本發(fā)明屬于生物工程技術領域，更具體地，涉及一種鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白及應用。

背景技術：

鴨疫里默氏桿菌病是鴨、鵝、火雞和其他鳥類的一種高致病性、接觸性傳染病之一，其病原體為鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer, RA)，主要侵害1～8 周齡（尤其2～3周齡）雛鴨、雛鵝及雛火雞等。鴨疫里默氏桿菌病多呈急性或慢性敗血癥病程，主要以神經癥狀和纖維素性心包炎、肝周炎和氣囊炎為特征，發(fā)病率90%以上，死亡率高達75%，耐過的病鴨常長成殘次鴨或僵鴨，飼料轉化率降低，生長發(fā)育遲緩，且由RA引起的輸卵管炎嚴重影響鴨成年后產蛋率。因此，鴨疫里默氏桿菌病的廣泛流行，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來嚴重的經濟損失。

目前已成功研制出弱毒疫苗、滅活疫苗和亞單位疫苗來控制鴨疫里默氏桿菌病。由于RA 的血清型多而復雜，國際公認有21 個血清型，我國也存在10 多個血清型，且各血清型之間缺乏有效的交叉免疫保護，這給RA 的疫苗防治帶來一定困難。比較有效的方法是針對當地主要流行血清型，選取相應菌株研制疫苗，以達到更有效的防治效果。

鐵是生命系統(tǒng)所必需的分子，在脊椎動物體液中，鐵絕大部分與轉鐵蛋白和乳鐵蛋白結合在一起，致病菌要想在宿主體內建立感染，很大程度上依賴于其利用宿主鐵復合物的能力，因此微生物的鐵載體運輸系統(tǒng)，是致病菌戰(zhàn)勝宿主非特異性防御機制，并在宿主體內繁殖的關鍵。鐵載體運輸系統(tǒng)主要由鐵載體、鐵載體受體蛋白(Siderophore Receptor Protein, SRP)組成，其中，SRP在細菌鐵離子攝取機制中起著至關重要的作用，是細菌重要的毒力因子和潛在的疫苗靶分子。

RA抗體的檢測是評價RA疫苗免疫效果及制定合理的免疫程序的關鍵。目前未見RA血清1型SRP研究和應用的相關研究報道。因此，研制一種易于制備，不存在散毒危險的新型RA抗原，對建立特異敏感的RA抗體檢測方法進而防控RA具有非常重要的現實意義。

技術實現要素：

本發(fā)明的目的之一在于提供一種RA血清1型鐵載體受體蛋白SRP及其編碼核苷酸序列，目的之二在于提供一種RA血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白及其編碼核苷酸序列，目的之三是提供RA血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白的制備方法及其在特異性檢測RA抗體的應用。

本發(fā)明所采取的技術方案是：

鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

編碼權利要求1所述的鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的核苷酸序列，優(yōu)選的，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

一種鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

編碼鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白的核苷酸序列，優(yōu)選的，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

一種鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP截斷重組蛋白在制備檢測鴨疫里默氏桿菌抗體試劑中的應用，鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP截斷重組蛋白能與鴨疫里默氏桿菌抗體產生特異性反應。

一種鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白的方法，其步驟包括：

（1）將編碼鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白的核苷酸序列克隆入原核表達質粒pET43a(+)中，獲得重組表達載體；

（2）將步驟（1）獲得的重組表達載體轉入大腸桿菌Rosetta工程菌株中，獲得SRP截斷重組蛋白Rosetta工程菌；

（3）將步驟（2）獲得的SRP截斷重組蛋白Rosetta工程菌按體積比1:50加入到含Amp的LB培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至OD₆₀₀為0.6～0.8，加入終濃度為0.5 mmol/L的IPTG，進行誘導培養(yǎng)；

（4）誘導培養(yǎng)結束后，離心收集菌體，加入PBS重懸菌體，于冰浴中進行超聲裂解，離心，收集上清；

（5）將上清液進行純化，獲得權利要求3所述的截斷重組蛋白，即鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白。

優(yōu)選的，步驟（3）所述的IPTG誘導培養(yǎng)時間為3～5h。

進一步優(yōu)選的，步驟（3）所述的IPTG誘導培養(yǎng)時間為5h。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明制備得到的RA血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白能夠與血清1型RA多克隆抗體產生特異性反應，可作為血清1型RA抗體檢測的理想抗原。

