本技術(shù)涉及特異性識別補(bǔ)體組分5a(c5a)的抗體及其制造、使用方法，包括用于治療自身免疫疾病和/或炎癥疾病、癌癥、疼痛、移植相關(guān)疾病的用途。

背景技術(shù)：

1、c5a是過敏性反應(yīng)和炎癥過程中的一種活性肽，其在補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)中由c5轉(zhuǎn)化酶切割補(bǔ)體組分c5而形成。c5a刺激肥大細(xì)胞脫粒、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)和組胺的釋放，還通過增加內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附分子的表達(dá)從而將吞噬細(xì)胞募集至感染和炎癥部位(mollnes,t.e.et?al.blood?2002,100,1869–1877；riedemann,n.c.et?al.immunity?2003,19,193–202)。在一些病理刺激的情況下，如移植后異體移植排斥和哮喘，c5a還導(dǎo)致血管通透性增加(gueler,f.et?al.j.am.soc.nephrol.2008,19,2302–2312；krug,n.etal.am.j.respir.crit.care?med.2001,164,1841–1843；khan,m.a.etal.proc.natl.acad.sci.usa?2013,110,6061–6066)。已有多項(xiàng)研究討論過血清中c5a水平。在lechner等人的一項(xiàng)研究中，對照組中c5a的水平為8.34+2.05(ng/ml)(lechner,j.etal.immun.ageing?2016,13,4)。另有研究表明，在正常情況下，由于過敏毒素的快速清除，血漿中c5a水平非常低(oppermann,m.etal.immunology?1994,82,516–521)。使用c5a(25nm)處理后，小鼠皮質(zhì)腎小管細(xì)胞中轉(zhuǎn)化生長因子-β(tgf-β)的水平升高，這表明c5a可導(dǎo)致腎纖維化和腎疤痕形成(boor,p.et?al.j.am.soc.nephrol.2007,18,1508–1515)。

2、c5a是一種有效的促炎分子，與一種經(jīng)典的g蛋白偶聯(lián)受體(gpcr)c5ari(cd88)結(jié)合并引發(fā)促炎信號通路激活(li,r.et?al.faseb?j.2013,27,855–864)。c5ar在非髓樣細(xì)胞上廣泛表達(dá)如臍血管內(nèi)皮細(xì)胞(huvec)，鼠類真皮，肝，肺和腎近端小管(monsinjon,t.etal.faseb?j.2003,17,1003–1014；gerard,c.et?al.annu.rev.immunol.1994,12,775–808；haviland,d.l.et?al.j.immunol.1995,154,1861–1869)。此外，研究證明c5ar在腎小球內(nèi)皮細(xì)胞而非足細(xì)胞中表達(dá)，這表明c5a可能主要在腎內(nèi)皮細(xì)胞中引起蛋白尿(tsai,i.j.etal.cell.mol.life?sci.2015,72,3157–3171)。

3、因此，通過中和c5a阻斷其與c5ar的結(jié)合，成為一種治療c5a介導(dǎo)的疾病和病癥的方法。專利申請wo2011063980中披露了針對人c5a的抗體inab308(inflarx)，wo2012088247中披露了c5a抗體medi-7814(medimmune)，us10450370中披露了c5a抗體bnj383(alexion)。

4、本文提及的所有出版物、專利、專利申請和已公開的專利申請中披露的內(nèi)容，以引用方式全部并入本文中。

5、申請概述

6、在一個(gè)方面，本技術(shù)提供一種分離的抗c5a抗體，其能夠特異性地與人c5a上的表位結(jié)合，其中所述分離的抗c5a抗體特異性結(jié)合如seq?id?no：141所示的人c5a中的第31位d殘基，第32位e殘基和第40位r殘基中至少一個(gè)氨基酸殘基。在一些實(shí)施例中，分離的抗c5a抗體特異性地結(jié)合如seq?id?no：141所示的人c5a中的31-40位殘基。在一些實(shí)施例中，分離的抗c5a抗體特異性結(jié)合一個(gè)表位，該表位在以下序列之內(nèi)、由以下序列組成或包含以下序列：(i)dgacvnndetceqraarislgpr、(ii)ndetceqraarislgpr或(iii)detceqraar。在一些實(shí)施例中，分離的抗c5a抗體特異性結(jié)合由以下序列組成或包含以下序列的多肽：(i)dgacvnndetceqraarislgpr、(ii)ndetceqraarislgpr或(iii)detceqraar。在一些實(shí)施例中，分離的抗c5a抗體與人c5a結(jié)合的kd值為0.1pm至1nm的結(jié)合。

