星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、生殖細(xì)胞瘤(松果體瘤)、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤(oligodendroglioma)、神經(jīng)鞘瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤)；婦科：子宮(子宮內(nèi)膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前宮頸病變(pre-tumorcervicaldysplasia))、卵巢(卵巢癌(漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分類(lèi)癌(unclassifiedcarcinoma))、顆膜細(xì)胞瘤(granulosa-thecalcelltumor)、塞-萊細(xì)胞瘤(sertoli-leydigcelltumor)、無(wú)性細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀上皮細(xì)胞癌、上皮內(nèi)癌、腺癌、纖維肉瘤、黑色素瘤)、陰道(透明細(xì)胞癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、輸卵管癌)；血液方面：血液(髓細(xì)胞性白血病(急性和慢性)、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndrome))、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(惡性淋巴瘤)；皮膚：惡性黑色素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、卡波西肉瘤、發(fā)育不良痣(molesdysplasticnevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、牛皮癬；和腎上腺：神經(jīng)母細(xì)胞瘤。因此，本文所述術(shù)語(yǔ)“癌細(xì)胞”包括患有任一上述病癥或相關(guān)病癥的細(xì)胞。

本發(fā)明化合物可與其他治療劑，尤其是可提高化合物活性及體內(nèi)處置時(shí)間的藥劑組合或共同給藥。本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物并使用至少一種其他治療方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和手術(shù)治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和放射療法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種支持療法藥物(例如，至少一種鎮(zhèn)吐藥)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種其他化療劑。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種抗腫瘤藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括治療方案，其中本公開(kāi)的ezh2抑制劑本身并沒(méi)有活性或并沒(méi)有顯著活性，但是當(dāng)其與另一療法組合時(shí)(所述另一療法作為單獨(dú)療法時(shí)可以是有活性的或無(wú)活性的)，該組合提供有用的治療效果。

本文所用的術(shù)語(yǔ)“共同給藥”及其衍生詞語(yǔ)是指同時(shí)給藥或以任意單獨(dú)的方式相繼給藥本文所述的ezh2抑制化合物和已知用于治療癌癥(包括化療和放射治療)的一種或多種其他活性成分。當(dāng)向有治療癌癥需要的患者給藥時(shí)，本文所用術(shù)語(yǔ)一種或多種活性成分還包括已知的或被證明有有益性質(zhì)的任意化合物或治療劑。優(yōu)選地，如果所述給藥不是同時(shí)的，那么該化合物以彼此極接近的時(shí)間進(jìn)行給藥。此外，所述化合物是否以同一劑型施用并不重要，例如一種化合物可局部給藥而另一化合物可口服給藥。

通常，在治療本發(fā)明中指定的癌癥時(shí)，可以共同給藥對(duì)待治療的敏感腫瘤具有活性的任何抗腫瘤藥物。該藥物的實(shí)例參考v.t.devita和s.hellman(主編)的cancerprinciplesandpracticeofoncology，第6版(2001年2月15日)，lippincottwilliams&wilkinspublishers。本領(lǐng)域一般技術(shù)人員將能夠根據(jù)藥物的具體特征和所涉及癌癥辨別藥物的何種組合將是有用的。可用于本發(fā)明的典型抗腫瘤藥物包括，但不限于，抗微管劑例如二萜類(lèi)化合物和長(zhǎng)春花生物堿；鉑配位絡(luò)合物；烷基化劑例如氮芥、氧氮磷雜環(huán)己二烯(oxazaphosphorine)、烷基磺酸鹽、亞硝基脲和三氮烯；抗生素例如蒽環(huán)類(lèi)、放線菌素和博萊霉素；拓?fù)洚悩?gòu)酶ii抑制劑例如表鬼臼毒素；抗代謝劑例如嘌呤和嘧啶類(lèi)似物和抗葉酸化合物；拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制劑例如喜樹(shù)堿；激素和激素類(lèi)似物；dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑例如阿扎胞苷和地西他濱；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑；非受體酪氨酸激酶血管生成抑制劑；免疫治療劑；促細(xì)胞凋亡劑；以及細(xì)胞周期信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑。

通常，對(duì)所治療的易感腫瘤具有活性的任意化學(xué)治療劑可與本發(fā)明化合物組合使用，條件是該具體藥物與采用本發(fā)明化合物的療法在臨床上兼容。用于本發(fā)明的典型抗腫瘤劑包括，但不限于：烷化劑、抗代謝藥、抗腫瘤抗生素、抗有絲分裂藥、核苷類(lèi)似物、拓?fù)洚悩?gòu)酶i和ii抑制劑、激素和激素類(lèi)似物；維甲酸，組蛋白脫乙?；敢种苿?；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑，包括細(xì)胞生長(zhǎng)或生長(zhǎng)因子功能的抑制劑、血管生成抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸或其他激酶抑制劑；細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑；反義療法和免疫治療劑，包括單克隆抗體、疫苗或其他生物制劑。

核苷類(lèi)似物是指轉(zhuǎn)化成三磷酸脫氧核苷酸并代替胞嘧啶并入到復(fù)制的dna中的化合物。dna甲基轉(zhuǎn)移酶共價(jià)地連接至該修飾的堿基上，導(dǎo)致酶失活以及降低的dna甲基化。核苷類(lèi)似物的實(shí)例包括阿扎胞苷和地西他濱，它們都用于治療骨髓增生異常疾病。組蛋白脫乙?；?hdac)抑制劑包括伏立諾他，其用于治療皮膚t細(xì)胞淋巴瘤。hdac通過(guò)組蛋白脫乙酰基作用來(lái)修飾染色質(zhì)。此外，它們具有各種作用底物，包括各種轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)分子。其他hdac抑制劑正在研發(fā)。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑是阻斷或抑制化學(xué)過(guò)程的那些抑制劑，所述化學(xué)過(guò)程引起細(xì)胞內(nèi)變化。如本文所用，這一變化是細(xì)胞增殖或分化或存活。用于本發(fā)明的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑包括，但不限于，受體酪氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶、sh2/sh3結(jié)構(gòu)域阻斷劑、絲氨酸/蘇氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3-oh激酶、肌醇信號(hào)傳導(dǎo)和ras癌基因的抑制劑。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑可與上述組合物和方法中的本發(fā)明化合物組合使用。

受體激酶血管生成抑制劑也可用于本發(fā)明中。涉及vegfr和tie-2的血管生成抑制劑在上述針對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑(兩者都是受體酪氨酸激酶)中進(jìn)行討論。其他抑制劑可與本發(fā)明化合物組合使用。例如，抗vegf抗體，其不識(shí)別vegfr(受體酪氨酸激酶)，但結(jié)合至該配體；整聯(lián)蛋白(αvβ3)的小分子抑制劑，其抑制血管生成；內(nèi)皮他丁和血管他丁(非-rtk)也可被證明用于與本發(fā)明化合物組合。vegfr抗體的一個(gè)實(shí)例是貝伐單抗

生長(zhǎng)因子受體的多種抑制劑正在研發(fā)且包括配體拮抗劑、抗體、酪氨酸激酶抑制劑、反義寡核苷酸和適體。任意這些生長(zhǎng)因子受體抑制劑可與本發(fā)明化合物組合用于本文所述的任意組合物和方法/用途中。曲妥珠單抗是生長(zhǎng)因子功能的抗-erbb2抗體抑制劑的實(shí)例。生長(zhǎng)因子功能的抗-erbb2抗體抑制劑的實(shí)例是西妥昔單抗(erbitux^tm，c225)。貝伐單抗是直接針對(duì)vegfr的單克隆抗體的實(shí)例。表皮生長(zhǎng)因子受體的小分子抑制劑的實(shí)例包括但不限于拉帕替尼和厄洛替尼甲磺酸伊馬替尼是pdgfr抑制劑的一個(gè)實(shí)例。vegfr抑制劑的實(shí)例包括帕唑帕尼zd6474、azd2171、ptk787、舒尼替尼和索拉非尼。

抗微管或抗有絲分裂劑是時(shí)相特異性藥物(phasespecificagent)，其在細(xì)胞周期中的m期或有絲分裂期對(duì)腫瘤細(xì)胞的微管具有活性?？刮⒐軇┑膶?shí)例包括但不限于二萜類(lèi)化合物(diterpenoid)和長(zhǎng)春花生物堿(vincaalkaloid)。

天然來(lái)源的二萜類(lèi)化合物是時(shí)相特異性的抗癌劑，其在細(xì)胞周期中的g2/m期起作用。認(rèn)為二萜類(lèi)化合物通過(guò)與該蛋白結(jié)合，使微管的β-微管蛋白亞單位穩(wěn)定。然后使蛋白的分解受到抑制，有絲分裂停止，接著發(fā)生細(xì)胞死亡。二萜類(lèi)化合物的實(shí)例包括但不限于紫杉醇及其類(lèi)似物多西他賽。

紫杉醇，5β,20-環(huán)氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2r,3s)-n-苯甲酰基-3-苯基異絲氨酸酯(5β,20-epoxy-1,2α,4,7β,10β,13α-hexa-hydroxytax-11-en-9-one4,10-diacetate2-benzoate13-esterwith(2r,3s)-n-benzoyl-3-phenylisoserine)，其是從太平洋紫杉樹(shù)(taxusbrevifolia)中分離出來(lái)的天然二萜產(chǎn)物，且作為可注射的溶液市售。其為萜類(lèi)紫杉烷家族的成員。其在1971年由wani等人首次分離出來(lái)(j.am.chem，soc.,93：2325,1971)，并通過(guò)化學(xué)和x-射線結(jié)晶學(xué)方法表征其結(jié)構(gòu)。其活性的機(jī)理之一是關(guān)于紫杉醇能結(jié)合微管蛋白，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)。schiff等,proc.natl,acad,sci.usa,77：1561-1565(1980)；schiff等,nature,277：665-667(1979)；kumar,j.biol,chem,256：10435-10441(1981)。有關(guān)一些紫杉醇衍生物的合成和抗癌活性的綜述，參見(jiàn)d.g.i.kingston等,studiesinoranicchemistry第26卷,標(biāo)題為“newtrendsinnaturalproductschemistry1986”,attaur-rahman,p.w.lequesne編輯(elsevier,amsterdam,1986)第219-235頁(yè)。

在美國(guó)，已經(jīng)批準(zhǔn)紫杉醇的臨床使用，用于治療難治的卵巢癌(markman等,yalejournalofbiologyandmedicine,64：583,1991；mcguire等,ann.int.,med.,111：273,1989)和用于治療乳腺癌(holmes等,j.nat.cancerinst.,83：1797,1991)。其為治療皮膚癌(einzig等,proc.am.soc.clin.oncol.,20：46)和頭頸癌(forastire等,sem.oncol.,20：56,1990)的可能的候選藥物。該化合物還具有治療多囊性腎病(woo等,nature,368：750,1994)、肺癌和瘧疾的潛力。采用紫杉醇治療患者，導(dǎo)致骨髓抑制(多重細(xì)胞譜系(multiplecelllineage),ignoff,r.j.等,cancerchemotherapypocketguide,1998)，這與高于閾濃度(50nm)的給藥的持續(xù)時(shí)間有關(guān)(kearns,c.m.等,seminarsinoncology,3(6)p.16-23,1995)。

多西他賽(docetaxel)，5β-20-環(huán)氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2r,3s)-n-羧基-3-苯基異絲氨酸n-叔丁基酯，三水合物，作為可注射的溶液市售。多西他賽可用于治療乳腺癌。多西他賽是適量(q.v.)紫杉醇的半合成衍生物，其利用天然前體即從歐洲漿果紫杉樹(shù)的針葉中提取的10-去乙?；鶟{果赤霉素iii制備。多西他賽的劑量限制性毒性是嗜中性白細(xì)胞減少癥。

長(zhǎng)春花生物堿(vincaalkaloids)是來(lái)源于長(zhǎng)春花屬植物的時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物。長(zhǎng)春花生物堿通過(guò)特異性地結(jié)合微管蛋白而在細(xì)胞周期的m期(有絲分裂)起作用。因此，被結(jié)合的微管蛋白分子不能聚合成微管。認(rèn)為有絲分裂在中期被停止，隨后細(xì)胞死亡。長(zhǎng)春花生物堿的實(shí)例包括但不限于長(zhǎng)春堿，長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春瑞濱。

長(zhǎng)春堿(vinblastine)，長(zhǎng)春堿硫酸鹽，以注射液市售。盡管已經(jīng)表明其有可能作為各種實(shí)體瘤的二線治療，但是其最初表明用于治療睪丸癌和各種淋巴瘤，包括霍奇金病以及淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞的淋巴瘤。骨髓抑制是長(zhǎng)春堿的劑量限制性副作用。

長(zhǎng)春新堿(vincristine)，長(zhǎng)春堿22-氧代-硫酸鹽，以注射溶液市售。長(zhǎng)春新堿顯示用于治療急性白血病，還發(fā)現(xiàn)用于治療霍奇金和非霍奇金惡性淋巴瘤。脫發(fā)和神經(jīng)作用是長(zhǎng)春新堿最常見(jiàn)的副作用，并產(chǎn)生較小程度的骨髓抑制和胃腸粘膜炎作用。

長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)，3',4'-二脫氫-4'-脫氧-c'-去甲長(zhǎng)春堿(norvincaleukoblastine)[r-(r*,r*)-2,3-二羥基丁二酸二酯(1：2)(鹽)]，以長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽注射溶液市售，是半合成的長(zhǎng)春花生物堿。長(zhǎng)春瑞濱可作為單獨(dú)的藥物或與其它化學(xué)治療劑(如順鉑)組合，用于治療各種實(shí)體瘤，特別是非小細(xì)胞肺癌、晚期乳腺癌和激素難治的前列腺癌。骨髓抑制是長(zhǎng)春瑞濱最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

鉑配位絡(luò)合物(platinumcoordinationcomplex)是非時(shí)相特異性的抗癌劑，其與dna相互作用。鉑絡(luò)合物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，進(jìn)行水合作用，并與dna形成鏈內(nèi)部和之間的交聯(lián)，導(dǎo)致對(duì)腫瘤不利的生物學(xué)作用。鉑配位絡(luò)合物的實(shí)例包括但不限于順鉑和卡鉑。

順鉑，順式-二氨二氯合鉑，以注射溶液市售。順鉑最初用于治療轉(zhuǎn)移性睪丸癌和卵巢癌以及晚期的膀胱癌。順鉑的主要?jiǎng)┝肯拗菩愿弊饔檬悄I毒性和耳毒性，所述腎毒性可通過(guò)水合和利尿來(lái)控制。

卡鉑，二氨[1,1-環(huán)丁烷-二羧酸根(2-)-o,o']合鉑，以注射溶液市售?？ㄣK最初用于晚期卵巢癌的一線和二線治療。骨髓抑制是卡鉑的劑量限制性毒性。

烷化劑是非時(shí)相特異性的抗癌藥物和強(qiáng)親電試劑。通常，烷化劑借助于烷基化作用，通過(guò)dna分子的親核部分如磷酸基(phosphate)、氨基、巰基、羥基、羧基和咪唑基，與dna形成共價(jià)鍵。這種烷基化作用破壞核酸功能，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。烷化劑的實(shí)例包括但不限于氮芥(如環(huán)磷酰胺、美法侖和苯丁酸氮芥)、磺酸烷基酯(如白消安、亞硝基脲如卡莫司汀)，以及三氮烯(如達(dá)卡巴嗪)。

環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)，2-[雙(2-氯乙基)氨基]四氫-2h-1,3,2-氧氮磷雜環(huán)己二烯2-氧化物一水合物(2-[bis(2-chloroethyl)amino]tetrahydro-2h-1,3,2-oxazaphosphorine2-oxidemonohydrate)，以注射溶液或片劑市售。環(huán)磷酰胺可作為單獨(dú)的藥物或與其它化學(xué)治療劑組合，用于治療惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和白血病。脫發(fā)、惡心、嘔吐和白細(xì)胞減少癥是環(huán)磷酰胺最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

