本發(fā)明涉及一種從枝菌根真菌摩西球囊霉的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，具體為涉及一種摩西球囊霉（Glomus mosseae）的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

自然界中普遍存在著由真菌與植物根形成的共生體——菌根，叢枝菌根是菌根中最普遍、數(shù)量最多的一種。叢枝菌根真菌（Arbuscular Mycorrhizal Fungi，AM）是土壤中存在的一類(lèi)有益微生物，約占土壤微生物總量的5%～36%，是生物量最大的一類(lèi)土壤真菌，它能夠與80%以上的陸生植物形成良好的互利共生體，能夠在植物根系皮層細(xì)胞內(nèi)形成叢枝，部分形成泡囊結(jié)構(gòu)，因此該類(lèi)真菌被稱(chēng)為叢枝菌根真菌，屬于球囊霉真菌。

摩西球囊霉菌屬于從枝菌根真菌中的一種，近年來(lái)，如何獲得高產(chǎn)量、高密度、高質(zhì)量的菌根菌劑，是國(guó)際上倍受關(guān)注的微生物熱點(diǎn)課題?，F(xiàn)有條件下，只能采用將叢枝菌根真菌與植物共生的方法進(jìn)行開(kāi)放式培養(yǎng)，主要方法有：盆缽培養(yǎng)法、營(yíng)養(yǎng)薄層法、靜水培養(yǎng)法、氣霧培養(yǎng)法、雙重?zé)o菌培養(yǎng)法、玻璃珠培養(yǎng)法、大田培養(yǎng)法等技術(shù)，但這些技術(shù)存在的問(wèn)題是：產(chǎn)孢量少、保存時(shí)間短、操作技術(shù)難度大、易受到污染、培養(yǎng)成本和技術(shù)要求高等。目前我國(guó)關(guān)于叢枝菌根真菌的生產(chǎn)與應(yīng)用仍然處于起步階段，關(guān)于叢枝菌根真菌摩西球囊霉的培養(yǎng)方法報(bào)道還較少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種摩西球囊霉的培養(yǎng)基及離體純培養(yǎng)方法，所采用的技術(shù)方案如下。

（1）單孢離體培養(yǎng)基配制。

固體培養(yǎng)基的組分為：淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.05%、硫酸亞鐵0.01%、瓊脂粉2%，pH值7.0～7.2。

作為優(yōu)選，可采用液體培養(yǎng)基替代固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基的組分為：淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.5%、硫酸亞鐵0.01%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%，pH值7.0～7.2。

（2）單孢獲取。

稱(chēng)取20g含有摩西球囊霉（編號(hào)為HEBO7B）的沸石沙，在體式顯微鏡下挑取該菌株的單個(gè)孢子，在生物顯微鏡下，觀察孢子形態(tài)。

孢子果：黃棕至淺褐色，多為不規(guī)則圓形，內(nèi)含1至多個(gè)孢子，200-600μm，有菌絲被。

孢子：淺黃至黃褐色，幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不規(guī)則。孢子壁：3層。1無(wú)色透明，易脫落，厚約0.5-1μm，Melzer′s試劑中呈淺粉紅色；L2無(wú)色透明，0.8-1.6μm。L3淺黃至黃棕色，層積壁，厚1.5-3μm，在連點(diǎn)處增厚至6μm。

連孢菌絲：寬8μm.連點(diǎn)漏斗狀，漏斗底部有厚凹隔。

(3)培養(yǎng)基接種培養(yǎng)。

將上述獲得的摩西球囊霉單胞子，接種到培養(yǎng)基中，恒溫30℃靜置培養(yǎng)7～10天，出現(xiàn)黃綠色-黃褐色菌絲。

（4）形態(tài)鑒定。

吸取少量培養(yǎng)基，在顯微鏡下觀察，形態(tài)學(xué)鑒定符合上述摩西球囊霉的特征，鑒定為摩西球囊霉菌株。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了摩西球囊霉的實(shí)驗(yàn)室分離純培養(yǎng)，打破了叢枝菌根真菌依賴(lài)作物共生的限制，具有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的任意組合。

實(shí)施例1。

本實(shí)施方式摩西球囊霉的培養(yǎng)基及離體純培養(yǎng)方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)。

（1）株單孢離體培養(yǎng)基配制。

固體培養(yǎng)基組分為：淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.05%、硫酸亞鐵0.01%、瓊脂粉2%，pH值7.0～7.2。

（2）單孢獲取。

稱(chēng)取20g含有摩西球囊霉（編號(hào)為HEBO7B）的沸石沙，在體式顯微鏡下挑取該菌株的單個(gè)孢子，在生物顯微鏡下，觀察孢子形態(tài)。

孢子果：黃棕至淺褐色，多為不規(guī)則圓形，內(nèi)含1至多個(gè)孢子，200-600μm，有菌絲被。

孢子：淺黃至黃褐色，幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不規(guī)則。孢子壁：3層。1無(wú)色透明，易脫落，厚約0.5-1μm，Melzer′s試劑中呈淺粉紅色；L2無(wú)色透明，0.8-1.6μm。L3淺黃至黃棕色，層積壁，厚1.5-3μm，在連點(diǎn)處增厚至6μm。

連孢菌絲：寬8μm.連點(diǎn)漏斗狀，漏斗底部有厚凹隔。

(3)培養(yǎng)基接種培養(yǎng)。

將上述獲得的摩西球囊霉單胞子，接種到固體培養(yǎng)基中，恒溫30℃靜置培養(yǎng)7天，出現(xiàn)黃綠色-黃褐色菌絲。

（4）形態(tài)鑒定。

挑取少量培養(yǎng)基中的菌絲，在顯微鏡下觀察，形態(tài)學(xué)鑒定符合上述摩西球囊霉的特征，鑒定為摩西球囊霉菌株。

實(shí)施例2 。

本實(shí)施方式摩西球囊霉的培養(yǎng)基及離體純培養(yǎng)方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)。

（1）株單孢離體培養(yǎng)基配制。

液體培養(yǎng)基為：淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.5%、硫酸亞鐵0.01%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%，pH值7.0～7.2。

（2）單孢獲取。

稱(chēng)取20g含有摩西球囊霉（編號(hào)為HEBO7B）的沸石沙，在體式顯微鏡下挑取該菌株的單個(gè)孢子，在生物顯微鏡下，觀察孢子形態(tài)。

孢子果：黃棕至淺褐色，多為不規(guī)則圓形，內(nèi)含1至多個(gè)孢子，200-600μm，有菌絲被。孢子：淺黃至黃褐色，幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不規(guī)則。孢子壁：3層。1無(wú)色透明，易脫落，厚約0.5-1μm，Melzer′s試劑中呈淺粉紅色；L2無(wú)色透明，0.8-1.6μm。L3淺黃至黃棕色，層積壁，厚1.5-3μm，在連點(diǎn)處增厚至6μm。連孢菌絲：寬8μm.連點(diǎn)漏斗狀，漏斗底部有厚凹隔。

(3) 培養(yǎng)基接種培養(yǎng)。

將上述獲得的摩西球囊霉單胞子，接種到液體培養(yǎng)基中，恒溫30℃震蕩培養(yǎng)10天。

（4）形態(tài)鑒定。

吸取少量液體培養(yǎng)基，在顯微鏡下觀察，形態(tài)學(xué)鑒定符合上述摩西球囊霉的特征，鑒定為摩西球囊霉菌株。