一種新的單萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于有機(jī)化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新的單萜類化合物及其制備方法 和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 西藏大花黃牡丹（Paeonialudlowii)為毛茛科（Ranunculacea)，茍藥屬 (Paeonia)，牡丹組(Sect.MoutanDC.)植物。僅生長在我國西藏的米林、林芝、波密、察隅、 隆子等縣的海拔2500~3500m的雅魯藏布江開闊河谷及山坡林緣灌叢中，數(shù)量極少，且呈逐 年減少趨勢，屬于西藏特有的瀕臨滅絕的保護(hù)植物。據(jù)當(dāng)?shù)氐胤街居涊d，藏民早在幾百年前 就已經(jīng)使用西藏大花黃牡丹根皮治療婦科疾病、心腦血管疾病、皮膚癬菌病等。
[0003]目前，對大花黃牡丹根皮的藥用效果已經(jīng)有相關(guān)研究，但由于大花黃牡丹根皮中 化學(xué)成分多種多樣，對于其活性成分的研究還未見有相關(guān)報(bào)道，申請人利用正相硅膠柱色 譜、反相(MCI-Gel)柱色譜、凝膠（SephadexLH-20)柱色譜、高效液相色譜等技術(shù)對大花黃 牡丹根皮的乙酸乙酯提取組分進(jìn)行分離、純化，得到單體化合物23個(gè)，通過紫外光譜、紅外 光譜、質(zhì)譜、核磁共振譜并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道確定其結(jié)構(gòu)，其中包括單萜類化合物7個(gè)、單萜苷類 化合物3個(gè)、酚類化合物8個(gè)、酚苷類化合物3個(gè)、生物堿類化合物1個(gè)、三萜類化合物1個(gè)，其 中新化合物4個(gè)，已知化合物19個(gè)，均首次從西藏大花黃牡丹中分離得到。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明通過對大花黃牡丹根皮的深入研究，提供了一種單萜類的新化合物和其制 備方法。
[0005]本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0006] -種單萜類化合物，其結(jié)構(gòu)式如式I所示：
[0007]
[0008] 式I所述化合物為無色油狀，通過ESI-MS譜（[M+Na]+m/z249)和HR-ESI-MS譜（[M+Na]+m/z249.1101，calcdfor&2Η18〇4Νβ，249.1097)，確定該化合物的分子式&21118〇4,其不 飽和度為4。紅外光譜(KBr壓片)給出了羥基(3435CHT1)和羰基（1720(^1)信號。紫外光譜顯 示該化合物紫外最大吸收在203nm〇
[0009]所述的式I化合物的制備方法，具體包括以下步驟：
[0010] 1)取干燥的西藏大花黃牡丹根皮粉碎后，加入95 %乙醇，室溫浸提24h，重復(fù)抽濾， 50°C減壓濃縮，利用乙酸乙酯進(jìn)萃取，將萃取液在50°C條件下減壓濃縮，得到干粉A;
[0011] 2)將干粉A與聚酰胺按質(zhì)量比1:4~5的比例混合，利用體積濃度為40 %的甲醇水 溶液洗脫得到組分B;
[0012] 3)將組分B用120mL甲醇溶解，硅膠拌樣，待溶劑完全揮發(fā)，進(jìn)行硅膠柱色譜，用石 油醚/異丙醇體積比為10:1的混合液洗脫，得到組分C;
[0013] 4)將組分C重復(fù)進(jìn)行硅膠柱色譜，用石油醚和異丙醇體積比為9:1的混合液洗脫， 得到組分D;
[0014] 5)將組分D繼續(xù)經(jīng)過凝膠柱色譜，甲醇作為洗脫液，得到式I單體化合物。
[0015]本發(fā)明制備方法步驟(1)中根皮與95%乙醇的質(zhì)量體積比為1:10。
[0016] 本發(fā)明制備方法步驟(2)中干粉A與聚酰胺優(yōu)選按質(zhì)量比1:4.2的比例混合。
[0017] 本發(fā)明還提供了式I化合物作為抗真菌藥物的應(yīng)用。
[0018] 所述的藥物可以按需要加工成任何醫(yī)藥上可接受的劑型，其中較優(yōu)選的劑型為片 劑、膠囊劑、顆粒劑、糖漿劑、凍干粉針劑或注射液。其配制可由通常的本領(lǐng)域技術(shù)人員所公 知的加工方法制備，即將活性物質(zhì)式I化合物與液體溶劑或固體載體混合后，再加入填充 劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、溶劑、表明活性劑、香味劑、防腐劑、潤滑劑、甜味 劑或色素中的一種或幾種。
