本發(fā)明涉及生物，更具體地說，涉及一種新型雙細(xì)胞因子融合蛋白，其包含白介素-12(“il-12”)或白介素-il-27與其他炎性和免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子的組合；涉及治療炎性和免疫疾病或病癥的方法、和/或治療癌癥的方法。

背景技術(shù)：

1、il-12是一種70kda異二聚體細(xì)胞因子，是原型t輔助細(xì)胞1型(th1)極化細(xì)胞因子(mossman,1989；athie-morales,2004)。il-12通過激活cd8+t細(xì)胞(henry,2008；vacaflores,2017；chowdhury,2011)、nk細(xì)胞(2015；parihar,2002；zhang,2008)、cd4+t細(xì)胞(yoo,2002；vacaflores1,2016)以及一定程度上，單核細(xì)胞(coma,2006)，來發(fā)揮強(qiáng)的抗腫瘤免疫。因此，il-12主要增強(qiáng)抗原特異性t細(xì)胞活化，同時可通過適度刺激nk細(xì)胞和單核細(xì)胞，部分地橋接先天免疫系統(tǒng)。

2、干擾素-α(ifnα-2a)是i型干擾素單體，可直接誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟(simmons,2012；gessani,2014；padovan,2002)并增強(qiáng)cd8+t細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能(hiroishi,2000；kolumam,2005；lu,2019)。因此，相對于其在適應(yīng)性免疫反應(yīng)上具有的更有限影響，ifnα-2a對先天免疫系統(tǒng)的作用更大。

3、il-12的抗腫瘤作用已在臨床前和臨床上進(jìn)行評估(brunda，1993；atkins，1997)，其中由于毒性，直接腫瘤內(nèi)注射被評估并發(fā)現(xiàn)優(yōu)于臨床給藥(herpen，2004；li?s.，2005；sabel，2004)。

4、類似地，ifnα-2a已在臨床前評估，并以聚乙二醇化形式進(jìn)行了臨床評估(lyrdal，2009；sunela，2009；medrano，2017)，被批準(zhǔn)用于某些癌癥(how，2020)。

5、考慮到為驅(qū)動強(qiáng)健的抗腫瘤功能既需要啟動抗腫瘤免疫反應(yīng)(nemunaitis,2005)又需要刺激cd8+、cd4+和nk細(xì)胞，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，將ifnα-2a和il-12組合在靶向型雙細(xì)胞因子支架系統(tǒng)上(稱為“diakinetm，(“dk”)，其在共同待決申請美國申請?zhí)?7/110,104中進(jìn)行了一般性描述)，以使這兩種細(xì)胞因子靶向腫瘤微環(huán)境，可以通過誘導(dǎo)m2單核細(xì)胞分化為功能性抗原呈遞細(xì)胞(vidyarthi,2018)來增強(qiáng)原位啟動，并增強(qiáng)t細(xì)胞和nk細(xì)胞功能。這兩種細(xì)胞因子的組合在適應(yīng)性免疫系統(tǒng)和先天免疫系統(tǒng)之間架起了刺激的橋梁。

6、白介素10(il-10)是一種非共價同二聚體細(xì)胞因子，其結(jié)構(gòu)與干擾素g(ifng)相似。il-10受體由兩個il10受體1(il10r1)分子和兩個il-10受體2(il10r2)分子組成(moore，2001)。il-10受體在大多數(shù)造血細(xì)胞表面表達(dá)，并在巨噬細(xì)胞和t細(xì)胞上高度表達(dá)。

7、據(jù)報道，il-10既是免抑制性細(xì)胞因子(schreiber,2000)，又是免疫刺激性細(xì)胞因子(mumm,2011)。但il-10治療克羅恩病患者的臨床評估結(jié)果顯示反向劑量反應(yīng)(fedorak,2000；schreiber,2000)，而用聚乙二醇化il-10治療癌癥患者則產(chǎn)生了劑量可滴定的強(qiáng)效抗腫瘤反應(yīng)(naing,2018)。

8、據(jù)報道，il-10可抑制由il-2驅(qū)動的ifng自nk和cd4+t細(xì)胞的分泌產(chǎn)生(scott,2006)，但也有報道稱，il-10可以用作il-2誘導(dǎo)的cd8+t細(xì)胞增殖的輔助因子(groux,1998)。

