本發(fā)明涉及一種雙核芳基釕金屬配合物，還涉及上述雙核芳基釕金屬配合物的合成方法以及用于制備抗癌藥物和制備抗癌藥物組分方面的應(yīng)用。

技術(shù)背景

金屬抗癌藥物在生物無(wú)機(jī)化學(xué)領(lǐng)域占據(jù)著重要的地位，其中鉑類藥物在臨床上的使用率已超過50％，其通過改變dna的空間結(jié)構(gòu)來(lái)抑制癌細(xì)胞的增殖，但是其抗藥性阻礙了該類藥物的臨床使用，除此之外，在治療過程中，鉑類藥物出現(xiàn)了嚴(yán)重的副作用，例如：腎毒性、神經(jīng)毒性、血小板減少癥和嗜中性白血球減少癥等。因此，研究低毒金屬抗癌藥物具有非常重要的意義。由于釕類金屬配合物溶解在水中時(shí)，其配體交換速率與鉑類藥物類似(均為10^-3～10^-2s^-1)，這一速率指標(biāo)對(duì)抗癌活性有較大的影響。并且，釕類金屬配合物的合成方法較多、在體內(nèi)以多種價(jià)態(tài)存在(ruⁱⁱ、ruⁱⁱⁱ、ru^iv)。因此，釕類金屬抗癌藥物引起了人們的廣泛關(guān)注。其中芳基釕金屬配合物被認(rèn)為是最有前景的非鉑類金屬抗癌藥物，它具有高活性，選擇性(只選擇與癌細(xì)胞發(fā)生作用，不與正常細(xì)胞發(fā)生作用)，多靶點(diǎn)，低耐藥性及低毒性等優(yōu)點(diǎn)。因此一種具有良好的抗癌活性的芳基釕金屬配合物的研究很有意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種雙核芳基釕金屬配合物，具備該結(jié)構(gòu)的雙核芳基釕金屬配合物具有很好的抗癌活性，同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞僅有極低的副作用。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供上述雙核芳基釕金屬配合物的合成方法，該方法工藝流程簡(jiǎn)單、易于操作，且產(chǎn)率高。

本發(fā)明最后要解決的技術(shù)問題是提供上述雙核芳基釕金屬配合物在用于制備抗癌藥物和制備抗癌藥物組分方面的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

一種雙核芳基釕金屬配合物，具有如下結(jié)構(gòu)通式：

其中：r為對(duì)甲基異丙基苯或聯(lián)苯，x為cl^-、br^-或i^-中的一種，y為cl^-、br^-、i^-、cf3so3^-、no3^-、pf6^-、bf4^-或sbf6^-中的一種。

其中，該雙核芳基釕金屬配合物具有碗狀結(jié)構(gòu)，且配合物中包含的陰離子可以調(diào)節(jié)其水溶性，即配合物中所含的陰離子種類不同，配合物的水溶性也不同。

上述雙核芳基釕金屬配合物的合成方法，包括如下步驟：

步驟1，在惰性氣體氛圍下，將一定量的芳基釕二聚體溶解于有機(jī)溶劑中，得到初始溶液；

步驟2，將1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體加入到步驟1的初始溶液中，于一定溫度下反應(yīng)一段時(shí)間，得到混合溶液；

步驟3，往步驟2的混合溶液中加入所需的陰離子鹽，室溫?cái)嚢枰欢螘r(shí)間，然后過濾、濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析進(jìn)一步純化，即可得到雙核芳基釕金屬配合物。

其中，所述芳基釕二聚體為二氯芳基釕二聚體、二溴芳基釕二聚體或二碘芳基釕二聚體。

其中，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈或氯仿中的一種或多種按任意比例混合的混合溶劑。

其中，芳基釕二聚體和1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體的反應(yīng)摩爾比1∶20～10∶1。

