一種從靈芝中提取多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從靈芝中提取多糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝(學(xué)名:Ganoderma Lucidum Karst),別稱紅芝、丹芝、木靈芝、菌靈芝、萬年蕈、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。靈芝主要分布在中國、朝鮮半島和日本，中國分布最廣的在江西。早在東漢時(shí)期，張衡的《西京賦》中就出現(xiàn)了靈芝一詞，距今已經(jīng)有兩千多年的歷史?！侗静菥V目》收錄了黃芝、白芝、黑芝、青芝、赤芝、紫芝六種，每種均按照釋名、集解、正誤、修治、氣味、主治、附方等項(xiàng)，詳加注解。
[0003]靈芝具有保肝解毒、治療糖尿病、改善心血管系統(tǒng)、肌膚美白、補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效，主治神疲乏力、頭暈、心悸、失眠、虛勞、冠心病、塵肺、久咳氣喘等。近些年來，癌癥患者的數(shù)量逐年增加，各種抗癌藥物的研發(fā)成為熱點(diǎn)。研究表明靈芝制劑對(duì)胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、子宮癌有一定的輔導(dǎo)治療效果。靈芝中的化學(xué)成分復(fù)雜，其中的三萜類和糖類化合物是主要的活性成分。現(xiàn)代藥理研究表明，靈芝多糖具有顯著的提高免疫力抗腫瘤功效，可以通過巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞釋放能抑制或殺死腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞因子如腫瘤壞死影子(TNF)和干擾素(IFN)來殺死腫瘤細(xì)胞或促其凋亡，也可以通過增強(qiáng)巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK)和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的功能，間接殺死腫瘤細(xì)胞。
[0004]靈芝活性成分的提取方法有多種，多糖的提取方法有水浴提取法，堿提取法，超聲提取法，酶提取法，超臨界流體萃取等。各種提取方法都有自己的優(yōu)缺點(diǎn)，水浴提取法優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單方便，缺點(diǎn)是提取效率低，有時(shí)會(huì)破壞多糖的結(jié)構(gòu)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服現(xiàn)有的靈芝提取多糖的方法存在的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種從靈芝中提取多糖的方法。
[0006]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]本發(fā)明的從靈芝中提取多糖的方法的具體步驟如下:
[0008](1)水浸提取:
[0009]將靈芝加入粉碎機(jī)中粉碎，稱取粉碎后的靈芝粉，加入蒸餾水，靈芝粉與蒸餾水的重量體積比為1:30-90g/ml，浸泡5-10min，再加入蒸餾水，加入的蒸餾水與靈芝粉的體積重量比為300-600:lml/g，置于恒溫水箱中50_90°C恒溫水浴l_3h，之后煮沸l(wèi)h，將煮沸后的溶液經(jīng)漏斗過濾，濾液備用，濾渣加入蒸餾水，繼續(xù)煮沸，沸騰時(shí)間0.5h然后過濾，濾液備用，濾渣加入蒸餾水，過濾之后把濾渣棄掉，三次過濾留下的濾液收集備用；
[0010](2)纖維素酶和植物蛋白酶酶解及膜分離:
[0011]將步驟(1)水浸提后濾液加入濾液重量0.l_lwt%纖維素酶和0.5_2wt%植物蛋白酶，在pH5.0時(shí)，于40-70°C水浴下酶解30-90min ;將濾液裝入離心管中行離心，在壓力為0.05?0.1MPa時(shí)，用超濾膜進(jìn)行膜分離，離心后將殘?jiān)サ簦x心液于4°C放置2h ;
[0012](3)去蛋白質(zhì):
[0013]用6mol/L HC1調(diào)節(jié)步驟(2)的離心液pH到3，用等體積比的三氯甲烷萃取兩次，留上清液進(jìn)行過濾，濾液上DEAE-S印hadexA-25柱，然后用NaCl洗脫，洗脫液濃縮透析除鹽；
