酞嗪并[1,2,b]喹唑啉-8-酮化合物及其制備方法和在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及有機化學，具體是酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮化合物及其制備方法和 在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是威脅人類健康和生命安全的主要疾病.抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)一直是化 學家和藥物學家關(guān)注的熱點.尋找更高效、更高選擇性而毒副作用小的抗腫瘤藥物是抗腫 瘤藥物研究開發(fā)的主要方向.
[0003] 我們研究發(fā)現(xiàn)5-位接有ω-二甲胺取代的胺乙基和胺丙基及ω-六氫吡啶基胺丙 基的酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮化合物是無論是在體內(nèi)還是體外均具有良好化合物的新 骨架，這些化合物的合成及應(yīng)用目前沒有文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種5-位接有ω-二甲胺取代的胺乙基和胺丙基及ω-六氫 吡啶基胺丙基的酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮化合物。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的是提供上述5-位接有ω-二甲胺取代的胺乙基和胺丙基及 ω-六氫吡啶基胺丙基的酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮化合物的合成方法。
[0006] 本發(fā)明的另一個目的是提供上述5-位接有ω-二甲胺取代的胺乙基和胺丙基及 ω-六氫吡啶基胺丙基的酞嗪并[l，2，b]喹唑啉-8-酮化合物在制備抗腫瘤藥物上的應(yīng)用。
[0007]實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：
[0008] -種酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮化合物的結(jié)構(gòu)通式
[0010]式中：R1為:H，鹵素，烷基、烷氧基等；
[0011]η為:2,3;n'=0，1;X為:NH，NMe
[0012] 酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮化合物的合成方法，包括如下步驟：
[0013]合成路線的反應(yīng)式：
[00?5]合成具體步驟：
[0016] 1.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入化合物鄰氨基苯乙酸和THF，將燒瓶置于 冰水浴中，在攪拌下分批加入三光氣，加完后將燒瓶移至室溫中攪拌l〇h.反應(yīng)結(jié)束后，過濾 除去多余的溶劑，濾餅用石油醚洗，得到白色的肼解產(chǎn)物。
[0017] 2.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入上步反應(yīng)得到的肼解產(chǎn)物和水合肼，攪 拌均勻后在氮氣保護下于l〇5°C的油浴中加熱回流反應(yīng)3.5h(TLC監(jiān)控反應(yīng)進程，展開劑： Vpe:VEtciA。= 2:1).反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，析出固體，過濾，固體用95%乙醇重結(jié)晶，得到白色固 體2.
[0018] 3.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入化合物2,鄰苯二甲酸酐和乙二醇，攪拌 均勻后在氮氣保護下于150°C的油浴中加熱回流反應(yīng)2h.反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，過濾，濾餅用 EtOAc洗，得到3的淡黃色固體.
[0019] 4.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中依次加入化合物3和三氯氧磷，攪拌均勻后在 氮氣保護下于90°C的油浴中加熱回流6h(TLC監(jiān)控反應(yīng)進程，展開劑:VPE:VEtQAc； = 3:1).反應(yīng) 完成后，減壓除去大部分三氯氧磷，然后加入冰水，過濾，濾餅用水充分洗滌，再用甲醇洗， 得到4的淡黃色固體.
[0020]5.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入4，甲苯和脂肪胺，將反應(yīng)容器置于90°C 的油浴加熱反應(yīng)12h(TLC監(jiān)控反應(yīng)進程，展開劑:VEtQA。:Vdom:νΜ^Η= 9: 3:1).反應(yīng)結(jié)束后，減 壓除去溶劑，硅膠柱層析提純(洗脫劑:VEA:VD?:VMe3QH = 9:3:l)，分別得化合物（1)、（11)、 (III)的淡黃色目標化合物5.
