本發(fā)明涉及氨基酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種康復(fù)新液及其半成品中總氨基酸含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

康復(fù)新液是一種外科常用藥，其原料為美洲大蠊?？祻?fù)新液在臨床上被廣泛應(yīng)用于燒傷、燙傷、戰(zhàn)傷、創(chuàng)面感染及頑固性潰瘍、褥瘡等，使用簡(jiǎn)便易行，療效較好，該單品種產(chǎn)品市場(chǎng)銷量很好。康復(fù)新液產(chǎn)品富含丙氨酸、亮氨酸和纈氨酸等18種氨基酸，因此總氨基酸含量是產(chǎn)品質(zhì)量的主要評(píng)估指標(biāo)之一?？祻?fù)新液半成品即康復(fù)新液待灌液和成品康復(fù)新液均需對(duì)總氨基酸含量進(jìn)行質(zhì)量控制，由于其中的丙氨酸含量比重最大，故以丙氨酸作為總氨基酸含量的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。

現(xiàn)有的康復(fù)新液中總氨基酸含量的檢測(cè)方法包括以下步驟：對(duì)照品溶液的制備：精密稱取在105℃干燥至恒重的丙氨酸對(duì)照品50mg，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL稀釋搖勻后的溶液，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：精密量取所述對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于10mL具塞試管中，加水至1mL；然后依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)1.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，放冷；再加入80％乙醇3.0mL，搖勻，采用紫外分光光度法試驗(yàn)，在570nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測(cè)品的測(cè)定：精密量取康復(fù)新液待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1mL稀釋搖勻后的溶液，置于10mL具塞試管中，然后依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)1.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，放冷；再加入80％乙醇3.0mL，搖勻，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定紫外吸收度，從所述標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待測(cè)品溶液中氨基酸的含量，計(jì)算，即得。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：康復(fù)新液成品每1mL含總氨基酸以丙氨酸(C₃H₇NO₂)計(jì)，不得少于0.72mg。

現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)曲線法可檢測(cè)出康復(fù)新液或其半成品(康復(fù)新液半成品每1mL含總氨基酸以丙氨酸(C₃H₇NO₂)計(jì)，不得少于0.77mg)中總氨基酸的含量，以判斷是否合格。但是，該檢測(cè)方法操作復(fù)雜，檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)(一般在2h以上)，影響生產(chǎn)周期。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N康復(fù)新液及其半成品中總氨基酸含量的檢測(cè)方法，本申請(qǐng)?zhí)峁┑臋z測(cè)方法能定性檢測(cè)總氨基酸的含量，操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)較短，生產(chǎn)周期較短。

本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

提供濃度為0.0154mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液；

將康復(fù)新液半成品待測(cè)品用水稀釋，稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的待測(cè)品；同時(shí)將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與所述茚三酮溶液同樣進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的對(duì)照品；

目視比較所述預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品的顏色，得到康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量。

優(yōu)選地，所述茚三酮溶液為茚三酮乙二醇甲醚試液。

優(yōu)選地，所述稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液的反應(yīng)在緩沖液和抗壞血酸溶液存在的條件下進(jìn)行；

所述緩沖液不含與茚三酮反應(yīng)的基團(tuán)，且所述緩沖液的pH值為5～7。

優(yōu)選地，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液或枸櫞酸類緩沖液。

優(yōu)選地，所述待測(cè)品稀釋倍數(shù)為50倍，稀釋后的待測(cè)品的用量為1mL；

所述緩沖液的pH值為5，濃度為0.2mol/L，用量為2mL～20mL；

所述抗壞血酸溶液的質(zhì)量濃度為1％，用量為0.1mL；

所述茚三酮溶液的用量為3mL。

優(yōu)選地，所述稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液的反應(yīng)通過(guò)在沸水浴中加熱實(shí)現(xiàn)。

優(yōu)選地，所述加熱的時(shí)間為5min～10min。

優(yōu)選地，所述在沸水浴中加熱后還包括：在冷水浴中放冷，分別得到預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品。

本發(fā)明還提供一種康復(fù)新液中總氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

提供濃度為0.0144mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液；

將康復(fù)新液待測(cè)品用水稀釋，稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的待測(cè)品；同時(shí)將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與所述茚三酮溶液同樣進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的對(duì)照品；