9、本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，將il-10和il-12組合在靶向型dk細(xì)胞因子支架系統(tǒng)上從而使這兩種細(xì)胞因子靶向腫瘤微環(huán)境，可增強(qiáng)nk和t細(xì)胞功能。

10、il-27是il-12家族成員，是一種由兩個亞基(p28和eb病毒誘導(dǎo)基因3(“eib3”))組成的異二聚體細(xì)胞因子。已知il-27可誘導(dǎo)il-10。il-28是一種3型干擾素，可引發(fā)ifnα-2a釋放，刺激cd8+t細(xì)胞。il-28包括兩種同種型，il-28a和il-28b。il-29與il-28具有序列同源性，也是一種參與先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的3型干擾素。

11、本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，其他細(xì)胞因子組合(包括但不限于il-12與白介素28(il-28)或白介素29(il-29)的組合、白介素27(il-27)與ifnα-2a、il-28或il-29的組合)可并入本文描述的雙細(xì)胞因子支架系統(tǒng)中(參見例如圖1)。簡而言之，雙細(xì)胞因子支架系統(tǒng)允許多亞基細(xì)胞因子(例如，包括但不限于il-12，il-27)融合到包含人抗hiv或人抗埃博拉單克隆抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或單鏈可變區(qū)(scfv)的支架系統(tǒng)的末端，與第二細(xì)胞因子(例如，il-2，il-4，ifna-2a，il-10)組合，其中第二細(xì)胞因子融合在所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或scfv的鉸鏈區(qū)中。

12、本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，雙細(xì)胞因子支架系統(tǒng)允許多亞基細(xì)胞因子(例如，il-12、il-27)融合到包含人抗hiv或人抗埃博拉單克隆抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或scfv的支架系統(tǒng)的末端，與單體細(xì)胞因子(例如，ifn-α、il-28、il-29)或另一多亞基細(xì)胞因子(例如，il-10、il-12、il-27)組合。

13、如先前在美國專利10,858,412中所描述，包含非免疫原性可變重鏈(“vh”)和可變輕鏈(“vl”)區(qū)的支架系統(tǒng)，導(dǎo)致產(chǎn)生半衰期延長的、正確折疊并保持功能活性的il-10變體分子。將il-10整合到該支架系統(tǒng)中，顯示了增強(qiáng)的il-10對炎癥細(xì)胞(例如單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞/樹突狀細(xì)胞)和免疫細(xì)胞(例如cd8+t細(xì)胞)的功能。參見美國專利10,858,412；于2020年3月6日提交，作為美國申請16/811,718，全文以引用方式并入本文。本技術(shù)在早期發(fā)現(xiàn)的基于il-10的雙細(xì)胞因子支架系統(tǒng)上提出了改進(jìn)，用其他多亞基細(xì)胞因子(例如il-12、il-27等)代替il-10，并進(jìn)一步將第二細(xì)胞因子整合到該新型融合蛋白中，以加性或協(xié)同的方式增強(qiáng)所述多亞基細(xì)胞因子(例如il-12或il-27)的生物學(xué)特性，從而治療炎性疾病、免疫疾病和/或癌癥。

技術(shù)實現(xiàn)思路

0、發(fā)明概述

1、本公開內(nèi)容一般地涉及雙細(xì)胞因子融合蛋白。

2、因此，在第一方面，本公開內(nèi)容涉及雙細(xì)胞因子融合蛋白，其包含第一細(xì)胞因子和第二細(xì)胞因子，所述第一細(xì)胞因子是多亞基細(xì)胞因子，例如但不限于il-10、il-12或il-27及其變體，其中每個亞基分別與獲自單克隆抗體的scfv或抗原結(jié)合片段的可變重鏈(“vh”)或可變輕鏈(“vl”)區(qū)融合，其中所述第二細(xì)胞因子連接在所述scfv或抗原結(jié)合片段的vh和vl區(qū)之間。在某些實施方案中，第一細(xì)胞因子可以是任何多亞基細(xì)胞因子，例如但不限于，il-10、il-12或il-27、或其功能變體，其中所述變體包括一個或多個氨基酸取代，以增強(qiáng)il-10、il-12或il-27的功能。所述融合蛋白還包括第二細(xì)胞因子，其是與所述多亞基細(xì)胞因子(例如il-10、il-12或il-27)協(xié)同發(fā)揮作用的細(xì)胞因子，由此當(dāng)?shù)谝缓偷诙?xì)胞因子通過scfv或抗原結(jié)合片段的vh和vl區(qū)靶向特定抗原時，產(chǎn)生加性或協(xié)同效應(yīng)。這些第二細(xì)胞因子可以是任何細(xì)胞因子，包括但不限于il-6、il-4、il-1、il-2、il-3、il-5、il-7、il-8、il-9、il-10、il-15、il-21、il-26、il-27、il-28、il-29、gm-csf、g-csf、干擾素-α、-β、-γ、tgf-β或腫瘤壞死因子-α、-β、堿性fgf、egf、pdgf、il-4、il-11或il-13。雙細(xì)胞因子融合蛋白還可以包括用來自任何靶向抗體的cdr植入或替換所述scfv的互補決定區(qū)(“cdr”)，所述靶向抗體將雙細(xì)胞因子融合蛋白引導(dǎo)至靶抗原。