其中，反應(yīng)時(shí)間為25～80℃，反應(yīng)時(shí)間為1～80h。

其中，所述陰離子鹽為nacl、agcf3so3、agno3、agbf4、agpf6、licf3coo、ki、lisbf6、libr或kbr。

上述雙核芳基釕金屬配合物在用于制備抗癌藥物和制備抗癌藥物組分方面的應(yīng)用。

上述雙核芳基釕金屬配合物在用于制備抗宮頸癌、乳腺癌、肝癌和肺癌藥物以及制備抗宮頸癌、乳腺癌、肝癌和肺癌藥物組分方面的應(yīng)用。

本發(fā)明合成方法中1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體的制備方法如下：在氬氣環(huán)境下，將所需量的1，3-二碘苯、咪唑、氫氧化鉀和氧化亞銅溶解在二甲基亞砜(dmso)中，于120℃下反應(yīng)48h，反應(yīng)結(jié)束后將混合液冷卻到室溫，再將冷卻后的混合液倒入體積比為1∶3的水和乙酸乙酯混合溶劑中，抽濾，濾液用乙酸乙酯萃取，干燥，濃縮，柱層析純化后得到1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體。

本發(fā)明雙核芳基釕金屬配合物合成方法的反應(yīng)鏈為：

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)方案具有的有益效果為：

本發(fā)明制備方法工藝流程簡(jiǎn)單、易于操作，產(chǎn)品收率高；制得的雙核芳基釕金屬配合物具有良好的抗癌活性，能與dna發(fā)生作用，可應(yīng)用于制備抗癌藥物或抗癌藥物組分，同時(shí)該雙核芳基釕金屬配合物對(duì)癌細(xì)胞和正常細(xì)胞具有較高的選擇性，因此具有低毒副作用和較高的藥物研究?jī)r(jià)值。

附圖說明

圖1是實(shí)施例3制得的雙核芳基釕金屬配合物3晶體結(jié)構(gòu)圖；

圖2是實(shí)施例4制得的雙核芳基釕金屬配合物4晶體結(jié)構(gòu)圖；

圖3是實(shí)施例6制得的雙核芳基釕金屬配合物6晶體結(jié)構(gòu)圖；

圖4是實(shí)施例2制得的雙核芳基釕金屬配合物2與dna相互作用的圓二色譜圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍并不局限于此。

實(shí)施例1

在氬氣氛圍下，將0.06mmol二氯(對(duì)甲基異丙基苯基)釕(ii)二聚體溶解在乙腈中，制成初始溶液；將0.4mmol1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體加入到二氯芳基釕二聚體的乙腈溶液中，80℃下反應(yīng)72h后，向反應(yīng)液中加入1mmol所需陰離子鹽agcf3so3，室溫下攪拌4h；過濾，濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析分離純化，得到黃色粉末雙核芳基釕金屬配合物1，產(chǎn)率為92.1％。

元素分析：理論值(％)：ru2c46h48cl2n8f6s2o6·(c2h6o)1.5：c44.28，h4.32，n8.43；實(shí)驗(yàn)值：c44.28，h4.04，n8.28。¹hnmr(cdcl3-d，400mhz)：7.69(2h，m，hbz，1，3-bib)，7.65(4h，s，him)，7.47(4h，dd，j＝8.2hz，j＝2.0hz，him)，7.36(4h，s，hbz，1，3-bib)，7.24(6h，s，hbz，1，3-bib)，5.94(4h，d，j＝5.7hz，hbz，p-cymene)，5.85(4h，d，j＝5.3hz，hbz，p-cymene)，2.45(2h，m，ch)，1.93(6h，s，ch3)，1.18(12h，d，j＝6.9hz，ch3)。esi-ms(+)：理論值：[1-cf3so3]⁺m/z：1111.03，實(shí)驗(yàn)值：m/z1111.17。