目視比較所述預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品的顏色，得到康復(fù)新液中總氨基酸含量。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)?zhí)峁┑目祻?fù)新液半成品中總氨基酸含量的檢測(cè)方法包括以下步驟：提供濃度為0.0154mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液；將康復(fù)新液半成品待測(cè)品用水稀釋，得到稀釋后的待測(cè)品；所述稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的待測(cè)品；將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，得到預(yù)處理的對(duì)照品；目視比較所述預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品的顏色，得到康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量。本申請(qǐng)利用康復(fù)新液半成品中總氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)，以及該顯色反應(yīng)在屬于可見(jiàn)光區(qū)的570nm波長(zhǎng)有最大吸收，直接通過(guò)肉眼觀察，比較待測(cè)品與對(duì)照品的顏色深淺，從而檢測(cè)得到康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量是否合格，耗時(shí)在15min以內(nèi)。因此，本申請(qǐng)?zhí)峁┑臋z測(cè)方法無(wú)需紫外可見(jiàn)光分光儀器，可排除儀器的限制，操作簡(jiǎn)便，能大大縮短檢測(cè)時(shí)間，同時(shí)其準(zhǔn)確性和重復(fù)性也符合生產(chǎn)對(duì)總氨基酸含量檢測(cè)的要求。尤其地，本申請(qǐng)能實(shí)現(xiàn)快速有效的車間在線監(jiān)控。

同理，本申請(qǐng)?zhí)峁┑目祻?fù)新液中總氨基酸含量的檢測(cè)方法也具有操作簡(jiǎn)便和檢測(cè)時(shí)間較短等特點(diǎn)。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)提供的附圖獲得其他的附圖。

圖1為實(shí)施例1預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖；

圖2為比較例2預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖；

圖3為比較例3預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖；

圖4為實(shí)施例2預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖；

圖5為實(shí)施例3預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本申請(qǐng)實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒旧暾?qǐng)中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本申請(qǐng)保護(hù)的范圍。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

提供濃度為0.0154mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液；

將康復(fù)新液半成品待測(cè)品用水稀釋，稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的待測(cè)品；同時(shí)將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與所述茚三酮溶液同樣進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的對(duì)照品；

目視比較所述預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品的顏色，得到康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N總氨基酸含量(康復(fù)新液及其半成品)的快速檢測(cè)技術(shù)，是一種限度檢驗(yàn)法，效率高，適用于車間在線監(jiān)控。

針對(duì)康復(fù)新液半成品中總氨基酸要求控制在0.77mg/mL以上，本申請(qǐng)實(shí)施例制備成濃度為0.0154mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液。所述丙氨酸對(duì)照品的來(lái)源可為中國(guó)藥品生物制品鑒定所(140680-201002)，含量為100.0％。所述丙氨酸對(duì)照品溶液要求具有穩(wěn)定性，62天內(nèi)含量不發(fā)生顯著變化。

本申請(qǐng)實(shí)施例精密量取康復(fù)新液半成品待測(cè)品，置于量瓶中用水稀釋至刻度，搖勻，得到稀釋后的待測(cè)品。

在本申請(qǐng)中，所述待測(cè)品稀釋倍數(shù)優(yōu)選為50倍，如精密量取待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得到稀釋后的待測(cè)品。本申請(qǐng)實(shí)施例精密量取稀釋后的待測(cè)品1mL，置于納氏比色管中。

得到稀釋后的待測(cè)品后，本申請(qǐng)實(shí)施例加入茚三酮溶液進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的待測(cè)品；同時(shí)將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與所述茚三酮溶液同樣進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的對(duì)照品。

本申請(qǐng)加入茚三酮溶液，利用康復(fù)新液半成品中總氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)進(jìn)行總氨基酸含量的檢測(cè)。在本申請(qǐng)的實(shí)施例中，所述茚三酮溶液為茚三酮乙二醇甲醚試液。本申請(qǐng)對(duì)所述茚三酮溶液的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，具體的，所述茚三酮乙二醇甲醚試液的配制方法包括：取2.5g茚三酮，加入50mL乙二醇甲醚使溶解，另取濃度為0.01mol/L的氰化鉀溶液5mL，用乙二醇甲醚稀釋至250mL，將上述茚三酮乙二醇甲醚溶液和氰化鉀乙二醇甲醚溶液這兩種溶液混勻，放置24小時(shí)即得試液，所述試液在2℃～8℃于暗處保存，儲(chǔ)存一周待用；所述茚三酮乙二醇甲醚試液的用量可為3mL。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液的反應(yīng)在緩沖液和抗壞血酸溶液存在的條件下進(jìn)行，得到預(yù)處理的待測(cè)品。其中，所述抗壞血酸溶液的質(zhì)量濃度優(yōu)選為1％，用量?jī)?yōu)選為0.1mL。

