一種光合細菌菌劑的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水體凈化領(lǐng)域，具體設(shè)及一種用于凈化養(yǎng)殖水體水質(zhì)的光合細菌菌劑 的制備方法，W及運種細菌菌劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在集約化養(yǎng)殖水體中，水產(chǎn)動物放養(yǎng)密度高、投喂巧料量大，養(yǎng)殖水體中極易蓄積 大量的殘巧、動植物排泄物、死亡殘體等含氮有機物。加之，未經(jīng)處理的養(yǎng)殖廢水和工業(yè)、生 活污水被排放或被雨水沖刷進入養(yǎng)殖水體，導(dǎo)致養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸鹽嚴重超標。高 濃度的氨氮或亞硝酸鹽易導(dǎo)致有害細菌和條件致病菌大量滋生，魚、郵等養(yǎng)殖動物的體質(zhì) 下降，抗應(yīng)激能力差，易受病原茵的侵襲，引起水產(chǎn)動物疾病的大面積爆發(fā)。
[0003] 生物修復(fù)是國內(nèi)外近10年發(fā)展起來的最新環(huán)境工程技術(shù)，已被成功地應(yīng)用于± 壤、城市河湖、地下水、近海洋面、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)等多個領(lǐng)域，并成為21世紀環(huán)境科技發(fā)展最 快的高新技術(shù)領(lǐng)域之一。與傳統(tǒng)掠奪式養(yǎng)殖模式不同，生物修復(fù)技術(shù)應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，并非 通過大量使用高營養(yǎng)的巧料和抗生素提高養(yǎng)殖產(chǎn)量，而主要通過生物-生態(tài)措施，修復(fù)受 損的池塘生態(tài)系統(tǒng)，加速生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量循環(huán)，增加水體溶氧，改善水質(zhì)和池塘 自凈能力，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖的產(chǎn)量和品質(zhì)。把生物修復(fù)技術(shù)應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境修復(fù)中，對恢 復(fù)和優(yōu)化水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境，推動水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重大意義。
[0004] 光合細菌（PhotosyntheticBacteriaJSB)是一類在厭氧條件下進行光合作用的 細菌總稱。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，光合細菌可改善水質(zhì)，穩(wěn)定養(yǎng)殖環(huán)境，增進魚郵的免疫力，預(yù)防 疾病。同時，光合細菌的菌體蛋白質(zhì)含量高達65%W上，各種維生素、輔酶等生物活性物質(zhì) 含量豐富，可W作為魚郵的巧料及巧料添加劑。
[0005] 隨著微生物水處理技術(shù)的興起和發(fā)展，開發(fā)和利用新型的光合細菌來解決池塘養(yǎng) 殖水體在養(yǎng)殖中后期氨氮、亞硝酸鹽升高的問題，已受到了人們的普遍關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，其主要發(fā)明目的是提供一種有效凈化水體、增強 水產(chǎn)對象抗病能力的光合細菌菌劑的制備方法。
