一種用于肺腺癌診療的分子標記物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，涉及一種用于肺腺癌診療的分子標記物，所述分子標 記物為UPK3B。
【背景技術】
[0002] 癌癥是影響社會經(jīng)濟發(fā)展和人民生活水平的重大疾病之一，隨著全球工業(yè)化和環(huán) 境污染的加重，肺癌已躍居全世界癌癥發(fā)病率和死亡率的首位，每年全球肺癌死亡人數(shù)超 過100萬。肺癌氛圍非小細胞肺癌和小細胞肺癌。非小細胞肺癌占85 %，小細胞肺癌占15 %。 非小細胞肺癌包括腺癌、鱗癌、大細胞癌及腺鱗癌等，其中腺癌的比例最高，約占全部肺癌 的50%。肺腺癌大多起源于較小的支氣管粘膜分泌液的上皮細胞，大多數(shù)腺癌位于肺組織 的周圍，呈球形腫塊，靠近胸膜部位。在周圍型肺癌中，肺腺癌的發(fā)病率居肺癌各組織學類 型之首，且其發(fā)病率呈明顯升高趨勢。肺腺癌患者中女性病人較多，發(fā)病年齡也較小。
[0003] 肺腺癌早期臨床癥狀隱匿，不易發(fā)現(xiàn)，大多患者在就診時已到中晚期，失去了最佳 手術時機，即使手術，多數(shù)患者仍會死于肺腺癌復發(fā)的侵襲或轉移。有報道表明，早期肺腺 癌患者術后5年生存率約為90%，1-11期患者5年生存率低于70%，而晚期患者僅為1%。因 此，早發(fā)現(xiàn)、早治療是降低肺腺癌患者高死亡率、改善預后的關鍵。臨床上肺腺癌早期診斷 主要依賴于X線檢查、支氣管鏡檢查、放射性核素檢查、細胞學檢查、剖胸探查、ECT檢查、縱 隔鏡檢查等。利用現(xiàn)有的檢查手段來區(qū)別肺腺癌與肺其他類型的腫瘤以及胸膜間皮瘤，具 有較大的困難。
[0004] 近年來，隨著分子生物學的不斷發(fā)展，一些新的生物標志物已經(jīng)出現(xiàn)，不僅對肺腺 癌的病理診斷提供了很大的幫助，并為其預后判斷、治療方案的選擇提供了更全面的依據(jù)， 在一定程度上發(fā)揮了獨特的作用。進一步尋找肺腺癌早期診斷和復發(fā)轉移的分子標志物， 是提高腫瘤患者治愈率與生存率的有效手段，并對肺腺癌的診斷和治療具有重要的理論意 義和臨床應用價值。

【發(fā)明內容】

[0005] 為了彌補現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于肺腺癌診療的分子 標記物-UPK3B基因。相比傳統(tǒng)的肺腺癌的診斷和治療方法，使用基因標志物來診斷和治療 肺腺癌具有敏感性、特異性和無創(chuàng)性。
[0006] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
[0007] 本發(fā)明提供了UPK3B基因及其表達產(chǎn)物在制備診斷肺腺癌的產(chǎn)品中的應用。
[0008] 進一步，所述產(chǎn)品包括:通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或芯片檢 測UPK3B基因及其表達產(chǎn)物的表達水平以診斷肺腺癌的產(chǎn)品。
[0009] 進一步，所述用RT-PCR診斷肺腺癌的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增UPK3B基因的引 物;所述用實時定量PCR診斷肺腺癌的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增UPK3B基因的引物;所述 用免疫檢測診斷肺腺癌的產(chǎn)品包括:與UPK3B蛋白特異性結合的抗體;所述用原位雜交診斷 肺腺癌的產(chǎn)品包括:與UPK3B基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片診斷肺腺癌的產(chǎn)品包 括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括與UPK3B蛋白特異性結合的抗體，基因芯片包 括與UPK3B基因的核酸序列雜交的探針。
