一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及活性藥物的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 對羥基苯甲醛（4-羥基苯甲醛）廣泛分布于自然界中，植物、海洋生物中都存在對 羥基苯甲醛。它們或作為某些植物或食品中的揮發(fā)性成分，或是某些海洋生物的代謝物產(chǎn) 物，對一些人體致病菌如金黃色葡萄球菌、白色念珠菌以及其他海洋細(xì)菌等都具有很好的 抑菌效果。在現(xiàn)有技術(shù)中，在蘿卜中還鮮有報道對羥基苯甲醛的存在。
[0003] 有鑒于此，本發(fā)明人研宄和設(shè)計了一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法， 本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，通過在鹽漬 蘿卜中加入抽提液逐步抽提后，并通過反相硅膠柱及正相硅膠柱的色譜分離，最終制得對 羥基苯甲醛，本發(fā)明首次從鹽漬蘿卜中分離到了對羥基苯甲醛，該成分是鹽漬蘿卜中抑制 真菌的活性物質(zhì)。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是：
[0006] 一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，包括以下步驟：
[0007] 步驟一、鹽漬蘿卜干粉的制備：將鹽漬蘿卜切成薄片，于50°C下烘干，粉碎，過20 目篩，得鹽漬蘿卜干粉，裝于密封袋中，干燥器中保存?zhèn)溆茫?br>[0008] 步驟二、鹽漬蘿卜粗提物的制備：稱取已烘干粉碎的5年鹽漬蘿卜粉2份，每份 20g，分別置于2個500mL三角瓶中，按料液比1:15分別加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于 搖床中，40°C，150rpm下提取6h，抽濾，收集濾液；再向殘渣中加入相應(yīng)溶劑進(jìn)行第二次提 取，在同樣的條件下提取3h，抽濾，收集濾液，待殘渣中溶劑揮干后，再交換溶劑提取1次， 提取條件同第二次提取，合并濾液，40°C減壓濃縮至圓底燒瓶中，回收溶劑，分別得乙酸乙 酯和丙酮提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到鹽漬蘿卜粗提物，4°C貯存?zhèn)?用；
[0009] 步驟三、鹽漬蘿卜粗提物的初步分離：將鹽漬蘿卜粗提物用甲醇溶解后過濾，40°C 減壓濃縮后上含170g填料的S印hadex LH-20凝膠柱，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，控制流 速為5~9s/drop，使用自動收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流 份；合并第48至第63管的流份，再進(jìn)行減壓濃縮，得到組分Yl ;
[0010] 步驟四、組分Yl的分離純化：組分Yl用適量甲醇溶解后，直接上含170g填料的 Sephadex LH-20凝膠柱，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，經(jīng)若干次凝膠柱分離，最終收集得到 31管流份，合并第11至第15管流份得310mg樣品，將該部分標(biāo)記為組分1-2 ;
[0011] 步驟五、組分1-2的分離純化：組分1-2加適量甲醇溶解后，過反相硅膠柱進(jìn)行分 離，以50% CH3OH進(jìn)行洗脫，洗脫體積為1L，每200mL收集1個流份，共收集得到5個流份， 45°C減壓濃縮除去溶劑后，選擇第1個流份用正相硅膠進(jìn)行分離；將正相硅膠分離后的2mg 樣品用IOmg硅膠粉拌樣，0. 08g硅膠用石油醚飽和后裝柱，樣品上柱后，用石油醚進(jìn)行洗 脫，收集第20至第32管的流份，合并流份后濃縮，蒸干溶劑后，制得對羥基苯甲醛。
[0012] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟五中采用的正相硅膠柱進(jìn)行分離的步驟為：
[0013] (1)硅膠粉活化
[0014] 取200~300目硅膠粉于試劑瓶中，用扎孔的錫箔紙包好瓶口，置于IKTC烘箱中 活化2~3h，冷卻后封好瓶口置于干燥器中，備用；
[0015] ⑵拌樣
[0016] 根據(jù)樣品的量4mg，向干凈的圓底燒瓶中硅膠粉20mg，用膠頭滴管吸取樣品液滴 至圓底燒瓶中的硅膠粉上，迅速攪拌均勻并間歇用電吹風(fēng)給圓底燒瓶加熱以使溶劑快速揮 干，使樣品呈均勻粉末狀，如此重復(fù)，直至樣品全部吸附于硅膠粉上，繼續(xù)加熱，使樣品中的 溶劑完全揮發(fā)，用濾紙封口后置于干燥器中備用；
[0017] ⑶裝柱
[0018] 采用濕法裝柱，稱取0. 2g硅膠用石油醚飽和后裝柱；
[0019] ⑷上樣
[0020] 采用干法上樣，將吸附有樣品的硅膠粉裝至層析柱中，使其均勻沉降于硅膠層表 面，待樣品沉降完全，打開閥門，收集洗脫液；
[0021] (5)樣品洗脫
[0022] 梯度洗脫：先用初始洗脫劑對樣品進(jìn)行洗脫，然后逐漸增加洗脫劑的極性，洗脫過 程中用泵加壓并用薄層層析TLC追蹤，直至目標(biāo)點(diǎn)被洗脫；
[0023] (6)樣品的收集與合并
[0024] 用小試管分部收集樣品，將含有目標(biāo)點(diǎn)的樣品管按照出柱順序合并為幾個部分， 減壓濃縮后，繼續(xù)進(jìn)行薄層層析，根據(jù)樣品的具體情況繼續(xù)進(jìn)行分離或者合并濃縮后4°C貯 減備用。