所述緩沖液一般不含與茚三酮反應(yīng)的基團(tuán)如胺基等，且所述緩沖液的pH值優(yōu)選為5～7；所述緩沖液優(yōu)選自磷酸鹽緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液或枸櫞酸類緩沖液如枸櫞酸緩沖液。在本申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施例中，所述緩沖液的pH值為5，濃度可為0.2mol/L，能使后續(xù)目視比色更加明顯；所述緩沖液的用量可為2mL～20mL，優(yōu)選為4mL～10mL，更優(yōu)選為6mL～8mL，更方便后續(xù)目視比色。

在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為磷酸二氫鉀-氫氧化鈉溶液，pH值為6.8，配制方法可為：把25mL 0.2mol/L的磷酸二氫鉀與23.6mL 0.1mol/L氫氧化鈉混合均勻，加水稀釋至100mL。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為5的磷酸鹽緩沖液，配制方法可為：取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至5，即得。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為5.6的鄰苯二甲酸鹽緩沖液，配制方法可為：取鄰苯二甲酸氫鉀10g，加水900mL，攪拌使溶解，用氫氧化鈉試液(必要時(shí)用稀鹽酸)調(diào)節(jié)pH值至5.6，加水稀釋至1000mL，混勻，即得。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為5.8的磷酸鹽緩沖液，配制方法可為：取磷酸二氫鉀8.34g與磷酸氫二鉀0.87g，加水使溶解成1000mL，即得。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為5的枸櫞酸緩沖液，濃度為0.2mol/L，用量為7mL。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為6.2的枸櫞酸鹽緩沖液，配制方法可為：取枸櫞酸4.2g，加1mol/L的20％乙醇制氫氧化鈉溶液40mL使溶解，再用20％乙醇稀釋至100mL，即得；或者，取2.1％枸櫞酸水溶液，用50％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.2，即得。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為6.5的磷酸鹽緩沖液，配制方法可為：取磷酸二氫鉀0.68g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液15.2mL，用水稀釋至100mL，即得。在本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液為pH值為6.6的磷酸鹽緩沖液，配制方法可為：取磷酸二氫鈉1.74g、磷酸氫二鈉2.7g與氯化鈉1.7g，加水使溶解成400mL，即得。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液的反應(yīng)通過(guò)在沸水浴中加熱實(shí)現(xiàn)，加熱一定時(shí)間后取出反應(yīng)容器，放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品。所述沸水浴為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，溫度為98℃～100℃；所述加熱的時(shí)間優(yōu)選為5min～10min。本申請(qǐng)減少了水浴時(shí)間，縮短了檢測(cè)時(shí)間。本發(fā)明在沸水浴中加熱后優(yōu)選還包括：在冷水浴中放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品。本申請(qǐng)實(shí)施例將加熱后的待測(cè)品取出，置于冷水浴中迅速放冷，也利于縮短檢測(cè)時(shí)間。

本申請(qǐng)實(shí)施例精密量取所述丙氨酸對(duì)照品溶液，與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，如同時(shí)將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與所述茚三酮溶液同樣進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的對(duì)照品。在此，對(duì)得到預(yù)處理的對(duì)照品的過(guò)程不作贅述。

得到預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品后，本申請(qǐng)實(shí)施例通過(guò)目視比較兩者的顏色，判定得到康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量的結(jié)果：如果預(yù)處理的待測(cè)品的顏色比預(yù)處理的對(duì)照品的顏色深，則該康復(fù)新液半成品待測(cè)品中總氨基酸含量符合規(guī)定；如果預(yù)處理的待測(cè)品的顏色比預(yù)處理的對(duì)照品的顏色淺，則該康復(fù)新液半成品待測(cè)品中總氨基酸含量不符合規(guī)定，需添加藥材提取物等。

本發(fā)明還提供了一種康復(fù)新液中總氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

提供濃度為0.0144mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液；

將康復(fù)新液待測(cè)品用水稀釋，稀釋后的待測(cè)品與茚三酮溶液進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的待測(cè)品；同時(shí)將所述丙氨酸對(duì)照品溶液與所述茚三酮溶液同樣進(jìn)行反應(yīng)，得到預(yù)處理的對(duì)照品；