7、在一些實(shí)施例中，如上所述任一種分離的抗c5a抗體，所述分離的抗c5a抗體包括重鏈可變域(vh)，所述vh包含：一個(gè)包含序列x1yyx2q(seq?id?no:67)的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(hc-cdr)1，其中x1為d或n，x2為m或i；一個(gè)包含序列l(wèi)irx1kx2x3gx4tx5x6x7aasx8kg(seq?idno:68)的hc-cdr2，其中x1為k或n，x2為a或v，x3為v、n、或i，x4為g、e、f、h、i、q或r，x5為t、v或a，x6為q、e、t或s，x7為y或f，x8為v或l；和一個(gè)包含序列rx1gppglx2(seq?id?no:69)的hc-cdr3，其中x1為a、l或v，x2為t、s或a；以及輕鏈可變域(vl)，所述vl包含：一個(gè)包含序列rssqx1llx2x3x4x5yx6yx7d(seq?id?no:70)的lc-cdr1，其中x1為s、r或n，x2為a、h或d，x3為s或t，x4為d或n，x5為g、a或r，x6為n、i、t、e或a，x7為i、m、l或v；一個(gè)包含序列g(shù)x1sx2ras(seq?idno:71)的lc-cdr2，其中x1為g或a，x2為n或k；和一個(gè)包含序列x1qhx2x3lpx4t(seq?id?no:72)的lc-cdr3，其中x1為l或m，x2為r或k，x3為a或v，x4為p或l。

8、在一些實(shí)施例中，提供一種分離的抗c5a抗體，包括vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?nos:1-6中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?nos:7-29中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?nos:30-38中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?nos:39-56中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?nos:57-59中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?nos:60-66中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列。

9、在一些實(shí)施例中，提供一種分離的抗c5a抗體，包括vh，其包含具有seq?id?nos:73-111中任一氨基酸序列的vh中的hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，以及vl，其包含具有seq?idnos:112-140中任一氨基酸序列的vl中的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3。

10、在一些實(shí)施例中，提供一種分離的抗c5a抗體，包括：(i)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:1所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:7所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:30所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:39所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:60所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(ii)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:8所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:31所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?idno:40所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?idno:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seqid?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(iii)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:10所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(iv)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seqid?no:41所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seqid?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:64所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(v)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:9所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:43所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:63所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(vi)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:35所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seqid?no:44所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seqid?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:60所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(vii)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:6所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:18所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:36所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(viii)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(ix)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:10所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:53所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:59所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:65所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(x)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:23所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(xi)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:23所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:56所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(xii)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:6所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:18所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:36所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:52所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:58所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(xiii)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:6所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:18所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:36所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:53所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:59所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:65所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(xiv)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?idno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?idno:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seqid?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:52所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:58所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；或(xv)vh，所述vh包含：一個(gè)hc-cdr1，其包含與seq?id?no:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)hc-cdr2，其包含與seq?id?no:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)hc-cdr3，其包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，所述vl包含：一個(gè)lc-cdr1，其包含與seq?id?no:53所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一個(gè)lc-cdr2，其包含與seq?id?no:59所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一個(gè)lc-cdr3，其包含與seq?id?no:65所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列。

