本發(fā)明屬于寵物食品，具體地，涉及一種寵物益生菌及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、隨著生活水平的提高，寵物主人對寵物食品的要求也越來越嚴(yán)格，健康、營養(yǎng)、安全成為現(xiàn)代社會寵物主人選擇寵物食品的潮流。寵物貓和犬長期食用的貓糧、狗糧等都是加工的食品，添加了大量的色素、香精、防腐劑等食品添加劑，且抗生素的廣泛使用，機(jī)體耐藥性以及藥物殘留破壞了寵物腸道正常菌群的平衡，使寵物容易產(chǎn)生便秘、消化不良、腸胃炎等腸胃疾病，給寵物的健康帶來了嚴(yán)重的危害。益生菌是通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮作用的活性微生物。這種活性微生物經(jīng)口服一定數(shù)量后會改善宿主腸道內(nèi)微生物的平衡，進(jìn)而對宿主健康產(chǎn)生有益影響。富含益生菌的寵物主糧不僅能夠促使寵物腸道健康，提高其營養(yǎng)物質(zhì)吸收代謝能力，而且可以增強(qiáng)寵物抵抗力，減少過敏等免疫疾病的發(fā)生。

2、目前，現(xiàn)有技術(shù)中寵物主糧大多以濕法擠壓膨化、焙烤加工為主，通過直接添加益生菌，由于益生菌的不耐熱性，在后期高溫擠壓或加熱烘干過程中，益生菌的活性會嚴(yán)重?fù)p失；而將益生菌通過噴涂在寵物主糧表面的方式生產(chǎn)，不僅會產(chǎn)生噴涂不均勻，產(chǎn)品附菌率較低，成本較高的問題，而且增加了加工工序，產(chǎn)品易受二次污染，貯藏過程中易腐敗變質(zhì)，不利于益生菌的長時間保存。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種寵物益生菌及其制備方法，通過將植物乳桿菌、嗜熱雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和脆弱擬桿菌以1：1：2-4：4-6的細(xì)菌數(shù)比例混合均勻，得到混合菌液；植物乳桿菌、嗜熱雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和脆弱擬桿菌均屬于益生菌，能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖，有助于緩解腸道炎癥、腹瀉等腸道問題，四種益生菌活菌數(shù)較高，經(jīng)活化后，活性較高；將混合菌液接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，再封裝在天然化合物負(fù)載的脂質(zhì)體中，得到包衣益生菌；不僅具有良好的生物相容性，且提高了四種益生菌的活性，也增強(qiáng)了菌種的穩(wěn)定性；通過將步驟s2中的包衣益生菌依次用氧化纖維素納米纖維和海藻酸鹽進(jìn)行包覆，最后制得寵物益生菌；氧化纖維素納米纖維可以加強(qiáng)海藻酸鹽的多孔結(jié)構(gòu)，提高水凝膠的熱穩(wěn)定性和抗壓強(qiáng)度，同時提高了包衣益生菌的穩(wěn)定性，可以負(fù)載更多的包衣益生菌，制得的寵物益生菌可以耐胃酸、耐膽汁，可以較好地適應(yīng)寵物腸道內(nèi)的環(huán)境。

2、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題：現(xiàn)有技術(shù)中寵物主糧大多以濕法擠壓膨化、焙烤加工為主，通過直接添加益生菌，由于益生菌的不耐熱性，在后期高溫擠壓或加熱烘干過程中，益生菌的活性會嚴(yán)重?fù)p失；而將益生菌通過噴涂在寵物主糧表面的方式生產(chǎn)，不僅會產(chǎn)生噴涂不均勻，產(chǎn)品附菌率較低，成本較高的問題，而且增加了加工工序，產(chǎn)品易受二次污染，貯藏過程中易腐敗變質(zhì)，不利于益生菌的長時間保存。

3、本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

4、一種寵物益生菌的制備方法，包括以下步驟：

5、s1:將植物乳桿菌、嗜熱雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和脆弱擬桿菌以1：1：2-4：4-6的體積比混合均勻，得到混合菌液；