[0007] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種光合細菌菌劑的制備方法，包 括W下步驟 a) 、菌種活化采用硅膠塞封口的試管作為培養(yǎng)容器，加入液體活化培養(yǎng)基，其總體積 占容器有效容積的70-80%，將在冷凍室中低溫保存的光合細菌菌種接種于液體活化培養(yǎng) 基中靜置培養(yǎng)，接種量1毫升，培養(yǎng)溫度30-35°C，培養(yǎng)時間5-7天，即得到光合細菌一級 種子； b) 、種子液制備在無菌的操作臺上，將光合細菌一級種子接種到250毫升液體種子 培養(yǎng)基中，接種量為20-25毫升，梓緊瓶蓋后放于自然光下培養(yǎng)，溫度30-35 °C，培養(yǎng)周期 5-7天，得到光合細菌二級種子液； C)、發(fā)酵培養(yǎng)向5升可密封的塑料桶中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，按照20-50%比例接入光合 細菌二級種子液，梓緊桶蓋后露天放置，在光照下發(fā)酵，檢測發(fā)酵液中菌體數(shù)量，待菌體數(shù) 量達到100億/毫升時即可停止發(fā)酵。
[0008] 所述的一種光合細菌菌劑的制備方法，其步驟a)中液體活化培養(yǎng)基的抑值為 7. 2,含有W下重量百分比的物質(zhì)：蛋白腺0. 6%，巧樣酸鋼0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨鋼 0. 2%，氯化鋼0. 2%，氯化錠0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸二氨鐘0. 2%和余量的水。
[0009] 所述的一種光合細菌菌劑的制備方法，其步驟b)中液體種子培養(yǎng)基的抑值為 7. 2,含有W下重量百分比的物質(zhì)：蛋白腺0. 6%，巧樣酸鋼0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨鋼 0. 2%，氯化鋼0. 2%，氯化錠0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸二氨鐘0. 2%和余量的水。
[0010] 所述的一種光合細菌菌劑的制備方法，其步驟C)中發(fā)酵培養(yǎng)基含有W下重量百分 比的物質(zhì)：醋酸鋼0. 1% - 0. 2%，酵母膏0. 1%，氯化錠0. 1%，氯化鋼0. 01%，碳酸氨鋼0. 3%，屯 水硫酸儀0. 04%，憐酸氨二鐘0. 6%，微量元素母液0. 1%，水余量。
[0011] 所述的一種光合細菌菌劑的制備方法，其微量元素母液含有W下重量百分比的物 質(zhì)：乙二胺四乙酸二鋼0. 25%，硫酸鋒1. 0%，硫酸儀0. 2%，硫酸銅0. 04%，氯化鉆0. 02%，硫酸 亞鐵0.7%，水余量。
[0012] 所述的一種光合細菌菌劑的制備方法，其步驟C)中的發(fā)酵過程在室外自然光或室 內(nèi)鶴絲燈光源下進行，每天搖動培養(yǎng)容器2-3次。
[0013] 所述的一種光合細菌菌劑的制備方法，其步驟C)中菌體數(shù)量的檢測采用雙層瓊脂 檢測法。
[0014] 本發(fā)明的又一目的是提供一種上述光合細菌菌劑的應(yīng)用。
[0015] 主要用途：應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖水體施用W凈化水質(zhì)；可針對水體污染、氨氮及亞硝 酸鹽含量過高的養(yǎng)殖水體，也可針對受污染的非養(yǎng)殖水體中使用；使用時按照0. 5-1升/ 畝的用量直接撒入水中。
[0016] 本發(fā)明的有益效果是：光合細菌菌劑在光合作用下，能夠利用污水中的有機質(zhì)作 為營養(yǎng)物質(zhì)迅速生長繁殖，而在連續(xù)光照作用下，光合作用消耗C〇2的速率遠大于其呼吸作 用產(chǎn)生c〇2的速率，導(dǎo)致CO3 7肥〇3值增大，因此抑值持續(xù)上升，而較高的抑值有利于降 低系統(tǒng)中憐的可溶性和生物有效性，因此對有機物污染的水體中的氨氮及亞硝酸鹽均具有 良好的降解效果，對污水具有較強的凈化效果，增加了水中的含氧量，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有良 好的水質(zhì)調(diào)節(jié)作用。
【具體實施方式】
[0017] 本發(fā)明作為一種光合細菌菌劑，包含光合細菌菌體及發(fā)酵液，活性組分為光合細 菌的一種或幾種，有效活菌數(shù)不低于100億/毫升，發(fā)酵成熟的菌劑為深紅色菌劑，培養(yǎng)容 器內(nèi)壁有菌體附著。使用沼澤紅假單抱菌作為菌種時，發(fā)酵時間為3-5天，有效活菌數(shù)達 至Ij100億/毫升。