[0025] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述薄層層析TLC追蹤為：將GF254硅膠板于IKTC烘 箱中活化2~3h，待其自然冷卻至室溫后取出，置于干燥器中備用，用玻璃毛細(xì)管吸取適 量樣品，點(diǎn)于硅膠板基線上，并在樣點(diǎn)下端用鉛筆做好標(biāo)記，硅膠板上基線距板底端距離為 0· 8~lcm，兩樣點(diǎn)之間的距離不小于0· 8cm，用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后，置于裝有飽和層析液的 層析缸中展開，待溶劑前沿展至距薄層板頂端約Icm時，用鑷子取出，吹干溶劑，用紫外分 析儀和其它顯色劑進(jìn)行顯色。
[0026] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，還包括對羥基苯甲醛的結(jié)構(gòu)鑒定：將過正相硅膠柱后制 得的對羥基苯甲醛裝入核磁管中，蒸干溶劑，加入氘代試劑，以TMS作為內(nèi)標(biāo)，使用400MHz 核磁共振儀測定化合物的核磁譜，測定項目包括1H-NMR、13C-NMR、DEPT 90、DEPT 135^H-1H COSY、HSQC、HMBC ;將樣品用含5%甲酸的甲醇溶液溶解后測定質(zhì)譜，質(zhì)譜條件：電離源： 電噴霧電離源；干燥氣溫度：200°C ;干燥氣壓力：20psi ;霧化氣壓力：50psi ;霧化室溫度 50°C ;針孔電壓：5000V ;屏蔽電壓：600V ;毛細(xì)管電壓：80V。
[0027] 本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，通過在鹽漬蘿卜中加入抽提液逐步抽提，并通過反 相硅膠柱及正相硅膠柱的色譜分離，最終制得對羥基苯甲醛，本發(fā)明從鹽漬蘿卜中首次分 離到了對羥基苯甲醛，該成分是鹽漬蘿卜中抑制真菌的活性物質(zhì)。
【附圖說明】
[0028] 圖1是本發(fā)明Y3的薄層層析結(jié)果；其中，展開劑石油醚：乙酸乙酯=5:1，碘顯示；
[0029] 圖2是本發(fā)明Y3的結(jié)構(gòu)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 本發(fā)明揭示了一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，包括以下步驟：
[0031] 步驟一、鹽漬蘿卜干粉的制備：將鹽漬蘿卜切成薄片，于50°C下烘干，粉碎，過20 目篩，得鹽漬蘿卜干粉，裝于密封袋中，干燥器中保存?zhèn)溆茫?br>[0032] 步驟二、鹽漬蘿卜粗提物的制備：稱取已烘干粉碎的5年鹽漬蘿卜粉2份，每份 20g，分別置于2個500mL三角瓶中，按料液比1:15分別加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于 搖床中，40°C，150rpm下提取6h，抽濾，收集濾液；再向殘渣中加入相應(yīng)溶劑進(jìn)行第二次提 取，在同樣的條件下提取3h，抽濾，收集濾液，待殘渣中溶劑揮干后，再交換溶劑提取1次， 提取條件同第二次提取，合并濾液，40°C減壓濃縮至圓底燒瓶中，回收溶劑，分別得乙酸乙 酯和丙酮提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到鹽漬蘿卜粗提物，4°C貯存?zhèn)?用；
[0033] 步驟三、鹽漬蘿卜粗提物的初步分離：將鹽漬蘿卜粗提物用甲醇溶解后過濾，40°C 減壓濃縮后上含170g填料的S印hadex LH-20凝膠柱，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，控制流 速為5~9s/drop，使用自動收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流 份；合并第48至第63管的流份，再進(jìn)行減壓濃縮，得到組分Yl ;
[0034] 步驟四、組分Yl的分離純化：組分Yl用適量甲醇溶解后，直接上含170g填料的 Sephadex LH-20凝膠柱，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，經(jīng)若干次凝膠柱分離，最終收集得到 31管流份，合并第11至第15管流份得310mg樣品，將該部分標(biāo)記為組分1-2 ;
[0035] 步驟五、組分1-2的分離純化：組分1-2加適量甲醇溶解后，過反相硅膠柱進(jìn)行分 離，以50% CH3OH進(jìn)行洗脫，洗脫體積為1L，每200mL收集1個流份，共收集得到5個流份， 45°C減壓濃縮除去溶劑后，選擇第1個流份用正相硅膠進(jìn)行分離；將正相硅膠分離后的2mg 樣品用IOmg硅膠粉拌樣，0. 08g硅膠用石油醚飽和后裝柱，樣品上柱后，用石油醚進(jìn)行洗 脫，收集第20至第32管的流份，合并流份后濃縮，蒸干溶劑后，制得對羥基苯甲醛。
[0036] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟五中采用的正相硅膠柱進(jìn)行分離的步驟為：
[0037] (1)硅膠粉活化
[0038] 取200~300目硅膠粉于試劑瓶中，用扎孔的錫箔紙包好瓶口，置于IKTC烘箱中 活化2~3h，冷卻后封好瓶口置于干燥器中，備用；
[0039] (2)拌樣
[0040] 根據(jù)樣品的量4mg，向干凈的圓底燒瓶中硅膠粉2