6、s2:將步驟s1中的混合菌液接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，再封裝在天然化合物負(fù)載的脂質(zhì)體中，得到包衣益生菌；

7、s3:將步驟s2中的包衣益生菌依次用氧化纖維素納米纖維和海藻酸鹽進(jìn)行包覆，最后制得寵物益生菌。

8、進(jìn)一步地，步驟s1中，所述植物乳桿菌的活菌個數(shù)為1×1010cfu/ml-3×1010cfu/ml，嗜熱雙歧桿菌的活菌個數(shù)為2×1010cfu/ml-4×1010cfu/ml，凝結(jié)芽孢桿菌的活菌個數(shù)為1×1010cfu/ml-3×1010cfu/ml，脆弱擬桿菌的活菌個數(shù)為1×1011cfu/ml-3×1011cfu/ml。

9、進(jìn)一步地，步驟s2具體為：

10、a1：將步驟s1中混合菌液接種到已滅菌的斜面培養(yǎng)基中，在33-37℃下好氧培養(yǎng)18-24h直至長出菌落，得到活化菌種;

11、a2：將活化菌種離心8-12min，用磷酸鹽緩沖溶液洗滌，然后溶解在氯化鈣溶液中，得到懸浮液，將天然化合物、大豆卵磷脂和膽固醇溶于乙醇中，并在室溫下通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成脂質(zhì)膜，將制得的脂質(zhì)膜與懸浮液孵育10-20min，然后用去離子水洗滌，得到包衣益生菌。

12、進(jìn)一步地，所述斜面培養(yǎng)基的組分包括：牛肉膏1-5g、蛋白胨5-15g、氯化鈉2-10g、瓊脂10-30g和去離子水800-1200ml，ph值為7-7.5。

13、進(jìn)一步地，所述混合菌液的接種量為5%。

14、進(jìn)一步地，所述活化菌種在4℃下以3500-4500rpm的轉(zhuǎn)速離心8-12min。

15、進(jìn)一步地，所述天然化合物為姜黃素、石榴皮提取物、茶多酚中的一種。

16、進(jìn)一步地，活化菌種、氯化鈣溶液、天然化合物、大豆卵磷脂和膽固醇的用量比為4-6ml：2-4ml：0.02-0.03g：0.8-1.2g：0.12-0.13g。

17、進(jìn)一步地，步驟s3具體為：

18、將氧化纖維素納米纖維分散在去離子水中，并超聲處理8-12min，得到懸浮液，將制得的懸浮液與步驟s2中的包衣益生菌混合，然后邊攪拌邊加入到氯化鈣溶液中，再將混合物浸入海藻酸鈉溶液中，并攪拌20-30min，然后轉(zhuǎn)移到氯化鈣溶液中并保存20-30min，最后得到寵物益生菌。

19、進(jìn)一步地，氧化纖維素納米纖維、去離子水、氯化鈣溶液和海藻酸鈉溶液的用量比為0.8-1.2g：40-60ml：45-55ml：45-55ml。

20、進(jìn)一步地，所述氧化纖維素納米纖維的制備方法包括以下步驟：

21、將纖維素納米纖維加入去離子水中，然后加入2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物、溴化鈉和次氯酸鈉，并以500rpm的轉(zhuǎn)速攪拌30min，再加入0.1m氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系ph值為10，直至消耗所有次氯酸鈉，經(jīng)過濾，用去離子水清洗三次，得到氧化纖維素納米纖維，并儲存在4℃下備用。

22、進(jìn)一步地，纖維素納米纖維、去離子水、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物、溴化鈉、次氯酸鈉和氫氧化鈉溶液的用量比為1g：100ml：0.016g：0.1g：0.55g：30ml。

