一種新的烏蘇烷型二萜類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體涉及從石見穿的干燥地上部分中分離得到的一種 烏蘇烷型二萜類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 石見穿系唇形科鼠尾草屬華鼠尾草Salvia chinensis benth的干燥地上部分，亦 名紫參、五鳳花、小丹參、月下紅、烏沙草、墨面風、大發(fā)汗、石大川、山縫拿、紫丹花、紅根參、 田芹菜、活血草，廣泛分布于江蘇、安徽、江西、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、云南等地。其性 涼，味微苦、辛、平，歸胃、肝、肺經(jīng)，有清熱解毒、活血理氣止痛等功能，民間主治噎嗝、痰喘、 肝炎、赤白帶、癰腫、瘰疬等癥。歷代典籍均對其功效有記載，認為其"主骨痛，大風癰腫" (《本草綱目》），"治瘰疬"（《江蘇藥材志》），"治噎嗝，痰飲氣喘"（《蘇州本產(chǎn)藥材》），"活血化 瘀、止血、解毒、消腫"（《浙江民間常用草藥》），"活血止血，清熱解毒"（《安徽中醫(yī)藥》），"治 黃疸型肝炎，濕熱帶下，痛經(jīng)，菌痢，外治面神經(jīng)麻痹，乳腺炎，癤腫，跌打損傷等"（《浙江藥 用植物志》）。
[0003] 到目前為止，從石見穿中分離出的化學成分已達30多種，主要包括多糖類、萜類、 甾醇類、多酚類等。
[0004] 石見穿具有抗炎、抗氧化和抗腫瘤等作用?！吨兴幋筠o典》、《全國中草藥匯編》均記 載了石見穿、糯稻根等合用為方，用于治療急、慢性肝炎均取得了顯著療效。石見穿作為常 用的"抗癌中藥"被廣泛應用于臨床。石見穿在婦科疾病治療中也得到了廣泛應用，除清熱 利濕外，還具有活血化瘀、軟堅散結之功效。因其藥性平和，不燥不寒，故被廣泛應用于因血 熱、濕熱所致崩漏、月經(jīng)先期盆腔炎、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、卵巢囊腫、痛經(jīng)等病，療效 顯著。此外，《浙江民間常見草藥》記載紫參根9~12g，羊乳塊根30g，用于治療淋巴結結核， 療效顯著?！墩憬幱弥参飳W》將本品用于治療面神經(jīng)麻痹、乳腺炎、瘡腫等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從石見穿的干燥地上部分中分離得到的一種烏蘇烷型 二萜類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結構式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將石見穿的干燥地上部分 粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用5 %乙醇洗脫6個柱體積，再用75 %乙醇洗脫8個柱 體積，收集75 %洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中75 %乙醇洗脫濃縮 物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到 4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1、8:1和5:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進一步地，步驟(a)中，用85%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011]進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物(I)和藥學上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療急性T淋巴細胞白血病的藥物中的應用。
[0014]所述的藥物組合物在制備治療急性T淋巴細胞白血病的藥物中的應用。
[0015]本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016]該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結構式；
[0019] 圖2為化合物（I)計算E⑶和實驗E⑶圖。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質(zhì)和范圍。
[0021 ] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0024] (a)將石見穿的干燥地上部分(8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取(30LX3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯(6LX3次)和水飽和的正 丁醇(6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(375g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱體積，再用75%乙 醇洗脫8個柱體積，收集75%洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫濃縮物（129g);(c)步驟(b) 中75 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (8個柱體積）、30:1 (8個柱體 積）、15:1(8個柱體積)和8:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1(8個柱體積）、8:1(10個 柱體積)和5:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (40mg)。