本發(fā)明的制備得到的RA血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白非全細菌，不存在散毒的危險，并且該蛋白原核表達時的可溶性增加，可有效降低下游大規(guī)模生產成本，適于工業(yè)化大規(guī)模生產，亦利于實驗室疫苗研究。

附圖說明

圖1：jSRP基因PCR 產物的瓊脂糖凝膠電泳圖【M: DNA Marker；1: jSRP基因PCR 產物】；

圖2：重組表達質粒pET43a-jSRP雙酶切產物的瓊脂糖凝膠電泳圖【M: DNA Marker；1: pET43a-jSRP重組表達質粒用BamHⅠ和Hind Ⅲ雙酶切后的產物；2: pET43a-jSRP重組質粒未酶切】；

圖3：pET43a-jSRP重組工程菌表達SRP截斷重組蛋白的SDS-PAGE圖 【M: 蛋白Marker；1～3: pET43a-jSRP重組工程菌誘導3h、4h、5h；4: pET43a-jSRP重組工程菌未誘導；5: pET-43a(+)空載體轉化菌誘導5h】；

圖4：pET43a-jSRP重組工程菌誘導裂解上清和沉淀SDS-PAGE電泳圖 【M: 蛋白 Marker；1: pET43a-jSRP重組工程菌誘導裂解上清，2：pET43a-jSRP重組工程菌誘導裂解沉淀】；

圖5：SRP截斷重組蛋白Western blot圖【1：pET-43 a (+)空載體蛋白印跡；2：pET43a-SRP蛋白印跡】。

具體實施方式

以下通過具體實施例進一步解釋本發(fā)明，未詳細描述的技術為本領域技的常規(guī)技術。

本發(fā)明涉及的RA血清1型鐵載體受體蛋白(SRP)的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，編碼SRP蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，命名為SRP基因，SRP基因片段長度2262bp，源至RA-GD全基因組(登錄號為CP002562)。

1、RA血清1型SRP截斷重組蛋白的選取

利用Signal P、TMHMM在線分析軟件對SRP基因的信號肽序列、跨膜序列以及抗原性分析，選取RA血清1型SRP截斷重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，編碼該截斷重組蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示(即SRP基因第600位至1112位核苷酸序列)，此處命名為jSRP基因，片段長度為513bp。

2、引物設計

根據jSRP基因序列設計引物，由上海英濰捷基生物技術公司合成。

上游引物P1：5'-CGGATCCACTTATGCAAGTTTTAATACTTACACG-3' (SEQ ID NO:5)

下游引物P2：5'-CCAAGCTTTTTATTCCCATATTGTTGCAGG-3' (SEQ ID NO:6)

3、RA全基因組提取及jSRP基因區(qū)段PCR擴增

參照天根細菌基因組DNA 試劑盒說明書步驟提取RA-GD菌株全基因組DNA，-20℃保存?zhèn)溆?。以RA-GD菌株全基因組DNA為模板，采用上游引物P1、下游引物P2擴增jSRP基因區(qū)段。PCR反應體系如下：10×ExTaq buffer 5μL、dNTPs(2.5 mM) 4.0μL、P1(10 pmol/L) 2.0μL、P2(10 pmol/μL) 20μL、ExTaqDNA聚合酶(5 U/μL) 0.25μL、DNA 4μL，加雙蒸水至50μL。PCR擴增反應為：首先94℃5min；然后94℃ 30s、53℃退火30s、72℃延伸30 s，循環(huán)35次；最后72℃延伸10min結束。

取5μL擴增產物用1％瓊脂糖凝膠進行電泳，結果如圖1所示，獲得一條與預期大小一致的特異性DNA條帶片段。

4、重組表達質粒的構建與鑒定

按照天根凝膠回收試劑盒說明書，將jSRP基因區(qū)段PCR回收純化產物與表達載體pET43a(+)分別用BamHⅠ和Hind Ⅲ進行雙酶切，16 ℃連接過夜后轉化DH5α感受態(tài)細胞，將培養(yǎng)液涂布于含Amp (終濃度100 mg/ L)的平板上，37℃培養(yǎng)過夜，挑選陽性克隆，抽提質粒，獲得重組質粒pET43a-jSRP。

重組質粒pET43a-jSRP采用BamHⅠ和Hind Ⅲ雙酶切鑒定，結果如圖2所示，其中DNA小片段與目的DNA片段大小相符，另外一條較大的DNA片段是pET43a (+)載體片段。將鑒定的陽性重組質粒pET43a-jSRP送上海生物工程技術有限公司測序，結果顯示，所得的jSRP基因序列與目標序列完全一致。

