本發(fā)明屬于腫瘤免疫治療領(lǐng)域，具體涉及一種針對kif5b-alk融合基因的腫瘤新抗原多肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、腫瘤免疫治療是一種革命性的腫瘤治療方法，被視為繼手術(shù)、放療、化療和小分子靶向治療之后的新一代治療手段。與傳統(tǒng)治療方法相比，免疫治療的核心在于強化患者自身的免疫系統(tǒng)，使其能夠有效地對抗腫瘤，而非直接殺滅腫瘤細胞。這種方法的優(yōu)勢包括治療的精準(zhǔn)性、副作用的降低、長期效果以及高度的個性化。免疫治療的一個關(guān)鍵特點是它能夠激活機體的免疫記憶。這意味著治療不僅針對當(dāng)前的腫瘤細胞，還能防止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因為體內(nèi)形成了對抗腫瘤的長期記憶性免疫反應(yīng)。免疫治療的方法之一是基于腫瘤新抗原肽的疫苗治療，這種疫苗通過向mhc分子提供腫瘤突變肽，誘導(dǎo)產(chǎn)生針對腫瘤的特異性和長期記憶t細胞。腫瘤抗原主要被視為內(nèi)源性抗原，它們與mhc?i類分子結(jié)合，激活cd8+細胞毒性t細胞。此外，還有一些較大的多肽可以與mhc?ii分子結(jié)合，專門激活cd4+t輔助細胞。這些免疫細胞的激活和增強對抗腫瘤的能力是免疫治療的核心機制。因此，腫瘤免疫治療不僅提供了一種治療腫瘤的新途徑，而且為患者帶來了希望，特別是對于那些對傳統(tǒng)治療方法不敏感的病例。

2、在肺癌的發(fā)生和進展中，alk融合基因起著重要作用。alk(間變性淋巴瘤激酶)是一種受體酪氨酸激酶，可以通過染色體重排形成融合基因，導(dǎo)致腫瘤原性激活。肺癌中最常見的alk融合涉及到棘皮動物微管蛋白樣4(eml4)基因，形成eml4-alk融合基因。這種融合導(dǎo)致alk激酶的持續(xù)活化，促進細胞增殖和存活途徑，從而有助于癌癥的發(fā)展。alk融合基因的發(fā)現(xiàn)徹底改變了肺癌的治療方式,目前開發(fā)出針對癌細胞中異常alk蛋白的alk酪氨酸激酶抑制劑(tkis)，為患者提供了靶向治療方法。這種靶向治療方法顯著改善了alk陽性肺癌患者的預(yù)后，改變了這種癌癥亞型的治療格局。然而，alk?tkis的抗藥性是目前相關(guān)癌癥治療的一個挑戰(zhàn)，包括alk基因的二次突變、激活旁路跟蹤和腫瘤細胞的表型變化等多種機制有助于抗藥性的發(fā)展。

3、除了常見的eml4-alk融合基因外，還存在很多其它的alk相關(guān)融合基因，例如kif5b-alk融合基因。kif5b基因(kinesin?family?member?5b，驅(qū)動蛋白家族成員5b)編碼的蛋白屬于運動蛋白家族，這個家族的蛋白質(zhì)以其在細胞內(nèi)微管依賴的運輸過程中的作用而聞名。這類基因的改變可能會破壞正常的細胞功能，包括細胞分裂和細胞內(nèi)運輸。比如在肺癌中kif5b還常常與ret基因形成融合，對肺癌的發(fā)生和進展中起到至關(guān)重要的作用。持續(xù)的研究工作繼續(xù)識別新的alk融合變體，并開發(fā)新的治療策略以克服現(xiàn)有alk?tkis的抗藥性。

4、kif5b-alk融合基因是由于染色體重排導(dǎo)致的基因融合，具體機制為染色體的3號染色體(kif5b基因所在位置)與2號染色體(alk基因所在位置)之間發(fā)生斷裂和重新連接。這個過程可以通過非同源末端連接(nhej)或同源重組(hr)等機制完成。kif5b-alk融合基因形成的蛋白具有alk的激酶功能，但在kif5b的調(diào)控下表現(xiàn)出異?；钚浴＿@種異常的激酶活性可以激活多條信號通路(如pi3k/akt、ras/raf/mek/erk)，促進細胞增殖和存活，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。目前認為kif5b-alk融合基因其與肺癌等腫瘤發(fā)生發(fā)展的有重要關(guān)。

5、kif5b-alk融合基因在肺腺癌中的發(fā)現(xiàn)率較高，尤其是在不吸煙或輕度吸煙的患者中。對于攜帶kif5b-alk融合基因的腫瘤，alk抑制劑是主要的治療方法，主要包括第一代alk抑制劑克唑替尼(crizotinib)、第二代alk抑制劑阿來替尼(alectinib)和布加替尼(brigatinib)以及第三代alk抑制劑勞拉替尼(lorlatinib)。但是，基于kif5b-alk融合基因的腫瘤新抗原目前還未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種針對含有kif5b-alk融合基因的腫瘤患者的特異性免疫治療方案。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案是提供針對含有kif5b-alk融合基因的新抗原多肽，該新抗原多肽為kif5b-alk融合基因所編碼的蛋白中的katdqeksrklheltdlkevprknitlir(seq?id?no.27)肽段的截短肽；其長度為8到15個氨基酸，并且其中含有肽段katdqeksrklheltdlk?evprknitlir中的三個連續(xù)的氨基酸dlk。