[0021 ]化合物的抗體外抗腫瘤活性研究方法及相關(guān)數(shù)據(jù)：
[0022] 采用MTT[3-(4,5)-雙甲基-2-噻唑-(2,5)-苯基溴化四氮唑藍]法來測定酞嗪并
[l，2，b]喹唑酮衍生物對人胃癌細胞(MGC-803)、人肺癌細胞（NCI-H460)、人肝癌細胞 (!1印6-2)、子宮頸癌細胞(他1&)、膀胱癌細胞(1'-24)的半數(shù)抑制濃度(1(：50)
[0023] (1)培養(yǎng)液(每升）的配制：①懸浮細胞:RPMI-1640培養(yǎng)粉一袋（10·4g)，新生牛血 清100ml，青霉素溶液(20萬U/ml)0.5ml，鏈霉素溶液(20萬U/ml)0.5ml，加三蒸水溶解后，用 5.6%的NaHC03溶液調(diào)PH值至7.2-7.4，最后定容至1000ml.過濾滅菌.②貼壁細胞：同上，再 WANaHC032.00g，HEPES2.38g·
[0024] (2)D-Hanks緩沖液（每升）的配制：NaCl8.00g，KCl0.40g，Na2HP〇4 · 12H2O0 · 06g，KH2PO40 · 06g，NaHC〇3〇 · 35g·高壓滅菌.
[0025] (3)胰蛋白酶液的配制：利用D-Hanks緩沖液配成濃度為0.5%胰蛋白酶液.過濾除 菌·
[0026] (4)實驗藥液的配制:將測試樣品用少量的三蒸水溶解配成儲備液，一般按實驗最 高濃度的10倍配制儲備液.根據(jù)化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量DMS0助 溶，再加三蒸水溶解.DMS0在培養(yǎng)液中的濃度不宜過大，加藥后的每孔細胞懸液中DMS0的終 濃度一般不超過〇. 05%-0.1 % .儲備液保存于-20°C冰箱中備用.
[0027] (5)人腫瘤細胞的培養(yǎng):常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)（含10%小牛血清、100U/ ml鏈霉素），置于37°C、5 %C〇2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-4天傳代一次.傳代時將原瓶中培養(yǎng)液 轉(zhuǎn)移至離心管中，l〇〇〇rpm離心5min，棄去原培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液，吹打均勻，移取 適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10).
[0028] (6)細胞孵育:取對數(shù)生長期的腫瘤細胞，調(diào)細胞懸液濃度為1-1.5X105個πιΓ1.在 96孔培養(yǎng)板中每孔加細胞懸液100μΙ，置37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h.培養(yǎng)24h后，分別按 設(shè)計加入藥液.
[0029] (7)加藥:將測試藥液按照最終濃度的濃度梯度分別加入到各個孔中，每個濃度設(shè) 6個平行孔.實驗分為藥物試驗組(分別加入不同濃度的測試藥）、對照組（只加培養(yǎng)液和細 胞，不加測試藥)和空白組（只加培養(yǎng)液，不加細胞和測試藥）.將加藥后的96孔板置于37°C， 5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h.陽性對照藥物的活性按照測試樣品的方法測定.
[0030] (8)存活細胞的測定：在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，每孔加ΜΤΤ40μ1(用D-Hanks緩 沖液配成4mg/ml).在37°C放置4h后，移去上清液.每孔加150μ1DMS0，振蕩5min，使 formazan結(jié)晶溶解.最后，利用自動酶標儀在490nm波長處檢測各孔的光密度(0D值）.
[0031]抑制率的計算:細胞生長的抑制率按照下列公式計算：
[0032] 生長抑制率=(1 一存活率）X100% = [ 1 -（0D幾一ODs白)/(0???-ODsg) ]X100% (〇D_表示測試藥物組的平均光密度，0ft?表示對照組的平均光密度，0??表示對照組的平 均光密度）.
[0033]半數(shù)抑制濃度（IC5Q)定義為當50%的腫瘤細胞存活時的藥物濃度.根據(jù)測定的光 密度(0D值），制作細胞生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其對應(yīng)的藥物濃度.結(jié)果 如表一所示.結(jié)果表明部分化合物在體外對這五種腫瘤細胞株具有較強的抑制作用.
