本發(fā)明涉及肽化合物的制造方法。

背景技術(shù)：

1、肽是多個(gè)氨基酸連接而成的分子，其在生物進(jìn)行生命活動(dòng)方面發(fā)揮著不可或缺的作用。隨著生物學(xué)、化學(xué)的發(fā)展，肽的理解加深，并且積極地進(jìn)行了以創(chuàng)造出新型藥物為目標(biāo)的天然肽的有效利用、基于肽的人工設(shè)計(jì)的功能性肽的研究、開發(fā)(非專利文獻(xiàn)1)。尤其是報(bào)道了肽的環(huán)化、構(gòu)成氨基酸的n-烷基化、特別是n-甲基化有助于膜透過性、代謝穩(wěn)定性提高(非專利文獻(xiàn)2、非專利文獻(xiàn)3)、成為細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移、口服劑的開發(fā)的關(guān)鍵的類似藥物的環(huán)狀肽結(jié)構(gòu)的見解、考察，肽制藥中的該結(jié)構(gòu)的重要性的認(rèn)知度正在提高(專利文獻(xiàn)1)。

2、肽的合成通過形成酰胺鍵而延伸至所需序列得以實(shí)現(xiàn)。作為更具體的方法，可舉出液相法和固相法(非專利文獻(xiàn)4)。其中，固相法是通過將聚合物樹脂(固相合成用樹脂)作為固定相，使氨基酸依次鍵合從而合成目標(biāo)肽的方法(非專利文獻(xiàn)5)。此外，近年來，以纖維素等的膜為固定相的肽陣列技術(shù)不斷發(fā)展，作為迅速地自動(dòng)合成少量多檢體的肽的技術(shù)而備受關(guān)注(非專利文獻(xiàn)6)。

3、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

4、專利文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)1：wo2013/100132

6、專利文獻(xiàn)2：wo2018/225851

7、非專利文獻(xiàn)

8、非專利文獻(xiàn)1：future?med.chem.，2009，1，1289-1310.

9、非專利文獻(xiàn)2：acc?chem.res.，2008，41，1331-1342.

10、非專利文獻(xiàn)3：angew.chem.int.ed.，2013，52，254-269.

11、非專利文獻(xiàn)4：amino?acids，peptides?and?proteins?in?organicchemistry：building?blocks，catalysis?and?coupling?chemistry，volume?3，2011.

12、非專利文獻(xiàn)5：solid?phase?peptide?synthesis(bachem公司發(fā)行)[2022年1月18日檢索]，網(wǎng)絡(luò)＜url：https：//www.bachem.com/wp-admin/admin-ajax.php？juwpfisadmin＝false&action＝wpfd&task＝file.download&wpfd_category_id＝180&wpfd_file_id＝213490&token＝&preview＝1>

13、非專利文獻(xiàn)6：biotechnology?and?bioprocess?engineering，2016，21，119-127.

14、非專利文獻(xiàn)7：methods?mol.biol.，2009，570，157-174.

15、非專利文獻(xiàn)8：org.lett.2021，23，6900-6904.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的課題

2、在肽固相合成中，將纖維素等膜作為固定相的肽陣列技術(shù)不斷發(fā)展，作為迅速地自動(dòng)合成少量多檢體的肽的技術(shù)而備受關(guān)注(非專利文獻(xiàn)6)。因此，本發(fā)明人等為了合成類似藥物的肽而嘗試將其應(yīng)用于以膜為固定相的肽陣列技術(shù)。然而，由于類似藥物的肽含有大量n-烷基氨基酸，所以酰胺化反應(yīng)的合成難度高，在使用了肽陣列的合成中應(yīng)用了現(xiàn)有的酰胺化條件，結(jié)果均為低收率，明確了不存在充分滿足的酰胺化的條件。例如，在與膜固相鍵合的n-甲基苯丙氨酸與接下來的fmoc-正亮氨酸的酰胺化反應(yīng)中，使用非專利文獻(xiàn)7中記載的反應(yīng)條件，結(jié)果反應(yīng)轉(zhuǎn)化率為3～4％。另外，參考包含n-取代氨基酸的肽的合成方法(專利文獻(xiàn)2)中記載的、使用二異丙基碳二亞胺(dic)和1－羥基-7-氮雜苯并三唑(hoat)的條件實(shí)施，結(jié)果反應(yīng)轉(zhuǎn)化率為50～64％。

3、詳細(xì)研究了反應(yīng)的詳細(xì)情況，結(jié)果確認(rèn)到反應(yīng)體系中的活性酯的失活。出于提高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率的目的，將試劑濃度設(shè)為2倍進(jìn)行了研究，結(jié)果析出了n，n’-二異丙基脲的晶體。在肽陣列技術(shù)中，通過將送液自動(dòng)化而實(shí)現(xiàn)迅速化和效率化，但由于晶體析出而引起堵塞和/或伴隨清洗不足的雜質(zhì)的增加，因此難以在現(xiàn)有條件下直接應(yīng)用高試劑濃度的條件。

4、一方面，本發(fā)明的課題在于，在肽合成法的、特別是縮合反應(yīng)的工序中提高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率。另外，一方面，本發(fā)明的課題在于提供一種使用通過避免晶體析出而能夠應(yīng)用于自動(dòng)合成的酰胺化條件從而高效地制造高純度的肽化合物的方法。