目視比較所述預(yù)處理的待測(cè)品和預(yù)處理的對(duì)照品的顏色，得到康復(fù)新液中總氨基酸含量。

針對(duì)康復(fù)新液中總氨基酸要求控制在0.72mg/mL以上，本申請(qǐng)實(shí)施例制備成濃度為0.0144mg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液。除此之外，檢測(cè)康復(fù)新液中總氨基酸含量的方法與上文所述的康復(fù)新液半成品的檢測(cè)方法一致，在此不再贅述。

本申請(qǐng)?zhí)峁┑臋z測(cè)方法可以直接用肉眼比較顏色深淺，定性檢測(cè)康復(fù)新液及其半成品中總氨基酸的含量，適用于車間在線監(jiān)控，操作簡(jiǎn)單快捷，減少了對(duì)精密儀器的依賴度，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間；同時(shí)其準(zhǔn)確性和重復(fù)性等都符合生產(chǎn)對(duì)總氨基酸含量檢測(cè)的要求。

為了進(jìn)一步理解本申請(qǐng)，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本申請(qǐng)?zhí)峁┑目祻?fù)新液及其半成品中總氨基酸含量的檢測(cè)方法進(jìn)行具體地描述。

以下實(shí)施例所用丙氨酸對(duì)照品的來(lái)源為中國(guó)藥品生物制品鑒定所(140680-201002)，含量為100.0％；康復(fù)新液及康復(fù)新液半成品均為湖南科倫制藥有限公司生產(chǎn)。

實(shí)施例1

精密稱取丙氨酸對(duì)照品15.4mg，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；再精密量取稀釋后的對(duì)照品5mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為15.4μg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液。

精密量取康復(fù)新液半成品(批號(hào)為M150117)待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋后的待測(cè)品1mL，置于納氏比色管中，依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)2.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱10分鐘，取出，置于冷水浴中迅速放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品(可稱為甲管樣品)。

精密量取所述丙氨酸對(duì)照品溶液1mL，置于納氏比色管中，與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，得到預(yù)處理的對(duì)照品(可稱為乙管對(duì)照品)。

目視比較甲管樣品和乙管對(duì)照品的顏色，參見(jiàn)圖1，圖1為實(shí)施例1預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖。從圖1可以看出，甲管樣品的顏色深于乙管對(duì)照品的顏色，說(shuō)明所述康復(fù)新液半成品待測(cè)品中總氨基酸含量在0.77mg/mL以上，符合規(guī)定。

并且，本實(shí)施例的檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)在15min以內(nèi)。

比較例1

精密稱取在105℃干燥至恒重的丙氨酸對(duì)照品50mg，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL稀釋搖勻后的溶液，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：精密量取所述對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于10mL具塞試管中，加水至1mL；然后依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)1.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，放冷；再加入80％乙醇3.0mL，搖勻，采用紫外分光光度法試驗(yàn)，在570nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

待測(cè)品的測(cè)定：精密量取實(shí)施例1中的康復(fù)新液半成品待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1mL稀釋搖勻后的溶液，置于10mL具塞試管中，然后依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)1.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，放冷；再加入80％乙醇3.0mL，搖勻，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定紫外吸收度，從所述標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待測(cè)品溶液中氨基酸的含量。結(jié)果顯示，所述康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量為0.81mg/mL。

并且，本比較例的檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)在2h以上。

比較例2

精密稱取丙氨酸對(duì)照品15.4mg，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；再精密量取稀釋后的對(duì)照品5mL，置于50mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為30.8μg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液。

精密量取康復(fù)新液半成品(批號(hào)M150117)待測(cè)品2mL，置于50mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋后的待測(cè)品1mL，置于納氏比色管中，依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)2.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱10分鐘，取出，置于冷水浴中迅速放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品(可稱為甲管樣品)。

精密量取所述丙氨酸對(duì)照品溶液1mL，置于納氏比色管中，與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，得到預(yù)處理的對(duì)照品(可稱為乙管對(duì)照品)。

目視比較甲管樣品和乙管對(duì)照品的顏色，參見(jiàn)圖2，圖2為比較例2預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖。從圖2可以看出，甲管樣品的顏色與乙管對(duì)照品的顏色均過(guò)淺，難以判斷所述康復(fù)新液半成品待測(cè)品中總氨基酸含量是否在0.77mg/mL以上。

比較例3

精密稱取丙氨酸對(duì)照品15.4mg，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；再精密量取稀釋后的對(duì)照品5mL，置于200mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為7.7μg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液。