5、重組表達質粒pET43a-jSRP的誘導表達

把測序正確的陽性重組質粒pET43a-jSRP轉化至大腸桿菌Rosetta感受態(tài)細胞，獲得含重組質粒pET43a-jSRP的Rosetta工程菌，將其按體積比1 :50加入含Amp (100 mg/ L)的LB培養(yǎng)基中，37 ℃，180 r/min振蕩培養(yǎng)，待OD600達到0.6~0.8時，加入終濃度為0.5 mmol/ L的IPTG，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，分別在誘導后3h、4h和5h 吸取1 mL菌液于4 ℃保存，12000 r/min 離心1 min，收集細菌沉淀進行SDS-PAGE分析。

如圖3所示，第1～3泳道分別是pET43a-jSRP的Rosetta工程菌誘導3h、4h和5h情況，可見均在87 KDa左右出現特異性蛋白條帶，與預期的蛋白分子量大小一致；第4泳道是pET43a-jSRP的Rosetta工程菌未誘導的情況，無特異性蛋白條帶出現；第5泳道是pET43a (+)空載體轉化菌IPTG誘導5 h的情況，只出現了載體自身表達的蛋白。從圖3可以看出誘導5h的蛋白表達量最大，故選取5 h作為最佳誘導時間。

6、pET43a-jSRP的Rosetta工程菌表達產物的可溶性分析

將pET43a-jSRP的Rosetta工程菌按體積比1 :50加入含Amp (100 mg/ L)的LB培養(yǎng)基中，37 ℃，180 r/min振蕩培養(yǎng)，待OD₆₀₀達到0. 6~0. 8時，加入終濃度為0.5 mmol/L的IPTG，誘導培養(yǎng)5h，然后4℃，10000r/min離心10min收集菌體，加入20 mL PBS重懸菌體，于冰浴中進行超聲裂解。超聲完畢后于4℃，12000 r/min離心20 min分離超聲產物的上清和沉淀，用10 mL PBS重懸沉淀。取50 μL的超聲上清和沉淀，分別加入50 μL上樣緩沖液，混勻，置沸水浴中煮10 min后12000 r/min離心1 min，最后分別取10 μL上清進行SDS-PAGE分析。

如圖4所示，上清(第1泳道)中含有pET43a-jSRP的Rosetta工程菌表達的目的蛋白，表明該蛋白能以可溶的形式存在。

7、SRP截斷重組蛋白的純化及Western-blot檢測

采用上述誘導條件進行大量蛋白表達，收集菌液，離心，菌體沉淀用pH 7.2的PBS進行重懸，冰水浴超聲裂解菌體，離心后收集上清，按照Novagen公司的Ni-NTA His.Bind 樹脂說明書對重組蛋白進行純化，取10 μL上清進行 SDS-PAGE分析。

SRP截斷重組蛋白經SDS-PAGE電泳分離后，按如下操作進行電轉印：將預先在轉印緩沖液中浸泡后的濾紙、膠、NC膜，按以下順序組裝：平板陽極-三層濾紙-NC膜-凝膠-三層濾紙-平板陰極，15 mA轉1.5 h。電轉印結束后，NC膜用5%脫脂奶粉封閉1 h，用PBST洗滌3次，每次5 min，加入1:50稀釋的RA陽性血清(血清1型)，37℃作用1 h后，再用PBST洗滌3 次，加入1:2000稀釋的HRP標記的兔抗鴨IgG，37℃作用1 h后，用PBST洗滌3 次，用DAB顯色，然后用雙蒸水終止，拍照保存。

結果如圖5所示，第1泳道為空載體pET43a(+)轉化Rosetta菌的IPTG誘導產物與RA 血清無特異性的反應條帶，第2泳道為SRP截斷重組蛋白與RA陽性血清(血清1型)有特異性的反應條帶，表明該截斷重組蛋白具有良好的免疫反應原性，可作為血清1型RA的理想抗原。