5、用于解決課題的手段

6、鑒于上述情況，本發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，結(jié)果完成了本發(fā)明。本發(fā)明的方法并不限定于以膜為固定相的肽陣列技術(shù)，是也能夠應(yīng)用于以聚合物樹脂(固相合成用樹脂)為固定相的固相合成的方法。

7、例如，本發(fā)明提供以下的[a1]～[a64]。

8、[a?1]一種基于固相法的肽化合物的制造方法，其包括：

9、準(zhǔn)備工序，準(zhǔn)備擔(dān)載于固相的、具有氨基的第一氨基酸或具有氨基的第一肽；以及

10、縮合工序，使第一氨基酸或第一肽與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二氨基酸，或者與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二肽在下述通式(a)所示的至少1種碳二亞胺系縮合劑和添加劑的存在下進(jìn)行縮合，

11、ra-n＝c＝n-rb···(a)

12、(式中，ra為c4～c10仲烷基或叔烷基，rb為c2～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，ra和rb中的各基團(tuán)可以被獨(dú)立地選自鹵素、c1～c6烷氧基、二c1～c6烷基氨基、或4～8元環(huán)狀氨基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。)。

13、[a2]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為c4～c10仲烷基。

14、[a2-1]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為c4～c8仲烷基。

15、[a2-2]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c8仲烷基或叔烷基。

16、[a2-3]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c8仲烷基。

17、[a2-4]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c6仲烷基。

18、[a2-5]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為1-甲基庚基、1-甲基丁基、1-乙基丙基或仲丁基。

19、[a2-6]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為仲丁基。

20、[a3]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為c3～c10仲烷基或叔烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，rb中的各基團(tuán)可以被獨(dú)立地選自鹵素、c1～c6烷氧基、二c1～c6烷基氨基、或4～8元環(huán)狀氨基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。

21、[a3-1]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為c3～c10仲烷基或叔烷基。

22、[a3-2]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為c3～c10仲烷基或叔烷基、或者c7～c14芳基烷基。

23、[a3-3]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為c3～c10仲烷基、或者c7～c10芳基烷基。

24、[a3-4]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為c3～c6仲烷基。

25、[a3-5]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為1-甲基芐基、1-甲基庚基、1-甲基丁基、1-乙基丙基或仲丁基。

26、[a3-6]根據(jù)[a1]或[a2]中記載的方法，其中，rb為仲丁基。

27、[a4]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為c4～c8仲烷基或叔烷基，rb為c4～c10仲烷基或叔烷基、或c7～c14芳基烷基。

28、[a4-1]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為c4～c8仲烷基，rb為c4～c10仲烷基、或c7～c14芳基烷基。

29、[a4-2]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為c4～c6仲烷基，rb為c4～c8仲烷基、或c7～c10芳基烷基。

30、[a5]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c8仲烷基或叔烷基，rb為c3～c10仲烷基或叔烷基。

31、[a5-1]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c8仲烷基，rb為c4～c10仲烷基、或c7～c14芳基烷基。

32、[a5-2]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c8仲烷基，rb為c4～c10仲烷基、或c7～c10芳基烷基。

33、[a5-3]根據(jù)[a1]中記載的方法，其中，ra為具有不對(duì)稱碳的c4～c6仲烷基，rb為c4～c8仲烷基、或c7～c10芳基烷基。

34、[a6]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑包含選自n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、n，n’雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)和n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)中的至少1種。

35、[a6-1]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑包含選自n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)中的至少1種。

36、[a6-2]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1－甲基丁基)碳二亞胺(ss30)。

37、[a6-3]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)。

38、[a6-4]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)。

39、[a6-5]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)。

40、[a6-6]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n,n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)。

41、[a6-7]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n,n’-雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)。

42、[a6-8]根據(jù)[a1]～[a5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)。

43、[a7]根據(jù)[a1]～[a6]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，添加劑為選自1-羥基-7-氮雜苯并三唑(hoat)、1-羥基苯并三唑(hobt)、3，4-二氫-3-羥基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(hoobt)、氰基(羥基亞氨基)乙酸乙酯(oxyma)、和5-(羥基亞氨基)-1，3-二甲基嘧啶-2，4，6(1h，3h，5h)-三酮(oxyma?b)中的至少1種。

44、[a8]根據(jù)[a1]～[a6]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，添加劑為選自hoat、hoobt和oxyma中的至少1種。

45、[a9]根據(jù)[a1]～[a6]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，添加劑為hoat、hoobt、或oxyma。

46、[a10]根據(jù)[a1]～[a9]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在溶劑中進(jìn)行，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.4mol/l以上、0.5mol/l以上、0.6mol/l以上、或0.7mol/l以上。

47、[a11]根據(jù)[a1]～[a10]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，縮合工序在溶劑中進(jìn)行，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為4.0mol/l以下、3.0mol/l以下、2.0mol/l以下、或1.0mol/l以下。

48、[a12]根據(jù)[a1]～[a11]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，縮合工序在溶劑中進(jìn)行，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.4～4.0mol/l、0.5～3.0mol/l、0.6～2.0mol/l、或0.7～1.0mol/l。

49、[a13]根據(jù)[a1]～[a11]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，縮合工序在溶劑中進(jìn)行，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.7～1.0mol/l。

50、[a14]根據(jù)[a1]～[a13]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，固相為膜或固相合成用樹脂。

51、[a15]根據(jù)[a1]～[a13]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，固相為膜。