實(shí)施例2

在氬氣氛圍下，將0.06mmol二氯(對(duì)甲基異丙基苯基)釕(ii)二聚體溶解在氯仿中，制成初始溶液；將0.2mmol1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體加入到二氯芳基釕二聚體的氯仿溶液中，60℃下反應(yīng)10h后，向反應(yīng)液中加入1mmol所需陰離子鹽ki，室溫下攪拌48h；過濾，濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析分離純化，得到黃色粉末雙核芳基釕金屬配合物2，產(chǎn)率為54.7％。

元素分析：理論值(％)：ru2(c20h28)(c24h20n8cl2)i2·(c2h6o)1.5：c43.93，h4.47，n8.72；實(shí)驗(yàn)值：c43.58，h4.60，n8.25。¹hnmr(dmso-d⁶，400mhz)：9.76(4h，s，him)，8.71(2h，s，hbz，1，3-bib)，8.06(4h，s，him)，7.79(6h，d，j＝6.9hz，hbz，1，3-bib)，7.54(4h，s，hbz，1，3-bib)，6.11(8h，s，hbz，p-cymene)，2.56(2h，m，ch)，1.85(6h，s，ch3)，1.14(12h，d，j＝6.9hz，ch3)。esi-ms(+)：理論值：[2-i^-]⁺m/z：1090.75，實(shí)驗(yàn)值：m/z1090.7，理論值：[2-2i^-]²⁺m/z：481.0，實(shí)驗(yàn)值：m/z481.17。

實(shí)施例3

在氬氣氛圍下，將0.2mmol二氯(對(duì)甲基異丙基苯基)釕(ii)二聚體溶解在二氯甲烷中，制成初始溶液；將0.05mmol1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體加入到二氯芳基釕二聚體的二氯甲烷溶液中，25℃下反應(yīng)24h后，向反應(yīng)液中加入1mmol所需陰離子鹽agno3，室溫下攪拌24h；過濾，濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析分離純化，得到黃色粉末雙核芳基釕金屬配合物3，產(chǎn)率為55.4％，晶體結(jié)構(gòu)圖如圖1所示。

元素分析：理論值(％)：ru2c44h48cl2n10o6·ch2cl2：c46.16，h4.30，n11.96；實(shí)驗(yàn)值：c46.60，h4.55，n11.98。¹hnmr(dmso-d6，400mhz)：10.34(4h，s，him)，9.09(2h，s，hbz，1，3-bib)，8.08(4h，t，j＝1.6hz，him)，7.77(4h，m，hbz，1，3-bib)，7.73(2h，m，hbz，1，3-bib)，7.48(4h，s，hbz，1，3-bib)，6.09(8h，m，hbz，p-cymene)，2.53(2h，m，ch)，1.82(6h，s，ch3)，1.14(12h，d，j＝1.9hz，ch3)。esi-ms(+)：理論值：[3-no3^-]⁺m/z：1023.96，實(shí)驗(yàn)值：m/z1023.23，理論值：[3-2no3^-]²⁺m/z：480.98，實(shí)驗(yàn)值：m/z481.25。

實(shí)施例4

在氬氣氛圍下，將0.06mmol二氯(對(duì)甲基異丙基苯基)釕(ii)二聚體溶解在甲醇中，制成初始溶液；將0.6mmol1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體加入到二氯芳基釕二聚體的甲醇溶液中，70℃下反應(yīng)40h后，向反應(yīng)液中加入1mmol所需陰離子鹽agbf4，室溫下攪拌2h；過濾，濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析分離純化，得到黃色粉末雙核芳基釕金屬配合物4，產(chǎn)率為80.3％，晶體結(jié)構(gòu)圖如圖2所示。

