抗eLtaS蛋白的人源化抗體與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中抗eLtaS蛋白的人源化抗體與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)屬葡萄球菌屬，是人類的一種重要 病原菌，能夠引起肺炎、心內(nèi)膜炎、燒傷及戰(zhàn)傷感染、敗血癥、中毒性休克等多種嚴(yán)重感染 (Lowy FD. New Engl J Med. 1998 ;339, 520-532)，它是革蘭氏陽(yáng)性菌膿毒血癥的主要致病 菌，也是燒傷創(chuàng)面感染、急性肝衰竭的重要病原菌（姚詠明等，膿毒癥研宄的若干新動(dòng)態(tài) 2000 ;13, 517-519)。其能夠在人群密集的區(qū)域通過(guò)飛沫、接觸進(jìn)行大規(guī)模傳播。更為嚴(yán) 重的是，金黃色葡萄球菌耐藥性不斷增強(qiáng)，如1961年發(fā)現(xiàn)的對(duì)β -內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA)，2002年10月又發(fā)現(xiàn)了耐萬(wàn)古霉素的金黃色葡萄球菌 (VRSA)。2007年10月，Klevens R M等調(diào)查表明美國(guó)2005年感染MRSA的人數(shù)超過(guò)9萬(wàn) 人，感染MRSA的病人死亡率為19. 8 %，死亡人數(shù)超過(guò)HIV感染的死亡人數(shù)（Klevens RM，et al. JAMA. 2007 ;298:1763-1771)。今天細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)正在逆轉(zhuǎn)過(guò)去80年抗生素創(chuàng)造的 奇跡，許多細(xì)菌感染的治療藥物選擇變得日益有限和昂貴，某些情況下甚至根本無(wú)藥可用， 抵抗細(xì)菌感染亟需新的更有效的治療策略。
[0003] LtaS(Lipoteichoic acid synthase, LTA合成酶）是金黃色葡萄球菌的細(xì)胞膜 蛋白之一，全長(zhǎng)646aa，N端位于胞內(nèi)，C端位于胞外，有5個(gè)跨膜區(qū)，其功能區(qū)位于胞外，與 金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁主要成分LTA(Lipoteichoic acid)的合成密切相關(guān)。I型多肽酶 SpsB可以水解全長(zhǎng)LtaS并將其胞外區(qū)eLtaS(218_646aa)釋放于細(xì)菌生長(zhǎng)上清中。申請(qǐng) 人在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中證實(shí)在小鼠急性腹膜炎模型和肺炎模型中eLtaS可以顯著加重金黃色葡 萄球菌對(duì)小鼠的感染，從而證實(shí)其為金黃色葡萄球菌重要毒力因子之一；進(jìn)一步還證實(shí)針 對(duì)eLtaS蛋白的中和性單克隆抗體E4-2可以在小鼠腹膜炎模型和肺炎模型中有效抵抗金 黃色葡萄球菌對(duì)小鼠的感染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何預(yù)防及治療金黃色葡萄球菌所致疾病。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了抵抗金黃色葡萄球菌感染的抗eLtaS蛋 白的人源化抗體。
[0006] 本發(fā)明所提供的抗eLtaS蛋白的人源化抗體，名稱為EA4-2,由重鏈和輕鏈組成， 所述重鏈和所述輕鏈均由可變區(qū)和恒定區(qū)組成；所述重鏈和所述輕鏈的恒定區(qū)均來(lái)自于 人；所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 1的第1-116位氨基酸所示；所述 輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 2的第1-111位氨基酸所示。
[0007] 上述抗體中，所述重鏈的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 1所示。
[0008] 上述抗體中，所述輕鏈的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 2所示。
[0009] 其中，SEQ ID No. 1的第1-116位氨基酸為EA4-2的重鏈可變區(qū)序列，SEQ ID No. 1 的第117-446位氨基酸為EA4-2的重鏈恒定區(qū)序列。SEQ ID No. 2的第1-111位氨基酸為 EA4-2的輕鏈可變區(qū)序列，SEQ ID No. 2的第112-218位氨基酸為EA4-2的輕鏈恒定區(qū)序 列。
[0010] 上述抗體中，所述重鏈的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 3所示。
[0011] 上述抗體中，所述輕鏈的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 4所示。
[0012] 上述抗體中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向進(jìn)化 和點(diǎn)突變的方法，對(duì)本發(fā)明的所述重鏈或所述輕鏈的核苷酸序列進(jìn)行突變。那些經(jīng)過(guò)人工 修飾的，編碼所述重鏈或所述輕鏈的核苷酸序列，均是衍生于本發(fā)明的核苷酸序列并且等 同于本發(fā)明的序列。
[0013] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了與所述EA4-2相關(guān)的生物材料。
[0014] 本發(fā)明所提供的與所述EA4-2相關(guān)的生物材料，為M或N :
[0015] M、下述El)至E40)中的任一種：
[0016] El)由編碼所述重鏈的核酸分子和編碼所述輕鏈的核酸分子組成的組合物；
[0017] E2)含有El)所述組合物的表達(dá)盒；
[0018] E3)表達(dá)盒組合物，由E3a)的表達(dá)盒和E3b)的表達(dá)盒組成：
[0019] E3a)含有編碼所述重鏈的核酸分子但不含有編碼所述輕鏈的核酸分子的表達(dá) 盒；
[0020] E3b)含有編碼所述輕鏈的核酸分子但不含有編碼所述重鏈的核酸分子的表達(dá) 盒；
[0021] E4)含有El)所述組合物的重組載體；
[0022] E5)含有E2)所述表達(dá)盒的重組載體；
[0023] E6)含有E3)所述表達(dá)盒組合物的重組載體；
[0024] E7)重組載體組合物，由E7a)的重組載體和E7b)的重組載體組成：
[0025] E7a)含有編碼所述重鏈的核酸分子但不含有編碼所述輕鏈的核酸分子的重組載 體；
[0026] E7b)含有編碼所述輕鏈的核酸分子但不含有編碼所述重鏈的核酸分子的重組載 體；
[0027] E8)重組載體組合物，由E8a)的重組載體和E8b)的重組載體組成：
[0028] E8a)含有E3a)所述表達(dá)盒的重組載體；
