體液增菌培養(yǎng)瓶及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及臨床微生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)，是一種體液增菌培養(yǎng)瓶及其制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 體液培養(yǎng)是用于檢測(cè)人體樣本中有無(wú)微生物存在的一種微生物學(xué)檢測(cè)方法，包括 血培養(yǎng)、疲培養(yǎng)、尿培養(yǎng)W及其他體液(胸水、腹水、腦脊液等)培養(yǎng)。對(duì)于快速檢測(cè)臨床上嚴(yán) 重危及患者生命的敗血癥、菌血癥，患者體液中是否有微生物生長(zhǎng)W明確診斷有十分重要 的作用，是臨床有效治療的關(guān)鍵。所W體液或類(lèi)似物中致病微生物的檢測(cè)應(yīng)當(dāng)在盡可能短 的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。近年來(lái)，隨著科技進(jìn)步，微生物學(xué)、計(jì)算機(jī)學(xué)和工程學(xué)的結(jié)合，已經(jīng)創(chuàng)造出許 多自動(dòng)化的培養(yǎng)系統(tǒng)。
[0003] 自動(dòng)化的體液微生物培養(yǎng)一般包括兩部分，自動(dòng)化檢測(cè)設(shè)備和體液增菌培養(yǎng)瓶。 自動(dòng)化檢測(cè)設(shè)備提供特定培養(yǎng)環(huán)境的解育箱和檢測(cè)系統(tǒng)，體液增菌培養(yǎng)基提供微生物的生 長(zhǎng)環(huán)境和供檢測(cè)的傳感器。將體液樣本接種到體液增菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在自動(dòng)化體液培養(yǎng)儀中 進(jìn)行微生物培養(yǎng)，檢測(cè)系統(tǒng)通過(guò)體液增菌培養(yǎng)瓶中傳感器產(chǎn)生的變化，自動(dòng)檢測(cè)，給出培養(yǎng) 結(jié)果，提供給臨床診斷的依據(jù)。
[0004] 現(xiàn)有的培養(yǎng)瓶多為血液培養(yǎng)瓶，專(zhuān)利號(hào)2004200480078中描述一種血液培養(yǎng)瓶，該 瓶不具有負(fù)壓，不易于臨床樣本的注入，使用不慎時(shí)會(huì)造成污染，并且使用玻璃瓶體，具有 安全風(fēng)險(xiǎn)，不慎跌落時(shí)會(huì)導(dǎo)致破碎，使使用者暴露在碎玻璃，并有感染的可能。另一種使用 塑料材質(zhì)，例如聚碳酸醋，運(yùn)種材料的瓶體可W解決安全風(fēng)險(xiǎn)，但是其具有透氣性，會(huì)導(dǎo)致 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的負(fù)壓變化，在有效使用期間不能保證順利注入樣本。另一方面如果外界氣體進(jìn) 入到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)內(nèi)置氣體成分改變，而影響微生物的生長(zhǎng)，例如厭氧培養(yǎng)瓶 內(nèi)進(jìn)入空氣之后，會(huì)導(dǎo)致厭氧菌無(wú)法生長(zhǎng)，而造成臨床誤判。
[0005] 培養(yǎng)瓶底部的傳感器由高分子聚合物和指示劑組成，現(xiàn)有技術(shù)中傳感器的透過(guò)性 由分子大小決定，如專(zhuān)利號(hào)2012105834227中描述的，高分子半透膜能阻擋分子量300W上 的物質(zhì)，實(shí)際液體培養(yǎng)基中存在小分子，水、氨離子等，運(yùn)些小分子如果透過(guò)半透膜都會(huì)對(duì) 傳感器產(chǎn)生影響，引起顏色變化，而本質(zhì)不是微生物生長(zhǎng)產(chǎn)生的變化。并且依據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中 描述的傳感器具有透光性，而自動(dòng)化檢測(cè)設(shè)備使用的檢測(cè)原理為光電檢測(cè)原理，采集光信 號(hào)，然后轉(zhuǎn)化為電信號(hào)傳輸?shù)娇刂葡到y(tǒng)中，此時(shí)如果傳感器具有透光性，將影響光信號(hào)的采 集。
[0006] 另外，在現(xiàn)有技術(shù)中，傳感器的制備和固化所耗費(fèi)的時(shí)間都較長(zhǎng)，一般在24小時(shí)- 48小時(shí)，嚴(yán)重影響了生產(chǎn)效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種雙層的塑料材質(zhì)的體液增菌培養(yǎng)瓶及其 制備方法，不易破碎，不透氣性，透明，熱穩(wěn)定性好，制造工藝簡(jiǎn)單，減少生產(chǎn)過(guò)程步驟，降低 生產(chǎn)成本。