3、在又一方面，本公開內(nèi)容涉及式(ia)或(ib)的雙細(xì)胞因子融合蛋白：

4、nh2-(r1)-(x1)-(zn)-(x2)-(r2)-cooh(式ia)；

5、nh2-(r2)-(x1)-(zn)-(x2)-(r1)-cooh(式ib)；

6、其中

7、“r1”是來自任何多亞基第一細(xì)胞因子的α亞基，優(yōu)選為il-12-α亞基(p35)或il-27α亞基(p28)，更優(yōu)選為seq?id?no:1或5或17或19的亞基；

8、“r2”是來自任何多亞基第一細(xì)胞因子的β亞基，優(yōu)選為il-12-β亞基(p40)或il-27β亞基(ebi3)，更優(yōu)選為seq?id?no:3或7或18或20的亞基；

9、其中當(dāng)r1是第一細(xì)胞因子的α亞基時，r2是第一細(xì)胞因子的β亞基；或者當(dāng)r1是p35時，r2是p40；或者當(dāng)r1是p28時，r2是ebi3；或者當(dāng)r1為seq?id?no:1、17或19時，r2為seq?idno:3、18或20；或者當(dāng)r1為seq?id?no:5時，r2為seq?id?no:7；

10、“x1”為從第一單克隆抗體獲得的vl或vh區(qū)；“x2”為從第一單克隆抗體獲得的vh或vl區(qū)；其中當(dāng)x1為vl時，x2為vh，或者當(dāng)x1為vh時，x2為vl；

11、“z”為任何能夠增強(qiáng)所述多亞基細(xì)胞因子的生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，優(yōu)選ifnα-2a、il-28、il-29；并且

12、“n”為選自0-2的整數(shù)。

13、在一個實施方案中，所述vh和vl為獲自人抗埃博拉抗體的scfv的形式。在另一實施方案中，從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的6個cdr(來自vh的cdr?1-3和來自vl的cdr?1-3)被替換或移植成來自第二單克隆抗體的6個cdr，由此使得所述雙細(xì)胞因子融合蛋白能夠靶向特定靶標(biāo)，例如但不限于酶、受體、細(xì)胞外蛋白或細(xì)胞內(nèi)蛋白，例如與腫瘤(例如腫瘤相關(guān)抗原(taa))、炎癥反應(yīng)或自身免疫性疾病相關(guān)的靶標(biāo)。第二抗體可以包括但不限于，表皮生長因子受體(egfr)；cd14；cd52；各種免疫檢查點靶標(biāo)，例如但不限于pd-l1、pd-1、tim3、btla、lag3或ctla4；cd19；cd20；cd22；cd47；cd123；gd-2；vegfr1；vegfr2；her2；pdgfr；epcam；icam(icam-1、-2、-3、-4、-5)、vcam、fapα；5t4；trop2；edb-fn；tgfβtrap；madcam、β7整合素亞基；α4β7整合素；α4整合素；bcma；psa；psma；cea；gpc3；sr-a1；sr-a3；sr-a4；sr-a5；sr-a6；sr-b；dsr-c1；sr-d1；sr-e1；sr-f1；sr-f2；sr-g；sr-h1；sr-h2；sr-i1；或sr-j1。

14、在又一個方面，本公開內(nèi)容涉及包含il-12的雙細(xì)胞因子融合蛋白，所述融合蛋白為式(iia)或(iib):

