從海參內臟中提取肽、多糖、皂苷和脂類的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及海參內臟提取技術領域，具體涉及從海參內臟中提取肽、多糖、皂苷和脂類的方法。
【背景技術】
[0002]刺參(ApostichopusjaponicasSelenka)，也稱仿刺參，屬棘皮動物門，盾手目(Aspidochirotida)，刺參科(Stichopodidae Haeckel)。全世界約有海參 1100 余種，其中可食用者有40余種。我國海域有100多種，北起渤海灣，南到圍洲島都有出產(chǎn)。在我國，海參不僅一向被視為具有顯著滋補作用的美食佳肴，被列為“八珍之一”，在明代就被作為補益藥收入《食物本草》。
[0003]為了適應我國城鄉(xiāng)居民對海參日益增長的需求和海參育苗、養(yǎng)殖技術的突破，我國海參養(yǎng)殖近年迅速發(fā)展，據(jù)不完全統(tǒng)計2013年海參的捕撈量超過20萬噸，加工過程中，海參內臟(腸)超過4萬噸。由于海參內臟(腸)清洗泥沙較困難，因此極大部分未被利用，作為廢物排放。候英雪等(2008年)研究凈海參腸含水分82.03%，干基粗蛋白含量73.6%。內臟中泥沙的含量約為80%左右。【食品研究與開發(fā)，2008，29 (10):61_63】以此計算我國沿海年加工海參過程中廢棄的凈海參腸達8000噸左右，其中的蛋白質超過1000噸，當然還有多糖和脂類，同樣具有海參的功效。據(jù)報道海參腸蛋白質中必須氨基酸比例比海參體壁更高，EAA/TAA達40 %以上，超過WH0/FA0推薦的優(yōu)質蛋白質比例。有報道海參內臟(腸)中含的留醇量較多，特別是繁殖季節(jié)，內臟含量比平時高80-200倍。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的缺陷和不足，提供一種工藝簡單、設計合理的從海參內臟中提取肽、多糖、皂苷和脂類的方法，充分利用海參這種寶貴資源，同時也減少排放海參內臟對灘涂和近海環(huán)境造成的污染。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是:它的工藝流程如下:
[0006]步驟一、從海參體內取出的內臟立即放入沸水中煮制1min以上滅酶，殺死腸道中微生物，取出冷卻；
[0007]步驟二、將海參內臟(腸)粉碎；
[0008]步驟三、內臟碎粒放入20-60目網(wǎng)框內，將網(wǎng)框放入合適容器內的水中，向一個方向攪拌，使腸中的泥沙隨著水流的離心力流向網(wǎng)框外，經(jīng)一定時間后放出泥沙臟水，再放清水洗滌，如此重復3-4次即可將腸內泥沙洗凈，收集網(wǎng)框中的凈腸供下一步酶解用，也可以用自動洗腸機連續(xù)洗滌海參腸碎，獲得海參凈腸；
[0009]步驟四、稱取一定量洗凈的腸碎，按1: 1-10加純水，用膠體磨磨漿，調整體系溫度 40°C-55°C，PH7.0-9.0，加復合蛋白酶(其中 10 萬 u/g Asl398 20 %-80%、20 萬 u/g 2709堿性蛋白酶10% -50%、胰酶10% -70%,60萬u/g木瓜蛋白酶2% -30%、風味酶0.5%-10%) 1.0-5.0% (蛋白總量)，攪拌酶解 3-6h，升溫 80°C _95°C滅酶 10_25min，離心或板框過濾得清液；
[0010]步驟五、將步驟四中的清液經(jīng)孔徑1-Snm膜過濾，其中過濾下來的截留液加純水3-5次稀釋后再過濾，合并透過液，最終截留液含多糖，經(jīng)脫色樹脂脫色，活性炭精制、脫炭得精制液，加輔料，經(jīng)含量測定可以直接調配海參多糖口服液，或精制液經(jīng)濃縮干燥得多糖粉；
[0011]步驟六、將步驟五中的膜透過液經(jīng)處理好的大孔樹脂柱，流速為l_5BV/h，吸附在樹脂柱上的是皂苷和脂類，流出液為肽類和無機離子；
[0012]步驟七、將步驟六中的樹脂柱上的流出液經(jīng)電滲析脫去無機離子，活性炭精制、脫炭，得精制液，經(jīng)含量測定后加輔料、調配得海參肽口服液，或精制液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、干燥得海參肽粉；
[0013]步驟八、將步驟六中的樹脂柱用純水、10% -50%乙醇液洗滌，60% -90%乙醇液洗脫，流速l_4BV/h，收集洗脫液4-8Bv，回收乙醇得浸膏物，用適量純水分散，用石油醚脫月旨，回收石油醚得脂類，脫脂液用純水飽和的正丁醇液萃取，回收正丁醇后的殘渣真空干燥得阜苷。