美法侖(melphalan)，4-[雙(2-氯乙基)氨基]-l-苯基丙氨酸(4-[bis(2-chloroethyl)amino]-l-phenylalanine)，以注射溶液或片劑市售。美法侖可用于多發(fā)性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮癌的姑息療法。骨髓抑制是美法侖最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

苯丁酸氮芥(chlorambucil)，4-[雙(2-氯乙基)氨基]苯丁酸(4-[bis(2-chloroethyl)amino]benzenebutanoicacid)，以片劑市售。苯丁酸氮芥可用于慢性淋巴細(xì)胞性白血病，惡性淋巴瘤(如淋巴肉瘤、巨濾泡性淋巴瘤和霍奇金病)的姑息療法。骨髓抑制是苯丁酸氮芥最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

白消安(busulfan)，1,4-丁二醇二甲磺酸酯(1,4-butanedioldimethanesulfonate)，以片劑市售。白消安用于慢性髓細(xì)胞性白血病的姑息療法。骨髓抑制是白消安最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

卡莫司汀(carmustine)，1,3-[雙(2-氯乙基)-1-亞硝基脲(1,3-[bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea)，以單瓶裝的凍干產(chǎn)物市售?？就】勺鳛閱为?dú)的藥物或與其它藥物組合，用于腦瘤、多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的姑息療法。延遲的骨髓抑制是卡莫司汀最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺(5-(3,3-dimethyl-1-triazeno)-imidazole-4-carboxamide)，以dtic-單瓶裝的產(chǎn)物市售。達(dá)卡巴嗪可用于轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤的治療，并且可與其它藥物組合，用于霍奇金病的二線治療。惡心、嘔吐和厭食是達(dá)卡巴嗪最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

抗生素類(lèi)抗癌劑(antibioticanti-neoplastics)是非時(shí)相特異性的藥物，其結(jié)合或嵌入dna中。通常，這種作用導(dǎo)致穩(wěn)定的dna復(fù)合物或鏈斷裂，破壞核酸的正常功能，導(dǎo)致細(xì)胞死亡?？股仡?lèi)抗腫瘤藥物的實(shí)例包括但不限于放線菌素(如放線菌素d)；蒽環(huán)類(lèi)(anthrocyclins)(如柔紅霉素和多柔比星)；以及博來(lái)霉素。

放線菌素d(dactinomycin，也稱(chēng)為actinomycind)，以注射液形式市售。放線菌素d可用于威爾姆斯腫瘤和橫紋肌肉瘤的治療。惡心、嘔吐和厭食是放線菌素d最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

柔紅霉素(daunorubicin)，(8s-順式-)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧基α-l-來(lái)蘇-己吡喃糖基)-氧基]-7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽，以脂質(zhì)體可注射形式或可注射形式市售。柔紅霉素可在急性非淋巴細(xì)胞性白血病和晚期hiv相關(guān)的卡波西肉瘤的治療中用于誘導(dǎo)緩解。骨髓抑制是柔紅霉素最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

多柔比星(doxorubicin)，(8s,10s)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧-α-l-來(lái)蘇-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇酰基-7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽((8s,10s)-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxy-α-l-lyxo-hexopyranosyl)oxy]-8-glycoloyl,7,8,9,10-tetrahydro-6,8,11-trihydroxy-1-methoxy-5,12naphthacenedionehydrochloride)，以或adriamycin注射溶液市售。多柔比星主要用于急性成淋巴細(xì)胞性白血病和急性成髓細(xì)胞性白血病的治療，但也是治療某些實(shí)體瘤和淋巴瘤的有用組分。骨髓抑制是多柔比星最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

博來(lái)霉素(bleomycin)，是從輪絲鏈霉菌(streptomycesverticilus)菌株中分離出來(lái)的細(xì)胞毒素糖肽類(lèi)抗生素的混合物，以市售。博來(lái)霉素可作為單獨(dú)的藥物或與其它藥物組合，用于鱗狀細(xì)胞癌、淋巴瘤和睪丸癌的姑息療法。肺部和皮膚毒性是博來(lái)霉素最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

拓?fù)洚悩?gòu)酶ii抑制劑包括但不限于表鬼臼脂毒素。

表鬼臼脂毒素(epipodophyllotoxins)是來(lái)源于曼德拉草(mandrake)植物的時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物。表鬼臼脂毒素通常通過(guò)與拓?fù)洚悩?gòu)酶ii和dna形成三元復(fù)合物，導(dǎo)致dna鏈斷裂來(lái)影響處于細(xì)胞周期的s和g2期的細(xì)胞。鏈斷裂積聚，接著細(xì)胞死亡。表鬼臼脂毒素的實(shí)例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷(etoposide)，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(r)-亞乙基-β-d-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液或膠囊市售，并且常稱(chēng)之為vp-16。依托泊苷可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療睪丸癌和非小細(xì)胞肺癌。骨髓抑制是依托泊苷最常見(jiàn)的副作用。白細(xì)胞減少癥的發(fā)生率(incidence)傾向于比血小板減少癥的發(fā)生率更嚴(yán)重。

替尼泊苷(teniposide)，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(r)-噻吩亞甲基-β-d-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液市售，并且通常稱(chēng)之為vm-26。替尼泊苷可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療兒童急性白血病。骨髓抑制是替尼泊苷最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。替尼泊苷可引起白細(xì)胞減少癥和血小板減少癥。

抗代謝腫瘤藥物(antimetaboliteneoplasti)是時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物，其作用于細(xì)胞周期的s期(dna合成)，通過(guò)抑制dna的合成，或者通過(guò)抑制嘌呤或嘧啶堿基的合成進(jìn)而限制dna的合成。因此，s期不能繼續(xù)下去，接著細(xì)胞死亡?？勾x類(lèi)抗腫瘤藥物的實(shí)例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巰基嘌呤、硫鳥(niǎo)嘌呤，以及吉西他濱(fluorouracil,methotrexate,cytarabine,mecaptopurine,thioguanine,andgemcitabine)。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1h,3h)嘧啶二酮，以氟尿嘧啶市售。5-氟尿嘧啶的給藥導(dǎo)致胸苷酸合成的抑制，并且還摻入到rna和dna中。結(jié)果通常是細(xì)胞死亡。5-氟尿嘧啶可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌和胰腺癌。骨髓抑制和粘膜炎是5-氟尿嘧啶的劑量限制性副作用。其它的氟嘧啶類(lèi)似物包括5-氟脫氧尿嘧啶核苷(氟尿苷)和5-氟脫氧尿嘧啶核苷一磷酸。

阿糖胞苷(cytarabine)，4-氨基-1-β-d-阿拉伯呋喃糖基-2(1h)-嘧啶酮(4-amino-1-β-d-arabinofuranosyl-2(1h)-pyrimidinone)，以cytosar-市售，并且通常稱(chēng)之為ara-c。認(rèn)為阿糖胞苷在s-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性，其通過(guò)將阿糖胞苷末端摻入到生長(zhǎng)的dna鏈中而抑制dna鏈的延長(zhǎng)。阿糖胞苷作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。其它的胞苷類(lèi)似物包括5-氮雜胞苷和2',2'-二氟脫氧胞苷(吉西他濱)。阿糖胞苷引起白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和粘膜炎。

巰基嘌呤，1,7-二氫-6h-嘌呤-6-硫酮一水合物(1,7-dihydro-6h-purine-6-thionemonohydrate)，以嘌呤市售。巰基嘌呤在s-期通過(guò)至今尚未清楚的機(jī)理抑制dna的合成具有細(xì)胞時(shí)相特異性。巰基嘌呤可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。預(yù)期骨髓抑制和胃腸粘膜炎是高劑量巰基嘌呤的副作用?？墒褂玫膸€基嘌呤類(lèi)似物是硫唑嘌呤。

硫鳥(niǎo)嘌呤(thioguanine)，2-氨基-1,7-二氫-6h-嘌呤-6-硫酮(2-amino-1,7-dihydro-6h-purine-6-thione)，以市售。硫鳥(niǎo)嘌呤在s-期通過(guò)至今尚未清楚的機(jī)理抑制dna的合成具有細(xì)胞時(shí)相特異性。硫鳥(niǎo)嘌呤可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。骨髓抑制，包括白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血是給藥硫鳥(niǎo)嘌呤最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。然而，還發(fā)生胃腸副作用，而且該副作用可能是劑量限制性的。其它的嘌呤類(lèi)似物包括噴司他丁、赤式羥基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、磷酸氟達(dá)拉濱和克拉屈濱。

吉西他濱(gemcitabine)，2'-脫氧-2',2'-二氟胞苷一鹽酸鹽(β-異構(gòu)體)，以市售。吉西他濱通過(guò)阻斷細(xì)胞通過(guò)g1/s邊界的發(fā)展在s-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性。吉西他濱可與順鉑組合，用于治療局部的晚期非小細(xì)胞肺癌，也可以單獨(dú)地用于治療局部的晚期胰腺癌。骨髓抑制(包括白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血)是給藥吉西他濱最常見(jiàn)的劑量限制性副作用。

甲氨蝶呤，n-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲?；鵠-l-谷氨酸，以甲氨蝶呤鈉市售。甲氨蝶呤在s-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性作用，其通過(guò)抑制合成嘌呤核苷酸和胸苷酸所需的脫氫葉酸還原酶來(lái)抑制dna的合成、修復(fù)和/或復(fù)制。甲氨蝶呤可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療絨毛膜癌、腦膜白血病、非霍奇金淋巴瘤，以及乳腺癌、頭癌、頸癌、卵巢癌和膀胱癌。預(yù)期骨髓抑制(白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血)和粘膜炎是給藥甲氨蝶呤的副作用。

喜樹(shù)堿(camptothecins)，包括喜樹(shù)堿和喜樹(shù)堿衍生物，其可作為拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制劑來(lái)使用或開(kāi)發(fā)。認(rèn)為喜樹(shù)堿細(xì)胞毒素活性與其拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制活性相關(guān)。喜樹(shù)堿的實(shí)例包括但不限于伊立替康、托泊替康，以及下述7-(4-甲基哌嗪基-亞甲基)-10,11-亞乙二氧基-20-喜樹(shù)堿的各種旋光體。

鹽酸伊立替康(irinotecanhcl)，(4s)-4,11-二乙基-4-羥基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-1h-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4h,12h)-二酮鹽酸鹽，以注射溶液市售。

伊立替康(irinotecan)是喜樹(shù)堿的衍生物，其與其活性代謝物sn-38一起結(jié)合在拓?fù)洚悩?gòu)酶i-dna復(fù)合物上。認(rèn)為由于雙鏈不可修復(fù)的(irreparable)斷裂，導(dǎo)致出現(xiàn)細(xì)胞毒性，所述斷裂是由拓?fù)洚悩?gòu)酶i：dna：伊立替康或sn-38三元復(fù)合物與復(fù)制酶之間的相互作用引起的。伊立替康可用于治療結(jié)腸或直腸的轉(zhuǎn)移癌。鹽酸伊立替康的劑量限制性副作用是骨髓抑制，包括嗜中性白細(xì)胞減少癥，以及包括腹瀉的gi效應(yīng)。

鹽酸托泊替康(topotecanhcl)，(s)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羥基-1h-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14-(4h,12h)-二酮一鹽酸鹽((s)-10-[(dimethylamino)methyl]-4-ethyl-4,9-dihydroxy-1h-pyrano[3’,4’,6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14-(4h,12h)-dionemonohydrochloride)，以注射溶液市售。托泊替康是喜樹(shù)堿的衍生物，其與拓?fù)洚悩?gòu)酶i-dna復(fù)合物結(jié)合，并阻止單鏈斷裂的再連接，所述單鏈斷裂是拓?fù)洚悩?gòu)酶i響應(yīng)dna分子的扭轉(zhuǎn)張力(torsionalstrain)所引起的。托泊替康用于卵巢轉(zhuǎn)移癌和小細(xì)胞肺癌的二線治療。鹽酸托泊替康的劑量限制性副作用是骨髓抑制，主要是嗜中性白細(xì)胞減少癥。

本文提供了治療或預(yù)防自身免疫性和炎性病癥和疾病的方法，所述病癥和疾病可通過(guò)抑制ezh1和/或ezh2而改善，從而，例如，調(diào)節(jié)甲基化活化和甲基化抑制的靶基因的表達(dá)水平或調(diào)節(jié)信號(hào)蛋白的活性。一種方法可以包括向人，例如有此需要的人給藥治療有效量的本文所述藥劑。

炎癥代表針對(duì)創(chuàng)傷的一組血管、細(xì)胞和神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)。炎癥可以表征為炎性細(xì)胞如單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和粒細(xì)胞進(jìn)入組織的運(yùn)動(dòng)。這通常與減少的內(nèi)皮屏障功能和水腫進(jìn)入組織有關(guān)。炎癥可分為急性或慢性。急性炎癥是身體對(duì)有害刺激的初始反應(yīng)，并且是通過(guò)血漿和白細(xì)胞從血液向損傷組織的運(yùn)動(dòng)增加而實(shí)現(xiàn)的。生物化學(xué)事件的級(jí)聯(lián)傳播和使炎癥反應(yīng)成熟，涉及局部血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和損傷組織內(nèi)的各種細(xì)胞。被稱(chēng)為慢性炎癥的長(zhǎng)期炎癥導(dǎo)致存在于炎癥部位的細(xì)胞類(lèi)型的逐漸變化，且其特征在于炎癥過(guò)程中組織的同時(shí)破壞和愈合。

當(dāng)發(fā)生作為對(duì)感染的免疫應(yīng)答的一部分或作為對(duì)創(chuàng)傷的急性反應(yīng)時(shí)，炎癥可以是有益的并且通常是自限性的。然而，炎癥在不同條件下可能是有害的。這包括響應(yīng)于感染因子產(chǎn)生過(guò)度炎癥，其可導(dǎo)致顯著的器官損傷和死亡(例如，在敗血癥的情況中)。此外，慢性炎癥通常是有害的，并且是許多慢性疾病的根源，對(duì)組織造成嚴(yán)重的和不可逆的損害。在這種情況下，免疫應(yīng)答通常針對(duì)自身組織(自身免疫)，盡管對(duì)外來(lái)實(shí)體的慢性反應(yīng)也可能導(dǎo)致對(duì)自身組織的旁觀者損傷(bystanderdamage)。

因此，抗炎治療的目的是減少這種炎癥，當(dāng)存在時(shí)抑制自身免疫并允許生理過(guò)程或愈合和組織修復(fù)進(jìn)展。

這些藥劑可用于治療身體的任何組織和器官的炎癥，包括肌肉骨骼炎癥、血管炎癥、神經(jīng)炎癥、消化系統(tǒng)炎癥、眼部炎癥、生殖系統(tǒng)的炎癥和其它炎癥，如下所示。

肌肉骨骼炎癥是指肌肉骨骼系統(tǒng)的任何炎癥病癥，特別是影響骨骼關(guān)節(jié)，包括手、手腕、肘部、肩部、頜、脊柱、頸部、髖部、膝蓋、腳踝和腳部的關(guān)節(jié)的那些病癥以及影響連接肌肉與骨骼的組織(例如腱)的病癥。可用本發(fā)明化合物治療的肌肉骨骼炎癥的實(shí)例包括關(guān)節(jié)炎(包括例如，骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、急性和慢性感染性關(guān)節(jié)炎、與痛風(fēng)和假性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的關(guān)節(jié)炎和幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎)、肌腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑囊炎、纖維組織炎(纖維肌痛)、上髁炎、肌炎和骨炎(包括，例如，佩吉特氏病、恥骨骨炎和纖維性骨炎)。

眼部炎癥是指眼睛任何結(jié)構(gòu)的炎癥，包括眼瞼。可以在本發(fā)明中治療的眼部炎癥的實(shí)例包括眼瞼炎、眼瞼皮膚松弛癥、結(jié)膜炎、淚腺炎、角膜炎、干燥性角結(jié)膜炎(干眼癥)、鞏膜炎、倒睫癥和葡萄膜炎。

