本發(fā)明涉及單抗純化領(lǐng)域，具體來說，涉及一種初步處理CHO細(xì)胞培養(yǎng)液的純化方法技術(shù)背景在現(xiàn)代生物制藥領(lǐng)域中，利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體對(duì)醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展起著越來越重要的作用。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過澄清過濾、純化制劑等步驟，制得單克隆抗體。然而，細(xì)胞培養(yǎng)液中所包含的細(xì)胞碎片、宿主細(xì)胞蛋白(HCP)、DNA、高分子聚合物(HMW)等雜質(zhì)，不僅加大了澄清過濾的難度，而且還會(huì)增加下游純化處理的成本。在產(chǎn)品的成本構(gòu)成中，后處理成本占總成本的40％～80％。目前，分離細(xì)胞和培養(yǎng)液的方法包括：兩層深層膜過濾技術(shù)或離心沉降結(jié)合一層深層膜過濾技術(shù)等。通過深層膜過濾技術(shù)獲得濁度較低的料液，需要使用孔徑較小(可能低于小于0.2um)的深層過濾膜，而該深層過濾膜的價(jià)格非常昂貴，且過濾通量也較低，因此分離CHO細(xì)胞培養(yǎng)液的膜過濾成本非常高。由于膜過濾后料液中HCP和DNA等雜質(zhì)的濃度很高，料液在過ProteinA柱時(shí)對(duì)填料使用壽命的損害大，使得下游純化的成本較高。本發(fā)明通過絮凝結(jié)合酸沉的方式，絮凝CHO細(xì)胞液中細(xì)胞、細(xì)胞碎片、HCP等雜質(zhì)，增大料液中顆粒的粒徑，降低離心后料液濁度，可以顯著提高膜過濾通量，降低膜過濾成本。同時(shí)，絮凝結(jié)合酸沉的方法，可吸附帶負(fù)電的HCP和DNA等雜質(zhì)，提高ProteinA柱的使用壽命，降低下游純化工藝的成本。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種初步處理CHO細(xì)胞培養(yǎng)液的純化方法，在保證單克隆抗體產(chǎn)量和質(zhì)量的前提下，降低料液濁度，提高膜過濾通量，降低膜過濾成本，并且能減少HCP、DNA等雜質(zhì)含量，提高ProteinA的使用壽命，節(jié)約生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率。具體的，本發(fā)明提供了一種初步處理CHO細(xì)胞培養(yǎng)液的純化方法，包括以下步驟：1)收獲CHO細(xì)胞培養(yǎng)液；2)添加絮凝劑，調(diào)節(jié)pH值后，攪拌；3)澄清步驟2)所述CHO細(xì)胞培養(yǎng)液。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施例，所述絮凝劑選自殼聚糖、聚氯化鋁或其組合。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施例，在CHO細(xì)胞培養(yǎng)液中，殼聚糖的終濃度為0.2-0.5g/L，聚氯化鋁終濃度為20-70mg/L。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施例，步驟2)調(diào)節(jié)pH值為5.0～7.0。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施例，步驟2)攪拌時(shí)間為30分鐘。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施例，所述澄清方法選自離心、靜置分離、膜過濾或其組合。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施例，所述離心，優(yōu)選地，轉(zhuǎn)速為4000×g，時(shí)間為15～20分鐘，溫度為15～25℃。本發(fā)明利用殼聚糖、聚氯化鋁和pH的組合方法，絮凝細(xì)胞液中細(xì)胞、細(xì)胞碎片、HCP和DNA等雜質(zhì)，效果顯著，工藝簡(jiǎn)單，而且料液中殘留的殼聚糖和聚氯化鋁可在下游工藝中進(jìn)一步去除，最終殼聚糖殘留量可低于1ppm。