15、nh2-(p35)-(l)-(x1)-(l)-(zn)-(l)-(x2)-(l)-(p40)-cooh(式iia)；

16、nh2-(p40)-(l)-(x1)-(l)-(zn)-(l)-(x2)-(l)-(p35)-cooh(式iib)；

17、其中

18、“p35”是具有seq?id?no:1、17或19序列的il-12α亞基；

19、“p40”是具有seq?id?no:3、18或20序列的il-12β亞基；

20、“l(fā)”是任意接頭；

21、“x1”為從第一單克隆抗體獲得的vl或vh區(qū)；“x2”為從第一單克隆抗體獲得的vh或vl區(qū)；其中當(dāng)x1為vl時，x2為vh，或者當(dāng)x1為vh時，x2為vl；

22、“z”是選自il-6、il-4、il-1、il-2、il-3、il-5、il-7、il-8、il-9、il-10單體、il-15、il-21、il-26、il-27、il-28、il-29、gm-csf、g-csf、干擾素-α、-β、-γ、tgf-β、或腫瘤壞死因子-α、-β、堿性fgf、egf、pdgf、il-4、il-11或il-13的細(xì)胞因子；且

23、“n”為選自0-2的整數(shù)。

24、在一個實施方案中，vh和vl是從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的形式。在另一實施方案中，從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的6個cdr(來自vh的cdr?1-3和來自vl的cdr?1-3)被替換或移植為來自第二單克隆抗體的6個cdr，這使得雙細(xì)胞因子融合蛋白能夠針對特定靶標(biāo)，例如但不限于酶、受體、細(xì)胞外蛋白或細(xì)胞內(nèi)蛋白，例如與腫瘤(例如腫瘤相關(guān)抗原(taa))、炎癥反應(yīng)或自身免疫性疾病相關(guān)的靶標(biāo)。第二抗體可以包括但不限于表皮生長因子受體(egfr)；cd14；cd52；各種免疫檢查點靶標(biāo)，例如但不限于pd-l1、pd-1、tim3、btla、lag3或ctla4；cd19；cd20；cd22；cd47；cd123；gd-2；vegfr1；vegfr2；her2；pdgfr；epcam；icam(icam-1、-2、-3、-4、-5)、vcam、fapα；5t4；trop2；edb-fn；tgfβtrap；madcam、β7整合素亞基；α4β7整合素；α4整合素；bcma；psa；psma；cea；gpc3；sr-a1；sr-a3；sr-a4；sr-a5；sr-a6；sr-b；dsr-c1；sr-d1；sr-e1；sr-f1；sr-f2；sr-g；sr-h1；sr-h2；sr-i1；或sr-j1。

25、在又一個方面，本公開內(nèi)容涉及包含il-27的雙細(xì)胞因子融合蛋白，所述融合蛋白為式(iiia)或(iiib):

26、nh2-(p28)-(l)-(x1)-(l)-(zn)-(l)-(x2)-(l)-(ebi3)-cooh(式iiia)；

27、nh2-(ebi3)-(l)-(x1)-(l)-(zn)-(l)-(x2)-(l)-(p28)-cooh(式iiib)；

28、其中

29、“p28”是具有seq?id?no；5序列的il-27的α亞基；

30、“ebi3”是具有seq?id?no；7序列的il-27的β亞基；

31、“l(fā)”是任意接頭；

32、“x1”為從第一單克隆抗體獲得的vl或vh區(qū)；“x2”為從第一單克隆抗體獲得的vh或vl區(qū)；其中當(dāng)x1為vl時，x2為vh，或者當(dāng)x1為vh時，x2為vl；

33、“z”是選自il-6、il-4、il-1、il-2、il-3、il-5、il-7、il-8、il-9、il-10單體、il-15、il-21、il-26、il-27、il-28、il-29、gm-csf、g-csf、干擾素-α、-β、-γ、tgf-β、或腫瘤壞死因子-α、-β、堿性fgf、egf、pdgf、il-4、il-11或il-13的細(xì)胞因子；