52、[a16]根據(jù)[a15]中記載的方法，其中，膜為纖維素膜、聚丙烯膜、或聚氨基乙基甲基丙烯酰胺膜。

53、[a17]根據(jù)[a15]中記載的方法，其中，膜為纖維素膜。

54、[a18]根據(jù)[a1]～[a13]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，固相為固相合成用樹脂。

55、[a19]根據(jù)[a?18]中記載的方法，其中，固相合成用樹脂為氯三苯甲基(ctc)樹脂、三苯甲基(trt)樹脂、sasrin樹脂、rink酰胺樹脂、merrifield樹脂、或wang樹脂。

56、[a20]根據(jù)[a?18]中記載的方法，其中，固相合成用樹脂為氯三苯甲基(ctc)樹脂。

57、[a21]根據(jù)[a1]～[a20]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由光裂解性部位、二硫鍵、或酸不穩(wěn)定部位進(jìn)行鍵合。

58、[a21-1]根據(jù)[a1]～[a20]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由光裂解性部位進(jìn)行鍵合。

59、[a21-2]根據(jù)[a1]～[a20]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由二硫鍵進(jìn)行鍵合。

60、[a21-3]根據(jù)[a1]～[a20]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由酸不穩(wěn)定部位進(jìn)行鍵合。

61、[a22]根據(jù)[a21-1]中記載的方法，其中，光裂解性部位具有硝基藜蘆氧基羰基殘基或香豆素殘基。

62、[a22-1]根據(jù)[a21-1]中記載的方法，其中，光裂解性部位為硝基藜蘆氧基羰基殘基。

63、[a23]根據(jù)[a21-3]中記載的方法，其中，酸不穩(wěn)定部位具有三苯甲基酯結(jié)構(gòu)、氯三苯甲基酯結(jié)構(gòu)、烷氧基芐基醚結(jié)構(gòu)、三烷氧基芐基氨基羰基結(jié)構(gòu)、二烷氧基苯基-烷氧基苯基甲基氨基羰基結(jié)構(gòu)、或烷氧基咕噸-9-基氨基羰基結(jié)構(gòu)。

64、[a23-1]根據(jù)[a21-3]中記載的方法，其中，酸不穩(wěn)定部位具有氯三苯甲基酯結(jié)構(gòu)。

65、[a24]根據(jù)[a1]～[a23]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.0當(dāng)量以上、1.1當(dāng)量以上、或1.2當(dāng)量以上的碳二亞胺系縮合劑。

66、[a25]根據(jù)[a1]～[a24]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用5.0當(dāng)量以下、4.0當(dāng)量以下、3.0當(dāng)量以下、2.0當(dāng)量以下、或1.5當(dāng)量以下的碳二亞胺系縮合劑。

67、[a26]根據(jù)[a1]～[a25]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.0～5.0當(dāng)量、1.1～4.0當(dāng)量、1.1～3.0當(dāng)量、1.2～2.0當(dāng)量、或1.2～1.5當(dāng)量的碳二亞胺系縮合劑。

68、[a27]根據(jù)[a1]～[a25]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.2～1.5當(dāng)量的碳二亞胺系縮合劑。

69、[a28]根據(jù)[a1]～[a27]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用0.01當(dāng)量、0.05當(dāng)量、0.1當(dāng)量、0.2當(dāng)量以上、或0.3當(dāng)量以上的添加劑。

70、[a29]根據(jù)[a1]～[a28]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.0當(dāng)量以下、0.9當(dāng)量以下、0.8當(dāng)量以下、或0.7當(dāng)量以下的添加劑。

71、[a30]根據(jù)[a1]～[a29]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用0.05～1.0當(dāng)量、0.1～0.9當(dāng)量、0.2～0.8當(dāng)量、或0.3～0.7當(dāng)量的添加劑。

72、[a31]根據(jù)[a1]～[a29]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用0.3～0.7當(dāng)量的添加劑。

73、[a32]根據(jù)[a1]～[a31]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為非天然氨基酸。

74、[a33]根據(jù)[a1]～[a32]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為α，α-二取代氨基酸、β-支鏈氨基酸、或n-烷基氨基酸(其中，n-烷基氨基酸中的烷基可以被獨(dú)立地選自c3～c6環(huán)烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代)。

75、[a34]根據(jù)[a1]～[a32]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為烷基的碳原子數(shù)為1～8的n-烷基氨基酸(其中，烷基可以被獨(dú)立地選自鹵素、氰基、c3～c6環(huán)烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代)。

76、[a35]根據(jù)[a1]～[a32]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為n-烷基氨基酸、烷基的碳原子數(shù)為1～8的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子數(shù)為1～6的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子數(shù)為1～3的n-烷基氨基酸、或n-甲基氨基酸。

77、[a36]根據(jù)[a1]～[a32]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為n-甲基氨基酸。

78、[a37]根據(jù)[a1]～[a36]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸為非天然氨基酸。

79、[a38]根據(jù)[a1]～[a37]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸為α，α-二取代氨基酸、β-支鏈氨基酸、或n-烷基氨基酸。

80、[a39]根據(jù)[a1]～[a38]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，保護(hù)氨基中的保護(hù)基為下述式(1)所示的基團(tuán)，

81、[化學(xué)式1]