[0034]本發(fā)明涉及的部分酞嗪并[l，2，b]喹唑啉-8-酮衍生物的IC5Q值(ymol/L)
[0036] 喜樹堿(CPT)為陽性對照
[0037] 因此本發(fā)明的取代酞嗪并[l，2，b]喹唑酮衍生物極具開發(fā)前景，可用于制備抗腫 瘤藥物。
[0038]本發(fā)明的優(yōu)點是:本發(fā)明的大部分酞嗪并[1，2，b]喹唑啉-8-酮衍生物對人胃癌細 胞(MGC-803)、人肺癌細胞(NCI-H460)、人肝癌細胞(HepG-2)、子宮頸癌細胞(Hela)、人膀胱 癌細胞(T-24)等常見癌細胞有很強的抑制作用，可誘導癌細胞的凋亡，因此這些酞嗪并[1， 2，b]喹唑酮及其衍生物在制備抗腫瘤藥物中具有潛在的應(yīng)用。
【具體實施方式】[0039]實施例1
[0040]5-(2-(dimethylamino)ethylamino)-8H_phthalazino[1，2-b]quinazolin_8-〇ne
[0042]合成方法包括如下步驟：
[0043] 1.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入化合物鄰氨基苯甲酸和THF，將燒瓶置于 冰水浴中，在攪拌下分批加入三光氣，加完后將燒瓶移至室溫中攪拌l〇h.反應(yīng)結(jié)束后，過濾 除去多余的溶劑，濾餅用石油醚洗，得到白色的肼解產(chǎn)物。
[0044] 2.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入上步反應(yīng)得到的肼解產(chǎn)物和水合肼，攪 拌均勻后在氮氣保護下于l〇5°C的油浴中加熱回流反應(yīng)3.5h(TLC監(jiān)控反應(yīng)進程，展開劑： Vpe:VEtciA。= 2:1).反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，析出固體，過濾，固體用95%乙醇重結(jié)晶，得到白色固 體2.
[0045] 3.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入化合物2,鄰苯二甲酸酐和乙二醇，攪拌 均勻后在氮氣保護下于150°C的油浴中加熱回流反應(yīng)2h.反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，過濾，濾餅用 EtOAc洗，得到3的淡黃色固體.
[0046] 4.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中依次加入化合物3和三氯氧磷，攪拌均勻后在 氮氣保護下于90°C的油浴中加熱回流6h(TLC監(jiān)控反應(yīng)進程，展開劑:VPE:VEtQAc； = 3:1).反應(yīng) 完成后，減壓除去大部分三氯氧磷，然后加入冰水，過濾，濾餅用水充分洗滌，再用甲醇洗， 得到4的淡黃色固體.
[0047] 5.在電磁攪拌下，依次往反應(yīng)容器中加入4，甲苯和脂肪胺，將反應(yīng)容器置于90°C 的油浴加熱反應(yīng)12h(TLC監(jiān)控反應(yīng)進程，展開劑:VEtQA。:Vdom:νΜ^Η= 9: 3:1).反應(yīng)結(jié)束后，減 壓除去溶劑，硅膠柱層析提純(洗脫劑:Vea:Vdqi:Vioh= 9:3:1)，得到目標化合物5.
[0048]5-(2-(dimethylamino)ethylamino)-8H_phthalazino[1，2-b]quinazolin_8-〇ne 的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)為:m.p.219~22115?NMR(500MHz，CD30D)S:8.74(dd，J= 6.2,3.0Hz，lH， ArH)，8.23(dd，J= 8.1，0.9Hz，lH，ArH)，7.94(dd，J= 6.1，3.0Hz，lH，ArH)，7.77~7.69(m， 3H，ArH)，7.67(d，J= 7.7Hz，lH，ArH) ,7.45~7.35(m，lH，ArH)，3.75(t，J= 6.4Hz，2H，CH2)， 2.79(t，J= 6.4Hz，2H，CH2)，2.41(s，6H，CH3);13C匪R(125MHz，CD30D)S: 159.0,149.2, 146.2,142.8,133.6,132.5,131.8,128.6,126.9,126.3,126.2,125.5,122.1,121.4， 119.4,57.5,44.1,38.6.HRMS(ESI+):m/zcalcdfor333.15896,found334.166604([M+ H] + ).
[0049] 實施例2
[0050]5-(3-(dimethy1amino)propylamino)-8H-phthalazino[1,2-b