可以在本發(fā)明中治療的神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥的實(shí)例包括腦炎、格-巴二氏綜合征、腦膜炎、神經(jīng)性肌強(qiáng)直、發(fā)作性睡病、多發(fā)性硬化、脊髓炎和精神分裂癥。

可在本發(fā)明中治療的脈管系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)炎癥的實(shí)例包括關(guān)節(jié)硬化、關(guān)節(jié)炎、靜脈炎、血管炎和淋巴管炎。

可在本發(fā)明中治療的消化系統(tǒng)的炎性病癥的實(shí)例包括膽管炎、膽囊炎、腸炎、小腸結(jié)腸炎、胃炎、胃腸炎、回腸炎和直腸炎。

可以在本發(fā)明中治療的生殖系統(tǒng)的炎性病癥的實(shí)例包括宮頸炎、絨毛膜羊膜炎、子宮內(nèi)膜炎、附睪炎、臍炎、卵巢炎、睪丸炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、尿道炎、陰道炎、外陰炎和外陰痛。

所述藥劑可用于治療具有炎性成分的自身免疫病癥。這些病癥包括急性播散性脫發(fā)、貝赫切特病、查加斯病、慢性疲勞綜合征、自主神經(jīng)機(jī)能異常、腦脊髓炎、強(qiáng)直性脊柱炎、再生障礙性貧血、化膿性汗腺炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎、乳糜瀉、克羅恩病、1型糖尿病、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、肺出血腎炎綜合征、格雷夫病、格-巴二氏綜合征、橋本病、過(guò)敏性紫癜、川崎病、紅斑狼瘡、微觀結(jié)腸炎、微觀多動(dòng)脈炎、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、眼肌陣攣綜合征、視神經(jīng)炎、ord’s甲狀腺炎、天皰瘡、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、多肌痛、賴(lài)特綜合征、干燥綜合征、顳動(dòng)脈炎、韋格納肉芽腫病、溫?zé)嶙陨砻庖咝匀苎载氀㈤g質(zhì)性膀胱炎、萊姆病、硬斑病、結(jié)節(jié)病、硬皮病、潰瘍性結(jié)腸炎和白癜風(fēng)。

所述藥劑可用于治療具有炎性成分的t細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)性疾病。這些病癥包括接觸性超敏反應(yīng)、接觸性皮炎(包括由有毒常春藤引起的)、蕁麻疹、皮膚過(guò)敏、呼吸道過(guò)敏(花粉癥、過(guò)敏性鼻炎)和麩質(zhì)敏感性腸病(乳糜瀉)。

可在本發(fā)明中治療的其它炎性病癥包括例如，闌尾炎、皮炎、皮肌炎、心內(nèi)膜炎、纖維組織炎、牙齦炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳腺炎、心肌炎、腎炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、腎盂腎炎和口內(nèi)炎、移植排斥反應(yīng)(涉及腎臟、肝臟、心臟、肺、胰腺(如胰島細(xì)胞)、骨髓、角膜、小腸、皮膚同種異體移植物、皮膚同種移植物和心臟瓣膜異種移植物、血清病(sewrumsickness)和移植物抗宿主病)、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、急性呼吸窘迫綜合征、sexary綜合征、先天性腎上腺增生、非化膿性甲狀腺炎、與癌癥相關(guān)的高鈣血癥、天皰瘡、大皰性皰疹性皮炎、嚴(yán)重多形紅斑、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、季節(jié)性或常年性變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、接觸性皮炎、異位性皮炎、藥物超敏反應(yīng)、變應(yīng)性結(jié)膜炎、角膜炎、眼部帶狀皰疹、虹膜炎和虹膜睫狀體炎、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)炎、癥狀性結(jié)節(jié)病、暴發(fā)性或播散性肺結(jié)核化療、成人特發(fā)性血小板減少性紫癜、成人繼發(fā)性血小板減少癥、獲得性(自身免疫性)溶血性貧血、成人白血病和淋巴瘤、兒童的急性白血病、局限性腸炎、自身免疫性血管炎、多發(fā)性硬化、慢性阻塞性肺疾病、實(shí)體器官移植排斥、敗血癥。

優(yōu)選的治療包括移植排斥、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1型糖尿病、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性肺疾病和伴隨感染的傳染性疾病(例如敗血癥)的治療中的任一種。

藥物組合物可按照每單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式存在。該單位依據(jù)所治療的疾病、給藥途徑和患者的年齡、體重和狀況，可含有，例如，0.5mg-1g，優(yōu)選1mg-700mg，更優(yōu)選5mg-100mg的式(i)化合物，或藥物組合物可按照每單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式存在。優(yōu)選的單位劑量組合物是含有如上文所述的活性成分的日劑量或亞劑量或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的那些。此外，該藥物組合物可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任意方法制備。

藥物組合物可適于任意合適的途徑的施用，例如，口服(包括口腔或舌下)、直腸、鼻、局部(包括口腔、舌下或經(jīng)皮)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或真皮內(nèi))途徑。該組合物可通過(guò)藥物領(lǐng)域已知的任意方法制備，例如，通過(guò)將式(i)化合物與一種或多種載體或賦形劑組合。

適用于口服給藥的藥物組合物可為離散單位，例如片劑或膠囊；粉劑或顆粒；水性或非水液體中的溶液或混懸液；食用泡沫或攪打劑；水包油的液體乳液或油包水的液體乳液。

膠囊是通過(guò)以下制備的：按上述制備粉末混合物并填充到成形的明膠鞘中?？稍谔畛洳僮髑埃瑢⒅鲃┖蜐?rùn)滑劑，例如膠體二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、固體聚乙二醇加至該粉末混合物中。還可加入崩解劑或增溶劑，例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，使得當(dāng)該膠囊被攝取時(shí)提高藥物的可用性。

此外，當(dāng)需要或必要時(shí)，還可將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑摻入到該混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然和合成樹(shù)膠(例如阿拉伯膠、黃蓍膠)、海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。在這些劑型中所用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括，但不限于，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。片劑是通過(guò)如下制備的，例如，制備粉末混合物、制?；蝾A(yù)壓(slugging)、添加潤(rùn)滑劑和崩解劑并壓制成片。粉末混合物是通過(guò)以下制備的，將適當(dāng)粉碎的化合物與上述稀釋劑或堿混合，并任選地，與粘合劑(例如羧甲基纖維素和藻酸鹽)、明膠或聚乙烯吡咯烷酮、溶液延遲劑(例如石蠟)、再吸收加速劑(例如季鹽)和/或吸收劑(例如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣)混合。用片劑成形模，通過(guò)加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油可將該粉末混合物制粒。然后將該潤(rùn)滑的混合物壓制成片。本發(fā)明化合物還可與自由流動(dòng)的惰性載體組合且無(wú)需進(jìn)行制?；蝾A(yù)壓步驟而直接壓制成片?？商峁┯上x(chóng)膠隔離層、糖或聚合材料的包衣和蠟的拋光包衣組成的澄清或不透明的保護(hù)包衣?？蓪⑷玖霞又吝@些包衣以區(qū)分不同的劑量。

口服流體(例如溶液、糖漿和酏劑)可以單位劑量形式制備，使得給定量含有預(yù)定量的式(i)化合物。糖漿可通過(guò)將該化合物溶于適當(dāng)矯味的水溶液中進(jìn)行制備，而酏劑通過(guò)使用無(wú)毒醇媒介物制備。混懸液可通過(guò)將該化合物分散于無(wú)毒媒介物中進(jìn)行配制。還可加入增溶劑和乳化劑(例如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(例如薄荷油)、天然甜味劑、糖精或其他人造甜味劑等。

當(dāng)適當(dāng)時(shí)，可對(duì)用于口服給藥的劑量單位制劑進(jìn)行微囊化。也可例如通過(guò)將顆粒物質(zhì)包衣或包埋到聚合物、蠟等中來(lái)制備制劑以延長(zhǎng)或維持釋放。

適用于直腸給藥的藥物組合物可以栓劑或灌腸劑存在。

適用于陰道給藥的藥物組合物可以陰道栓劑、棉塞、霜?jiǎng)?、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑存在。

適用于胃腸外給藥的藥物制劑包括水性和非水無(wú)菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和溶質(zhì)，其使得該組合物與預(yù)期接受者的血液等滲；和水性和非水無(wú)菌混懸液，其可包含懸浮劑和增稠劑。該藥物組合物可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密閉的安瓿和小瓶且可儲(chǔ)存于冷凍干燥的(凍干的)條件下，其僅需在使用前立即加入無(wú)菌液體載體，例如注射用水。臨時(shí)注射溶液和混懸液可由無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。

應(yīng)理解，除了上面特別提及的成分，該藥物組合物可根據(jù)所探討的制劑類(lèi)型包含本領(lǐng)域常用的其他試劑，例如適用于口服給藥的那些可包含矯味劑。

本發(fā)明化合物的治療有效量將取決于許多因素，包括，例如，預(yù)期接受者的年齡和體重、需要治療的精確病癥和其嚴(yán)重性、該制劑的性質(zhì)和給藥途徑且最終由開(kāi)處方人員慎重決定。但是，治療貧血的式(i)化合物的有效量的通常范圍是每天0.001-100mg/kg接受者體重，適當(dāng)?shù)胤秶鸀槊刻?.1-10mg/kg體重。對(duì)于70kg成年哺乳動(dòng)物，每天的實(shí)際量將適當(dāng)?shù)貫?-700mg且該量可以每日單一劑量給予或以每天若干(例如2、3、4、5或6個(gè))亞劑量給予，使得總的劑量相同。有效量的鹽或溶劑合物等可按式(i)化合物本身有效量的比例來(lái)確定。預(yù)期類(lèi)似的劑量將適用于治療上述其他病癥。

定義

術(shù)語(yǔ)以其被接受的含義使用。以下定義旨在闡明，而非限制所定義的術(shù)語(yǔ)。

本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基”表示具有指定碳原子數(shù)的飽和、直鏈或支鏈烴部分。術(shù)語(yǔ)“(c1-c6)烷基”是指含有1-6個(gè)碳原子的烷基。示例性的烷基包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。

當(dāng)術(shù)語(yǔ)“烷基”與其他取代基組合使用時(shí)，例如“鹵代(c1-c4)烷基”，術(shù)語(yǔ)“烷基”旨在涵蓋二價(jià)直鏈或支鏈烴基，其中連接點(diǎn)通過(guò)烷基部分。術(shù)語(yǔ)“鹵代(c1-c4)烷基”旨在表示在含有1-4個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)的1個(gè)或多個(gè)碳原子上具有1個(gè)或多個(gè)可相同或不同的鹵素原子的基團(tuán)，其可以是直鏈或支鏈碳基。在本發(fā)明中所用的“鹵代(c1-c4)烷基”的實(shí)例包括，但不限于，-cf3(三氟甲基)、-ccl3(三氯甲基)、1,1-二氟乙基、2-氟-2-甲基丙基、2,2-二氟丙基、2,2,2-三氟乙基和六氟異丙基。

術(shù)語(yǔ)“鹵素”和“鹵”表示氯、氟、溴或碘取代基?！傲u基”旨在表示基團(tuán)-oh。

本文所用術(shù)語(yǔ)“任選地”是指隨后描述的事件可能發(fā)生或不發(fā)生，且包括發(fā)生的事件和不發(fā)生的事件二者。

本文所用術(shù)語(yǔ)“治療”是指在先前患有或確診的患者或受試者中，減輕具體病癥、消除或減少該病癥的一種或多種癥狀、減緩或消除該病癥的進(jìn)展和預(yù)防或延遲該病癥的復(fù)發(fā)。

本文所用術(shù)語(yǔ)“有效量”是指由例如研究人員或臨床醫(yī)師所探索的將引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的藥物或藥劑的量。

術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指與未接受該量的相應(yīng)受試者相比，引起疾病、障礙或副作用的改進(jìn)的治療、治愈或改善，或降低疾病或障礙進(jìn)展速度的任意量。術(shù)語(yǔ)在其范圍內(nèi)還包括提高正常生理功能的有效量。對(duì)于在療法中的用途，治療有效量的式(i)化合物及其鹽可以化學(xué)原料施用。此外，所述活性成分可以藥物組合物存在。

化合物的制備

縮寫(xiě)

acoh乙酸

boc叔丁氧基羰基

boc2o二碳酸二叔丁酯

ch3cn乙腈

ch3no2硝基甲烷

cs2co3碳酸銫

dcm二氯甲烷

dibal-h二異丁基氫化鋁

dmap4-二甲基氨基吡啶

dmfn,n-二甲基甲酰胺

dmso二甲基亞砜

edcn-(3-二甲基氨基丙基)-n′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽

es電噴射

et3n三乙胺

etoac乙酸乙酯

etococl氯甲酸乙酯

etoh乙醇

h小時(shí)

h2氫氣

hcl鹽酸

h2o水

h2so4硫酸

hoat1-羥基-7-氮雜苯并三唑

hplc高效液相色譜

in(otf)3三氟甲磺酸銦(iii)

k2co3碳酸鉀

koac乙酸鉀

kotbu叔丁醇鉀

lcms液相色譜質(zhì)譜

libh4硼氫化鋰

liclo4高氯酸鋰

meoh甲醇

mgso4硫酸鎂

min分鐘

ms質(zhì)譜

nabh4硼氫化鈉

nabh3cn氰基硼氫化鈉

nabh(oac)3三乙酰氧基硼氫化鈉

na2co3碳酸鈉

nahco3碳酸氫鈉

nahmds二(三甲基甲硅烷基)氨基鈉

na2hpo4磷酸氫二鈉

nano2亞硝酸鈉

naoh氫氧化鈉

na2so4硫酸鈉

nbsn-溴琥珀酰亞胺

nh4cl氯化銨

nh4oac醋酸銨

nh4oh氫氧化銨

nmmn-甲基嗎啉

2-ntf2-吡啶1,1,1-三氟-n-(吡啶-2-基)-n-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰

胺

pd/c鈀/炭

pdcl2(dppf)[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(ii)

pd(pph3)4四(三苯基膦)鈀(0)

phh苯

p2o5五氧化二磷

pocl3磷酰氯

pyr吡啶

rt室溫

socl2亞硫酰氯

tfa三氟乙酸

tf2o三氟甲磺酸酐

thf四氫呋喃

ticl4四氯化鈦(iv)

tmscl三甲基氯硅烷

ti(oipr)4異丙醇鈦(iv)

一般性合成方案

本發(fā)明化合物可通過(guò)各種方法，包括熟知的標(biāo)準(zhǔn)合成方法制備。示例性的一般性合成方法如下所示，然后具體的本發(fā)明化合物在工作實(shí)施例中進(jìn)行制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，如果本文所描述的取代基對(duì)本文所述的合成方法不相容，則該取代基可用對(duì)該反應(yīng)條件穩(wěn)定的合適的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。該保護(hù)基團(tuán)可在反應(yīng)順序中合適的點(diǎn)進(jìn)行脫除以提供所需的中間體或目標(biāo)化合物。在下文所述的全部方案中，根據(jù)合成化學(xué)的一般原則，在有必要的位置，使用敏感或反應(yīng)性基團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)根據(jù)有機(jī)合成的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行處理(t.w.green和p.g.m.wuts，(1991)protectinggroupsinorganicsynthesis，johnwiley&sons，其保護(hù)基團(tuán)引入本文作為參考)。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法，在該化合物合成的合適的階段將這些基團(tuán)脫除。方法及反應(yīng)條件的選擇以及它們的執(zhí)行順序應(yīng)與本發(fā)明化合物的制備一致。起始材料是市售可得的或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法從市售可得的起始材料制備的。

式(id)化合物可根據(jù)方案1或類(lèi)似方法制備。適當(dāng)取代的噻吩-3-甲酸的酯化提供了相應(yīng)的酯。用適當(dāng)取代的任何酸酐(或酰氯)進(jìn)行銦介導(dǎo)的?；磻?yīng)得到5-酰基噻吩。與適當(dāng)取代的酮進(jìn)行的mcmurray偶聯(lián)得到四取代的烯烴。用適當(dāng)取代的三氟甲磺酸酯(或烷基鹵化物)進(jìn)行的烷基化或用適當(dāng)取代的醛進(jìn)行的還原胺化提供取代的衍生物。酯的皂化，然后將所得甲酸與適當(dāng)取代的胺偶聯(lián)，得到式(id)化合物。