82、

83、(式中，r1～r8獨(dú)立地選自氫、c1-c8烷基、c1-c8氟烷基、鹵素、磺基和三甲基甲硅烷基，r9～r10獨(dú)立地為氫或甲基)。

84、[a40]根據(jù)[a1]～[a38]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，保護(hù)氨基中的保護(hù)基為9-芴基甲基氧基羰基(fmoc)基、fmoc(2，7tb)基、fmoc(1me)基、fmoc(2f)基、fmoc(2，7br)基、mio-fmoc基、dio-fmoc基、tdf-fmoc基、fmoc(2tms)基、fmoc(2so3h)基、sm-fmoc基、或rm-fmoc基。

85、[a41]根據(jù)[a1]～[a38]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，保護(hù)氨基中的保護(hù)基為fmoc基。

86、[a42]根據(jù)[a?1]～[a41]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在溶劑中進(jìn)行。

87、[a43]根據(jù)[a42]中記載的方法，其中，溶劑包含選自酰胺系溶劑、脲系溶劑、醚系溶劑、鹵素系溶劑、腈系溶劑和苯系溶劑中的至少1種。

88、[a44]根據(jù)[a43]中記載的方法，其中，溶劑為酰胺系溶劑。

89、[a45]根據(jù)[a44]中記載的方法，其中，酰胺系溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)、二甲基乙酰胺(dma)、n-乙基-2-吡咯烷酮(nep)、n-丁基-2-吡咯烷酮(nbp)和甲酰胺。

90、[a46]根據(jù)[a43]中記載的方法，其中，溶劑為脲系溶劑。

91、[a47]根據(jù)[a46]中記載的方法，其中，脲系溶劑選自1，3-二甲基-2-咪唑啉酮(dmi)和n,n’-二甲基丙烯基脲(dmpu)。

92、[a48]根據(jù)[a43]中記載的方法，其中，溶劑為醚系溶劑。

93、[a49]根據(jù)[a48]中記載的方法，其中，醚系溶劑選自四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、4-甲基四氫吡喃。

94、[a50]根據(jù)[a43]中記載的方法，其中，溶劑為鹵素系溶劑。

95、[a51]根據(jù)[a50]中記載的方法，其中，鹵素系溶劑選自二氯甲烷、1，2-二氯乙烷。

96、[a52]根據(jù)[a43]中記載的方法，其中，溶劑為腈系溶劑。

97、[a53]根據(jù)[a52]中記載的方法，其中，腈系溶劑為乙腈。

98、[a54]根據(jù)[a43]中記載的方法，其中，溶劑為苯系溶劑。

99、[a55]根據(jù)[a54]中記載的方法，其中，苯系溶劑選自苯、甲苯、二甲苯。

100、[a56]根據(jù)[a1]～[a55]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在0℃～100℃、10℃～80℃、10℃～60℃、10℃～50℃、10℃～40℃、10℃～35℃、15℃～60℃、20℃～60℃、20℃～40℃、或25℃～40℃下進(jìn)行。

101、[a57]根據(jù)[a1]～[a55]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在20℃～60℃下進(jìn)行。

102、[a58]根據(jù)[a1]～[a57]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，將縮合工序重復(fù)2次以上。

103、[a59]根據(jù)[a1]～[a57]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，將縮合工序重復(fù)2次。

104、[a60]根據(jù)[a1]～[a59]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序之后還包括將擔(dān)載于固相的、第二氨基酸或第二肽中的保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基的保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)的脫保護(hù)工序。

105、[a61]根據(jù)[a60]中記載的方法，其中，在縮合工序與脫保護(hù)工序之間還包括對(duì)固相進(jìn)行清洗的清洗工序。

106、[a62]根據(jù)[a60]或[a61]中記載的方法，其中，將縮合工序和脫保護(hù)工序重復(fù)多次(其中，多次縮合工序中使用的多個(gè)第二氨基酸和/或第二肽分別可以相同也可以不同)。

107、[a63]上述式(a)所示的碳二亞胺系縮合劑在[a1]～[a62]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

108、[a64]dsbc在[a1]～[a62]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

109、關(guān)于上述通式(a)中的ra和rb的組合，從在反應(yīng)體系中活性酯能夠長(zhǎng)時(shí)間維持高濃度、在縮合反應(yīng)的工序中能夠進(jìn)一步提高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選[a4]～[a4-2]，從即使在高濃度下也能夠通過高度避免源自碳二亞胺的脲的析出而在自動(dòng)合成中也能夠高效地酰胺化的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選[a5]～[a5-3]。

110、在[a1]～[a64]中，對(duì)基于固相法的肽化合物的制造方法進(jìn)行了說明，但這些制造方法也能夠應(yīng)用于液相法。即，本發(fā)明的一個(gè)方面提供以下的[a1’]。[a1’]也可以包括[a2]～[a64]中的涉及除固相以外的特征。

111、[a1’]一種基于液相法的肽化合物的制造方法，其包括：

112、準(zhǔn)備工序，準(zhǔn)備具有氨基的第一氨基酸或具有氨基的第一肽；以及

113、縮合工序，使第一氨基酸或第一肽與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二氨基酸，或者與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二肽在上述通式(a)所示的至少1種碳二亞胺系縮合劑和添加劑的存在下進(jìn)行縮合。

114、根據(jù)該方法，能夠以高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率得到目標(biāo)肽化合物。

115、例如，本發(fā)明還提供以下的[b1]～[b63]。

116、[b1]一種基于固相法的肽化合物的制造方法，其包括：

117、準(zhǔn)備工序，準(zhǔn)備擔(dān)載于固相的、具有n-烷基氨基的第一氨基酸或在n末端具有n-烷基氨基的第一肽；以及

118、縮合工序，使第一氨基酸或第一肽與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二氨基酸，或者與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二肽在下述通式(a’)所示的至少1種碳二亞胺系縮合劑和添加劑的存在下，在溶劑中進(jìn)行縮合，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.4～4.0mol/l，