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例子僅為了闡明本發(fā)明，而非為了限制本發(fā)明的應(yīng)用范圍。本發(fā)明以下實(shí)施例中的CHO細(xì)胞(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)細(xì)胞株購(gòu)自invitrogen公司；表達(dá)重組人腫瘤壞死因子受體-Fc重組蛋白(rhTNFR-Fc)抗體所用的細(xì)胞株為自主構(gòu)建。本發(fā)明實(shí)施例中rhTNFR-Fc抗體是基于專利US2005/0069979A發(fā)酵制備而來。實(shí)施例1向1L收獲液中添加殼聚糖0.2g，聚氯化鋁20mg，用0.8M鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5.0。將上述收獲液在15℃下攪拌30分鐘，15℃、4000×g離心15分鐘，測(cè)濁度，檢測(cè)初步分離料液中DNA濃度及ProteinA步驟后料液中HCP濃度和HMW的百分含量，結(jié)果見表1。DNA、HCP和HMW三者的檢測(cè)方法：DNA檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。酶激活和預(yù)變性條件是95℃，5min。PCR反應(yīng)條件是95℃，15s；60℃，60s；40個(gè)循環(huán)。HCP檢測(cè)采用夾心ELISA方法。轉(zhuǎn)速180rpm，孵育溫度37℃，OD值檢測(cè)波長(zhǎng)450/630nm。HMW采用高效液相色譜法。色譜柱TSK-gelG3000SW7.8*300mm(5μm)，流動(dòng)相150mM磷酸鹽緩沖液，100％A相，流速0.5mL/min，溫度25℃，pH7.0，檢測(cè)時(shí)間30min，波長(zhǎng)280nm。實(shí)施例2向1L收獲液中添加殼聚糖0.5g，聚氯化鋁40mg，用1M鹽酸調(diào)節(jié)pH值為7.0。將上述收獲液在15℃下攪拌30分鐘，15℃、4000×g離心15分鐘，測(cè)濁度，檢測(cè)初步分離料液中DNA濃度及ProteinA步驟后料液中HCP濃度和HMW的百分含量，檢測(cè)方法同實(shí)施例1，結(jié)果見表1。實(shí)施例3向1L收獲液中添加殼聚糖0.5g，聚氯化鋁70mg，用0.8M鹽酸調(diào)節(jié)pH值為6.0。將上述收獲液在15℃下攪拌30分鐘，15℃、4000×g離心15分鐘，測(cè)濁度，檢測(cè)初步分離料液中DNA濃度及ProteinA步驟后料液中HCP濃度和HMW的百分含量，檢測(cè)方法同實(shí)施例1，結(jié)果見表1。對(duì)比例1用0.8M鹽酸調(diào)節(jié)細(xì)胞收獲液的pH值為7.0，向細(xì)胞收獲液中加入聚氯化鋁，聚氯化鋁終濃度40mg/L。將上述收獲液在15℃下攪拌30分鐘，15℃、4000×g離心15分鐘，測(cè)濁度，檢測(cè)初步分離料液中DNA濃度及ProteinA步驟后料液中HCP濃度和HMW的百分含量，檢測(cè)方法同實(shí)施例1，結(jié)果見表1。對(duì)比例2向1L收獲液中添加殼聚糖0.5g，用0.8M鹽酸調(diào)節(jié)pH值為6.0。收獲液中將上述收獲液在15℃下攪拌30分鐘，15℃、4000×g離心15分鐘，測(cè)濁度，檢測(cè)初步分離料液中DNA濃度及ProteinA步驟后料液中HCP濃度和HMW的百分含量，檢測(cè)方法同實(shí)施例1，結(jié)果見表1。表1檢測(cè)結(jié)果表離心后濁度(NTU)DNA濃度(g/L)HCP濃度(g/L)HMW百分含量(％)實(shí)施例122.5120820.180.83實(shí)施例210.960506.080.50實(shí)施例315.5881550.640.95對(duì)比例198.0615238866.240.75對(duì)比例284.214922405.371.49由上表可見，向收獲液中添加殼聚糖、聚氯化鋁并調(diào)節(jié)溶液pH值，能夠同時(shí)降低料液的濁度、DNA、HCP和HMW的含量。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3