對神經(jīng)激肽-1受體蛋白特異性識別的p物質(zhì)多肽探針及其制備與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及腫瘤診斷的藥物領(lǐng)域，具體涉及的是對神經(jīng)激肽-1受體蛋白特異性 識別的P物質(zhì)多肽探針及其制備與應(yīng)用，該P(yáng)物質(zhì)多肽探針為新型多肽二聚體和多肽聚合 物，通過特異性結(jié)合腫瘤中的神經(jīng)激肽-I (NK-I)受體蛋白來檢測腫瘤。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國城市人口惡性腫瘤死亡原因中，肺癌居首 位，近幾年來世界各國肺癌的發(fā)病率和死亡率都有明顯增高的趨勢，但其治療效果在近10 中沒有明顯提高，總的治愈率為10%左右。目前早期診斷缺乏特異性指標(biāo)和方法，且部分影 響診斷性分期的檢查難以普及實施，肺癌患者早期無特異性癥狀，故就診時多為中晚期。
[0003] 靶向治療，即在細(xì)胞分子水平上，針對已經(jīng)明確的致癌位點（該位點可以是腫瘤細(xì) 胞內(nèi)部的一個蛋白分子，也可以是一個基因片段)，來設(shè)計相應(yīng)的治療藥物，藥物進(jìn)入體內(nèi) 會特異地選擇致癌位點來相結(jié)合發(fā)生作用，使腫瘤細(xì)胞特異性死亡，而不會波及腫瘤周圍 的正常組織細(xì)胞，該治療方法已逐漸成為今后研究的主要方向之一。腫瘤組織是一個特殊 的微環(huán)境，其中包含很多在正常細(xì)胞中沒有或含量很低的蛋白，如神經(jīng)激肽-1受體蛋白。 該蛋白在肺癌的多種細(xì)胞中表達(dá)，如內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，并促進(jìn)這些細(xì)胞的 增長及轉(zhuǎn)移。故該蛋白可作為檢測肺癌的一個靶標(biāo)，通過檢測NK-I受體蛋白來診斷肺癌。
[0004] P物質(zhì)屬于速激肽家族，其氨基酸序列為MLGFFQQPKPR，參與多種生理過程，近年 來的研究發(fā)現(xiàn)，P物質(zhì)作為一種神經(jīng)遞質(zhì)，可以通過自分泌或者旁分泌，與其受體NK-I結(jié) 合。這表明，P物質(zhì)是一個很多前景的用于肺癌診斷的靶向性分子，并有可能對其他惡性腫 瘤也有潛在應(yīng)用價值。事實上，NK-I受體蛋白不僅在肺癌中有表達(dá)，也存在于卵巢癌、乳腺 癌、前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌中，故含有P物質(zhì)的探針可特異性檢測以上多種腫瘤。但 到目前為止，沒有報道利用P物質(zhì)探針通過磁成像和熒光成像雙功能成像來檢測NK-I受體 蛋白的文獻(xiàn)，故本發(fā)明首次提出了利用P物質(zhì)多肽探針檢測腫瘤。其優(yōu)點在于通過超分子 的思想合成多肽二聚體和多肽聚合物，通過磁成像和熒光成像雙功能成像兩種手段提高檢 測神經(jīng)激肽-1受體蛋白的靈敏性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種對神經(jīng)激肽-1受體蛋白特異性識別的P物質(zhì)多肽探 針及其制備與應(yīng)用，該多肽探針是一類新型的用于制備具有多種腫瘤診斷作用的多肽二聚 體和多肽聚合物，該多肽二聚體和多肽聚合物通過雙功能螯合基團(tuán)將金屬Gd 3+標(biāo)記到多肽 分子上，在體內(nèi)經(jīng)標(biāo)記的P物質(zhì)多肽探針與NK-I受體蛋白特異性結(jié)合濃聚到腫瘤部位，利 用磁成像和光學(xué)成像技術(shù)檢測神經(jīng)激肽-1受體蛋白，以提高檢測靈敏性。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0007] 本發(fā)明提供對神經(jīng)激肽-1受體蛋白特異性識別的P物質(zhì)多肽探針，其特征在 于：所述P物質(zhì)多肽探針為多肽二聚體或多肽聚合物，其單體由一段P物質(zhì)氨基酸序列 MLGFFQQPKPR、雙功能螯合基團(tuán)、熒光基團(tuán)和三聯(lián)吡啶基團(tuán)通過賴氨酸連接而成。
[0008] 本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，優(yōu)選的是，所述多肽二聚體的單體氨基酸序列為： MLGFFQQPKPRKKKKKK(tpy)KK(Dye)DOTA。