119、ra’-n＝c＝n-rb’...(a’)

120、(式中，ra’為c3～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，rb’為c1～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，ra’和rb’中的各基團(tuán)可以被獨(dú)立地選自鹵素、c1～c6烷氧基、二c1～c6烷基氨基、或4～8元環(huán)狀氨基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。其中，ra’中的總碳原子數(shù)為4以上。)。

121、[b2]根據(jù)[b1]中記載的方法，其中，ra’為c4～c10烷基、c4～c6烷基、或c4烷基。

122、[b3]根據(jù)[b1]或[b2]中記載的方法，其中，rb’為c1～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基。

123、[b3-1]根據(jù)[b1]或[b2]中記載的方法，其中，rb’為c1～c10烷基。

124、[b3-2]根據(jù)[b1]或[b2]中記載的方法，其中，rb’為c2～c6烷基。

125、[b3-3]根據(jù)[b1]或[b2]中記載的方法，其中，rb’為c4烷基。

126、[b4]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為選自dsbc、1-叔丁基-3-乙基碳二亞胺(tbec)、二叔丁基碳二亞胺(dtbc)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(edci)、n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、n，n’-雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)和n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)中的至少1種。

127、[b4-1]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為選自dsbc、1-叔丁基-3-乙基碳二亞胺(tbec)、二叔丁基碳二亞胺(dtbc)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(edci)中的至少1種。

128、[b5]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑包含選自n,n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、n，n’-雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)和n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)中的至少1種。

129、[b5-1]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑包含選自n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)中的至少1種。

130、[b5-2]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)。

131、[b5-3]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為dsbc。

132、[b5-4]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)。

133、[b5-5]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)。

134、[b5-6]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)。

135、[b5-7]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n，n’-雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)。

136、[b5-8]根據(jù)[b1]～[b3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，碳二亞胺系縮合劑為n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)。

137、[b6]根據(jù)[b1]～[b5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，添加劑為選自hoat、hobt、hoobt和oxyma中的至少1種。

138、[b7]根據(jù)[b1]～[b5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，添加劑為選自hoat、hoobt和oxyma中的至少1種。

139、[b8]根據(jù)[b1]～[b5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，添加劑為hoat、hoobt或oxyma。

140、[b9]根據(jù)[b1]～[b8]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.5mol/l以上、0.6mol/l以上、或0.7mol/l以上。

141、[b10]根據(jù)[b1]～[b9]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，在縮合工序中，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為3.0mol/l以下、2.0mol/l以下、或1.0mol/l以下。

142、[b11]根據(jù)[b1]～[b10]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，在縮合工序中，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.5～3.0mol/l、0.6～2.0mol/l、或0.7～1.0mol/l。

143、[b12]根據(jù)[b1]～[b10]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，在縮合工序中，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.7～1.0mol/l。

144、[b13]根據(jù)[b1]～[b12]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，固相為膜或固相合成用樹脂。

145、[b14]根據(jù)[b1]～[b12]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，固相為膜。

146、[b15]根據(jù)[b14]中記載的方法，其中，膜為纖維素膜、聚丙烯膜、或聚氨基乙基甲基丙烯酰胺膜。

147、[b16]根據(jù)[b14]中記載的方法，其中，膜為纖維素膜。

148、[b17]根據(jù)[b1]～[b12]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，固相為固相合成用樹脂。

149、[b18]根據(jù)[b17]中記載的方法，其中，固相合成用樹脂為氯三苯甲基(ctc)樹脂、三苯甲基(trt)樹脂、sasrin樹脂、rink酰胺樹脂、merrifield樹脂、或wang樹脂。

150、[b19]根據(jù)[b17]中記載的方法，其中，固相合成用樹脂為氯三苯甲基(ctc)樹脂。

151、[b20]根據(jù)[b1]～[b19]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由光裂解性部位、二硫鍵、或酸不穩(wěn)定部位進(jìn)行鍵合。

152、[b20-1]根據(jù)[b1]～[b19]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由光裂解性部位而被擔(dān)載。

153、[b20-2]根據(jù)[b1]～[b19]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由二硫鍵進(jìn)行鍵合。

154、[b20-3]根據(jù)[b1]～[b19]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，固相與第一氨基酸或第一肽經(jīng)由酸不穩(wěn)定部位進(jìn)行鍵合。

155、[b21]根據(jù)[b20-1]中記載的方法，其中，光裂解性部位具有硝基藜蘆氧基羰基殘基、或香豆素殘基。

156、[b21-1]根據(jù)[b20-1]中記載的方法，其中，光裂解性部位為硝基藜蘆氧基羰基殘基。

157、[b22]根據(jù)[b20-3]中記載的方法，其中，酸不穩(wěn)定部位具有三苯甲基酯結(jié)構(gòu)、氯三苯甲基酯結(jié)構(gòu)、烷氧基芐基醚結(jié)構(gòu)、三烷氧基芐基氨基羰基結(jié)構(gòu)、二烷氧基苯基-烷氧基苯基甲基氨基羰基結(jié)構(gòu)、或烷氧基咕噸-9-基氨基羰基結(jié)構(gòu)。