[0018] 應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖水體施用W凈化水質(zhì)時，可針對水體污染、氨氮及亞硝酸鹽含量 過高的養(yǎng)殖水體，也可針對受污染的非養(yǎng)殖水體中使用，使用時按照0. 5-1升/畝的用量 直接撒入水中。
[001引制備方法如下： a)、菌種活化 采用硅膠塞封口的試管作為培養(yǎng)容器，加入液體活化培養(yǎng)基，其總體積占容器有效容 積的70-80%，將在冷凍室中低溫保存的光合細菌菌種接種于液體活化培養(yǎng)基中靜置培養(yǎng)， 接種量1毫升，培養(yǎng)溫度30-35°C，培養(yǎng)時間5-7天，即得到光合細菌一級種子。
[0020] 液體活化培養(yǎng)基的抑值為7. 2,含有W下重量百分比的物質(zhì)：蛋白腺0. 6%，巧樣酸 鋼0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨鋼0. 2%，氯化鋼0. 2%，氯化錠0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸 二氨鐘0. 2%，培養(yǎng)基基質(zhì)為水，培養(yǎng)基在12rC條件下滅菌20min，然后降溫再使用。
[00川b)、種子液制備 在無菌的操作臺上，將光合細菌一級種子接種到250毫升液體種子培養(yǎng)基中，接種量 為20-25毫升，梓緊瓶蓋后放于自然光下培養(yǎng)，溫度30-35°C，培養(yǎng)周期5 -7天，得到光 合細菌二級種子液。
[0022] 液體種子培養(yǎng)基的抑值為7. 2,含有W下重量百分比的物質(zhì)：蛋白腺0. 6%，巧樣酸 鋼0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨鋼0. 2%，氯化鋼0. 2%，氯化錠0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸 二氨鐘0. 2%，培養(yǎng)基基質(zhì)為水。
[002引C)、發(fā)酵培養(yǎng) 向5升可密封的塑料桶中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，按照20-50%比例接入光合細菌二級種子 液，梓緊桶蓋后露天放置，在在室外自然光或室內(nèi)鶴絲燈光源下進行發(fā)酵，每天搖動培養(yǎng)容 器2-3次，采用雙層瓊脂檢測法檢測發(fā)酵液中菌體數(shù)量，待菌體數(shù)量達到100億/毫升時 即可停止發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)5-7天后形成深紅色發(fā)酵液。
[0024]發(fā)酵培養(yǎng)基含有W下重量百分比的物質(zhì)：醋酸鋼0. 1%-0. 2%，酵母膏0. 1%，氯化 錠0. 1%，氯化鋼0. 01%，碳酸氨鋼0. 3%，屯水硫酸儀0. 04%，憐酸氨二鐘0. 6%，微量元素母液 0. 1%，水余量。
[00巧]其中，所述的微量元素母液為微量元素混合液，含有W下重量百分比的物質(zhì)：乙 二胺四乙酸二鋼0. 25%，硫酸鋒1. 0%，硫酸儀0. 2%，硫酸銅0. 04%，氯化鉆0. 02%，硫酸亞鐵 0.7%，基質(zhì)為水。
[0026]實施例1本發(fā)明光合細菌菌劑對魚塘水氨氮和亞硝酸鹽處理的室內(nèi)試驗 在養(yǎng)殖池塘水中主要的化學(xué)指標有氨態(tài)氮、硫化氨、溶解氧、pH、亞硝酸鹽和有機物耗 氧量等，其中W氨態(tài)氮和亞硝酸鹽尤為重要，因為運兩種物質(zhì)是養(yǎng)殖池中的主要有害物質(zhì)。 氨通常是由含氮有機物分解而產(chǎn)生的，如沉入池底的飼料、魚排泄物、肥料和動植物死亡的 遺骸，或者是氨基酸經(jīng)微生物氨化作用脫氨基生成，另外魚類的代謝終產(chǎn)物多數(shù)也W氨的 形式排出。一般情況下，池水中氨的含量較低，水生生物和魚類排泄的氨被大量池水稀釋， 同時硝化細菌將其轉(zhuǎn)化為硝酸鹽，因此對魚類不會產(chǎn)生多大影響，但在缺氧或高密度養(yǎng)殖 和大量投喂巧料時，氨的濃度就會升高。當(dāng)氨氮的積累在水中達到一定的濃度時就會使魚 中毒，水中NH4+-N含量超過0. 2mg/L時，就會直接危害魚類生存，使魚中毒，減少攝食，生長 緩慢；當(dāng)水中NH4+-N含量超過0.6mg