方案1：式(id)化合物的合成。

所述式(ic)化合物可根據(jù)方案2或類(lèi)似方法制備。用相應(yīng)的weinreb酰胺形成適當(dāng)取代的酮是由合適的格氏(或烷基鋰)試劑完成的。相應(yīng)的三氟甲磺酸乙烯酯的形成，然后與適當(dāng)取代的溴代噻吩進(jìn)行鈀介導(dǎo)的偶聯(lián)，得到三取代的烯烴。烯烴的還原，然后用適當(dāng)取代的三氟甲磺酸酯(或烷基鹵化物)進(jìn)行烷基化或用適當(dāng)取代的醛還原胺化，得到取代的衍生物。酯的皂化，然后將所得羧酸與適當(dāng)取代的胺偶聯(lián)，得到式(ic)化合物。

方案2：式(ic)化合物的合成。

其中r³和r⁴一起表示-ch2ch2-的式(i)化合物可根據(jù)方案3或類(lèi)似方法制備。適當(dāng)取代的噻吩甲醛與硝基甲烷的縮合提供了相應(yīng)的硝基乙烯基噻吩。硝基乙烯基的還原，然后捕獲所得胺，產(chǎn)生相應(yīng)的氨基甲酸乙酯。將所述氨基甲酸乙酯用pocl3/p2o5處理得到內(nèi)酰胺。用適當(dāng)取代的酸酐(或酰氯)進(jìn)行銦介導(dǎo)的?；磻?yīng)，得到5-?；绶?。用適當(dāng)取代的胺進(jìn)行還原胺化或用適當(dāng)取代的酮進(jìn)行mcmurray偶聯(lián)，得到精制的噻吩內(nèi)酰胺。用適當(dāng)取代的烷基鹵化物進(jìn)行內(nèi)酰胺氮的烷基化，然后除去芐基保護(hù)基，得到式(i)化合物。

方案3：式(i)化合物的合成。

式(ic2)化合物可根據(jù)方案4或類(lèi)似方法制備。銥介導(dǎo)的硼酸化，然后與適當(dāng)取代的三氟甲磺酸酯進(jìn)行suzuki偶聯(lián)，得到相應(yīng)的偶聯(lián)烯烴。銥介導(dǎo)的所述烯烴的不對(duì)稱(chēng)還原，然后除去boc-保護(hù)基團(tuán)，得到所述哌啶。用適當(dāng)取代的三氟甲磺酸酯(或烷基鹵化物)進(jìn)行烷基化或用適當(dāng)取代的醛進(jìn)行還原胺化，得到取代的衍生物。酯的皂化，然后將所得羧酸與適當(dāng)取代的胺偶聯(lián)，得到式(ic2)化合物。

方案4：式(ic2)化合物的合成。

實(shí)驗(yàn)

以下指引適用于本文所述的全部實(shí)驗(yàn)操作。除非另外提及，否則所有反應(yīng)是在氮正壓下，使用烘干的玻璃器具進(jìn)行的。所指定的溫度是外部的(即浴溫度)且是近似的。通過(guò)注射器轉(zhuǎn)移對(duì)空氣和濕度敏感的液體。試劑按原樣使用。所用的溶劑是那些供應(yīng)商標(biāo)注為“無(wú)水”的溶劑。溶液試劑所標(biāo)注的摩爾濃度是近似的且使用前并未相對(duì)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行滴定。除非另外提及，否則所有的反應(yīng)是通過(guò)攪拌棒進(jìn)行攪拌的。除非另外提及，否則加熱是使用含有硅油的加熱浴進(jìn)行的。反應(yīng)是使用配有biotage微波exp小瓶(0.2–20ml)和隔墊和瓶蓋的biotageinitiator^tm2.0儀器，用微波輻射(0–400w，2.45ghz)進(jìn)行的?；谌軇┖碗x子電荷所使用的輻射水平(即高、正常、低)是基于供應(yīng)商的說(shuō)明。使用干冰/丙酮或干冰/2-丙醇將溫度冷卻至-70℃以下。用作干燥劑的硫酸鎂和硫酸鈉是無(wú)水級(jí)別的且可互換使用。被描述為“真空”或“減壓下”除去的溶劑是通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完成的。

制備型正相硅膠色譜是使用以下進(jìn)行的：配有redisep或iscogold硅膠柱(4g-330g)的teledyneiscocombiflashcompanion儀器或配有sf25硅膠柱(4g–300g)的analogixif280儀器或配有hp硅膠柱(10g–100g)的biotagesp1儀器。除非另外提及，否則反相hplc純化是使用ymc-pack柱(ods-a75x30mm)作為固相進(jìn)行的。除非另外提及，否則使用25ml/mina(ch3cn-0.1％tfa):b(水-0.1％tfa)的移動(dòng)相，10-80％梯度a(10min)，在214nm處進(jìn)行uv檢測(cè)。

pesciexapi150單四極質(zhì)譜儀(pesciex，thornhill，ontario，canada)是陽(yáng)離子檢測(cè)模式下，使用電噴霧電離進(jìn)行操作。該霧化氣體產(chǎn)生自零空氣發(fā)生器(balstoninc.，haverhill，ma，usa)并在65psi遞送，而所述氣簾氣(curtaingas)是從dewar液氮容器中遞送的在50psi的高純氮。施加到電噴霧針上的電壓是4.8kv。室口(orifice)設(shè)定在25v且質(zhì)譜儀以0.5掃描/秒的速率進(jìn)行掃描，其使用0.2amu的步幅質(zhì)量并收集分布數(shù)據(jù)。

方法a，lcms。使用配有hamilton10ul注射器(其執(zhí)行向valco10通進(jìn)樣閥的注入)的ctcpal自動(dòng)采樣器(leaptechnologies，carrboro，nc)，將樣品送入該質(zhì)譜儀。所述hplc泵是lc-10advp(shimadzuscientificinstruments，columbia，md)，其以0.3ml/min和線性梯度4.5％a至90％b操作3.2分鐘，保持0.4分鐘。流動(dòng)相由容器a中的100％(h2o0.02％tfa)和容器b中的100％(ch3cn0.018％tfa)組成。固定相是aquasil(c18)且柱尺寸為1mmx40mm。檢測(cè)是由214nm處的uv、蒸發(fā)光散射(elsd)和ms進(jìn)行的。

方法b，lcms?；蛘?，使用具有l(wèi)c/ms的agilent1100分析型hplc系統(tǒng)并在1ml/min和線性梯度5％a至100％b操作2.2min，保持0.4min。流動(dòng)相由容器a中的100％(h2o0.02％tfa)和容器b中的100％(ch3cn0.018％tfa)組成。固定相是具有3.5um顆粒尺寸的zobax(c8)且柱尺寸為2.1mmx50mm。檢測(cè)是由214nm處的uv、蒸發(fā)光散射(elsd)和ms進(jìn)行的。

方法c，lcms?；蛘撸褂门溆忻?xì)管柱(50×4.6mm，5μm)的mdssciexapi2000。hplc是在配有柱zorbaxsb-c18(50×4.6mm，1.8μm)的agilent-1200系列uplc系統(tǒng)上進(jìn)行的，其用ch3cn:nh4oac緩沖液進(jìn)行洗脫。該反應(yīng)是在微波(cem，discover)中進(jìn)行的。

¹h-nmr譜在400mhz進(jìn)行記錄，其使用brukeravance400mhz儀器，配有acdspectmanagerv.10用于再處理。所指代的多重性為：s＝單峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，sxt＝六重峰，m＝多重峰，dd＝雙二重峰，dt＝雙三重峰等和br表示寬信號(hào)。除非另外提及，否則所有nmr是在dmso-d6中進(jìn)行。

分析型hplc：產(chǎn)物用以下進(jìn)行分析，agilent1100分析型色譜系統(tǒng)，具有4.5x75mmzorbaxxdb-c18柱(3.5um)，梯度從5％ch3cn(0.1％甲酸)至95％ch3cn(0.1％甲酸)的h2o溶液(0.1％甲酸)以2ml/min進(jìn)行4min，和保持1min。

中間體

中間體1

a)2-(芐基氧基)-4,6-二甲基煙腈

將2-羥基-4,6-二甲基煙腈(5g，33.7mmol)在甲苯(50ml)中的溶液用芐基氯(4.70ml，40.5mmol)和氧化銀(8.60g，37.1mmol)處理，然后在110℃攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)通過(guò)過(guò)濾并將固體用dcm(2x100ml)洗滌。將合并的有機(jī)層用鹽水(30ml)洗滌，通過(guò)na2so4過(guò)濾并真空濃縮，得到殘余物。將該殘余物在真空下，使用20-30％dcm的石油醚溶液，通過(guò)二氧化硅填料純化。將所需級(jí)分合并并濃縮，得到2-(芐基氧基)-4,6-二甲基煙腈(9g，35.9mmol，106％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.47-7.56(m，2h)，7.31-7.43(m，3h)，6.72(s，1h)，5.51(s，2h)，2.48(d，j＝3.03hz，6h)。ms(es)[m+h]⁺239.0。

b)2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲醛

在惰性氣氛下，通過(guò)注射器向2-(芐基氧基)-4,6-二甲基煙腈(9g，35.9mmol)在dcm(100ml)中的冷卻(冰浴)溶液中緩慢加入1mdibal-h在甲苯(43.1ml，43.1mmol)中的溶液。將該反應(yīng)在0℃攪拌20min，此時(shí)除去冰浴并將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。lcms顯示約14％的起始原料剩余。加入另一部分的1mdibal-h的甲苯溶液(10.76ml，10.76mmol)并將該反應(yīng)在室溫繼續(xù)攪拌。lcms指示該反應(yīng)完成。將該反應(yīng)冷卻(冰浴)并用1nhcl(50ml)淬滅。**注意放熱。將該反應(yīng)攪拌30min直到鋁鹽自由流動(dòng)。將該反應(yīng)用2.5nnaoh(約15ml，約ph7.5)中和。將該兩相混合物過(guò)濾并將濾液用dcm(100ml，2x)洗滌。分離各層并將水相用dcm(100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(30ml)洗滌，通過(guò)na2so4過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用快速色譜純化(柱：80克二氧化硅。洗脫液：0-5％etoac的庚烷溶液。梯度：15min)。將所需級(jí)分合并并真空濃縮，得到2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲醛(3.5g，14.36mmol，40.0％產(chǎn)率)，其為蓬松的白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ10.58(s，1h)，7.49(d，j＝7.07hz，2h)，7.31-7.44(m，3h)，6.67(s，1h)，5.54(s，2h)，2.59(s，3h)，2.50(s，3h)。ms(es)[m+h]⁺242.1，[m+na]⁺264.0。

c)(2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲醇

將2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲醛(3.46g，14.34mmol)在meoh(100ml)中的混懸液保持在惰性氣氛下并在冰浴中冷卻至0℃。向該攪拌的混懸液中分兩次加入nabh4(0.651g，17.21mmol)。在加入第一批nabh4后，將該混懸液倒至溶液中。將該反應(yīng)在0℃攪拌10min，此時(shí)除去冰浴并將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該反應(yīng)溶劑真空除去，然后將剩余的白色固體殘余物分配于飽和nahco3(60ml)和etoac(125ml)之間。將水層用etoac(125ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml)洗滌，通過(guò)na2so4過(guò)濾并真空濃縮，得到(2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲醇(3.5g，14.39mmol，100％產(chǎn)率)，其為無(wú)色半透明油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.44-7.53(m，2h)，7.30-7.43(m，3h)，6.63(s，1h)，5.46(s，2h)，4.72(s，2h)，2.43(s，3h)，2.35(s，3h)，2.25(br.s.，1h)。ms(es)[m+h]⁺244.1。

d)2-(芐基氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶

將(2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲醇(3.5g，14.39mmol)在dcm(70ml)中的混懸液保持在惰性氣氛下并在干冰/ch3cn浴冷卻至-40℃持續(xù)30min。向該冷卻溶液中一次性加入2msocl2的dcm溶液(10.79ml，21.58mmol)并將該反應(yīng)在-40℃繼續(xù)攪拌。1h后，lcms顯示5％起始原料剩余。加入額外的2msocl2的dcm溶液(1.439ml，2.88mmol)且該反應(yīng)繼續(xù)。20min后，將該反應(yīng)傾倒至冰水中并將ph用飽和nahco3(30ml)調(diào)節(jié)至7-8。將水層用dcm(125ml，2x)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(50ml)洗滌，通過(guò)na2so4并真空濃縮。將該殘余物用快速色譜純化(柱：80克二氧化硅。洗脫液：0-10％etoac/庚烷。梯度：14min)，得到2-(芐基氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶(2.84g，10.74mmol，74.7％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.48-7.57(m，2h)，7.30-7.45(m，3h)，6.64(s，1h)，5.47(s，2h)，4.74(s，2h)，2.43(s，3h)，2.38(s，3h)。ms(es)[m+h]⁺262.1。

中間體2

a)4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

在室溫氮?dú)庀?，?-溴-4-甲基噻吩(20.0g，113mmol)在thf(100ml)中的攪拌溶液中滴加1.3n異丙基氯化鎂氯化鋰復(fù)合物的thf溶液(90ml，117mmol)。將該反應(yīng)攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)冷卻至-78℃并用氯甲酸甲酯(12ml，155mmol)處理。將該反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時(shí)。將該反應(yīng)用etoac稀釋?zhuān)蔑柡蚽ahco3洗滌，攪拌30min(形成懸浮于水相中的白色混懸液)，用鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該產(chǎn)物在44-50℃(油浴50-75℃)真空下(4-2mmhg)進(jìn)行短程蒸餾(shortpathdistilled)。將主要且較晚洗脫的級(jí)分合并，得到產(chǎn)物4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(13.2g，85mmol，74.8％產(chǎn)率)，其為澄清液體。ms(es)[m+h]⁺156.8。

b)4-甲基-5-丙?；绶?3-甲酸甲酯

向4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(5.0g，32.0mmol)在ch3no2(50ml)中的攪拌溶液中加入liclo4(4.0g，37.6mmol)、丙酸酐(5.87ml，38.4mmol)和in(otf)3(0.9g，1.601mmol)。將該反應(yīng)在50℃攪拌2小時(shí)。lcms顯示該反應(yīng)完全。將該反應(yīng)用水(100ml)稀釋?zhuān)胐cm(2x50ml)萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空蒸發(fā)至干。將剩余棕色固體用硅膠色譜純化(iscorfgold120g，0-25％etoac的己烷溶液)(裝載有dcm)。將純級(jí)分合并并蒸發(fā)至干。將剩余的淡黃色固體用己烷研磨，過(guò)濾和真空干燥，得到產(chǎn)物4-甲基-5-丙酰基噻吩-3-甲酸甲酯(4.60g，21.67mmol，67.7％產(chǎn)率)，其為白色固體。ms(es)[m+h]⁺212.9。

中間體3

5-溴-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(12g，77mmol)在dmf(200ml)中的溶液中加入nbs(14.36g，81mmol)。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該混合物傾倒至水中(1.5l)，攪拌1h并過(guò)濾。分離5-溴-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(17.5g，70.7mmol，92％產(chǎn)率)，其為白色固體(在真空烘箱中干燥后熔化，在冷藏庫(kù)儲(chǔ)存后固化)。

中間體4

三氟甲磺酸2-氟-2-甲基丙基酯

向2-氟-2-甲基丙-1-醇(1.3g，14.11mmol)、et3n(2.361ml，16.94mmol)和dmap(0.121g，0.988mmol)在dcm(8ml)中的冷卻(-20℃)溶液中滴加tf2o(2.86ml，16.94mmol)。將該反應(yīng)在0^℃攪拌2h。將該反應(yīng)用dcm稀釋?zhuān)?m檸檬酸水溶液和飽和nahco3洗滌。將有機(jī)層干燥(na2so4)并濃縮，得到2.2g的三氟甲磺酸2-氟-2-甲基丙基酯，其為棕色油。