158、[b22-1]根據(jù)[b20-3]中記載的方法，其中，酸不穩(wěn)定部位具有氯三苯甲基酯結(jié)構(gòu)。

159、[b23]根據(jù)[b1]～[b22]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.0當(dāng)量以上、1.1當(dāng)量以上、或1.2當(dāng)量以上的碳二亞胺系縮合劑。

160、[b24]根據(jù)[b1]～[b23]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用5.0當(dāng)量以下、4.0當(dāng)量以下、3.0當(dāng)量以下、2.0當(dāng)量以下、或1.5當(dāng)量以下的碳二亞胺系縮合劑。

161、[b25]根據(jù)[b1]～[b24]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.0～5.0當(dāng)量、1.1～4.0當(dāng)量、1.1～3.0當(dāng)量、1.2～2.0當(dāng)量、或1.2～1.5當(dāng)量的碳二亞胺系縮合劑。

162、[b26]根據(jù)[b25]中記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.2～1.5當(dāng)量的碳二亞胺系縮合劑。

163、[b27]根據(jù)[b1]～[b26]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用0.01當(dāng)量以上、0.05當(dāng)量以上、0.1當(dāng)量以上、0.2當(dāng)量以上、或0.3當(dāng)量以上的添加劑。

164、[b28]根據(jù)[b1]～[b27]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用1.0當(dāng)量以下、0.9當(dāng)量以下、0.8當(dāng)量以下、或0.7當(dāng)量以下的添加劑。

165、[b29]根據(jù)[b1]～[b28]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用0.05～1.0當(dāng)量、0.1～0.9當(dāng)量、0.2～0.8當(dāng)量、或0.3～0.7當(dāng)量的添加劑。

166、[b30]根據(jù)[b1]～[b28]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序中，相對(duì)于第二氨基酸或第二肽，使用0.3～0.7當(dāng)量的添加劑。

167、[b31]根據(jù)[b1]～[b30]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為非天然氨基酸。

168、[b32]根據(jù)[b1]～[b31]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸的n-烷基氨基中的烷基、或第一肽的n末端的氨基酸的n-烷基氨基中的烷基為c1～c10烷基、c1～c6烷基、或c1～c3烷基(此處的烷基可以被獨(dú)立地選自鹵素、氰基、c1～c6烷氧基、c3～c6環(huán)烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代)。

169、[b33]根據(jù)[b1]～[b32]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸是烷基的碳原子數(shù)為1～8的n-烷基氨基酸(其中，烷基可以被獨(dú)立地選自鹵素、氰基、c1～c6烷氧基、c3～c6環(huán)烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代)。

170、[b34]根據(jù)[b1]～[b32]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸為n-烷基氨基酸、烷基的碳原子數(shù)為1～8的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子數(shù)為1～6的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子數(shù)為1～3的n-烷基氨基酸、或n-甲基氨基酸。

171、[b35]根據(jù)[b1]～[b34]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第一氨基酸的n-烷基氨基中的烷基、或第一肽的n末端的氨基酸的n-烷基氨基中的烷基為甲基。

172、[b36]根據(jù)[b1]～[b35]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸為非天然氨基酸。

173、[b37]根據(jù)[b1]～[b36]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸為α，α-二取代氨基酸、β-支鏈氨基酸、或n-烷基氨基酸。

174、[b38]根據(jù)[b1]～[b37]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，保護(hù)氨基中的保護(hù)基為下述式(1)所示的基團(tuán)，

175、[化學(xué)式2]

176、

177、(式中，r1～r8獨(dú)立地選自氫、c1-c8烷基、c1-c8氟烷基、鹵素、磺基和三甲基甲硅烷基，r9～r10獨(dú)立地為氫或甲基)。

178、[b39]根據(jù)[b1]～[b37]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，保護(hù)氨基中的保護(hù)基為fmoc基、fmoc(2，7tb)基、fmoc(1me)基、fmoc(2f)基、fmoc(2，7br)基、mio-fmoc基、dio-fmoc基、tdf-fmoc基、fmoc(2tms)基、fmoc(2so3h)基、sm-fmoc基、或rm-fmoc基。

179、[b40]根據(jù)[b1]～[b37]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，保護(hù)氨基中的保護(hù)基為fmoc基。

180、[b41]根據(jù)[b1]～[b40]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在溶劑中進(jìn)行。

181、[b42]根據(jù)[b41]中記載的方法，其中，溶劑包含選自酰胺系溶劑、脲系溶劑、醚系溶劑、鹵素系溶劑、腈系溶劑和苯系溶劑中的至少1種。

182、[b43]根據(jù)[b42]中記載的方法，其中，溶劑為酰胺系溶劑。

183、[b44]根據(jù)[b43]中記載的方法，其中，酰胺系溶劑選自dmf、nmp、dma、nep、nbp和甲酰胺。

184、[b45]根據(jù)[b42]中記載的方法，其中，溶劑為脲系溶劑。

185、[b46]根據(jù)[b45]中記載的方法，其中，脲系溶劑選自dmi和dmpu。

186、[b47]根據(jù)[b42]中記載的方法，其中，溶劑為醚系溶劑。

187、[b48]根據(jù)[b47]中記載的方法，其中，醚系溶劑選自四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、4-甲基四氫吡喃。