11、在一些實(shí)施例中，如上所述任一種分離的抗c5a抗體，所述分離的抗c5a抗體包括：vh，其包含與seq?id?nos:73-111中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及vl，其包含與seq?id?nos:112-140中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列。在一些實(shí)施例中，分離的抗c5a抗體包括：(i)包含氨基酸序列seq?id?no:73的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:112的vl；(ii)包含氨基酸序列seq?id?no:75的vh和包含氨基酸序列seqid?no:114的vl；(iii)包含氨基酸序列seq?id?no:100的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:135的vl；(iv)包含氨基酸序列seq?id?no:79的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:118的vl；(v)包含氨基酸序列seq?id?no:85的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:117的vl；(vi)包含氨基酸序列seq?id?no:88的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:126；(vii)包含氨基酸序列seqid?no:93的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:116的vl；(viii)包含氨基酸序列seq?id?no:97的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:116的vl；(ix)包含氨基酸序列seq?id?no:77和包含氨基酸序列seq?id?no:132的vl；(x)包含氨基酸序列seq?id?no:102的vh和包含氨基酸序列seqid?no:135的vl；(xi)包含氨基酸序列seq?id?no:109的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:138的vl；(xii)包含氨基酸序列seq?id?no:110的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:139的vl；(xiii)包含氨基酸序列seq?id?no:110的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:140的vl；(xiv)包含氨基酸序列seq?id?no:111的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:139的vl；或(xv)包含氨基酸序列seq?id?no:111的vh和包含氨基酸序列seq?id?no:140的vl。

12、在一些實(shí)施例中，提供一種分離的抗c5a抗體，其與上述任一種分離的抗c5a抗體競爭性地結(jié)合c5a。在一些實(shí)施例中，提供一種分離的抗c5a抗體，其與上述任一種分離的抗c5a抗體特異性地結(jié)合相同的表位

13、在一些實(shí)施例中，如上所述任一種分離的抗c5a抗體，所述分離的抗c5a抗體包含fc片段。在一些實(shí)施例中，所述分離的抗c5a抗體是全長的igg抗體。在一些實(shí)施例中，所述分離的抗c5a抗體是全長的igg1或igg4抗體。在一些實(shí)施例中，所述分離的抗c5a抗體是嵌合的、全人的或人源化的。在一些實(shí)施例中，所述分離的抗c5a抗體是抗原結(jié)合片段，其選自由fab、fab’、f(ab)’2、fab’-sh、單鏈抗體(scfv)、fv片段、dab、fd、納米抗體、雙鏈抗體和線性抗體組成的組中。

14、在一些實(shí)施例中，提供一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼如上所述任一種抗c5a抗體。在一些實(shí)施例中，提供一種載體，所述載體包含如上所述任一種核酸分子。在一些實(shí)施例中，提供一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含如上所述任一種抗c5a抗體、如上所述任一種核酸分子或如上所述任一種載體。在一些實(shí)施例中，提供一種制備抗c5a抗體的方法，包括：a)在有效表達(dá)抗c5a抗體的條件下培養(yǎng)上述任一種宿主細(xì)胞；并且b)從所述宿主細(xì)胞中獲得所表達(dá)的抗c5a抗體。

15、在一些實(shí)施例中，提供一種治療所需個(gè)體疾病或病癥的方法，包括向所述個(gè)體施用有效量的如上所述的任一種抗c5a抗體。在一些實(shí)施例中，提供一種利用如上所述的任一種c5a抗體或包含c5a抗體的藥物組合物制備治療疾病或病癥的藥物。在一些實(shí)施例中，所述疾病或病癥為炎性、呼吸或自身免疫性疾病或病癥。在一些實(shí)施例中，所述疾病或病癥選自由炎癥反應(yīng)綜合癥(sirs)、敗血癥、嚴(yán)重?cái)⊙Y、感染性休克、缺血/再灌注相關(guān)損傷、急性肺損傷、肺炎、移植患者中急性和慢性移植排斥、移植物抗宿主反應(yīng)、腎小球疾病、腎小球腎炎、實(shí)體腎功能衰竭、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性疾病、bechterew氏病、狼瘡類疾病、炎癥性腸病、克羅恩氏病、腫瘤生長和實(shí)體器官癌癥組成的組中。

16、同時(shí)還提供包含如上所述的任一種抗c5a抗體的藥物組合物、試劑盒以及生產(chǎn)制品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路