精密量取康復(fù)新液半成品(批號(hào)M150117)待測(cè)品2mL，置于200mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋后的待測(cè)品1mL，置于納氏比色管中，依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)2.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱10分鐘，取出，置于冷水浴中迅速放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品(可稱為甲管樣品)。

精密量取所述丙氨酸對(duì)照品溶液1mL，置于納氏比色管中，與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，得到預(yù)處理的對(duì)照品(可稱為乙管對(duì)照品)。

目視比較甲管樣品和乙管對(duì)照品的顏色，參見(jiàn)圖3，圖3為比較例3預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖。從圖3可以看出，甲管樣品的顏色與乙管對(duì)照品的顏色均過(guò)深，難以判斷所述康復(fù)新液半成品待測(cè)品中總氨基酸含量是否在0.77mg/mL以上。

實(shí)施例2

精密量取康復(fù)新液半成品(批號(hào)為M150103)待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋后的待測(cè)品1mL，置于納氏比色管中，依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)4.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱8分鐘，取出，置于冷水浴中迅速放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品(可稱為甲管樣品)。

精密量取實(shí)施例1中制備的丙氨酸對(duì)照品溶液1mL，置于納氏比色管中，與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，得到預(yù)處理的對(duì)照品(可稱為乙管對(duì)照品)。

目視比較甲管樣品和乙管對(duì)照品的顏色，參見(jiàn)圖4，圖4為實(shí)施例2預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖。從圖4可以看出，甲管樣品的顏色淺于乙管對(duì)照品的顏色，說(shuō)明所述康復(fù)新液半成品待測(cè)品中總氨基酸含量在0.77mg/mL以下，不符合規(guī)定，需添加藥材提取物。

并且，本實(shí)施例的檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)在15min以內(nèi)。

比較例4

待測(cè)品的測(cè)定：精密量取實(shí)施例2中的康復(fù)新液半成品待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1mL稀釋搖勻后的溶液，置于10mL具塞試管中，然后依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)1.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，放冷；再加入80％乙醇3.0mL，搖勻，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定紫外吸收度，從比較例1繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待測(cè)品溶液中氨基酸的含量。結(jié)果顯示，所述康復(fù)新液半成品中總氨基酸含量為0.76mg/mL。

實(shí)施例3

精密稱取丙氨酸對(duì)照品14.4mg，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；再精密量取稀釋后的對(duì)照品5mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為14.4μg/mL的丙氨酸對(duì)照品溶液。

精密量取康復(fù)新液(批號(hào)為M150203)待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋后的待測(cè)品1mL，置于納氏比色管中，依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)7.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱5分鐘，取出，置于冷水浴中迅速放冷，得到預(yù)處理的待測(cè)品(可稱為甲管樣品)。

精密量取所述丙氨酸對(duì)照品溶液1mL，置于納氏比色管中，與稀釋后的待測(cè)品同時(shí)同法操作，得到預(yù)處理的對(duì)照品(可稱為乙管對(duì)照品)。

目視比較甲管樣品和乙管對(duì)照品的顏色，參見(jiàn)圖5，圖5為實(shí)施例3預(yù)處理的待測(cè)品和對(duì)照品的顏色比較圖。從圖5可以看出，甲管樣品的顏色深于乙管對(duì)照品的顏色，說(shuō)明所述康復(fù)新液待測(cè)品中總氨基酸含量在0.72mg/mL以上，符合規(guī)定。

并且，本實(shí)施例的檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)在15min以內(nèi)。

比較例5

待測(cè)品的測(cè)定：精密量取實(shí)施例3中的康復(fù)新液待測(cè)品2mL，置于100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1mL稀釋搖勻后的溶液，置于10mL具塞試管中，然后依次加入0.2mol/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)1.0mL、1％抗壞血酸溶液0.1mL、茚三酮乙二醇甲醚試液3.0mL，搖勻，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，放冷；再加入80％乙醇3.0mL，搖勻，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定紫外吸收度，從比較例1中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待測(cè)品溶液中氨基酸的含量。結(jié)果顯示，所述康復(fù)新液中總氨基酸含量為0.82mg/mL。

由以上實(shí)施例可知，本申請(qǐng)采用目視比色法，定性地檢測(cè)得到康復(fù)新液及其半成品中總氨基酸含量，耗時(shí)在15min以內(nèi)。本申請(qǐng)?zhí)峁┑臋z測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，能大大減少檢測(cè)時(shí)間，同時(shí)其準(zhǔn)確性和重復(fù)性等都符合生產(chǎn)對(duì)總氨基酸含量檢測(cè)的要求。