[0025] 結構確證：白色結晶（甲醇），熔點326°C;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z399.2120， 結合核磁特征可得分子式為C22H32O5，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0_d6， 400MHz):H-l(2.41，d)，H-l(2.17，d)，H-3(4.15，s)，H-5(1.23，m)，H-6(1.24，m)，H-6(1.42， m)，H-7(1.53，m)，H-7(1.37，m)，Η-9(2·14，br，s)，H-11(5.71，dd，J=10.2，2·0)，H-12 (6.08，dd，J=10.2,3.0)，H-15(1.30，m)，H-15(l. 19，m)，H-16(2.25，ddd，J=14.2,5.2， 2.2)，H-19(4.64，s)，H-21(1.53，m)，H-21(1.32，m)，H-22(1.55，m)，H-22(1.74，m)，H-23 (0.97，s)，H-24(0.83，s)，H-25(0.95，s)，H-26(0.73，s)，H-27(0.98，s)，H-29(1.01，s)，H-30 (0 · 91，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，DMS〇-d6，100MHz): 51 · 6 (CH2，1 -C)，210 · 7 (C，2-C)， 82.8(CH，3-C)，45.1(C，4-C)，47.3(CH，5-C)，17.6(CH2,6-C)，32.5(CH2,7-C)，40.4(C，8-C)， 52.4(CH，9-C)，37.8(C，10-C)，129.1(CH，n-C)，122.9(CH，12-C)，134.5(C，13-C)，40.8(C， 14-C)，25.2(CH2，15-C)，23.9(CH2，16-C)，43.7(C，17-C)，132.6(C，18-C)，84.7(CH，19-C)， 35.4(C,20-C), 32.3(CH2,21-C), 34.2(CH2,22-C), 27.8(CH3,23-C), 21.1(CH3,24-0,19.0 (CH3,25-C)，17.1(CH3,26-C)，19.2(CH3,27-C)，177.7(C，28-C)，27.6(CH3,29-C)，22.8(CH3， 30-C);碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥基（3358CHT1)和y-內(nèi)酯羰基 (1778cm-Oc/H-NMR譜數(shù)據(jù)顯示七個甲基信號[δΗ0·73(Μθ-26)，0.83(Me-24)，0· 91 (Me-30)， 0.95(]\^-25)，0.97(]\^-23)，0.98(]\^-27)和1.01(]\^-29)]，兩個含氧次甲基信號[5!14.15 (8，!1-3)，4.64(8，!1-19)]和兩個烯屬質(zhì)子[3!15.71((1(1，了=10.2,2.0!^，!1-11)和6.08((1(1，了 =10.2，3.OHz，H-l2)]。13CNMR和DEPT譜顯示30個共振碳信號，其中包括兩個含氧次甲基[δ C82.8(C-3)和84.7(019)]，四個烯屬碳[δ122·9(012)，129·l(C-ll)，132.6(C-18)和 134.5(013)]和兩個羰基碳[5(：177.7((：-28)和210.7((：-2)]。一個酯羰基信號[5(：177.7((：-28)]和兩個碳信號[SC43.7(C-17)和84.7(C-19)]說明該化合物存在一個γ內(nèi)酯結構。HMBC 譜中出-22與(：-28，!1-19與(：-18，以及16-29與(：-19的相關性驗證了28，19-這個官能團的連 接。此外，C-3的化學位移(SC82.8)表明存在一個羥基。上述數(shù)據(jù)表明該化合物為烏蘇烷型 二萜化合物。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數(shù)據(jù)，可基本 確定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致（圖 2)〇
[0026]實施例2:化合物（I)藥理作用試驗[0027] 一、材料和儀器
[0028]急性T淋巴細胞白血病Molt4細胞由暨南大學血液病研究所惠贈;慢性粒細胞白血 病細胞K562細胞由暨南大學由生物化學與分子生物學教研室惠贈?；衔铮↖)為自制，HPLC 歸一化純度大于98%，用DMS0分析純?nèi)芙馀渲瞥?.5yg/mL溶液備用。DMEM/F12培養(yǎng)基粉、羥 乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、四苯基氮哇藍試劑（MTT)購于美國Gibeo公司。新生牛血清 (NewbornCalfSerum)購于中國杭州四季青公司。青霉素（Peni