23、本發(fā)明的有益效果：

24、（1）本發(fā)明技術(shù)方案中，通過將植物乳桿菌、嗜熱雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和脆弱擬桿菌以1：1：2-4：4-6的體積比混合均勻，得到混合菌液；其中，植物乳桿菌、嗜熱雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和脆弱擬桿菌均屬于益生菌，植物乳桿菌在繁殖過程中能產(chǎn)出特有的乳酸桿菌素，乳酸桿菌素是一種生物型防腐劑，能很好地抑制飼料的腐爛，并減少氨氮和亞硝酸鹽的產(chǎn)生，可以大量減少化學(xué)防腐劑的使用，降低養(yǎng)殖成本，且具有多種保健作用，有一定的免疫調(diào)節(jié)能力，對致病菌有抑制作用，維持腸道內(nèi)菌群平衡，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，緩解乳糖不耐癥，抑制腫瘤細(xì)胞的形成等；嗜熱雙歧桿菌能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖，對腸道致病菌具有拮抗作用，可以釋放有益雙歧桿菌等其他益生菌生長的物質(zhì)，增加大腸內(nèi)益生菌的數(shù)量，增強(qiáng)它們的生命力；凝結(jié)芽孢桿菌能適應(yīng)低氧的腸道環(huán)境，對酸和膽汁有較高的耐受性，可以降低腸道ph值，抑制有害菌，并能促進(jìn)雙歧桿菌等有益菌的生長和繁殖，有利于恢復(fù)胃腸道的微生態(tài)平衡；脆弱擬桿菌能夠耐胃酸、耐膽汁，抑制致病菌的增殖，調(diào)節(jié)腸道內(nèi)的菌群平衡，有助于緩解腸道炎癥、腹瀉等腸道問題，降低過敏反應(yīng)等；所選擇的四種益生菌活菌數(shù)較高，經(jīng)活化后，活性較高。

25、（2）本發(fā)明技術(shù)方案中，將混合菌液接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，再封裝在天然化合物負(fù)載的脂質(zhì)體中，得到包衣益生菌；混合菌液經(jīng)活化處理后封裝在天然化合物負(fù)載的脂質(zhì)體中，不僅具有良好的生物相容性，且提高了四種益生菌的活性，也增強(qiáng)了菌種的穩(wěn)定性，提高了菌種在寵物腸道環(huán)境中的適應(yīng)性，進(jìn)一步提高了益生菌在胃腸道中的粘附性和活性，且天然化合物具有抗氧化、氧自由基清除和抗炎特性，沒有任何明顯的毒性，天然化合物和益生菌起到協(xié)同的作用，提高了益生菌在治療胃腸道疾病方面的功效；通過將步驟s2中的包衣益生菌依次用氧化纖維素納米纖維和海藻酸鹽進(jìn)行包覆，最后制得寵物益生菌；氧化纖維素納米纖維在超聲波處理下可以形成均勻的分散體，其豐富的羧酸基團(tuán)在鈣離子等電解質(zhì)存在下可以快速交聯(lián)形成凝膠，通過海藻酸鹽包覆，其多孔結(jié)構(gòu)使包衣益生菌進(jìn)行有效負(fù)載并使其在腸液中釋放足夠的益生菌，氧化纖維素納米纖維起到加強(qiáng)多孔結(jié)構(gòu)的作用，進(jìn)一步提高水凝膠的熱穩(wěn)定性和抗壓強(qiáng)度，同時壓縮了水凝膠空間并降低了其孔隙率，使水凝膠體系更加穩(wěn)定，且氧化纖維素納米纖維也提高了包衣益生菌的穩(wěn)定性，其網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可以提供更大的負(fù)載空間，使更多的包衣益生菌被包封在其中。

26、（3）本發(fā)明技術(shù)方案中，通過將植物乳桿菌、嗜熱雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和脆弱擬桿菌混合均勻，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，再封裝在天然化合物負(fù)載的脂質(zhì)體中，最后用氧化纖維素納米纖維和海藻酸鹽進(jìn)行包覆，得到寵物益生菌，不僅能夠耐胃酸、耐膽汁，可以很好地適應(yīng)寵物腸道內(nèi)的環(huán)境，且可以有效抑制致病菌的增殖，調(diào)節(jié)寵物腸道的微生態(tài)平衡，有助于緩解寵物的腸道問題，提高寵物的抗病毒能力，免疫功能等，且制得的寵物益生菌綠色安全，讓寵物更加健康。