元素分析：理論值(％)：ru2c44h48c14n8b2f8·c2h6o·(ch2cl2)2：c42.66，h4.33，n8.29；實(shí)驗(yàn)值：c42.42，h4.37，n8.28。¹hnmr(dmso-d6，400mhz)：10.24(4h，d，j＝1.4hz，him)，8.91(2h，d，j＝1.9hz，hbz，1，3-bib)，7.82(4h，t，j＝1.7hz，him)，7.70(4h，m，hbz，1，3-bib)，7.65(6h，m，hbz，1，3-bib)，6.06(8h，m，hbz，p-cymene)，2.55(2h，m，ch)，1.94(6h，s，ch3)，1.23(12h，d，j＝6.9hz，ch3)。esi-ms(+)：理論值：[4-bf4^-]⁺m/z：1048.76，實(shí)驗(yàn)值：m/z1049.08，理論值：[4-2bf4^-]²⁺m/z：481.0，實(shí)驗(yàn)值：m/z481.25。

實(shí)施例5

在氬氣氛圍下，將0.05mmol二氯(對(duì)甲基異丙基苯基)釕(ii)二聚體溶解在乙醇中，制成初始溶液；將1.0mmol1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體加入到二氯芳基釕二聚體的乙醇溶液中，80℃下反應(yīng)30h后，向反應(yīng)液中加入1mmol所需陰離子鹽agpf6，室溫下攪拌16h；過濾，濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析分離純化，得到黃色粉末雙核芳基釕金屬配合物5，產(chǎn)率為89.2％。

元素分析：理論值(％)：ru2c44h48n8cl2p2f12·h2o：c41.62，h3.97，n8.83；實(shí)驗(yàn)值：c41.40，h3.18，n8.38。¹hnmr(dmso-d6，400mhz)：9.05(4h，s，him)，8.14(2h，s，hbz，1，3-bib)，7.81(4h，m，him)，7.74(7h，m，hbz，1，3-bib)，7.66(3h，m，hbz，1，3-bib)，5.90(8h，dd，j＝6.29hz，j＝6.0hz，hbz，p-cymene)，2.55(2h，m，ch)，1.88(6h，s，ch3)，1.23(12h，d，j＝6.9hz，ch3)。esi-ms(+)：理論值：[5-pf6^-]⁺m/z：1106.9，實(shí)驗(yàn)值：m/z1108.0，理論值：[5-2pf6^-]²⁺m/z：481.0，實(shí)驗(yàn)值：m/z481.25。

實(shí)施例6

在氬氣氛圍下，將0.06mmol二氯(聯(lián)苯)釕(ii)二聚體溶解在氯仿中，制成初始溶液；將0.2mmol1，3-二(1h-咪唑-1-基)苯1，3-bib配體(簡(jiǎn)稱1，3-bib)加入到二氯芳基釕二聚體的氯仿溶液中，70℃下反應(yīng)10h后，向反應(yīng)液中加入1mmol所需陰離子鹽nacl，室溫下攪拌2h，過濾，濾液濃縮，粗產(chǎn)物通過柱層析分離純化，得到黃色粉末雙核芳基釕金屬配合物6，產(chǎn)率為78.9％，晶體結(jié)構(gòu)圖如圖3所示。

元素分析：理論值(％)：ru2c48h44n8cl4·c5h12·(h2o)0.5：c，43.69；h，2.44；n，5.66；實(shí)驗(yàn)值：c，43.82；h，2.49；n，5.59。¹hnmr(dmso-d6，400mhz)：10.37(4h，s，him)，9.09(2h，s，hbz，1，3-bib)，8.11(4h，t，him)，7.80(4h，m，hbz，1，3-bib)，7.74(2h，m，hbz，1，3-bib)，7.50(4h，s，hbz，1，3-bib)，6.11(4h，d，hbz，p-cymene)，6.07(4h，d，hbz，p-cymene)，2.57(2h，m，ch)，1.84(6h，s，ch3)，1.16(12h，d，ch3).esi-ms(+)：calcd.for[2-cl^-]⁺m/z：997.42，foundm/z998.92，calcd.for[6-2c1^-]²⁺m/z：480.98，foundm/z475.55。