SEQUENCE LISTING

<110> 廣東省農業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所

<120> 一種鴨疫里默氏桿菌血清1型鐵載體受體蛋白SRP的截斷重組蛋白及應用

<130>

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 753

<212> PRT

<213> Riemerella anatipestifer

<400> 1

Met Lys Lys Asn His Phe Tyr Gln Arg Asn Gly Tyr Tyr Leu Ser Thr

1 5 10 15

Met Leu Leu Lys Ala Cys Asn Ile Ala Leu Leu Thr Ala Pro Leu Phe

20 25 30

Ser Asn Ala Gln His Lys Glu Arg Ile Lys Asp Ile Gln Glu Val Glu

35 40 45

Leu Val Lys Arg Lys Leu Glu Ala Phe Glu Ser Arg Lys Leu Arg Glu

50 55 60

Val Glu Gly Thr Ser Ile Phe Ala Ala Lys Lys Thr Glu Val Val Leu

65 70 75 80

Met Asp Leu Lys Leu Ala Asn Lys Ala Leu Asn Asn Pro Arg Gln Val

85 90 95

Phe Ser Gln Val Ser Gly Val Asn Val Phe Asp Ser Asn Asp Gly Gly

100 105 110

Leu Gln Leu Asn Ile Gly Gly Arg Gly Leu Asn Pro Asn Arg Ser Ala

115 120 125

Asn Phe Asn Thr Arg Gln Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Ala Asp Val Leu

130 135 140

Gly Tyr Pro Glu Ser Tyr Tyr Thr Pro Pro Ala Glu Ala Leu Glu Glu

145 150 155 160

Ile Gln Val Val Arg Gly Ala Ala Ser Leu Gln Tyr Gly Thr Gln Phe

165 170 175

Gly Gly Leu Leu Asn Phe Lys Leu Lys Thr Pro Thr Lys Thr Gln Pro

180 185 190

Leu Glu Leu Ile Ser Arg Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Thr Tyr Thr

195 200 205

Ser Phe Ser Ala Leu Ser Gly Thr Val Gly Lys Trp Ser Tyr Tyr Thr

210 215 220

Phe Phe Asn Tyr Lys Gln Gly Asp Gly Phe Gln Glu Asn Ser Glu Tyr

225 230 235 240

Asn Ala Arg Asn Phe Tyr Val His Leu Asn Tyr Glu Ile Thr Pro Gln

245 250 255

Thr Ser Ile Ser Thr Glu Phe Thr Arg Phe Asn Tyr Leu Ala His Gln

260 265 270

Pro Gly Gly Leu Thr Asp Phe Gln Phe Tyr Gln Asn Pro Tyr Gln Ser

275 280 285

Asn Arg Ala Arg Asn Trp Phe Lys Val Asp Trp Asn Leu Trp Asn Val

290 295 300

Ser Leu Lys His Gln Phe Thr Pro Arg Ala Lys Leu Ser Leu Ser Gly

305 310 315 320

Phe Gly Leu Gly Ala Ser Arg Tyr Ser Leu Lys Val Ser Ser Ile His

325 330 335

Val Ala Asp Val Asp Tyr Glu Gly Ala Thr Arg Asp Leu Ile Thr Gly

340 345 350

Asp Phe Lys Asn Trp Gly Val Glu Ala Arg Phe Leu Gln Gln Tyr Gly

355 360 365

Asn Lys Asn His Thr Phe Leu Val Gly Gly Lys Tyr Tyr Lys Ala Gln

370 375 380

Asn Ser Gly Lys Gln Gly Pro Gly Ser Ala Phe Ser Gly Ala Asp Phe

385 390 395 400

Asn Phe Asp Gln Thr Asn Lys Asn Tyr Phe Phe Gln Ser Asn Tyr Ser

405 410 415

Tyr Pro Asn Arg Asn Ile Ala Val Phe Ser Glu Asn Ile Phe Lys Leu

420 425 430

Gly Ala Pro Trp Ser Val Val Pro Gly Val Arg Trp Glu Phe Ile Asp

435 440 445

Thr Gly Ala Asp Gly Ala Tyr Gln Arg Val Ile Glu Asp Asn Ala Gly

450 455 460

Asn Val Ile Tyr Asn Lys Arg Phe Glu Glu Gln Glu Lys Arg Gln Arg

465 470 475 480

Asn Phe Ala Leu Phe Gly Leu Gly Val Ser Tyr Lys Pro Thr Lys Ala

485 490 495

Phe Glu Phe Tyr Thr Asn Leu Ser Gln Asn Tyr Arg Ser Val Thr Phe

500 505 510

Ser Asp Ile Arg Val Glu Asn Asn Ser Gln Val Ile Asp Pro Asn Ile

515 520 525

Lys Asp Glu Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Leu Gly Ile Arg Gly Asn Trp