[0029] E8b)含有E3b)所述表達(dá)盒的重組載體；
[0030] E9)含有El)所述組合物的重組微生物；
[0031] E10)含有E2)所述表達(dá)盒的重組微生物；
[0032] El 1)含有E3)所述表達(dá)盒組合物的重組微生物；
[0033] E12)含有E4)所述重組載體的重組微生物；
[0034] E13)含有E5)所述重組載體的重組微生物；
[0035] E14)含有E6)所述重組載體的重組微生物；
[0036] E15)含有E7)所述重組載體組合物的重組微生物；
[0037] E16)含有E8)所述重組載體組合物的重組微生物；
[0038] E17)含有El)所述組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0039] E18)含有E2)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0040] E19)含有E3)所述表達(dá)盒組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0041] E20)含有E4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0042] E21)含有E5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0043] E22)含有E6)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0044] E23)含有E7)所述重組載體組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0045] E24)含有E8)所述重組載體組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0046] E25)含有El)所述組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0047] E26)含有E2)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0048] E27)含有E3)所述表達(dá)盒組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0049] E28)含有E4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0050] E29)含有E5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0051] E30)含有E6)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0052] E31)含有E7)所述重組載體組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0053] E32)含有E8)所述重組載體組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織；
[0054] E33)含有El)所述組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0055] E34)含有E2)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0056] E35)含有E3)所述表達(dá)盒組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0057] E36)含有E4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0058] E37)含有E5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0059] E38)含有E6)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0060] E39)含有E7)所述重組載體組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0061] E40)含有E8)所述重組載體組合物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物器官；
[0062] N、下述 Nl 和 / 或 N2:
[0063] Nl、與所述重鏈相關(guān)的生物材料，為下述Al)至A12)中的任一種：
[0064] Al)編碼所述重鏈的核酸分子；
[0065] A2)含有Al)所述核酸分子的表達(dá)盒；
[0066] A3)含有Al)所述核酸分子的重組載體；
[0067] A4)含有A2)所述表達(dá)盒的重組載體；
[0068] A5)含有Al)所述核酸分子的重組微生物；
[0069] A6)含有A2)所述表達(dá)盒的重組微生物；
[0070] A7)含有A3)所述重組載體的重組微生物；
[0071] A8)含有A4)所述重組載體的重組微生物；
[0072] A9)含有Al)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0073] A10)含有A2)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0074] All)含有A3)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0075] A12)含有A4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0076] N2、與所述輕鏈相關(guān)的生物材料，為下述BI)至B12)中的任一種：
[0077] BI)編碼所述輕鏈的核酸分子；
[0078] B2)含有BI)所述核酸分子的表達(dá)盒；
[0079] B3)含有BI)所述核酸分子的重組載體；
[0080] B4)含有B2)所述表達(dá)盒的重組載體；
[0081] B5)含有BI)所述核酸分子的重組微生物；
[0082] B6)含有B2)所述表達(dá)盒的重組微生物；
[0083] B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物；
[0084] B8)含有M)所述重組載體的重組微生物；
[0085] B9)含有BI)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0086] B10)含有B2)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0087] BI 1)含有B3)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系；
[0088] B12)含有M)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞系。
[0089] 上述生物材料中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向 進(jìn)化和點(diǎn)突變的方法，