34、“n”為選自0-2的整數(shù)。

35、在一個實施方案中，vh和vl是從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的形式。在另一實施方案中，從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的6個cdr(來自vh的cdr?1-3和來自vl的cdr?1-3)被替換或移植為來自第二單克隆抗體的6個cdr，這使得雙細(xì)胞因子融合蛋白能夠針對特定靶標(biāo)，例如但不限于酶、受體、細(xì)胞外蛋白或細(xì)胞內(nèi)蛋白，例如與腫瘤(例如腫瘤相關(guān)抗原(taa))、炎癥反應(yīng)或自身免疫性疾病相關(guān)的靶標(biāo)。第二抗體可以包括但不限于表皮生長因子受體(egfr)；cd14；cd52；各種免疫檢查點靶標(biāo)，例如但不限于pd-l1、pd-1、tim3、btla、lag3或ctla4；cd19；cd20；cd22；cd47；cd123；gd-2；vegfr1；vegfr2；her2；pdgfr；epcam；icam(icam-1、-2、-3、-4、-5)、vcam、fapα；5t4；trop2；edb-fn；tgfβtrap；madcam、β7整合素亞基；α4β7整合素；α4整合素；bcma；psa；psma；cea；gpc3；sr-a1；sr-a3；sr-a4；sr-a5；sr-a6；sr-b；dsr-c1；sr-d1；sr-e1；sr-f1；sr-f2；sr-g；sr-h1；sr-h2；sr-i1；或sr-j1。

36、在又一個方面，本公開內(nèi)容涉及包含兩個多亞基蛋白的雙細(xì)胞因子融合蛋白，所述融合蛋白為式(iv):

37、nh2-(r1)-(la)-(x1)-(la)-(w1)-(lb)-(w2)-(la)-(x2)-(la)-(r2)-cooh(式iv)；

38、其中

39、“r1”是第一細(xì)胞因子(例如il-12或il-27)的α亞基或同二聚細(xì)胞因子(例如il-10)的第一單體，其中r1優(yōu)選為p40；

40、“r2”是第一細(xì)胞因子(例如il-12或il-27)的β亞基或同二聚細(xì)胞因子(例如il-10)的第二單體，其中r2優(yōu)選為p35；

41、“l(fā)a”是任何接頭；優(yōu)選為seq?id?no.:45的(ggggs)4，或seq?id?no.:44的(ggggs)5；

42、“l(fā)b”是任何接頭；優(yōu)選為seq?id?no.:43的gggsggg或seq?id?no.:46的(ggggs)3；

43、“x1”為從第一單克隆抗體獲得的vl或vh區(qū)；“x2”為從第一單克隆抗體獲得的vh或vl區(qū)；其中當(dāng)x1為vl時，x2為vh，或者當(dāng)x1為vh時，x2為vl；

44、“w1”是第一細(xì)胞因子(例如il-12或il-27)的α亞基或同二聚細(xì)胞因子(例如il-10)的第一單體，優(yōu)選il-10的第一單體；

45、“w2”是第一細(xì)胞因子(例如il-12或il-27)的β亞基或同二聚細(xì)胞因子(例如il-10)的第二單體，優(yōu)選il-10的第二單體。

46、在一個實施方案中，vh和vl為從人抗埃博拉抗體獲得的scfv形式。在另一實施方案中，從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的6個cdr(來自vh的cdr?1-3和來自vl的cdr?1-3)被替換或移植為來自第二單克隆抗體的6個cdr，這使得雙細(xì)胞因子融合蛋白能夠針對特定靶標(biāo)，例如但不限于酶、受體、細(xì)胞外蛋白或細(xì)胞內(nèi)蛋白，例如與腫瘤(例如腫瘤相關(guān)抗原(taa))、炎癥反應(yīng)或自身免疫性疾病相關(guān)的靶標(biāo)。第二抗體可以包括但不限于表皮生長因子受體(egfr)；cd14；cd52；各種免疫檢查點靶標(biāo)，例如但不限于pd-l1、pd-1、tim3、btla、lag3或ctla4；cd19；cd20；cd22；cd47；cd123；gd-2；vegfr1；vegfr2；her2；pdgfr；epcam；icam(icam-1、-2、-3、-4、-5)、vcam、fapα；5t4；trop2；edb-fn；tgfβtrap；madcam、β7整合素亞基；α4β7整合素；α4整合素；bcma；psa；psma；cea；gpc3；sr-a1；sr-a3；sr-a4；sr-a5；sr-a6；sr-b；dsr-c1；sr-d1；sr-e1；sr-f1；sr-f2；sr-g；sr-h1；sr-h2；sr-i1；或sr-j1。

47、在又一個方面，本公開內(nèi)容涉及包含兩個多亞基蛋白的雙細(xì)胞因子融合蛋白，所述融合蛋白為式(v)：

48、nh2-(p35)-(la)-(x1)-(la)-(il10單體)-(lb)-(il10單體)-(la)-(x2)-(la)-(p40)-cooh(式va)；