[0014](4)除色素:
[0015]將步驟(3)得到的洗脫液依次用無水乙醚和無水乙醇洗滌，然后進(jìn)行逆向流水透析，最后濃縮冷凍干燥，放入真空干燥箱烘干得靈芝多糖。
[0016]步驟(1)中，粉碎后的靈芝粉的粒度大于80目。
[0017]步驟(1)中，優(yōu)選稱取粉碎后的靈芝粉，蒸餾水，靈芝粉與蒸餾水的重量體積比為1:60g/ml，浸泡 5min。
[0018]步驟(1)中，優(yōu)選加入的蒸餾水與靈芝粉的體積重量比為480: lml/g，置于恒溫水箱中70 °C恒溫水浴2h。
[0019]步驟⑵中，優(yōu)選將步驟(1)水浸提后濾液加入濾液重量0.5wt%纖維素酶和lwt%植物蛋白酶，在pH5.0時(shí)，于55°C水浴下酶解60min。
[0020]步驟⑵中，濾液在5000r/min的速度下進(jìn)行離心，時(shí)間20min。
[0021]步驟(2)中，真空干燥箱烘干是先于45°C下干燥2h，之后調(diào)節(jié)溫度到60°C烘干。
[0022]本發(fā)明的積極效果如下:
[0023]本發(fā)明以水提取法為基礎(chǔ)，在提取之前通過用熱水煮沸，破壞靈芝中其他的成分，在保證多糖結(jié)構(gòu)能被很少破壞的同時(shí)能提高多糖的提取率，同時(shí)結(jié)合酶解、柱層析的方法，經(jīng)過試驗(yàn)摸索，得到了最佳的提取工藝參數(shù)，極大提高了多糖的提取率。
[0024]本發(fā)明為靈芝的綜合利用和靈芝有效成分的工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的理論和實(shí)踐依據(jù)，同時(shí)對(duì)靈芝藥用價(jià)值的評(píng)價(jià)具有重要的意義。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0026]實(shí)施例1
[0027]本發(fā)明的從靈芝中提取多糖的方法的具體步驟如下:
[0028](1)水浸提取:
[0029]將靈芝加入粉碎機(jī)中粉碎，稱取粉碎后的靈芝粉lg，加入30ml蒸餾水，浸泡8min，再加入300ml蒸餾水，置于恒溫水箱中50°C恒溫水浴3h，之后煮沸l(wèi)h，將煮沸后的溶液經(jīng)漏斗過濾，濾液備用，濾渣加入蒸餾水，繼續(xù)煮沸，沸騰時(shí)間0.5h然后過濾，濾液備用，濾渣加入蒸餾水，過濾之后把濾渣棄掉，三次過濾留下的濾液收集備用；
[0030](2)纖維素酶和植物蛋白酶酶解:
[0031]將步驟(1)水浸提后濾液加入濾液重量0.lwt%纖維素酶和0.5?丨％植物蛋白酶，在pH5.0時(shí)，于40°C水浴下酶解90min ;將濾液裝入離心管中行離心，在壓力為0.05?0.1MPa時(shí)，用超濾膜進(jìn)行膜分離，離心后將殘?jiān)サ?，離心液于4°C放置2h ;
[0032](3)去蛋白質(zhì):
[0033]用6mol/L HC1調(diào)節(jié)步驟(2)的離心液pH到3，用等體積比的三氯甲烷萃取兩次，留上清液進(jìn)行過濾，濾液上DEAE-S印hadexA-25柱，然后用NaCl洗脫，洗脫液濃縮透析除鹽；
[0034](4)除色素:
[0035]將步驟(3)得到的洗脫液依次用無水乙醚和無水乙醇洗滌，然后進(jìn)行逆向流水透析，最后濃縮冷凍干燥，放入真空干燥箱烘干得靈芝多糖。
[0036]步驟(1)中，粉碎后的靈芝粉的粒度大于80目。
[0037]步驟⑵中，濾液在5000r/min的速度下進(jìn)行離心，時(shí)間20min。
[0038]步驟(2)中，真空干燥箱烘干是先于45°C下干燥2h，之后調(diào)節(jié)溫度到60°C烘干。
[0039]實(shí)施例2
[0040]本發(fā)明的從靈芝中提取多糖的方法的具體步驟如下:
[0041](1)水浸提取:
[0042]將靈芝加入粉碎機(jī)中粉碎，稱取粉碎后的靈芝粉，加入90ml蒸餾水，浸泡lOmin，再加入600ml蒸餾水，置于恒溫水箱中90°C恒溫水浴lh，之后煮沸l(wèi)h，將煮沸后的溶液經(jīng)漏斗過濾，濾液備用，濾渣加入蒸餾水，繼續(xù)煮沸，沸騰時(shí)間0.5h然后過濾，濾液備用，濾渣加入蒸餾水，過濾之后把濾渣棄掉，三次過濾留下的濾液收集備用；
[0043](2)纖維素酶和植物蛋白酶酶解:
[0044]將步驟(1)水浸提后濾液加入濾液重量1?丨％纖維素酶和2wt%植物蛋白酶，在pH5.0時(shí)，于70°C水浴下酶解30min ;將濾液裝入離心管中行離心，在壓力