3、進一步的，上述新抗原多肽為其中含有katdqeksrklheltdlke?vprknitlir中的tdlk四個連續(xù)氨基酸的截短肽。

4、進一步的，上述新抗原多肽為其中含有katdqeksrklheltdlke?vprknitlir中的ltdlk五個連續(xù)的氨基酸的截短肽。

5、其中，上述新抗原多肽的的長度為8、9、10、11、12、13、14或15個氨基酸殘基。

6、進一步的，上述新抗原多肽的氨基酸序列為seq?id?no.1～seq?id?no.26中至少一條所示；

7、或者，為上述各多肽的氨基酸序列中經(jīng)過取代和/或缺失和/或添加至少一個氨基酸所得的功能相同或者相似的多肽。

8、其中，上述新抗原多肽中，其特征在于所述的相同或相似的功能是指抗原多肽能激活hla分型為表1所示的對應(yīng)的hla分型且伴隨含有kif5b-alk融合基因的個體針對含有kif5b-alk融合基因的腫瘤的t細胞：

9、表1

10、

11、

12、表1中的新抗原多肽，均為這些備選的多肽在對應(yīng)的hla分型進行組合時，ic50值<1000nm并且netmhcpan_el值>0.1的新抗原多肽。

13、更進一步的，所述新抗原多肽的氨基酸序列為klheltdlk(seq?id?no.2)、ltdlkevprk(seq?id?no.8)或heltdlkev(seq?id?no.9)中的至少一條所示。

14、本發(fā)明還提供了上述的新抗原多肽在制備含有kif5b-alk融合基因的腫瘤的風(fēng)險干預(yù)和/或治療劑中的應(yīng)用。

15、本發(fā)明還提供了上述的腫瘤新抗原多肽在制備可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細胞毒性t細胞克隆的免疫活性調(diào)節(jié)劑中的應(yīng)用。

16、同時，本發(fā)明還提供了一種經(jīng)上述的新抗原多肽刺激而得的dc細胞；所述的刺激方式為dc細胞與腫瘤新抗原多肽進行共孵育。

17、其中，上述的dc細胞為成熟的dc細胞；或者，上述的dc細胞為含有kif5b-alk融合基因的患者的離體dc細胞。

18、進一步的，上述的dc細胞為含有表1所示的對應(yīng)的hla分型且伴隨含有kif5b-alk融合基因的離體dc細胞時；使用的新抗原多肽為在表1中hla分型所對應(yīng)的新抗原肽中進行選擇。

19、更進一步的。當(dāng)上述的dc細胞在刺激時使用的新抗原多肽為seq?id?no.2、seq?idno.8或seq?id?no.9中的至少一條時，所述的dc細胞為含有人類白細胞的hla分型為hla-a*11:01、hla-a*11:02、hla-a*30:01、hla-a*03:01、hla-b*40:06、hla-b*40:01和\或hla-b*40:02的個體的離體dc細胞。

20、本發(fā)明還提供了上述的新抗原多肽或上述的dc細胞在制備含有kif5b-alk融合基因的腫瘤的免疫治療藥物中的應(yīng)用。

21、其中，上述應(yīng)用中所述的腫瘤為肺癌。進一步的，所述的肺癌為非小細胞肺癌。

22、其中，上述應(yīng)用中所述的腫瘤為含有人類白細胞的hla分型為

23、hla-a*11:01、hla-a*11:02、hla-a*30:01、hla-a*03:01、hla-b*40:06、hla-b*40:01和\或hla-b*40:02的患者所患腫瘤。本發(fā)明還提供了針對上述的新抗原多肽的抗體。

24、其中，上述的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。

25、進一步的，上述的抗體還與偶聯(lián)部分形成偶聯(lián)物；所述偶聯(lián)部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、熒光素、載體蛋白或生物素中的至少一種。

26、本發(fā)明也提供了編碼上述腫瘤新抗原多肽或上述的抗體的基因。

27、同時，本發(fā)明還提供了裝載有上述的基因的載體。進一步的，所述載體為表達載體，表達載體可在質(zhì)粒載體、腺病毒載體、慢病毒載體或腺相關(guān)病毒載體等常用載體中選擇。當(dāng)使用腺病毒載體時，一般采用復(fù)制缺陷型腺病毒載體。

28、本發(fā)明的有益效果在于：

29、本發(fā)明的抗原肽能夠顯著激活人體特異性針對kif5b-alk融合基因編碼蛋白的t細胞，以增加t細胞對含有kif5b-alk融合基因的腫瘤細胞的殺傷能力，能夠制備治療含有kif5b-alk融合基因的腫瘤的藥物。而經(jīng)本發(fā)明抗原肽刺激的含有kif5b-alk融合基因的腫瘤患者的dc細胞，回輸回患者體內(nèi)后，能夠激活特異性針對kif5b-alk融合基因編碼蛋白的t細胞，以增加t細胞對含有kif5b-alk融合基因的癌細胞的殺傷能力。本發(fā)明的抗原肽彌補了個體化抗原肽在含有kif5b-alk融合基因的腫瘤病人中治療中的空白。同時，本發(fā)明的抗原便于大規(guī)模的合成，可用于含有kif5b-alk融合基因的腫瘤腫瘤患者標(biāo)準(zhǔn)化、個體化的的免疫治療之中。