表1為實(shí)施例3、實(shí)施例4和實(shí)施例6制得的雙核芳基釕金屬配合物晶體的x-ray單晶衍射檢測(cè)數(shù)據(jù)。

表1晶體x-ray單晶衍射檢測(cè)數(shù)據(jù)表

隨著實(shí)施例1～6反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，反應(yīng)溫度的升高，產(chǎn)物產(chǎn)率呈上升趨勢(shì)，同時(shí)反應(yīng)原料的不同對(duì)產(chǎn)率也會(huì)產(chǎn)生一定的影響。

本發(fā)明雙核芳基釕金屬配合物對(duì)于腫瘤細(xì)胞以及正常人體細(xì)胞的作用：

方法：mtt比色法，測(cè)定對(duì)人源癌細(xì)胞系(hela(宮頸癌)，mcf7(乳腺癌)，hepg2(肝細(xì)胞癌)，a549(非小細(xì)胞肺癌))在體外的抗癌活性和人正常細(xì)胞l02(肝細(xì)胞)在體外的毒副作用。hela，mcf7，hepg2，a549和l02細(xì)胞在具有10％胎牛血清和1％青霉素-鏈霉素溶液的dmem培養(yǎng)基中，37℃，5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將細(xì)胞以5000細(xì)胞/孔的初始密度接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，在培養(yǎng)24小時(shí)后移除培養(yǎng)基，作八組平行對(duì)比試驗(yàn)，在八組試驗(yàn)中分別加入相同濃度的配合物1～6、1，3-bib以及順鉑(cddp)，繼續(xù)孵育48h。之后，在每個(gè)孔中加入10μl，5mg/ml的mtt，孵育4h，最后除去培養(yǎng)基，加入150mldmso，并在eliasa(tecaninfinitem1000pro)酶標(biāo)儀上讀取490nm處的吸光度。

表2配合物1-6，1，3-bib和順鉑(cddp)的ic50(μm)值

結(jié)果表明，配合物2顯示出更高的抗癌活性，其對(duì)a549癌細(xì)胞表現(xiàn)出中等的抗增殖活性，而對(duì)正常細(xì)胞l02具有相對(duì)較低的細(xì)胞毒性(ic50＝215.9μm)，配合物2的細(xì)胞活性選擇因子(sf＝l02正常細(xì)胞的ic50/a549細(xì)胞的ic50)為7.0，高于cddp(sf＝3.3)。本發(fā)明配合物制備得到的抗癌藥物對(duì)癌細(xì)胞與正常細(xì)胞具有高選擇性，從而將減少患者潛在的副作用，反映了其低毒副作用和藥物研究?jī)r(jià)值。

本發(fā)明實(shí)施例2制得的雙核芳基釕金屬配合物2與dna作用的應(yīng)用：

方法：圓二色譜法。通過cd光譜在pbs緩沖液(50mm，ph＝7.2)中研究配合物與ct-dna的相互作用。制備含有不同摩爾比的[配合物]/[ct-dna]的一系列樣品，并在37℃孵育24小時(shí)。ct-dna的初始濃度設(shè)定為100μm，配置[配合物]/[ct-dna]摩爾比為0.01-0.07不斷增加的一系列待測(cè)樣品。在1cm路徑的比色皿中記錄cd光譜，掃描范圍設(shè)置為200-350nm，掃描速率為100nm·min^-1，狹縫寬度為1nm。

實(shí)施例2制得的雙核芳基釕金屬配合物2與dna的作用如圖4所示，隨著[配合物]/[ct-dna]的摩爾比的增加，配合物2正負(fù)信號(hào)的強(qiáng)度逐漸降低但并沒有發(fā)生移動(dòng)，其進(jìn)一步證實(shí)芳基釕(ii)配合物可以與ct-dna結(jié)合。配合物2誘導(dǎo)的dna構(gòu)象變化可以從cd光譜中明顯的看出，其中正負(fù)峰的強(qiáng)度隨著配合物2的濃度增加而降低，表明擴(kuò)展的苯環(huán)被插入到dna中。

顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而這些屬于本發(fā)明的精神所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。