188、[b49]根據(jù)[b42]中記載的方法，其中，溶劑為鹵素系溶劑。

189、[b50]根據(jù)[b49]中記載的方法，其中，鹵素系溶劑選自二氯甲烷、1，2-二氯乙烷。

190、[b51]根據(jù)[b42]中記載的方法，其中，溶劑為腈系溶劑。

191、[b52]根據(jù)[b51]中記載的方法，其中，腈系溶劑為乙腈。

192、[b53]根據(jù)[b42]中記載的方法，其中，溶劑為苯系溶劑。

193、[b54]根據(jù)[b53]中記載的方法，其中，苯系溶劑選自苯、甲苯、二甲苯。

194、[b55]根據(jù)[b1]～[b54]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在0℃～100℃、10℃～80℃、10℃～60℃、10℃～50℃、10℃～40℃、10℃～35℃、15℃～60℃、20℃～60℃、20℃～40℃、或25℃～40℃下進(jìn)行。

195、[b56]根據(jù)[b1]～[b54]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，縮合工序在20℃～60℃下進(jìn)行。

196、[b57]根據(jù)[b1]～[b56]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，將縮合工序重復(fù)2次以上。

197、[b58]根據(jù)[b1]～[b56]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，將縮合工序重復(fù)2次。

198、[b59]根據(jù)[b1]～[b58]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，在縮合工序之后還包括將擔(dān)載于固相的、第二氨基酸或第二肽中的保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基的保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)的脫保護(hù)工序。

199、[b60]根據(jù)[b59]中記載的方法，其中，在縮合工序與脫保護(hù)工序之間還包括對(duì)固相進(jìn)行清洗的清洗工序。

200、[b61]根據(jù)[b59]或[b60]中記載的方法，其中，將縮合工序和脫保護(hù)工序重復(fù)多次(其中，多次縮合工序中使用的多個(gè)第二氨基酸和/或第二肽分別可以相同也可以不同。)。

201、[b62]式(a’)所示的碳二亞胺系縮合劑在[b1]～[b61]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

202、[b63]dsbc在[b1]～[b61]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

203、[b63-1]n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)在[b1]～[b61]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

204、[b63-2]n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)在[b1]～[b61]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

205、[b63-3]n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)在[b1]～[b61]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

206、[b63-4]n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)在[b1]～[b61]中任一項(xiàng)記載的方法中的應(yīng)用。

207、在[b1]～[b63]中，對(duì)基于固相法的肽化合物的制造方法進(jìn)行了說明，但這些制造方法也能夠應(yīng)用于液相法。即，本發(fā)明的一個(gè)方面提供以下的[b1’]。[b1’]也可以包括[b2]～[b63]中的涉及除固相以外的特征。

208、[b1’]一種基于液相法的肽化合物的制造方法，其包括：

209、準(zhǔn)備工序，準(zhǔn)備具有n-烷基氨基的第一氨基酸或在n末端具有n-烷基氨基的第一肽；以及

210、縮合工序，使第一氨基酸或第一肽與具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二氨基酸，或者具有保護(hù)氨基和/或保護(hù)羥基、以及羧基的第二肽在上述通式(a’)所示的至少1種碳二亞胺系縮合劑和添加劑的存在下，在溶劑中進(jìn)行縮合，溶劑中的碳二亞胺系縮合劑的濃度為0.4～4.0mol/l。

211、根據(jù)該方法，能夠以高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率得到目標(biāo)肽化合物。

212、例如，本發(fā)明還提供以下的[c1]～[c16]。

213、[c1]一種擔(dān)載于膜的肽化合物的制造方法，其包括[a1]～[a64]或[b1]～[b63]中任一項(xiàng)記載的方法。

214、[c2]根據(jù)[c1]中記載的方法，其中，擔(dān)載于膜的肽化合物具有2個(gè)以上的源自n-烷基氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

215、[c3]根據(jù)[c1]或[c2]中記載的方法，其中，擔(dān)載于膜的肽化合物具有3個(gè)以上、4個(gè)以上、5個(gè)以上、6個(gè)以上、或7個(gè)以上的源自n-烷基氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

216、[c4]根據(jù)[c1]～[c3]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，擔(dān)載于膜的肽化合物具有7個(gè)以上的源自n-烷基氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

217、[c5]根據(jù)[c1]～[c4]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，擔(dān)載于膜的肽化合物具有合計(jì)7個(gè)以上、8個(gè)以上、9個(gè)以上、或10個(gè)以上的源自氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

218、[c6]根據(jù)[c1]～[c5]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，肽化合物具有合計(jì)10個(gè)以上的源自氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

219、[c7]根據(jù)[c1]～[c6]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，肽化合物具有合計(jì)30個(gè)以下、25個(gè)以下、20個(gè)以下、18個(gè)以下、17個(gè)以下、16個(gè)以下、或15個(gè)以下的源自氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

220、[c8]根據(jù)[c1]～[c7]中任一項(xiàng)記載的方法，其中，肽化合物具有合計(jì)15個(gè)以下的源自氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

221、[c9]一種擔(dān)載于膜的肽庫(kù)的制造方法，其包括通過[c1]～[c8]中任一項(xiàng)記載的方法得到擔(dān)載于膜的10種以上的肽化合物的工序。

222、[c10]一種擔(dān)載于膜的肽庫(kù)的制造方法，其包括通過[c1]～[c8]中任一項(xiàng)記載的方法得到擔(dān)載于膜的20種以上、40種以上、80種以上、100種以上、200種以上、或384種以上的肽化合物的工序。

223、[c11]一種擔(dān)載于膜的肽庫(kù)的制造方法，其包括通過[c1]～[c8]中任一項(xiàng)記載的方法得到擔(dān)載于膜的384種以上的肽化合物的工序。