實(shí)施例

實(shí)施例1

5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)亞丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在冰浴中冷卻至0℃的氮?dú)庀拢ㄟ^(guò)短冷凝器，用注射器向在1l圓底燒瓶中的鋅粉(21g，321mmol)和thf(250ml)的攪拌混懸液中加入ticl4(17ml，155mmol)(有黃色煙霧的劇烈反應(yīng))。將該反應(yīng)用thf(75ml)沖洗，并將所得黑色漿液加熱回流(70℃油浴)2h(反應(yīng)停止攪拌，但在其加熱時(shí)恢復(fù))。將4-甲基-5-丙?；绶?3-甲酸甲酯(5.0g，23.56mmol)、4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(15.0g，75mmol)和吡啶(20ml，247mmol)在thf(50ml)中的溶液加入并繼續(xù)加熱2天。將該反應(yīng)冷卻至室溫，用飽和nh4cl水溶液(500ml)淬滅并用etoac(200ml)萃取。將上層etoac相小心地傾倒至硅藻土墊上并過(guò)濾。通過(guò)用新鮮的etoac攪拌深藍(lán)色水性懸浮液并傾析來(lái)重復(fù)該方案三次(注意：下層深色水性懸浮液不容易過(guò)濾并最終堵塞過(guò)濾器)。將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。

將上述粗制胺鹽酸鹽溶于dcm中(250ml)并在0℃冰浴中用et3n(6.0ml，43.0mmol)和boc2o(9.57ml，41.2mmol)處理。將該反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝夭嚢?h。將該反應(yīng)真空濃縮，溶于etoac中并用nahco3水溶液洗滌(形成大量白色固體)。將固體過(guò)濾掉并用etoac沖洗。將含有產(chǎn)物的澄清濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。除去較低的nahco3相并將etoac相用1nhcl、鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold120g，0-25％etoac的己烷溶液)。將純級(jí)分合并并蒸發(fā)至干，得到4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)亞丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.08g，14.10mmol，59.9％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油，其在真空下固化成白色固體。該反應(yīng)重復(fù)兩次，總共得到12.17g的產(chǎn)物。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.04(s，1h)，3.86(s，3h)，3.51(br.s.，2h)，3.34(br.s.，2h)，2.44(t，j＝5.8hz，2h)，2.34(br.s.，2h)，2.24(s，3h)，2.01(t，j＝5.8hz，2h)，1.48(s，9h)，0.94(t，j＝7.6hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺-boc280.0，[m+h]⁺-異丁烯324.1，m+na⁺402.1。

b)5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)亞丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(12.1g，31.9mmol)中加入hcl的二噁烷溶液(30ml，120mmol)。攪拌30min后，將該反應(yīng)蒸發(fā)至干，得到粗制的胺鹽酸鹽，其為白色固體泡沫。

在0℃冰浴中，向2,2-二氟丙-1-醇(16.3g，170mmol)和吡啶(16.3ml，202mmol)在ch3cn(250ml)中的攪拌溶液中滴加tf2o(28ml，166mmol)。將該反應(yīng)在0℃攪拌30min，然后加入冰塊至上述胺鹽酸鹽和k2co3(46.8g，339mmol)在ch3cn(100ml)中的漿液中。將該反應(yīng)用ch3cn(50ml)漂洗。將該反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝?，加熱?0℃并攪拌6h。將該反應(yīng)真空蒸發(fā)至干，溶于dcm中，用水，鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold120g，5-15％etoac的己烷溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干，得到5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(10.05g，24.74mmol，78％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.03(s，1h)，3.86(s，3h)，2.70(t，j＝12.6hz，4h)，2.57-2.43(m，4h)，2.32(br.s.，2h)，2.25(s，3h)，2.06(br.s.，2h)，1.67(t，j＝18.8hz，3h)，0.94(t，j＝7.5hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺358.2。

c)5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(10.0g，28.0mmol)在meoh(150ml)中的攪拌溶液中加入5nnaoh(20ml，100mmol)。將該反應(yīng)在70℃攪拌4h。將該反應(yīng)真空濃縮以除去meoh并用6nhcl(16.7ml)中和至ph約7。形成膠質(zhì)，將其用dcm萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并蒸發(fā)成固體泡沫。

向上述物質(zhì)中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(5.8g，30.7mmol)、hoat(3.8g，27.9mmol)、dcm(150ml)和nmm(3.4ml，30.9mmol)。將所有固體塊用攪拌棒打碎。向該攪拌混懸液中加入edc游離堿(5.0g，32.2mmol)。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h，然后在40℃用連接的回流冷凝器過(guò)夜。將該反應(yīng)真空濃縮。將該渾濁溶液通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并用少量的dcm沖洗。將澄清濾液濃縮并用硅膠色譜純化(iscorfgold220g，0-5％etoh的etoac溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干。將所得固體用10％etoac/己烷研磨，過(guò)濾，用己烷洗滌和真空干燥，得到5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(11.56g，24.20mmol，87％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.48(s，1h)，8.01(t，j＝5.1hz，1h)，7.78(s，1h)，5.86(s，1h)，4.24(d，j＝5.1hz，2h)，2.71(t，j＝14.1hz，2h)，2.61(t，j＝4.7hz，2h)，2.46(br.s.，2h)，2.38(t，j＝5.6hz，2h)，2.30-2.21(m，2h)，2.18(s，3h)，2.11(s，3h)，2.07(s，3h)，1.93(t，j＝5.3hz，2h)，1.62(t，j＝19.2hz，3h)，0.86(t，j＝7.5hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺478.3。

實(shí)施例2

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-甲基-5-(1-(哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯鹽酸鹽(160mg，0.507mmol)在ch3cn(5ml)中的溶液中加入cs2co3(330mg，1.013mmol)和三氟甲磺酸2-氟-2-甲基丙基酯(454mg，2.026mmol)。將該混合物在50℃加熱18h。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水淬滅并用etoac(3x)萃取。將合并的有機(jī)物干燥(na2so4)并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-50％etoac/己烷)，得到5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(92mg)，其為無(wú)色油。ms(es)[m+h]⁺354.3。

b)n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(90mg，0.255mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入8nnaoh(0.159ml，1.273mmol)。將該混合物在35℃加熱18h。將該混合物用6nhcl(0.212ml，1.273mmol)中和，濃縮。

向該殘余物在二甲基亞砜(2.000ml)中的溶液中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(62.4mg，0.331mmol)、nmm(0.140ml，1.273mmol)、edc(98mg，0.509mmol)和hoat(69.3mg，0.509mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。將該混合物用水(10ml)淬滅。將所得沉淀物通過(guò)過(guò)濾收集，用水洗滌并真空干燥，得到n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(105mg)，其為灰白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.86(t，j＝7.45hz，3h)，1.28(s，3h)，1.33(s，3h)，1.93(t，j＝5.31hz，2h)，2.07(s，3h)，2.11(s,3h)，2.18(s，3h)，2.20-2.32(m，2h)，2.34-2.46(m，6h)，4.23(d，j＝5.05hz，2h)，5.86(s，1h)，7.78(s，1h)，8.01(t，j＝4.93hz，1h)。ms(es)[m+h]⁺474.3.

實(shí)施例3

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例2的一般操作，制備n-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.48(s，1h)，8.01(t，j＝4.93hz，1h)，7.79(s，1h)，5.86(s，1h)，4.24(d，j＝5.05hz，2h)，3.33(s，2h)，3.18(q，j＝10.27hz，2h)，2.69(d，j＝5.05hz，2h)，2.39(t，j＝5.56hz，2h)，2.26(d，j＝6.82hz，2h)，2.18(s，3h)，2.11(s，3h)，2.07(s，3h)，1.93(t，j＝5.31hz，2h)，0.87(t，j＝7.45hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺482.3。

實(shí)施例4

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)4-丙?；哙?1-甲酸叔丁酯

在0℃(冰浴)氮?dú)庀?，?-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.0g，36.7mmol)在thf(100ml)中的攪拌溶液中滴加2n乙基氯化鎂在thf(28ml，56.0mmol)。將該反應(yīng)在0℃攪拌4h，然后用飽和nh4cl淬滅，用etoac萃取，用鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空蒸發(fā)至干。將該粗產(chǎn)物用硅膠色譜純化(iscorfgold220g，0-40％etoac的己烷溶液)。(uv陰性，通過(guò)h2so4的etoh溶液炭化來(lái)顯現(xiàn))。將純級(jí)分合并并蒸發(fā)至干，得到4-丙?；哙?1-甲酸叔丁酯(8.10g，33.6mmol，91％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。ms(es)[m+h]+-異丁烯-18167.9，[m+h]+-異丁烯186.0，m+na+264.1。

b)(z)-4-(1-(((三氟甲基)磺?；?氧基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在-78℃(co2，丙酮)氮?dú)庀?，?-丙?；哙?1-甲酸叔丁酯(6.9g，28.6mmol)在thf(80ml)中的攪拌溶液中滴加1nnahmds的thf溶液(31ml，31.0mmol)。將該反應(yīng)在-78℃攪拌1h。接下來(lái)滴加2-ntf2-吡啶(11.4g，31.8mmol)在thf(50ml)中的，歷時(shí)5min。將該反應(yīng)在-78℃攪拌1h，然后在0℃攪拌30min。將該反應(yīng)用水(150ml)淬滅，用etoac(2x150ml)萃取，用鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該粗產(chǎn)物用硅膠色譜純化(iscorfgold220g，0-20％etoac的己烷溶液)。(uv陰性，通過(guò)h2so4的etoh溶液炭化來(lái)顯現(xiàn))。將純級(jí)分合并并蒸發(fā)至干，得到(z)-4-(1-(((三氟甲基)磺?；?氧基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.15g，24.51mmol，86％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。ms(es)[m+h]+-異丁烯318.1。

c)(z)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷)(17.39g，68.5mmol)、5-溴-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(7g，29.8mmol)和koac(9.64g，98mmol)在1,4-二噁烷(200ml)中的脫氣溶液中加入pdcl2(dppf)-dcm加合物(1.216g，1.489mmol)。將該反應(yīng)混合物在70℃加熱過(guò)夜，此時(shí)將該混懸液通過(guò)二氧化硅短墊過(guò)濾。向該濾液中加入(e)-4-(1-(((三氟甲基)磺?；?氧基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.67g，17.86mmol)、水(60ml)和na2co3(7.89g，74.4mmol)。將該溶液脫氣并加入pd(pph3)4(1.720g，1.489mmol)。將該反應(yīng)混合物在70℃加熱1h。將該反應(yīng)用etoac(200ml)稀釋并過(guò)濾。分離各層并將有機(jī)物用鹽水洗滌，用mg2so4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。將該殘余物用快速色譜純化(8％thf:己烷)，得到(z)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.2g，15.52mmol，52.1％產(chǎn)率)，其為白色固體。ms(es)[m+h]⁺402.2(m+na)

d)4-甲基-5-(1-(哌啶-4-基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯

向(z)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.2g，16.34mmol)在etoh(120ml)中的溶液中加入10％pd/c(degussa，12g，11.28mmol)。將該反應(yīng)在氫氣氛下(氣球)攪拌24h，此時(shí)將該混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾并蒸發(fā)。將該殘余物溶于二噁烷(10ml)中并加入3mhcl(10ml)。將該反應(yīng)混合物加熱回流10min，然后蒸發(fā)。將該殘余物分配于etoac(100ml)和1mna2co3(50ml)之間。分離各層并將有機(jī)物用鹽水洗滌，用mgso4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)，得到4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.6g，8.78mmol，53.7％產(chǎn)率)，其為無(wú)色液體。ms(es)[m+h]⁺282.2。

e)(s)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯和(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向2,2-二氟丙-1-醇(3.17g，33.0mmol)和吡啶(2.97ml，36.7mmol)在ch3cn(100ml)中的冷卻(0℃)溶液中滴加tf2o(5.70ml，33.8mmol)。將該反應(yīng)在0℃攪拌30min。向該冷卻漿液中加入4-甲基-5-(1-(哌啶-4-基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯鹽酸鹽(2.6g，7.34mmol)和k2co3(9.13g，66.0mmol)在ch3cn(20ml)中的冷溶液。將該反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝?，然后?0℃加熱過(guò)夜。將該反應(yīng)真空蒸發(fā)至干，溶于dcm，用水，鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold120g，5％etoac:己烷)，得到5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(2.05g，5.42mmol，73.8％產(chǎn)率)，其為黃色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.00(s，1h)，3.85(s，3h)，2.99(d，j＝11.12hz，1h)，2.86(d，j＝11.12hz，1h)，2.53-2.75(m，3h)，2.37(s，3h)，2.04-2.27(m，2h)，1.84-2.01(m，2h)，1.62(t，j＝18.69hz，4h)，1.30-1.47(m，5h)，0.76(t，j＝7.33hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺360.2。

通過(guò)手性hplc(chiralcelod-h，5微米，30mmx250mm，250nmuv，98:2:0.1正庚烷:2-丙醇:異丙胺)拆分外消旋產(chǎn)物。將該拆分的產(chǎn)物用2-丙醇稀釋兩次并濃縮，然后在真空烘箱中(50℃)干燥，得到：

s-(-)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(870mg)：>99.8％ee，[α]d＝-9.6°(c＝0.50，meoh，24℃)和

r-(+)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(860mg)：99.74％ee；[α]d＝+8.8°(c＝0.50，meoh，24℃)。

f)(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(860mg，2.392mmol)在meoh(10ml)中的溶液中加入3mnaoh(5ml，400mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，此時(shí)將其用6mhcl中和并蒸發(fā)至干。

向該殘余物在dmf(10.00ml)中的混懸液中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(542mg，2.87mmol)，然后加入edc(550mg，2.87mmol)和hoat(391mg，2.87mmol)。5min后，加入nmm(0.789ml，7.18mmol)并將該溶液在室溫?cái)嚢?h。將該反應(yīng)混合物傾倒至60ml水中并用etoac(2x50ml)萃取。將合并的有機(jī)物用水(30ml)，鹽水洗滌，用mgso4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。將該殘余物從20％ch3cn:水中重結(jié)晶，得到(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(780mg，1.626mmol，68.0％產(chǎn)率)，其為白色固體(注意：乙基基團(tuán)的絕對(duì)立體化學(xué)是根據(jù)關(guān)于ezh2抑制的r-異構(gòu)體的已知偏好指定的)。¹hnmr(400mhz，meoh-d4)δ7.60(s，1h)，6.12(s，1h)，4.45(s，2h)，3.01(d，j＝11.62hz，1h)，2.89(d，j＝11.12hz，1h)，2.74(ddd，j＝3.79，7.89，11.05hz，1h)，2.64(t，j＝14.02hz，2h)，2.37(s，2h)，2.25(d，j＝5.56hz，6h)，2.18(dt，j＝2.40，11.56hz，1h)，2.03-2.11(m，1h)，1.86-2.01(m，2h)，1.60(t，j＝18.69hz，3h)，1.20-1.49(m，5h)，0.76(t，j＝7.33hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺480.3。

實(shí)施例5

(s)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例4f的操作，制備(s)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺。¹hnmr(400mhz，meoh-d4)δ7.60(s，1h)，6.13(s，1h)，4.45(s，2h)，3.01(d，j＝11.62hz，1h)，2.89(d，j＝10.61hz，1h)，2.74(ddd，j＝3.79，7.89，11.05hz，1h)，2.65(t，j＝14.15hz，2h)，2.38(s，3h)，2.25(d，j＝6.06hz，6h)，2.18(dt，j＝2.53，11.62hz，1h)，2.07(dt，j＝2.53，11.62hz，1h)，1.87-2.01(m，2h)，1.60(t，j＝18.82hz，3h)，1.18-1.48(m，5h)，0.76(t，j＝7.20hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺480.3。