[0014]采用上述結構后，本發(fā)明有益效果為:
[0015]1、雖然海參腸是優(yōu)質蛋白質源，但由于海參腸中有自溶酶和泥沙、糞便，從海參體內取出超過2h會自溶、發(fā)臭，加上海參腸較細，只有2mm左右粗，清洗其中泥沙非常費時費力，效率低、費用高，是海參腸一直未被大量利用的主要原因，文獻中報導的數(shù)據(jù)只是為了撰寫論文在實驗室少量實驗的結果，至今尚未有海參腸產(chǎn)業(yè)化利用，本發(fā)明將海參腸經(jīng)煮制殺滅自溶酶和微生物后粉碎，然后在自動清洗機中洗凈泥沙獲得凈腸，為海參腸的工業(yè)化綜合利用成為可能；
[0016]2、海參腸中蛋白質、多糖含量較高，在繁殖期間皂苷的含量是平時的80-200倍，要從海參腸中提取海參蛋白、多糖和皂苷，首先要將海參腸酶解成液體，將蛋白質酶解成小肽，打開蛋白質與多糖的糖肽鍵，本發(fā)明酶解海參腸的復合蛋白酶(其中10萬u/g Asl39820% -80%、20萬u/g 2709堿性蛋白酶10% -50%、胰酶10% -70%、60萬u/g木瓜蛋白酶2% -30%、風味酶0.5% -10% )對海參腸的酶解收率達90%以上，分子量< 2000Da的小肽含量占90%以上，產(chǎn)品沒有苦味，這是目前文獻上均未達到的指標；
[0017]3、腸中高含量的皂苷分離，本發(fā)明采用大孔樹脂從酶解液中吸附工藝將其分離，具有工藝簡單、吸附完全、收率高等特點；
[0018]4、大孔樹脂柱流出液中小肽和多糖的分離采用膜分離，改變文獻中用酒精沉淀多糖與小肽分離的工藝，可以大幅度降低生產(chǎn)成本；
[0019]5、膜分離透過液中含有小肽和無機離子，本發(fā)明采用電滲析法將小肽中的無機離子去除，可以將可能受污染的重金屬離子去除，確保產(chǎn)品安全。
【具體實施方式】
[0020]本【具體實施方式】采用的技術方案是:它的工藝流程如下:
[0021]步驟一、從海參體內取出的內臟立即放入沸水中煮制1min以上滅酶，殺死腸道中微生物，取出冷卻；
[0022]步驟二、將海參內臟(腸)粉碎；
[0023]步驟三、內臟碎粒放入20-60目網(wǎng)框內，將網(wǎng)框放入合適容器內的水中，向一個方向攪拌，使腸中的泥沙隨著水流的離心力流向網(wǎng)框外，經(jīng)一定時間后放出泥沙臟水，再放清水洗滌，如此重復3-4次即可將腸內泥沙洗凈，收集網(wǎng)框中的凈腸供下一步酶解用，也可以用自動洗腸機連續(xù)清洗腸碎，獲得凈腸；
[0024]步驟四、稱取一定量洗凈的腸碎，按1: 1-10加純水，用膠體磨磨漿，調整體系溫度 40°C-55°C，PH7.0-9.0，加復合蛋白酶(其中 10 萬 u/g Asl398 20 %-80%、20 萬 u/g 2709堿性蛋白酶10% -50%、胰酶10% -70%,60萬u/g木瓜蛋白酶2% -30%、風味酶
0.5%-10%) 1.0-5.0% (蛋白總量)，攪拌酶解 3-6h，升溫 80°C _95°C滅酶 10_25min，離心或板框過濾得清液；
[0025]步驟五、將步驟四中的清液經(jīng)孔徑1-Snm膜過濾，其中過濾下來的截留液加純水3-5次稀釋后再過濾，合并透過液，最終截留液含多糖，經(jīng)2號脫色樹脂脫色，活性炭精制、脫炭得精制液，加輔料，經(jīng)含量測定可以直接調配海參多糖口服液，或精制液經(jīng)濃縮干燥得多糖粉；
[0026]步驟六、將步驟五中的膜透過液經(jīng)處理好的HPD-200A大孔樹脂柱，流速為1-5BV/h，吸附在樹脂柱上的是皂苷和脂類，流出液為肽類和無機離子；
[0027]步驟七、將步驟六中的樹脂柱上的流出液經(jīng)電滲析脫去無機離子，活性炭精制、脫炭，得精制液，經(jīng)含量測定后加輔料、調配得海參肽口服液，或精制液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、干燥得海參肽粉；
[0028]步驟八、將步驟六中的樹脂柱用純水、10 % -50 %乙醇液洗滌，60 % -90 %乙醇液洗脫，流速l_4BV/h，收集洗脫液4-8Bv，回收乙醇得浸膏物，用適量純水分散，用石油醚脫月旨，回收石油醚得脂類，脫脂液用純水飽和的正丁醇液萃取，回收正丁醇后的殘渣真空干燥得阜苷。.
[0029]本【具體實施方式】中的HPD-200A大孔樹脂柱和2號脫色樹脂均為河北滄州寶恩吸附材料有限公司生產(chǎn)。
[0030]本【具體實施方式】有益效果為:充分利用海參腸這種寶貴資源，同時也減少排放海參內臟對灘涂和近海環(huán)境造成的污染。
[0031]實施例一