224、[c12]根據(jù)[c1]～[c11]中任一項(xiàng)記載的方法，其使用自動(dòng)合成機(jī)。

225、[c13]根據(jù)[c1]～[c12]中任一項(xiàng)記載的方法，其還包括從擔(dān)載于膜的肽化合物中切出肽化合物的工序。

226、[c14]根據(jù)[c13]中記載的方法，其中，通過光照射來切出肽化合物。

227、[c15]一種環(huán)狀肽或環(huán)狀肽庫(kù)的制造方法，其包括將通過[c13]或[c14]中記載的方法切出的肽化合物進(jìn)行環(huán)化的工序。

228、[c16]根據(jù)[c15]中記載的方法，其使用自動(dòng)合成機(jī)。

229、例如，本發(fā)明還提供以下的[d?1]～[d6]。

230、[d?1]一種肽化合物，其經(jīng)由連接基團(tuán)鍵合于膜，所述肽化合物具有2個(gè)以上的源自n-烷基氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

231、[d2]根據(jù)[d?1]中記載的肽化合物，其中，肽化合物具有3個(gè)以上、4個(gè)以上、5個(gè)以上、6個(gè)以上、或7個(gè)以上的源自n-烷基氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

232、[d3]根據(jù)[d?1]或[d2]中記載的肽化合物，其中，肽化合物具有合計(jì)7個(gè)以上、8個(gè)以上、9個(gè)以上、10個(gè)以上、或11個(gè)以上的源自氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

233、[d4]根據(jù)[d?1]～[d3]中任一項(xiàng)記載的肽，其中，肽化合物具有合計(jì)30以下、25以下、20以下、18以下、17以下、16以下、或15以下的源自氨基酸的結(jié)構(gòu)單元。

234、[d5]一種肽庫(kù)，其包含10種以上的[d?1]～[d4]中任一項(xiàng)記載的、經(jīng)由連接基團(tuán)鍵合于膜的肽化合物。

235、[d6]根據(jù)[d5]中記載的肽庫(kù)，其包含20種以上、40種以上、80種以上、100種以上、200種以上、或384種以上的經(jīng)由連接基團(tuán)鍵合于膜的肽化合物。

236、例如，本發(fā)明還提供以下的[e1]～[e3]。

237、[e1]一種篩選與靶分子鍵合的化合物的方法，其包括：

238、(1)通過[c9]～[c16]中任一項(xiàng)記載的方法合成肽庫(kù)或環(huán)狀肽庫(kù)的步驟；

239、(2)使該肽庫(kù)或環(huán)狀肽庫(kù)與靶分子接觸的步驟；

240、(3)選擇與靶分子鍵合的肽化合物的步驟。

241、[e2]根據(jù)[e1]中記載的方法，其中，靶分子為蛋白質(zhì)、核酸、多肽或糖鏈。

242、[e3]根據(jù)[e1]或[e2]中記載的方法，其中，與靶分子鍵合的化合物的選擇通過表面等離子體共振(surface?plasmonresonance)或α篩選(amplified?luminescentproximityhomogeneousassay)來實(shí)施。

243、例如，本發(fā)明還提供以下的[f1]～[f5]。

244、[f1]一種肽合成中的析出抑制劑，其包含dsbc。

245、[f2]一種肽合成中的析出抑制劑，其包含n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)。

246、[f3]一種肽合成中的析出抑制劑，其包含n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)。

247、[f4]一種肽合成中的析出抑制劑，其包含n,n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)。

248、[f5]一種肽合成中的析出抑制劑，其包含n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)。

249、例如，本發(fā)明還提供以下的[g1]～[g4]。

250、[g1]n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)

251、[g2]n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)

252、[g3]n,n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)

253、[g4]n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)

254、例如，本發(fā)明還提供以下的[h1]～[h7]。

255、[h1]一種化合物的制造方法，其包括使用n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)、n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)、n，n’-雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

256、[h2]一種化合物的制造方法，其包括使用n，n’-二仲丁基碳二亞胺(dsbc)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

257、[h3]一種化合物的制造方法，其包括使用n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss26)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

258、[h4]一種化合物的制造方法，其包括使用n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亞胺(ss27)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

259、[h5]一種化合物的制造方法，其包括使用n，n’-雙(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss28)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

260、[h6]一種化合物的制造方法，其包括使用n，n’-雙(1-乙基丙基)碳二亞胺(ss29)或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

261、[h7]一種化合物的制造方法，其包括使用n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亞胺(ss30)作為縮合劑來形成酰胺鍵的工序。

262、[h8]根據(jù)[h1]～[h7]中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中，上述形成酰胺鍵的工序在固相或液相中進(jìn)行。

263、在上述編號(hào)中，除非另有說明，否則從屬技術(shù)方案引用的編號(hào)包括其編號(hào)的分支編號(hào)。例如，從屬技術(shù)方案中引用的[a2]表示包含[a2]以及其分支編號(hào)[a2-1]～〔a2-6〕。關(guān)于其他編號(hào)也是同樣的。

264、發(fā)明效果

265、根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，在肽固相合成法的、特別是縮合反應(yīng)的工序中，能夠提高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率。另外，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，能夠提供一種在肽固相合成法的、特別是縮合反應(yīng)的工序中，作為通過避免晶體析出而能夠應(yīng)用于自動(dòng)合成的酰胺化條件，高效地制造高純度的肽化合物的方法。