實(shí)施例6

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例4的操作，制備外消旋n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.62-0.76(m，3h)，1.08-2.97(m，24h)，3.26-3.41(m，2h)，4.17-4.31(m，2h)，5.79-5.94(m，1h)，7.68(s，1h)，7.98(t，j＝4.93hz，1h)。ms(es)[m+h]⁺476.3。

實(shí)施例7

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)亞丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.63mmol)中加入hcl的二噁烷溶液(20ml，658mmol)。攪拌30min后，將該反應(yīng)真空蒸發(fā)至干，得到脫保護(hù)的哌啶鹽酸鹽，其為白色固體泡沫。

向該白色固體在acoh(10ml)中的溶液中分批滴加nano2(0.46g，6.67mmol)在水(2.5ml)中的，歷時(shí)2h。將該反應(yīng)通過(guò)lcms監(jiān)測(cè)。2h后，該反應(yīng)完成91％(n-亞硝基中間體ms(es)[m+h]⁺309.2)。向該反應(yīng)中分批緩慢加入鋅粉(1.5g，22.94mmol)。該反應(yīng)變得溫?zé)嶂量捎|摸并在冰浴中冷卻。在室溫?cái)嚢?h后，將該反應(yīng)通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾以除去鋅并用少量的meoh(15ml)沖洗。向該濾液中加入37重量％的甲醛水溶液(2.0ml，26.9mmol)。向該攪拌混合物中分批加入nabh(oac)3(2.3g，10.85mmol)，歷時(shí)30min。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。lcms顯示17％所需的二甲基肼。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)至干，溶于dcm中，用1nna2co3處理并攪拌30min。將該混懸液通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并用少量的dcm沖洗。將澄清濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。將含有產(chǎn)物的較低有機(jī)相除去，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，0-8％etoh的etoac溶液)。(用3至5％etoh從柱中洗脫該產(chǎn)物)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并并蒸發(fā)至干，得到5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(200mg，0.360mmol，13.65％產(chǎn)率)，其為淡黃色油。ms(es)[m+h]⁺323.2。

b)n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(200mg，0.620mmol)在meoh(20ml)中的溶液中加入1nnaoh(4ml，4.00mmol)。將該反應(yīng)在70℃加熱4h。將該反應(yīng)真空濃縮以除去meoh并用1nhcl(4.0ml)中和。形成白色固體混懸液。將該混合物真空蒸發(fā)，得到粗制甲酸，其為白色固體。

向上述物質(zhì)中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(150mg，0.795mmol)、hoat(84mg，0.62mmol)、dcm(20ml)和nmm(90μl，0.819mmol)。將該固體塊用攪拌棒弄碎。向攪拌的混懸液中加入edc游離堿(130mg，0.837mmol)。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h，然后在連有回流冷凝器的情況下在40℃攪拌4h。將該渾濁溶液通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并用少量的dcm沖洗。將澄清濾液濃縮并用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，2-10％(5％nh4oh/meoh)的dcm溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干。將該殘余物通過(guò)硅膠色譜再純化(iscorfgold40g，15-40％etoh的etoac溶液)。將純級(jí)分合并，真空濃縮，用己烷研磨，過(guò)濾，用己烷洗滌和真空干燥，得到n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-(二甲基氨基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(144mg，0.325mmol，52.5％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.49(s，1h)，8.02(t，j＝5.1hz，1h)，7.78(s，1h)，5.86(s，1h)，4.24(d，j＝5.1hz，2h)，2.61(br.s.，2h)，2.45(br.s.，2h)，2.40(t，j＝5.4hz，3h)，2.26(br.s.，2h)2.25(s，6h)，2.18(s，3h)，2.11(s，3h)，2.06(s，3h)，1.94(t，j＝5.4hz，2h)，0.86(t，j＝7.5hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺443.3。

實(shí)施例8

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-羥基哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)5-(1-(1-(苯甲?；趸?哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)亞丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.63mmol)中加入hcl的二噁烷溶液(20ml，658mmol)。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?0min，然后真空蒸發(fā)至干，得到胺鹽酸鹽，其為白色固體泡沫。向上述的thf溶液(20ml)中加入na2hpo4(2.5g，17.61mmol)。將該反應(yīng)攪拌并用過(guò)氧苯甲酰(1.0g，4.13mmol)分批處理，歷時(shí)30min。在室溫?cái)嚢?h后，lcms未見(jiàn)任何變化。將該反應(yīng)在50℃攪拌過(guò)夜。lcms顯示大部分為所需產(chǎn)物。將該反應(yīng)冷卻至室溫，真空蒸發(fā)至干，溶于etoac中，用1nna2co3，鹽水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold80g，10-40％etoac的己烷溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干，得到5-(1-(1-(苯甲?；趸?哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.64g，1.602mmol，60.8％產(chǎn)率)，其為白色泡沫。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.06(s，1h)，8.04-8.01(m，2h)，7.62-7.56(m，1h)，7.50-7.43(m，2h)，3.87(s，3h)，3.61(br.s.，1h)，3.42(br.s.，1h)，3.02(br.s.，1h)，2.85(br.s.，2h)，2.60(br.s.，1h)，2.38(br.s.，4h)，2.30(br.s.，3h)，0.97(t，j＝7.5hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺400.2。

b)n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-羥基哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向5-(1-(1-(苯甲?；趸?哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.64g，1.602mmol)在meoh(25ml)中的攪拌溶液中加入5nnaoh(2.0ml，10.00mmol)。將該反應(yīng)在70℃加熱16h。將該反應(yīng)真空濃縮以除去meoh，然后用6nhcl(1.7ml)中和。形成白色固體混懸液。將該混合物真空蒸發(fā)，得到粗制去苯甲?；募姿?，其為灰白色固體，其被苯甲酸污染。

向上述物質(zhì)中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(0.604g，3.20mmol)、dcm(40ml)和nmm(0.352ml，3.20mmol)。將該固體塊用攪拌棒弄碎。向攪拌的混懸液中加入edc游離堿(0.547g，3.52mmol)。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h，然后在40℃加熱4h。lcms顯示所需產(chǎn)物，其為o-苯甲?；苌?注意：反應(yīng)混合物中存在的苯甲酸導(dǎo)致重新苯甲?；?和其他雜質(zhì)。將該渾濁溶液通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并用少量的dcm沖洗。將澄清濾液濃縮并用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，0-10％etoh的etoac溶液)。將含有o-苯甲?；a(chǎn)物的級(jí)分合并并蒸發(fā)至干。將該殘余物溶于meoh(25ml)中并用5nnaoh(1.5ml)處理。將該反應(yīng)在70℃加熱過(guò)夜。將該反應(yīng)用6nhcl(1.3ml)中和并真空蒸發(fā)至干。將該殘余物溶于dcm中，用nahco3水溶液洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，10-20％etoh的etoac溶液)，得到n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(1-羥基哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(251mg，0.604mmol，37.7％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.49(br.s.，1h)，8.02(t，j＝5.1hz，1h)，7.97(s，1h)，7.79(s，1h)，5.87(s，1h)，4.24(d，j＝4.8hz，2h)，3.16(br.s.，1h)，2.98(br.s.，1h)，2.73-2.66(m，1h)，2.42-2.32(m，1h)，2.31-2.17(m，2h)，2.18(s，3h)，2.11(s，3h)，2.07(br.s.，3h)，2.02(br.s.，1h)，1.92(br.s.，1h)，0.86(t，j＝7.5hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺416.2。

實(shí)施例9

5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

a)(z)-4-甲基-2-(2-硝基乙烯基)噻吩

將4-甲基噻吩-2-甲醛(10.0g，79.3mmol)、ch3no2(100ml)和nh4oac(1.1g，14.27mmol)的溶液在100℃加熱4h。將該反應(yīng)冷卻至室溫并真空濃縮。將該殘余物溶于etoac中，用1nhcl、nahco3水溶液、鹽水洗滌，干燥(mgso4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold120g，0-15％etoac的己烷溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干，得到(z)-4-甲基-2-(2-硝基乙烯基)噻吩(9.63g，56.91mmol，71.8％產(chǎn)率)，其為黃色油(在真空下固化)。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.10(d，j＝13.4hz，1h)，7.47(d，j＝13.4hz，1h)，7.27(s，1h)，7.17(s，1h)，2.31(d，j＝0.8hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺170.0。

b)(2-(4-甲基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸乙酯

在氮?dú)庀?，?nlibh4溶液(120ml，240mmol)中滴加tmscl(60ml，473mmol)，歷時(shí)10min。該反應(yīng)變成白色混懸液。攪拌15min后，緩慢滴加(z)-4-甲基-2-(2-硝基乙烯基)噻吩(9.60g，56.74mmol)在thf(50ml)中的溶液，歷時(shí)約20min。觀察到劇烈的冒泡。該反應(yīng)變得微熱至可觸摸，然后在冰浴中冷卻，同時(shí)定時(shí)加冰。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h，然后溫?zé)嶂?0℃并攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)在冰浴中冷卻并小心地用meoh(200ml)淬滅。攪拌1h后，將該反應(yīng)真空濃縮，得到粗制2-氨基乙基-4-甲基噻吩。ms(es)[m+h]⁺142.1。

向粗制的2-氨基乙基-4-甲基噻吩在dcm(200ml)和水(100ml)中的冷卻(0℃)溶液中緩慢滴加na2co3(25g，235.9mmol)和etococl(0.710ml，7.39mmol)。將所得混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?h。將該反應(yīng)通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并將澄清濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。將較低的有機(jī)相除去，干燥(mgso4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold120g，10-30％etoac的己烷溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干，得到(2-(4-甲基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸乙酯(9.29g，43.55mmol，76.7％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ6.74(s，1h)，6.66(s，1h)，4.80(br.s.，1h)，4.14(q，j＝6.9hz，2h)，3.46(q，j＝6.3hz，2h)，2.98(t，j＝6.6hz，2h)，2.24(d，j＝0.8hz，3h)，1.26(t，j＝7.1hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺214.1。

c)3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

向(2-(4-甲基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸乙酯(9.20g，43.13mmol)中加入pocl3(100ml，107mmol)和p2o5(14g，98.6mmol)。將該混合物加熱回流3h(該混合物暫時(shí)地形成膠狀沉淀物，其最終通過(guò)加熱溶解)。將該深色反應(yīng)混合物冷卻至室溫并真空蒸發(fā)至干。將該殘余物小心地用冰淬滅，用na2co3水溶液堿化，用dcm萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold80g，30-80％etoac的己烷溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干，用己烷研磨，過(guò)濾和真空干燥，得到3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(2.22g,13.27mmol，30.78％產(chǎn)率)，其為灰白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ6.72(m，1h)，5.75(br.s.，1h)，3.62(t，j＝6.2hz，2h)，3.05(t，j＝6.7hz，2h)，2.50(d，j＝1.3hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺168.0。

d)3-甲基-2-丙?；?6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

向3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(1.6g，9.57mmol)在ch3no2(50ml)中的溶液中加入liclo4(1.23mg，11.57mmol)、丙酸酐(3.08ml，20.12mmol)和in(otf)3(308mg，0.547mmol)。將該反應(yīng)在70℃加熱4h。將該反應(yīng)冷卻至室溫，用水(200ml)稀釋?zhuān)胐cm(100ml)萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空蒸發(fā)至干。將該殘余物溶于meoh(200ml)中。向該混合物中加入k2co3(10.0g，72.4mmol)。將該反應(yīng)在60℃加熱過(guò)夜。將該反應(yīng)蒸發(fā)至干，用1nhcl(150ml)酸化，用dcm萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold80g，20-50％etoac的dcm溶液)(裝載在大量的dcm中)。將純級(jí)分合并，蒸發(fā)至干，用己烷研磨，過(guò)濾和真空干燥，得到3-甲基-2-丙?；?6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(2101.59g，7.12mmol，74.4％產(chǎn)率)，其為亮黃色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.97(br.s.，1h)，3.63(t，j＝6.6hz，2h)，3.08(t，j＝6.7hz，2h)，2.88(s，3h)，2.87(q，j＝7.3hz，2h)，1.23(t，j＝7.2hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺224.1。

e)2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

向3-甲基-2-丙?；?6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(280mg，1.254mmol)和n,n-二甲基哌啶-4-胺(325mg，2.53mmol)中加入ti(oipr)4(0.80ml，2.73mmol)和苯(3ml)。將該反應(yīng)在80℃攪拌18h。將該反應(yīng)用meoh(3ml)稀釋?zhuān)缓蠓謨膳尤雗abh3cn(315mg，5.02mmol)，歷時(shí)2h。將該反應(yīng)在60℃加熱并再攪拌2h。將該反應(yīng)真空蒸發(fā)至干，溶于(9:1)dcm/meoh(15ml)中并用1nna2co3(10ml)處理。將所得混懸液攪拌30min。將該混懸液通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾(緩慢地)并用(9:1)dcm/meoh(5ml)漂洗。將澄清濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。將較低的有機(jī)相除去，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，5-20％(5％nh4oh/meoh)的dcm溶液)。將純級(jí)分合并并蒸發(fā)至干，得到2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(360mg，1.019mmol，81％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。(在真空下固化成白色固體泡沫)。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.59(br.s.，1h)，3.69(dd，j＝4.7，9.5hz，1h)，3.59(dt，j＝2.8，6.8hz，2h)，3.18-3.07(m，1h)，3.01(t，j＝6.8hz，2h)，2.97-2.93(m，1h)，2.44(s，3h)，2.29(s，6h)，2.17-1.88(m，4h)，1.88-1.72(m，2h)，1.70-1.39(m，3h)，0.81(t，j＝7.3hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺336.3。

f)5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

在氮?dú)夥障?，?-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(350mg，1.043mmol)在dmf(5ml)中的冷卻(0℃)溶液中滴加1nkotbu的thf溶液(1.3ml，1.30mmol)。將該混合物攪拌5min，然后一次性加入2-(芐基氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶(350mg，1.337mmol)的thf(1ml)溶液。在0℃攪拌15min后，將該混合物用飽和nh4cl(1.5ml)淬滅并真空蒸發(fā)至基本干。將該殘余物用na2co3水溶液(5ml)稀釋?zhuān)胐cm萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，0-15％(5％nh4oh/meoh)的dcm溶液)。將純級(jí)分合并并真空蒸發(fā)至干，得到5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(530mg，0.945mmol，91％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.51-7.43(m，2h)，7.41-7.30(m，3h)，6.64(s，1h)，5.43(s，2h)，4.87-4.74(m，2h)，3.68(dd，j＝4.7，9.5hz，1h)，3.38(t，j＝6.8hz，2h)，3.10(d，j＝10.9hz，1h)，2.95(dd，j＝2.3，11.1hz，1h)，2.71(t，j＝6.8hz，2h)，2.46(s，3h)，2.44(s，3h)，2.35(s，3h)，2.29(s，6h)，2.17-1.88(m，4h)，1.79(t，j＝15.3hz，2h)，1.69-1.38(m，3h)，0.80(t，j＝7.3hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺561.4。

g)5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

向5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(530mg，0.945mmol)中加入tfa(10ml，130mmol)。將該溶液加熱至45℃并攪拌3h。將該反應(yīng)真空蒸發(fā)至干。將該殘余物用1nna2co3(5ml)堿化，用dcm萃取，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，10-20％(5％nh4oh/meoh)的dcm溶液)。將純級(jí)分合并，蒸發(fā)至干，用己烷研磨，過(guò)濾和真空干燥，得到5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(520mg，1.050mmol)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.54(br.s.，1h)，5.88(s，1h)，4.54-4.42(m，2h)，3.71(dd，j＝5.2，8.7hz，1h)，3.50(t，j＝6.7hz，2h)，3.07(d，j＝10.1hz，1h)，2.89(d，j＝10.1hz，1h)，2.85(t，3h)，2.68(br.s.，1h)，2.51(s，6h)(隱藏在dmso峰下)，2.36(s，3h)，2.16(s，3h)，2.12(s，3h)，2.04-1.76(m，5h)，1.59-1.34(m，3h)，0.75(t，j＝7.2hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺471.3。

實(shí)施例10

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)5-(1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