530 535 540

Lys Asn Thr Leu Ser Tyr Asp Ile Asn Met Phe Gly Leu Trp Tyr Asn

545 550 555 560

Asn Arg Ile Asp Asn Val Phe Arg Lys Arg Glu Gly Leu Phe Ser Asp

565 570 575

Val Ala Lys Val Arg Thr Asn Val Gly Ala Ala Phe Ile Ala Gly Leu

580 585 590

Glu Ser Leu Val Asp Val Asn Ile Asn Lys Leu Leu Leu Gly Asn Leu

595 600 605

Gln His Trp Lys Trp Asn Leu Phe Phe Asn Thr Ala Leu Thr His Ser

610 615 620

Gln Tyr Val Lys Ser Glu Ile Pro Gly Ile Lys Gly Asn Arg Val Glu

625 630 635 640

Tyr Val Pro Lys Val Asn Leu Lys Ser Gly Leu Asn Phe Gly Tyr Arg

645 650 655

Asn Phe Leu Gly Ser Leu Leu Phe Thr Tyr Met Ser Glu Gln Phe Thr

660 665 670

Thr Ala Thr Asn Glu Pro Thr Asp Lys Thr Asp His Leu Trp Gly Ile

675 680 685

Arg Gly Ser Ile Pro Ala Tyr Lys Leu Leu Asp Ala Ser Phe Ser Tyr

690 695 700

Arg Ile Thr Pro Asn Ile Arg Leu Glu Thr Gly Val Asn Asn Val Leu

705 710 715 720

Asn Glu Val Tyr Phe Thr Arg Arg Ala Thr Gly Tyr Pro Gly Pro Gly

725 730 735

Ile Ile Pro Ser Ala Pro Arg Gln Tyr Tyr Phe Thr Leu Glu Met Lys

740 745 750

Leu

<210> 2

<211> 2262

<212> DNA

<213> Riemerella anatipestifer

<400> 2

atgaagaaga atcattttta ccaaagaaat ggctattacc tttcaacgat gttattaaag 60

gcttgtaaca ttgcattgct taccgcacca ttattttcga atgctcaaca caaagaaaga 120

atcaaggata tacaggaggt agaactggtt aaaagaaagt tggaagcctt tgaatccaga 180

aaattgaggg aagtggaagg caccagcatc tttgccgcta aaaaaacgga agtggtgcta 240

atggatttaa agttggctaa taaagccctt aataatccca gacaggtctt ttcccaagta 300

tcgggcgtta atgtttttga tagtaacgac ggggggcttc agctcaacat aggagggcga 360

gggcttaacc ctaaccgttc agctaacttt aacaccagac agaatgggta cgatattagt 420

gccgatgtat tgggttatcc agagagctat tatacaccac ccgcagaggc attggaggag 480

attcaggtgg tgagaggagc ggcttcgttg caatacggaa cacagttcgg agggttgctt 540

aattttaaac taaaaacgcc aactaaaaca caaccgttgg agcttatcag caggaatact 600

tatgcaagtt ttaatactta cacgagtttc agtgctttga gcggaacggt gggcaagtgg 660

tcttattata ctttttttaa ttataagcaa ggggacggat ttcaagaaaa ttcggaatat 720

aatgccagaa acttttatgt tcatttaaac tatgagataa cgcctcaaac aagtatcagt 780

acggagttta cccgttttaa ttatttggca catcaacctg gggggcttac cgattttcag 840

ttctaccaaa atccttatca aagcaaccga gcaagaaatt ggtttaaagt ggactggaac 900

ctttggaatg tgtcattaaa gcatcagttt acccctcgtg ccaaattaag tttaagtggg 960

tttggcttgg gagcgtcccg ttattcttta aaagtctcgt ctatccatgt cgcagatgtg 1020

gattatgaag gggctacacg ggatttgatt acaggagatt ttaagaattg gggagtagaa 1080

gcaaggttcc tgcaacaata tgggaataaa aaccatactt ttttggtagg aggtaaatat 1140

tataaagctc aaaactcggg gaagcaagga ccgggaagtg ctttttctgg ggcagatttt 1200

aactttgacc agactaataa aaactatttc tttcagtcga attatagcta tcctaaccga 1260

aatatagcgg tgttttcaga gaatatattt aagttgggag ctccttggtc ggtagttcct 1320

ggtgtgcgtt gggagtttat agatactggt gcagatgggg cgtaccaaag ggtgatagaa 1380

gataatgcag gaaatgtaat ctataacaaa cgctttgaag aacaagagaa acgccaaagg 1440