[0019] 本發(fā)明所述的藥物可以由使用者在使用前經(jīng)稀釋或直接使用。
[0020] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明從西藏大花黃牡丹根皮中提取分離出一種新化合 物，該提取與分離方法簡便、快速，效率高。同時(shí)該化合物具有抗真菌的活性作用，相比西藏 大花黃牡丹根皮藥理作用更確切，解決了西藏大花黃牡丹根皮中化學(xué)成分復(fù)雜，質(zhì)量難以 控制的問題。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，以下所述，僅是對本發(fā)明的較佳實(shí)施 例而已，并非對本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明 的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以下實(shí)施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0022] 實(shí)施例1
[0023]取干燥的西藏大花黃牡丹根皮，粉碎后準(zhǔn)確稱取10kg，按照根皮與溶劑1:10(W/V) 的比例加入95%乙醇，室溫浸提24h，抽濾，重復(fù)三次，50°C減壓濃縮，隨后將總的提取物用 乙酸乙酯萃取，萃取液在50°C條件下減壓濃縮，得到356g的組分干粉A。
[0024]將干粉A稱取356g與1.5kg聚酰胺拌樣，進(jìn)行中壓液相色譜，反相柱填充材料為MCI-Gel，利用體積濃度為40%的甲醇水溶液洗脫洗脫得到57g組分B，用120mL甲醇溶解，硅 膠拌樣，待溶劑完全揮發(fā)，進(jìn)行硅膠柱色譜，用石油醚/異丙醇體積比為10:1的混合液洗脫， 得到組分C，將組分C重復(fù)進(jìn)行硅膠柱色譜，用石油醚和異丙醇體積比為9:1的混合液洗脫， 得到組分D，將組分D繼續(xù)經(jīng)過凝膠柱色譜，甲醇作為洗脫液，得到式I單體化合物7mg。
[0025]實(shí)施例2單體化合物結(jié)構(gòu)鑒定
[0026] 1)波譜試驗(yàn)
[0027] 分離得到的化合物，經(jīng)過分析液相色譜進(jìn)行純度檢測，若無紫外吸收，分析液相色 譜無法檢測，進(jìn)行TLC檢測。并根據(jù)單體化合物極性選取相應(yīng)的氘代溶劑溶解，利用NMR檢 測，四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)。新化合物需KBr壓片進(jìn)行IR鑒定化合物結(jié)構(gòu)中所含的官能 團(tuán)種類；同時(shí)，取適量化合物，用相應(yīng)極性溶劑溶解進(jìn)行UV檢測，確定化合物結(jié)構(gòu)中具有紫 外吸收的官能團(tuán)種類。根據(jù)ESI-MS推測化合物分子量，再進(jìn)一步根據(jù)HR-ESI-MS確定化合物 的分子量、分子式和不飽和度。
[0028] 2)糖構(gòu)型的確定
[0029]參照酸水解薄層層析法，稱取適量的化合物，甲醇溶解，配制成lmg/mL的溶液，用 毛細(xì)管在硅膠板上點(diǎn)樣，并投放于裝有濃硫酸的密閉展開槽中，60°C水浴30min，結(jié)束后取 出用吹風(fēng)機(jī)吹至溶劑揮盡，在硅膠板空白處點(diǎn)上D-葡萄糖、D-芹糖、D-木糖標(biāo)準(zhǔn)品，將氯仿/ 甲醇（7: 3，v/v)的混合溶液用水飽和，取9mL用水飽和后的氯仿/甲醇溶液，再加入lmL的冰 醋酸混合均勻后作為展開劑展開，用鄰苯二甲酸苯胺的正丁醇溶液噴霧，于l〇5°C加熱 lOmin顯色。
[0030] 苯胺-鄰苯二甲酸顯色劑的配置：準(zhǔn)確稱取苯胺〇.93g和鄰苯二甲酸1.66g溶于 1 OOmL水飽和的正丁醇。
[0031] 3)結(jié)果與分析
[0032] 無色油狀。通過ESI-MS譜（[M+Na]+m/z249)和HR-ESI-MS譜（[M+Na]+m/z 249 · 1101，calcdforC12H18〇4Na，249 · 1097)，確定該化合物的分子SC12H18〇4,其不飽和度 為4<JR譜(KBr壓片）給出了羥基(3435CHT1)和羰基（1720(^1)信號。紫外光譜顯示該化合物 紫外最大吸收在203nm〇
[0033] 1H-匪R譜中，給出了 3 個(gè)甲基氫信號δΗ1.23(s，3H，H-8)、SH1.15(d，J=