49、nh2-(p40)-(la)-(x1)-(la)-(il10單體)-(lb)-(il10單體)-(la)-(x2)-(la)-(p35)-cooh(式vb)；

50、其中

51、“p35”是具有序列seq?id?no:1、17或19的il-12的α亞基；

52、“p40”是具有序列seq?id?no:3、18或20的il-12的βα亞基；

53、“l(fā)a”是任何接頭；優(yōu)選seq?id?no.:45的(ggggs)4，或seq?id?no.:44的(ggggs)5；

54、“l(fā)b”是任何接頭；優(yōu)選seq?id?no.:43的gggsggg或seq?id?no.:46的(ggggs)3；

55、“x1”為從第一單克隆抗體獲得的vl或vh區(qū)；“x2”為從第一單克隆抗體獲得的vh或vl區(qū)；其中當(dāng)x1為vl時，x2為vh，或者當(dāng)x1為vh時，x2為vl；

56、“il10單體”是具有seq?id?no:1、3、5、7、14或16序列的il-10單體，優(yōu)選seq?id?no:16。

57、在一個實施方案中，vh和vl為從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的形式。在另一個實施方案中，從人抗埃博拉抗體獲得的scfv的6個cdr(來自vh的cdr?1-3和來自vl的cdr?1-3)被替換或移植為來自第二單克隆抗體的6個cdr，這使得雙細(xì)胞因子融合蛋白能夠針對特定靶標(biāo)，例如但不限于酶、受體、細(xì)胞外蛋白或細(xì)胞內(nèi)蛋白，例如與腫瘤(例如腫瘤相關(guān)抗原(taa))、炎癥反應(yīng)或自身免疫性疾病相關(guān)的那些靶標(biāo)。第二抗體可以包括但不限于egfr；cd14；cd52；各種免疫檢查點靶標(biāo)，例如但不限于pd-l1、pd-1、tim3、btla、lag3或ctla4；cd19；cd20；cd22；cd47；cd123；gd-2；vegfr1；vegfr2；her2；pdgfr；epcam；icam(icam-1、-2、-3、-4、-5)、vcam、fapα；5t4；trop2；edb-fn；tgfβtrap；madcam、β7整合素亞基；α4β7整合素；α4整合素；bcma；psa；psma；cea；gpc3；sr-a1；sr-a3；sr-a4；sr-a5；sr-a6；sr-b；dsr-c1；sr-d1；sr-e1；sr-f1；sr-f2；sr-g；sr-h1；sr-h2；sr-i1；或sr-j1。

58、在其他方面，本公開涉及編碼多亞基雙細(xì)胞因子融合蛋白的核酸分子。包括編碼由式(ia)、(ib)、(iia)、(iib)、(iiia)、(iiib)、(iv)、(va)和(vb)表示的雙細(xì)胞因子融合蛋白的核酸分子。

59、在其他方面，本公開涉及制備和純化雙細(xì)胞因子融合蛋白的方法。在一個實施方案中，制備雙細(xì)胞因子融合蛋白的方法包括重組表達(dá)編碼所述雙細(xì)胞因子融合蛋白的核酸。

60、在其他方面，本公開涉及一種治療癌癥的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的雙細(xì)胞因子融合蛋白。

61、在其他方面，本公開涉及一種治療炎性疾病或病癥的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的雙細(xì)胞因子融合蛋白。優(yōu)選地，所述炎性疾病是克羅恩病、銀屑病和/或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。

62、在其他方面，本公開涉及一種治療免疫疾病或病癥的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的雙細(xì)胞因子融合蛋白。

63、在其他方面，本公開涉及治療、抑制和/或緩解膿毒癥和/或膿毒癥休克及其相關(guān)癥狀的方法。

64、以上對代表性方面的簡化總結(jié)旨在提供對本公開的基本理解。本總結(jié)并非對所有考慮方面的全面概述，并非旨在確定所有方面的關(guān)鍵或重要要素，也并非旨在界定本公開的任何或所有方面的范圍。其唯一目的是以概述方式呈現(xiàn)一個或多個方面，作為隨后更詳細(xì)描述本公開的序言。為實現(xiàn)上述目標(biāo)，本公開的該一個或多個方面包括權(quán)利要求中描述和示例性指出的特征。