[0009] 本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，優(yōu)選的是，所述多肽聚合物的單體氨基酸序列為： MLGFFQQPKPRKKKKKK(tpy)K(tpy)KK(Dye)DOTA。
[0010] 本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，P物質(zhì)氨基酸序列后加一系列賴氨酸一是為了增 強(qiáng)肽鏈的水溶性，二是為了盡量遠(yuǎn)離前面的P物質(zhì)序列，避免加入大基團(tuán)可能會改變P物質(zhì) 的結(jié)構(gòu)和功能。本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，在17和19位之間加一個賴氨酸是為減小 空間位阻，所述兩個基團(tuán)順序可以互換。
[0011] 本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，優(yōu)選的是，所述多肽聚合物的聚合度為3-5。
[0012] 本發(fā)明所述二聚體的肽鏈上有一個三聯(lián)吡啶基團(tuán)，只能形成二聚體；本發(fā)明所述 的多肽聚合物單體中有兩個三聯(lián)吡啶基團(tuán)，理論上可以由很多個單體通過共價鍵形成，但 在本申請中，由于空間位阻等原因?qū)е滤龆嚯木酆衔锏木酆隙仍?-5。
[0013] 本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，優(yōu)選的是，所述雙功能螯合基團(tuán)為D0TA，所述DOTA 是三叔丁基1，4, 7, 10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4, 7, 10-四乙酸。
[0014] 所述雙功能螯合基團(tuán)能夠螯合金屬Gd3+、F19、Mn 2+。
[0015] 本發(fā)明所述雙功能螯合基團(tuán)優(yōu)選螯合金屬Gd3+，目前用于臨床上的造影劑主要是 Gd3+配合物造影劑。
[0016] 所述雙功能螯合基團(tuán)，由于多肽沒有直接與金屬形成穩(wěn)定結(jié)合的功能團(tuán)，所以解 決的方法是在多肽上修飾上一些能與金屬離子牢固結(jié)合的基團(tuán)。本發(fā)明雙功能螯合基團(tuán)是 具有易與多肽氨基酸殘基結(jié)合的基團(tuán)，又具有能與金屬離子穩(wěn)定絡(luò)合的官能團(tuán)，通過它的 作用，可以形成磁成像金屬一雙功能螯合劑一抗體（多肽）的復(fù)合物。本發(fā)明中使用DOTA 作為雙功能螯合劑，該螯合劑螯合金屬后具有良好的穩(wěn)定性。
[0017] 本發(fā)明所述的P物質(zhì)多肽探針，優(yōu)選的是，所述三聯(lián)吡啶基團(tuán)選自4' -(4-羧甲 氧基苯基）-2, 2' ： 6'，2' ' -二聯(lián)批陡)、4' - (4_竣基苯基）_2, 2' ： 6'，2' ' -二聯(lián)批陡、4' -竣 基-2,2' ： 6'，2''-三聯(lián)吡啶中的一種。
[0018] 4' - (4-羧甲氧基苯基）-2, 2' ： 6'，2' ' -三聯(lián)吡啶結(jié)構(gòu)式：
【主權(quán)項】
1. 對神經(jīng)激肽-1受體蛋白特異性識別的P物質(zhì)多肽探針，其特征在于：所述P物質(zhì)多 肽探針為多肽二聚體或多肽聚合物，其單體由一段P物質(zhì)氨基酸序列MLGFFQQPKPR、雙功能 螯合基團(tuán)、熒光基團(tuán)和三聯(lián)吡啶基團(tuán)通過賴氨酸連接而成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的P物質(zhì)多肽探針，其特征在于：所述多肽二聚體的單體氨基 酸序列為以1^^^〇〇?即服1?1?1((丨? 7)1?(076)0(7^;所述多肽聚合物的單體氨基酸序列為： MLGFFQQPKPRKKKKKK(tpy)K(tpy)KK(Dye)DOTA。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的P物質(zhì)多肽探針，其特征在于：所