[0008] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種體液增菌培養(yǎng)瓶，包括瓶 體、瓶塞、瓶蓋、傳感器、液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶瓶體為圓柱形，傳感器貼于瓶底內(nèi)部底部，瓶塞 和瓶蓋起到密封和機(jī)械保護(hù)作用，體液增菌培養(yǎng)瓶的密封空間為負(fù)壓的無(wú)菌環(huán)境，體液增 菌培養(yǎng)瓶的瓶體為雙層塑料瓶體，一層為具有強(qiáng)度支撐的塑料材料，另一層為具有氣體屏 障作用的塑料材料。
[0009] 所述具有強(qiáng)度支撐的塑料材料為尼龍、聚碳酸醋PC或聚丙締 PP，所述雙層瓶體的 外層或內(nèi)層為具有氣體屏障作用的塑料材料，所述具有氣體屏障作用的塑料材料為聚糞二 甲酸乙二醇醋、聚對(duì)苯二甲酸乙二醋、聚醋或聚氯乙締。
[0010] 所述體液增菌培養(yǎng)瓶的傳感器為選擇性半透膜，其能透過(guò)非極性分子而阻擋極性 分子，保證二氧化碳能夠透過(guò)半透膜而阻擋培養(yǎng)基中的其他分子和/或離子。
[0011] 所述體液增菌培養(yǎng)瓶的傳感器為高分子娃橡膠材料聚甲基硅氧烷及其固化劑。
[0012] 所述體液增菌培養(yǎng)瓶的傳感器含有遮光劑、酸堿指示劑和巧光指示劑，酸堿指示 劑能根據(jù)培養(yǎng)基中微生物生長(zhǎng)產(chǎn)生的二氧化碳而發(fā)生顏色變化，巧光指示劑指示劑能根據(jù) 培養(yǎng)基中微生物生長(zhǎng)產(chǎn)生的二氧化碳而發(fā)生巧光反應(yīng)。
[0013] 所述的酸堿指示劑為漠百里酪藍(lán)、漠甲酪紫、漠甲酪綠或二甲苯酪藍(lán);所述巧光指 示劑為巧光素、副玫瑰紅、橫基羅丹明B、羅丹明B、酸性品紅、茜素紅或酸性紅;所述遮光劑 為鋒白、鐵白、鋒領(lǐng)白或鐵領(lǐng)白。
[0014] 所述傳感器材料配方為： 高分子廷橡膠材料 7 0%-9扭％ 高分子廷橡膠材料的固化劑 7%-9% 酸堿指示劑 0. 1%-10%
[0015] 遮光劑 ：0. 1嘴-9% 菱光指示劑 0. 1%-10% 其他
[0016] W上百分比為體積百分比，其中酸堿指示劑為質(zhì)量百分比濃度0.1%-10%的水溶 液，遮光劑為質(zhì)量百分比濃度10%-80%的懸濁水溶液，巧光指示劑為質(zhì)量百分比濃度0.1- 10 %的水溶液，其他成分為水和/或乙醇。
[0017] 優(yōu)選，所述傳感器材料配方為： Sy 1 gard 184磕橡膠基本組分 70%-9Ο騎 Sylgai-d 184廷橡膠的固化劑 7%-夢(mèng)％ 漠育里驗(yàn)藍(lán) 0.
[001 引 辭白 0. ?%-9% 羅丹巧Β 0. 其他 V!廣m
[0019] W上百分比為體積百分比，其中漠百里酪藍(lán)為質(zhì)量百分比濃度〇.1%-1〇%的漠百 里酪藍(lán)水溶液，鋒白為質(zhì)量百分比濃度10%-80%的鋒白懸濁水溶液，羅丹明B為質(zhì)量百分 比濃度0.1 -10 %的羅丹明B水溶液，其他成分為水和/或乙醇。
[0020] 所述液體培養(yǎng)基包括膜酶大豆肉湯、腦屯、浸液、酵母提取物、糖類(lèi)，并含有對(duì)微生 物起修復(fù)作用的維生素站矣和/或維生素 K族和/或維生素 E族。
[0021] 所述液體培養(yǎng)基還包括促進(jìn)厭氧微生物生長(zhǎng)的構(gòu)祿酸鋼、硫乙醇酸鋼、巧樣酸鋼、 巧樣酸鐵、亞硫酸鋼α-半脫氨酸鹽酸鹽中的一種或多種;包括減少樣本中其他物質(zhì)干擾， 促進(jìn)微生物生長(zhǎng)的乙二胺四乙酸鹽、對(duì)氨基苯甲酸、聚茵香橫酸鋼、葡萄糖氧化酶、氯化血 紅素中的一種或多種。
[0022] 所述液體培養(yǎng)基中添加有質(zhì)量百分比2%-20%的吸附樹(shù)脂，吸附樹(shù)脂為一種或多 種非離子吸附樹(shù)脂和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，W減弱樣本中抗生素對(duì)樣本培養(yǎng)的干擾。
[0023] 所述的體液增菌培養(yǎng)瓶的內(nèi)部密閉空間含有內(nèi)置氣體，所述的內(nèi)置氣體包括氧 氣、氮?dú)?、二氧化碳、氨氣、空氣中的一種或多種氣體。
[0024] -種體液增菌培養(yǎng)瓶的制備方法，包括W下步驟：
[0025] (1)雙層培養(yǎng)瓶的制備：先形成雙層型巧，再進(jìn)行吹塑，吹塑的溫度在25攝氏度到 150攝氏度；
[0026] (2)傳感器材料制備:將巧光指示劑和酸堿指示劑用純化水溶解，遮光劑用純化水 配制成懸濁水溶液，按照比例混合后，加入含有銷(xiāo)系催化劑的娃橡膠材料、固化劑，在真空 條件下攬拌脫泡，攬拌均勻的同時(shí)完成脫泡工作；
[0027] (3)傳感器添加及固化:使用均勻分裝設(shè)備將傳感器材料引入到瓶體內(nèi)，在底部鋪 平，形成2-lOmm厚度的傳感器;將引入傳感器材料的瓶體在溫度45-85°C環(huán)境下固化，在1-2 小時(shí)內(nèi)完成固化；
[002引（4)培養(yǎng)基制備：將液體培養(yǎng)基組分按比例添加到純化水中，溶解，攬拌均勻，除 菌；
[0029] (5)灌裝:將滅菌的液體培養(yǎng)基和滅菌的吸附樹(shù)脂通過(guò)灌裝-