通過(guò)短冷凝器向鋅(12.60g，193mmol)在thf(150ml)中的冷卻(0℃)混懸液中滴加ticl4(10.26ml，93mmol)。將該混合物加熱回流2h。將該混合物冷卻至室溫并加入4-甲基-5-丙?；绶?3-甲酸甲酯(3g，14.13mmol)、1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(6.62g，42.4mmol)和吡啶(12.00ml，148mmol)在thf(30ml)中的溶液。將該反應(yīng)混合物加熱回流20h。將該混合物冷卻至室溫，用水(100ml)和etoac(150ml)處理并通過(guò)短硅藻土墊過(guò)濾。將該藍(lán)色固體用etoac洗滌。收集濾液有機(jī)層，干燥(na2so4)并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-60％etoac/己烷)，得到5-(1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(1.71g，36％)，其為無(wú)色油。ms(es)[m+h]⁺337.2

b)4-甲基-5-(1-(4-氧代環(huán)己亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯

向5-(1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(1.5g，4.46mmol)在1,4-二噁烷(20ml)中的溶液中加入6nhcl(5.94ml，35.7mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。將該混合物濃縮并將該殘余物用10％nahco3處理并用etoac(3x)萃取。將萃取物干燥(na2so4)并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-70％etoac/己烷)，得到4-甲基-5-(1-(4-氧代環(huán)己亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯(1.1g)，其為無(wú)色油。ms(es)[m+h]⁺293.2

c)5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-甲基-5-(1-(4-氧代環(huán)己亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯(110mg，0.376mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入3-甲氧基氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽(60.4mg，0.489mmol)、diea(0.085ml，0.489mmol)和acoh(0.043ml，0.752mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?0min，此時(shí)加入nabh3cn(70.9mg，1.129mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。lcms未監(jiān)測(cè)到反應(yīng)。將該混合物加熱至50℃持續(xù)6h。lcms顯示沒(méi)有所需產(chǎn)物，而是顯示出還原的環(huán)己醇。將該混合物用10％nahco3淬滅并用etoac(3x)萃取。將該萃取物干燥(na2so4)并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-60％etoac/己烷)，得到5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(36mg)，其為灰白色固體。ms(es)[m+h]⁺295.2

d)n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(35mg，0.119mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入naoh(0.074ml，0.594mmol)。將該混合物在40℃加熱18h。將該混合物用hcl(0.099ml，0.594mmol)處理并濃縮。將該殘余物真空干燥并用二甲基亞砜(2.000ml)處理。向該混合物中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(29.2mg，0.155mmol)、nmm(0.078ml，0.713mmol)、edc(45.6mg，0.238mmol)和hoat(32.4mg，0.238mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。將該反應(yīng)混合物用水(10ml)淬滅并將所得沉淀物通過(guò)過(guò)濾收集和真空干燥，得到n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-5-(1-(4-羥基環(huán)己亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(45mg，88％)，其為灰白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.87(t，j＝7.45hz，3h)，1.10-1.50(m，2h)，1.60-1.90(m，3h)，1.96-2.30(m，13h)，3.66(m，1h)，4.24(d，j＝5.05hz，2h)，4.54(d，j＝4.04hz，1h)，5.87(s，1h)，7.70-7.82(m，1h)，7.92-8.11(m，1h)。ms(es)[m+h]⁺415.2

實(shí)施例11

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)丙基)噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例4的操作，制備外消旋n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)丙基)噻吩-3-甲酰胺(117.7mg，0.243mmol，47.8％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.47(s，1h)，7.98(t，j＝5.05hz，1h)，7.69(s，1h)，5.86(s，1h)，4.23(d，j＝5.05hz，2h)，3.07(d，j＝10.36hz，2h)，2.90(br.s.，1h)，2.83(d，j＝10.36hz，1h)，2.64-2.77(m，1h)，2.26(s，1h)，2.15-2.20(m，6h)，2.11(s，3h)，1.82(br.s.，2h)，1.03-1.42(m，6h)，0.69(t，j＝7.20hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺484.3。

實(shí)施例12

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(噁唑-2-基甲基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺

a)4-甲基-5-(1-(1-(噁唑-2-基甲基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯

向4-甲基-5-(1-(哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯鹽酸鹽(60mg，0.190mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入噁唑-2-甲醛(23.97mg，0.247mmol)、diea(0.043ml，0.247mmol)和acoh(0.023ml，0.399mmol)。將該混合物攪拌20min，此時(shí)加入nabh3cn(47.7mg，0.760mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。將該混合物用10％nahco3淬滅并用etoac(3x)萃取。將該萃取物干燥(na2so4)并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-80％etoac/己烷)，得到4-甲基-5-(1-(1-(噁唑-2-基甲基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯(49mg)，其為無(wú)色油。ms(es)[m+h]⁺361.2。

b)n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(噁唑-2-基甲基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例1c的一般操作，制備n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(噁唑-2-基甲基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺(27mg，42％產(chǎn)率)。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.85(t，j＝7.45hz，3h)，1.71-1.80(m，1h)，1.93(t，j＝5.43hz，2h)，2.05(s，3h)，2.11(s，3h)，2.18(s，3h)，2.19-2.45(m，5h)，3.52-3.75(m，3h)，4.23(d，j＝5.05hz，2h)，5.86(s，1h)，7.16(d，j＝0.76hz，1h)，7.78(s，1h)，7.93-8.15(m，2h)。ms(es)[m+h]⁺481.3。

實(shí)施例13

n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(嘧啶-2-基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺

a)4-甲基-5-(1-(1-(嘧啶-2-基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯

向4-甲基-5-(1-(哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯鹽酸鹽(98mg，0.310mmol)在1,4-二噁烷(3ml)中的溶液中加入2-氯嘧啶(42.6mg，0.372mmol)和k2co3(51.5mg，0.372mmol)。將該混合物加熱回流18h。將該混合物過(guò)濾并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-100％etoac/己烷)，得到4-甲基-5-(1-(1-(嘧啶-2-基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酸甲酯(84mg)，其為灰白色固體。ms(es)[m+h]⁺358.2。

b)n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(嘧啶-2-基)哌啶-4-亞基)丙基)噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例1c的一般操作，制備n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-5-(1-(1-(嘧啶-2-基)哌啶-4-亞基丙基)噻吩-3-甲酰胺(91mg，80％產(chǎn)率)。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.85(t，j＝7.45hz，3h)，1.71-1.80(m，1h)，1.93(t，j＝5.43hz，2h)，2.05(s，3h)，2.11(s，3h)，2.18(s，3h)，2.19-2.45(m，5h)，3.52-3.75(m，3h)，4.23(d，j＝5.05hz，2h)，5.86(s，1h)，7.16(d，j＝0.76hz，1h)，7.78(s，1h)，7.93-8.15(m，2h)。ms(es)[m+h]⁺478.3。

實(shí)施例14

5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例4的操作，制備外消旋5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(109mg，0.234mmol)。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.78(br.s.，1h)，7.43(s，1h)，7.38(t，j＝5.56hz，1h)，5.94-6.02(m，1h)，5.66-5.89(m，1h)，4.51(d，j＝5.81hz，2h)，2.78-3.06(m，2h)，2.60-2.77(m，3h)，2.39(s，3h)，2.27(s，6h)，1.98-2.19(m，2h)，1.81-1.97(m，2h)，1.30-1.48(m，4h)，0.67-0.94(m，4h)。ms(es)[m+h]⁺466.2。

實(shí)施例15

5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)5-(1-(1-(n’-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)亞丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.63mmol)中加入hcl的1,4-二噁烷溶液(15ml，60.0mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘然后真空蒸發(fā)至干成為固體泡沫。

向異硫氰酸甲酯(200mg，2.74mmol)在etoh(10ml)中的溶液中加入氰胺一鈉(180mg，2.81mmol)。將該混合物加熱回流(80℃油浴)3h，此時(shí)將其冷卻至室溫。向該混合物中加入上述胺鹽酸鹽在dmf中的溶液(5.0ml)。加入edc游離堿(450mg，2.90mmol)并將該反應(yīng)攪拌2h。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，溶于dcm中，用水洗滌，干燥(na2so4)，過(guò)濾并真空濃縮。通過(guò)硅膠色譜純化該殘余物(iscorfgold80g，0-10％etoh的etoac溶液)，得到5-(1-(1-(n’-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.72g，1.997mmol，76％產(chǎn)率)，其為白色固體泡沫。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.05(s，1h)，5.06-4.99(m，1h)，3.87(s，3h)，3.62(br.s.，2h)，3.38(br.s.，2h)，3.05(d，j＝4.8hz，3h)，2.59(t，j＝5.8hz，2h)，2.39-2.30(m，2h)，2.24(s，3h)，2.16(t，j＝5.9hz，2h)，0.94(t，j＝7.6hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺361.2。

b)5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向5-(1-(1-(n’-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.70g，1.942mmol)在meoh(20ml)中的溶液中加入5nnaoh(2.0ml，10.00mmol)。將該反應(yīng)在70℃攪拌6h。將該反應(yīng)真空濃縮，以除去meoh并用6nhcl(1.7ml)中和。形成白色膠狀固體混懸液。將該混合物真空蒸發(fā)，得到粗制甲酸(被nacl污染)，其為灰白色固體。

向上述物質(zhì)中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮鹽酸鹽(500mg，2.65mmol)、dcm(30ml)、hoat(270mg，1.984mmol)和nmm(0.30ml，2.73mmol)。將該固體塊用攪拌棒弄碎。向該攪拌的混懸液中加入edc游離堿(370mg，2.383mmol)。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h，然后在40℃攪拌4h。將該渾濁混合物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾并用少量的dcm沖洗。將澄清濾液濃縮并用硅膠色譜純化(iscorfgold80g，10-25％etoh的etoac溶液)。將純級(jí)分合并，蒸發(fā)至干，用etoac研磨，己烷，過(guò)濾和真空干燥，得到5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(0.75g，1.56mmol，80％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.48(br.s.，1h)，8.03(t，j＝4.8hz，1h)，7.81(s，1h)，7.20(q，1h)，5.87(s，1h)，4.24(d，j＝4.8hz，2h)，3.51(t，j＝5.2hz，2h)，3.32(br.s.，2h)，2.84(d，j＝4.5hz，3h)，2.47(t，j＝5.2hz，2h)，2.33-2.23(m，2h)，2.18(s，3h)，2.11(s，3h)，2.07(s，3h)，2.02-1.97(m，2h)，0.87(t，j＝7.5hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺481.2。

實(shí)施例16

2-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

a)4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯

在氮?dú)庀?，?50ml帶有攪拌棒的圓底燒瓶中加入(1,5-環(huán)辛二烯)(甲氧基)銥(i)二聚體(0.955g，1.440mmol)。邊攪拌邊通過(guò)注射器加入4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷(23.28ml，161mmol)，然后加入4,4'-二-叔丁基-2,2'-聯(lián)吡啶(0.773g，2.88mmol)在正己烷(150ml)中的溶液。將該深色混合物攪拌1min，此時(shí)滴加4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(15g，96mmol)(放氣)。將該反應(yīng)攪拌1.5h。將該反應(yīng)真空蒸發(fā)至干。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold330g，0-100％dcm/己烷，柱用3個(gè)柱體積的1％et3n的氯仿溶液預(yù)處理)，得到4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(19.5g，65.7mmol，68.4％產(chǎn)率)，其為亮棕色油，其一旦靜置則固化。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.32(s，1h)，3.87(s，3h)，2.70(s，3h)，1.36(s，12h)。ms(es)[m+h]⁺283.2。

b)(z)-4-(1-(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向3-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(0.82g，2.80mmol)和(z)-4-(1-(((三氟甲基)磺?；?氧基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.044g，2.80mmol)在1,4-二噁烷(30ml)中的溶液中加入水(10ml)和na2co3(0.741g，6.99mmol)。將該溶液脫氣并加入pd(pph3)4(0.162g，0.140mmol)。將該反應(yīng)混合物在70℃加熱1h。將該混合物用etoac(100ml)稀釋并過(guò)濾。分離各層并將有機(jī)物用鹽水洗滌，用mgso4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。將黑色殘余物用純化(50–100％etoac:己烷)，得到(z)-4-(1-(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(950mg，2.433mmol，87％產(chǎn)率)，其為無(wú)色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.73-5.86(m，1h)，5.66(br.s.，1h)，4.15(br.s.，2h)，3.63(t，j＝6.69hz，2h)，3.03(t，j＝6.69hz，2h)，2.67(t，j＝13.01hz，2h)，2.25(s，3h)，1.64-1.80(m，3h)，1.49-1.53(m，3h)，1.44-1.47(m，9h)，1.30-1.41(m，2h)。ms(es)[m+na]⁺413.2。

c)4-(1-(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(z)-4-(1-(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙-1-烯-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(950mg，2.433mmol)在etoh(30ml)中的脫氣(氮?dú)?溶液中加入10％pd/c(degussa，1.5g，1.410mmol)。將該反應(yīng)混合物在氫氣氛下(氣球)攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)混合物過(guò)濾并濃縮，得到4-(1-(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg，2.057mmol，85％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.77(br.s.，1h)，3.98-4.29(m，2h)，3.61(t，j＝6.82hz，2h)，3.01(t，j＝6.69hz，2h)，2.65-2.77(m，2h)，2.51-2.62(m，1h)，2.39(s，3h)，2.11(d，j＝12.88hz，1h)，1.81-1.95(m，2h)，1.36-1.61(m，11h)，1.02-1.20(m，2h)，0.79(t，j＝7.33hz，3h)。ms(es)[m+na]⁺415.2

d)4-(1-(5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在氮?dú)夥障?，?-(1-(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg，2.165mmol)在dmf(10ml)中的冷卻(0℃冰浴)溶液中滴加1nkotbu的thf(2.81ml，2.81mmol)。將該混合物攪拌5min，此時(shí)加入2-(芐基氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶(737mg，2.81mmol)在thf(5ml)中的溶液。將該混合物在0℃攪拌15min。將該混合物用飽和nh4cl(5ml)淬滅。將該混合物用水和etoac稀釋。分離各層并將有機(jī)物用水，鹽水洗滌，用mgso4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將該殘余物用硅膠色譜純化(iscorfgold40g，10-30％(etoac：己烷)，得到4-(1-(5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g，1.845mmol，85％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.45-7.51(m，2h)，7.29-7.41(m，4h)，6.65(s，1h)，5.46(s，2h)，4.80(s，2h)，3.84-4.28(m，2h)，3.38(t，j＝6.69hz，2h)，2.70(t，j＝6.69hz，4h)，2.46(s，3h)，2.40(s，3h)，2.37(s，3h)，1.88(dd，j＝4.04，7.33hz，2h)，1.32-1.58(m，12h)，1.01-1.21(m，2h)，0.78(t，j＝7.33hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺618.4。

e)5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)丙基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

向4-(1-(5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(900mg，1.457mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的冷卻(10℃)溶液中加入4mhcl的1,4-二噁烷溶液(3ml，12.00mmol)。將該反應(yīng)混合物維持在10℃，歷時(shí)1h。將該反應(yīng)通過(guò)lcms監(jiān)測(cè)。1h后，加入額外的4mhcl的1,4-二噁烷溶液(3ml，12.00mmol)。一旦起始原料耗盡，將該反應(yīng)混合物用6mnaoh(ph～9)中和并用dcm萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用mgso4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。將該殘余物通過(guò)柱色譜純化(30％[5％nh4oh/meoh]：70％dcm)，得到5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)丙基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(450mg，0.826mmol，56.7％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，meoh-d4)δ7.42(dd，j＝1.64，7.96hz，2h)，7.25-7.34(m，3h)，6.72(s，1h)，5.42(s，2h)，4.77(s，2h)，3.34-3.38(m，2h)，3.06(d，j＝12.38hz，1h)，2.96(d，j＝12.38hz，1h)，2.73-2.80(m，1h)，2.66-2.72(m，2h)，2.56(dt，j＝2.78，12.38hz，1h)，2.46(dt，j＝2.65，12.44hz，1h)，2.40(s，3h)，2.36(s，3h)，2.34(s，3h)，1.88-2.05(m，2h)，1.31-1.61(m，3h)，1.03-1.28(m，2h)，0.79(t，j＝7.33hz，3h)

ms(es)[m+h]⁺518.3。

f)2-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

向2,2-二氟丙-1-醇(193mg，2.010mmol)和吡啶(0.163ml，2.010mmol)在ch3cn(20ml)中的冷卻(0℃)溶液中滴加tf2o(0.312ml，1.849mmol)。將該反應(yīng)維持在0℃，歷時(shí)30min。