[0010]進一步，所述基因芯片可用于檢測包括UPK3B基因在內的多個基因（例如，與肺腺 癌相關的多個基因）的表達水平。所述蛋白質芯片可用于檢測包括UPK3B蛋白在內的多個蛋 白質（例如與肺腺癌相關的多個蛋白質）的表達水平。通過同時檢測多個肺腺癌的標志物， 可大大提高肺腺癌診斷的準確率。
[0011] 本發(fā)明提供了一種診斷肺腺癌的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品能夠通過檢測肺組織中UPK3B基 因的表達水平來診斷肺腺癌。
[0012] 進一步，所述產(chǎn)品包括芯片、或試劑盒；其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質芯 片;所述試劑盒包括基因檢測試劑盒、蛋白免疫檢測試劑盒。
[0013]進一步，所述基因檢測試劑盒可用于檢測包括UPK3B基因在內的多個基因（例如， 與肺腺癌相關的多個基因）的表達水平。所述蛋白免疫檢測試劑盒可用于檢測包括UPK3B蛋 白在內的多個蛋白質(例如與肺腺癌相關的多個蛋白質）的表達水平。將肺腺癌的多個標志 物同時進行檢測，可大大提高肺腺癌診斷的準確率。
[0014] 本發(fā)明提供了 UPK3B基因及其表達產(chǎn)物在制備治療肺腺癌的藥物組合物中的應 用。
[0015] 進一步，所述藥物組合物包括增加 UPK3B基因表達、增強UPK3B表達功能、和/或增 強UPK3B表達產(chǎn)物活性的試劑。
[0016] 進一步，所述試劑包括:含有能編碼功能性UPK3B蛋白的核酸的試劑、UPK3B蛋白的 激活劑、含有UPK3B蛋白質的試劑。
[0017] 其中，所述含有能編碼功能性UPK3B蛋白的核酸的試劑可以是在有利條件下翻譯 成活性形式的UPK3B蛋白的單鏈核酸(如mRNA)或雙鏈核酸(如DNA)，所述的核酸可以連接在 表達載體上或重組到宿主細胞里，只要能編碼成活性UPK3B蛋白，任何一種UPK3B基因的攜 帶方式均可。所述的UPK3B蛋白激活劑是指刺激UPK3B蛋白活性、增加 UPK3B蛋白活性、促進 UPK3B蛋白活性、增強UPK3B蛋白激活、使UPK3B蛋白活性敏感化或上調UPK3B蛋白活性的試 劑，如去甲基化試劑、UPK3B啟動子和/或增強子特異性的轉錄激活劑、UPK3B蛋白的激動劑 (如激活抗體)等。
[0018] 進一步，上述藥物組合物還包括藥學上可接受的載體，所述載體可以是一種也可 以是多種，所述載體包括但不限于稀釋劑如乳糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合劑 如淀粉、預膠化淀粉、糊精、麥芽糖糊精、鹿糖、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素、 乙基纖維素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸鹽、黃原膠、羥丙基纖 維素和羥丙基甲基纖維素等;表面活性劑如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸 鈉、硬脂酸單甘油酯、十六烷醇等;致濕劑如甘油、淀粉等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫土、 硅膠、高嶺土和皂粘土等；潤滑劑如硬脂酸鋅、單硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸 鈣和鎂、聚乙二醇、硼酸粉末、氫化植物油、硬脂富馬酸鈉、聚氧乙烯單硬脂酸酯、單月桂蔗 糖酸酯、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂、十二烷基硫酸鎂等;填充劑如甘露醇(粒狀或粉狀）、 木糖醇、山梨醇、麥芽糖、赤蘚糖、微晶纖維素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀 粉、海藻酸鈉、海帶多糖粉末、瓊脂粉末、碳酸鈣和碳酸氫鈉等；崩解劑如交聯(lián)乙烯吡咯烷 酮、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基甲基、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、大豆多糖等。