aatttcgcac tatttgggtt gggtgtttct tataagccta ccaaagcgtt tgaattttac 1500

actaacttgt cccaaaatta ccgctctgta acctttagtg atattagagt agaaaataat 1560

tcccaagtga tagaccccaa cattaaggac gaaacaggct atacgggaga tttggggata 1620

agagggaatt ggaaaaatac actgtcttac gacatcaata tgtttggatt gtggtataat 1680

aacagaatag ataatgtttt tagaaaaagg gaaggcttgt tctccgatgt agcaaaggta 1740

cgaactaatg taggagcggc atttattgcg gggttagaat cgttggtaga cgtaaatatc 1800

aacaaacttc ttttagggaa tttgcaacat tggaaatgga atttgttttt taatacagca 1860

ctcacgcatt ctcaatatgt aaagtccgag atacctggga ttaagggcaa ccgtgtggaa 1920

tatgtaccta aagtcaattt aaaatcgggg cttaactttg ggtaccgtaa ctttttagga 1980

agccttttgt ttacctatat gtcggagcaa tttaccacgg caactaatga acctacggat 2040

aaaacagacc atctgtgggg gatacgaggg agcataccag cttataagct attagatgcc 2100

tctttttcgt accgcatcac acctaatatc cgattggaaa caggcgtgaa taatgtactg 2160

aatgaagtct attttacccg aagagccaca gggtatccag gaccggggat tattccttcc 2220

gctcctcgcc aatattattt cactttggaa atgaagctgt ag 2262

<210> 3

<211> 171

<212> PRT

<213> Riemerella anatipestifer

<400> 3

Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Thr Tyr Thr Ser Phe Ser Ala Leu Ser Gly

1 5 10 15

Thr Val Gly Lys Trp Ser Tyr Tyr Thr Phe Phe Asn Tyr Lys Gln Gly

20 25 30

Asp Gly Phe Gln Glu Asn Ser Glu Tyr Asn Ala Arg Asn Phe Tyr Val

35 40 45

His Leu Asn Tyr Glu Ile Thr Pro Gln Thr Ser Ile Ser Thr Glu Phe

50 55 60

Thr Arg Phe Asn Tyr Leu Ala His Gln Pro Gly Gly Leu Thr Asp Phe

65 70 75 80

Gln Phe Tyr Gln Asn Pro Tyr Gln Ser Asn Arg Ala Arg Asn Trp Phe

85 90 95

Lys Val Asp Trp Asn Leu Trp Asn Val Ser Leu Lys His Gln Phe Thr

100 105 110

Pro Arg Ala Lys Leu Ser Leu Ser Gly Phe Gly Leu Gly Ala Ser Arg

115 120 125

Tyr Ser Leu Lys Val Ser Ser Ile His Val Ala Asp Val Asp Tyr Glu

130 135 140

Gly Ala Thr Arg Asp Leu Ile Thr Gly Asp Phe Lys Asn Trp Gly Val

145 150 155 160

Glu Ala Arg Phe Leu Gln Gln Tyr Gly Asn Lys

165 170

<210> 4

<211> 513

<212> DNA

<213> Riemerella anatipestifer

<400> 4

acttatgcaa gttttaatac ttacacgagt ttcagtgctt tgagcggaac ggtgggcaag 60

tggtcttatt atactttttt taattataag caaggggacg gatttcaaga aaattcggaa 120

tataatgcca gaaactttta tgttcattta aactatgaga taacgcctca aacaagtatc 180

agtacggagt ttacccgttt taattatttg gcacatcaac ctggggggct taccgatttt 240

cagttctacc aaaatcctta tcaaagcaac cgagcaagaa attggtttaa agtggactgg 300

aacctttgga atgtgtcatt aaagcatcag tttacccctc gtgccaaatt aagtttaagt 360

gggtttggct tgggagcgtc ccgttattct ttaaaagtct cgtctatcca tgtcgcagat 420

gtggattatg aaggggctac acgggatttg attacaggag attttaagaa ttggggagta 480

gaagcaaggt tcctgcaaca atatgggaat aaa 513

<210> 5

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

cggatccact tatgcaagtt ttaatactta cacg 34

<210> 6

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ccaagctttt tattcccata ttgttgcagg 30