向5-((2-(芐基氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)丙基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(208mg，0.402mmol)和k2co3(500mg，3.62mmol)在ch3cn(20ml)中的混懸液中加入上述冷卻的反應(yīng)混合物(含有三氟甲磺酸2,2-二氟丙酯)。將該反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝兀缓蠹訜嶂?0℃過(guò)夜。將該反應(yīng)過(guò)濾并真空蒸發(fā)至干。將該殘余物溶于etoac中并將所得溶液用水和鹽水洗滌，干燥(mgso4)，過(guò)濾并真空濃縮，得到油。

將上述油在tfa(5ml，64.9mmol)中的溶液保持30min，之后將其濃縮。將該反應(yīng)混合物用制備型hplc純化(5-60％mecn:水，含0.1％甲酸)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分用6mhcl(0.5ml)處理并濃縮，得到2-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(90mg，0.169mmol，42.1％產(chǎn)率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz，meoh-d4)δ7.07(s，1h)，4.82(s，2h)，3.88-3.99(m，2h)，3.72-3.86(m，3h)，3.65(d，j＝12.63hz，1h)，3.07-3.27(m，4h)，2.80-2.91(m，1h)，2.69(s，3h)，2.54(s，3h)，2.40(s，2h)，2.27(d，j＝14.15hz，1h)，2.00(ddd，j＝3.79，7.20，13.52hz，1h)，1.57-1.89(m，7h)，1.47(ddd，j＝7.07，11.18，13.58hz，1h)，0.80(t，j＝7.33hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺506.3。

實(shí)施例17

5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮

根據(jù)實(shí)施例16的操作，制備5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟丙基)哌啶-4-基)丙基)-3-甲基-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5h)-酮(110mg，0.199mmol)。¹hnmr(400mhz，meoh-d4)δ7.07(s，1h)，5.11-5.38(m，1h)，4.82(s，2h)，3.87-4.03(m，2h)，3.56-3.81(m，2h)，3.36-3.42(m，4h)，3.22-3.31(m，1h)，3.15(t，j＝6.95hz，2h)，2.92-3.10(m，2h)，2.80-2.91(m，1h)，2.69(s，3h)，2.54(s，3h)，2.40(s，3h)，2.22-2.33(m，1h)，2.00(ddd，j＝3.79，7.33，13.64hz，1h)，1.48-1.88(m，4h)，1.35-1.46(m，3h)，0.80(t，j＝7.20hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺488.3。

實(shí)施例18

n'-氰基-4-(1-(5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)-n-甲基哌啶-1-甲脒

根據(jù)實(shí)施例15和16的操作，制備n'-氰基-4-(1-(5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙基)-n-甲基哌啶-1-甲脒(35mg，0.065mmol)。¹hnmr(400mhz，meoh-d4)δ11.53(s，1h)，7.13(d，j＝4.8hz，1h)，5.87(s，1h)，4.48(s，2h)，3.98(d，j＝12.6hz，1h)，3.89(d，j＝12.9hz，1h)，3.50(t，j＝6.7hz，2h)，2.64-2.89(m，8h)，2.28-2.33(m，3h)，2.15(s，3h)，2.12(s，3h)，1.87(d，j＝11.4hz，2h)，1.52-1.64(m，1h)，1.25-1.42(m，2h)，1.12-1.20(m，1h)，1.00-1.09(m，1h)，0.71(t，j＝7.2hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺509.0。

實(shí)施例19

5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例4和15的操作，制備5-(1-(1-(n'-氰基-n-甲基甲脒基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(49mg，0.096mmol)。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.46(br.s.，1h)，7.98(t，j＝4.9hz，1h)，7.64-7.73(m，1h)，7.13(q，j＝4.3hz，1h)，5.86(s，1h)，4.22(d，j＝5.1hz，2h)，3.98(d，j＝13.4hz，1h)，3.88(d，j＝13.1hz，1h)，2.64-2.87(m，5h)，2.18(d，j＝2.5hz，6h)，2.11(s，3h)，1.80-1.92(m，2h)，1.55-1.66(m，1h)，1.29-1.43(m，2h)，0.91-1.19(m，3h)，0.70(t，j＝7.3hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺483。

實(shí)施例20

5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例2的一般操作，制備5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-亞基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.48(s，1h)，8.02(t，j＝5.05hz，1h)，7.79(s，1h)，5.95-6.32(m，1h)，5.86(s，1h)，4.23(d，j＝5.05hz，2h)，2.72(dt，j＝4.29，15.66hz，2h)，2.60(br.s.，2h)，2.44(br.s.，2h)，2.35-2.41(m，2h)，2.21-2.31(m，2h)，2.18(s，3h)，2.11(s，3h)，2.07(s，3h)，1.93(t，j＝5.05hz，2h)，0.86(t，j＝7.45hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺464.2。

實(shí)施例21

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例4的一般操作，制備(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)丙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.69(t，j＝7.20hz，3h)1.09-1.23(m，2h)1.25-1.39(m，3h)1.75-1.90(m，2h)1.93-2.02(m，1h)2.02-2.09(m，1h)2.11(s，3h)2.18(s，6h)2.56-2.74(m，3h)2.80(d，j＝11.12hz，1h)2.89(d，j＝11.62hz，1h)4.22(d，j＝5.05hz，2h)5.86(s，1h)6.06(t，j＝4.29hz，1h)7.68(s，1h)7.98(t，j＝5.05hz，1h)11.47(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺466.2。

實(shí)施例22

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

a)4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯

向裝有(1,5-環(huán)辛二烯)(甲氧基)銥(l)二聚體(325mg，0.490mmol)的100-ml圓底燒瓶中邊攪拌邊加入4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷(7.10g，55.5mmol)，然后加入4,4'-二-叔丁基-2,2'-二吡啶(260mg，0.969mmol)在正己烷(35ml)中的溶液。將該混合物在室溫?cái)嚢?min并滴加4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(5g，32mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。然后將該反應(yīng)混合物濃縮并將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-100％dcm/己烷)，得到5.8g的產(chǎn)物，其為無(wú)色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ1.36(s，12h)，2.70(s，3h)，3.87(s，3h)，8.32(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺283.1。

b)4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(2.65g，9.39mmol)在1,4-二噁烷(72ml)中的溶液中加入4-(1-(((三氟甲基)磺?；?氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.38g，9.39mmol)、na2co3(2.489g，23.48mmol)和水(24ml)。將該混合物通過(guò)鼓入氮?dú)饷摎?0min。加入pd(pph3)4(0.543g，0.470mmol)并將該混合物在70℃加熱1h。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用etoac(3x)萃取。將該合并的萃取物干燥(na2so4)并濃縮。將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-40％etoac/己烷)，得到2.8g產(chǎn)物，其為無(wú)色油。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ1.27-1.55(m，11h)，1.78(m，2h)，2.26-2.46(m，4h)，2.71(t，j＝11.49hz，2h)，3.87(s，3h)，4.18(br.s.，2h)，5.13(s，1h)，5.29-5.39(m，1h)，8.02(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺388.1。

c)(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

將4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g，3.28mmol)和((4r,5r)-(+)-o-[1-芐基-1-(5-甲基-2-苯基-4,5-二氫噁唑-4-基)-2-苯基乙基](二環(huán)己基膦氧基)(1,5-cod)銥(i)四(3,5-二(三氟甲基)苯基硼酸鹽(63mg，36μmol)在dcm(50ml)中的溶液在50psi氫氣壓下在parr振蕩器上氫化30h。將該混合物濃縮并將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-40％etoac/己烷)，得到(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.1g)，其為無(wú)色油。通過(guò)手性hplc測(cè)定產(chǎn)物的光學(xué)純度為98％e.e.(chiralpakay-h，5微米，4.6mmx150mm；245，250nmuv；90：10：0.1正庚烷：etoh：異丙胺，等梯度，1.0ml/min)。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ1.03-1.33(m，5h)，1.38-1.58(m，11h)，1.88(d，j＝12.38hz，1h)，2.37(s，3h)，2.48-2.77(m，2h)，2.94(quin，j＝7.26hz，1h)，3.85(s，3h)，4.05-4.15(m，1h)，7.97(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺390.2。

d)(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

向(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(85mg，0.231mmol)在dcm(2ml)中的溶液中加入4nhcl的1,4-二噁烷溶液(0.289ml，1.156mmol)。將該混合物保持在室溫4h。將該混合物濃縮并將該殘余物真空干燥。然后將該殘余物用ch3cn(2ml)稀釋。向該混合物中加入三氟甲磺酸2,2-二氟乙基酯(163mg，0.763mmol)和cs2co3(173mg，0.532mmol)。將該混合物在50℃加熱2h。將該混合物冷卻，用dcm稀釋并過(guò)濾。將該濾液濃縮并將該殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-50％etoac/己烷)，得到(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(68mg)，其為無(wú)色油。

e)(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

向(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(68mg，0.205mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入8nnaoh(0.14ml，1.120mmol)。將該混合物在40℃加熱18h。將該混合物用6nhcl(0.187ml，1.12mmol)處理并濃縮。將該殘余物真空干燥并用dmso(2ml)稀釋。向該混合物中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮，鹽酸鹽(58.1mg，0.308mmol)、nmm(0.135ml，1.231mmol)、edc(79mg，0.410mmol)和hoat(55.9mg，0.410mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8h。將該反應(yīng)混合物用水(10ml)淬滅并將所得沉淀物通過(guò)過(guò)濾收集并真空干燥，得到(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(49mg)，其為灰白色固體。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ1.08-1.38(m，7h)，1.76(m，1h)，1.92-2.14(m，5h)，2.18(m，6h)，2.64(td，j＝15.73，4.17hz，2h)，2.82(d，j＝11.87hz，1h)，2.86-2.97(m，2h)，4.17-4.30(m，2h)，5.86(s，1h),5.94-6.23(m，1h)，7.65(s，1h)，7.97(t，j＝5.05hz，1h)。ms(es)[m+h]⁺452.2。

實(shí)施例23

(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺

根據(jù)實(shí)施例22的一般操作，制備(r)-5-(1-(1-(2,2-二氟丙基)哌啶-4-基)乙基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ1.09-1.39(m，7h)，1.58(t，j＝19.07hz，3h)，1.76(m，1h)，1.98-2.27(m，12h)，2.63(m，2h)，2.81(d，j＝12.13hz，1h)，2.91(m，2h)，4.17-4.28(m，2h)，5.86(s，1h)，7.65(s，1h)，7.97(t，j＝4.93hz，1h)。ms(es)[m+h]⁺466.3。

測(cè)試方案

評(píng)估本文包含的化合物抑制prc2復(fù)合物中ezh2的甲基轉(zhuǎn)移酶活性的能力。人prc2復(fù)合物是通過(guò)如下制備的：在sf9細(xì)胞中共表達(dá)5個(gè)成員蛋白(flag-ezh2、eed、suz12、rbap48、aebp2)的每一個(gè)，然后共純化。酶活性是通過(guò)閃爍迫近分析法(spa)測(cè)定的，其中將氚代甲基從3h-sam轉(zhuǎn)移至衍生自組蛋白h3的生物素化的、未甲基化的肽底物上的賴(lài)氨酸殘基上。肽在鏈親和素包被的spa珠上被捕獲并將所得信號(hào)在viewlux讀板器上讀取。

部分a.化合物的制備

1.將固體溶于100％dmso中制備10mm化合物儲(chǔ)備液。

2.在384孔板上，將各測(cè)試化合物溶于100％dmso以建立11個(gè)點(diǎn)的連續(xù)稀釋(1:4稀釋?zhuān)罡邼舛?0mm)，第6欄和第18欄為dmso對(duì)照。

3.將10nl化合物從稀釋板分配至反應(yīng)板(corning，384-孔聚苯乙烯nbs，cat#3673)。

部分b.試劑的制備

制備以下溶液：

1.1x基礎(chǔ)緩沖液，50mmtris-hcl，ph8，2mmmgcl2:每1l基礎(chǔ)緩沖液，混合1mtris-hcl，ph8(50ml)，1mmgcl2(2ml)和蒸餾水(948ml)。

2.1x測(cè)試緩沖液:每10ml1x測(cè)試緩沖液，混合1x基礎(chǔ)緩沖液(9.96ml)，1mdtt(40ul)，和10％吐溫-20(1ul)，得到終濃度為50mmtris-hcl，ph8，2mmmgcl2，4mmdtt，0.001％吐溫-20。

3.2x酶溶液:每10ml2x酶溶液，混合1x測(cè)試緩沖液(9.99ml)和3.24umezh25成員復(fù)合物(6.17ul)，得到最終酶濃度為1nm。

4.pa珠溶液:每1mlspa珠溶液，混合鏈親和素包被的spa珠(perkinelmer，cat#rpnq0261，40mg)和1x測(cè)試緩沖液(1ml)，得到工作濃度為40mg/ml。

5.2x底物溶液:每10ml2x底物溶液，混合40mg/mlspa珠溶液(375ul)、1mm生物素化的組蛋白h3k27肽(200ul)、12.5um3h-sam(240ul；1mci/ml)、1mm冷sam(57ul)和1x測(cè)試緩沖液(9.13ml)，得到終濃度為0.75mg/mlspa珠溶液、10um生物素化的組蛋白h3k27肽、0.15um3h-sam(～12uci/ml3h-sam)和2.85um冷sam。

6.2.67x淬滅溶液:每10ml2.67x淬滅溶液，混合1x測(cè)試緩沖液(9.73ml)和10mm冷sam(267ul)，得到終濃度為100um的冷sam。

部分c.在384孔grenierbio-one板上的測(cè)試反應(yīng)

化合物的添加

1.將10nl/孔的1000x化合物分配至測(cè)試孔中(如上所述)。

2.將10nl/孔的100％dmso分配至第6和18欄(分別為高對(duì)照和低對(duì)照)。

測(cè)試

1.將5ul/孔的1x測(cè)試緩沖液分配至第18欄(低對(duì)照反應(yīng))。

2.將5ul/孔的2x底物溶液分配至第1-24欄(注:底物溶液應(yīng)被混合以保證在分配至基質(zhì)貯器之前為均勻的珠懸浮液)。

3.將5ul/孔的2x酶溶液分配至第1–17、19–24欄。

4.在室溫培養(yǎng)該反應(yīng)60分鐘。

淬滅

1.將6ul/孔的2.67x淬滅溶液分配至第1-24欄。

2.密封測(cè)試板且以500rpm旋轉(zhuǎn)約1分鐘。

3.在viewlux儀器中將板暗適應(yīng)15–60分鐘。

讀板

1.在viewlux讀板器上讀取測(cè)試板，其采用613nm的發(fā)射濾波器或?yàn)V光膜(300秒暴露)。

試劑的加入可采取手動(dòng)或用自動(dòng)液體處理器。

結(jié)果

對(duì)于每個(gè)化合物濃度，相對(duì)于dmso對(duì)照計(jì)算百分比抑制，并且使用abase數(shù)據(jù)擬合軟件包中的標(biāo)準(zhǔn)ic50擬合參數(shù)擬合所得值。

實(shí)施例化合物通常是根據(jù)上述或類(lèi)似的測(cè)試進(jìn)行測(cè)定的且發(fā)現(xiàn)它們是ezh2的抑制劑。根據(jù)該測(cè)試測(cè)定的具體生物活性列于下表。ic50值≤10nm是指化合物的活性接近該測(cè)試中的檢測(cè)限。重復(fù)測(cè)試流程可得到稍微不同的ic50值。