[0019] 所述的藥物組合物可以使用不同的添加劑進行制備，例如穩(wěn)定劑、殺菌劑、緩沖 劑、等滲劑、螯合劑、pH控制劑及表面活性劑。
[0020] 穩(wěn)定劑包括人類血清蛋白、L-氨基酸、糖及纖維素衍生物。L-氨基酸還可以包括甘 氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一個。糖類包括單糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖 等;糖醇，例如甘露醇、纖維醇、木糖醇等;二糖，例如蔗糖、麥芽糖、乳糖等;多聚糖，例如葡 聚糖、羥丙基淀粉、硫化軟骨素、透明質酸等及它們的衍生物。纖維素衍生物包括甲基纖維 素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素及羥甲基纖維素鈉。
[0021] 表面活性劑包括離子或非離子表面活性劑，例如聚氧化乙烯烷基酯、山梨聚糖單 酰基酯、脂肪酸甘油酯。
[0022] 添加劑緩沖劑可以包括硼酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、谷氨酸及相應的鹽(它們的堿金 屬或堿性稀土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及鎂鹽）。等滲劑包括氯化鉀、氯化鈉、糖及甘 油。螯合劑包括乙二胺四乙酸鈉及檸檬酸。
[0023]本發(fā)明還提供了一種治療肺腺癌的藥物組合物，所述藥物組合物包括增加 UPK3B 基因表達、增強UPK3B表達功能、和/或增強UPK3B表達產(chǎn)物活性的試劑。
[0024]本發(fā)明的藥物可以用于補充內源性的UPK3B蛋白的缺失或不足，通過提高UPK3B蛋 白的表達，從而治療因 UPK3B蛋白減少導致的肺腺癌。
[0025]本發(fā)明所述攜帶基因的載體是本領域已知的各種載體，如市售的載體、包括質粒、 粘粒、噬菌體、病毒等。
[0026]進一步，本發(fā)明中UPK3B蛋白或編碼UPK3B蛋白的核酸可以通過脂質體給予，所述 脂質體的作用是將藥物靶向于特定的組織，以及增加藥物的半衰期。脂質體包括乳化劑、起 泡劑、液態(tài)脂質、固態(tài)脂質、不溶性單層、磷脂分散劑、表面活性劑等。所述的脂質體中還可 以包括能與靶向的細胞中的受體分子結合或其他治療性或免疫原性組合物。
[0027] 本發(fā)明的藥物組合物可以被配制成任何的給藥類型，例如，利用注射器或其它裝 置的皮內注射、皮下注射、靜脈內注射、腹膜內注射、胸膜內注射、膀胱內注射、冠狀動脈內 或腫瘤內注射、口服給藥、直腸給藥。
[0028] 本發(fā)明的藥物導入組織或者細胞的方式可以分為體外或者體內的方式。體外方式 包括將含有UPK3B基因的藥物或者含有UPK3B蛋白質的藥物導入細胞中，再將細胞移植或回 輸?shù)襟w內。體內方式包括直接將含有UPK3B基因的藥物或者含有UPK3B蛋白質的藥物注入體 內組織中。
[0029] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療肺腺癌的藥物聯(lián)用，其他治療性化合物可以與主要 的活性成分(例如，UPK3B蛋白或編碼所述蛋白的核酸）同時給藥，甚至在同一組合物中同時 給藥。還可以以單獨的組合物或與主要的活性成分不同的劑量形式單獨給予其它治療性化 合物。主要成分(如UPK3B蛋白或編碼所述蛋白的核酸）的部分劑量可以與其它治療性化合 物同時給藥，而其它劑量可以單獨給藥。
[0030] 可以在治療過程中，根據(jù)癥狀的嚴重程度、復發(fā)的頻率和治療方案的生理應答，調 整本發(fā)明藥物組合物的劑量。
[0031] 在本發(fā)明中，術語"宿主細胞"包括原核細胞和真核細胞。常用的原核宿主細胞的 例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞、昆蟲細胞和哺乳動物 細胞。較佳地，該宿主細胞是真核細胞，如CHO細胞、COS細胞等。
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