本發(fā)明屬于酸棗仁中有效成分提取領(lǐng)域，尤其是一種ase法提取酸棗仁中斯皮諾素的方法。
背景技術(shù)：
：《中國藥典》2015年版一部制備供試品方法為取本品粉末(過四號篩)約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)適量，加熱回流4小時，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加入70％乙醇20ml，加熱回流2小時，濾過，濾渣用70％乙醇5ml洗滌，合并洗液與濾液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。該提取方法回流時間長，且對技術(shù)人員的專業(yè)水平要求較高。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對上述不足，本發(fā)明旨在提供一種耗時短且能達到同樣效果的ase法提取酸棗仁中斯皮諾素的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種ase法提取酸棗仁中斯皮諾素的方法,依次包括下述步驟:步驟1：將酸棗仁樣品粉碎，過三號篩，取1g與1g硅藻土混合均勻；步驟2：將步驟1所得的混合物裝于放有濾膜的10mlase萃取池中，加硅藻土至與池口平行；步驟3：用25ml正己烷萃取除雜，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。優(yōu)選地，步驟3所述的除雜步驟的參數(shù)為：溫度為80℃，時間為8min，次數(shù)為1次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s。優(yōu)選地，步驟3所述的萃取步驟的參數(shù)為：溫度為100℃，時間為8min，次數(shù)為1次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s。本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點：1、本發(fā)明提高了溫度降低溶劑的黏度，減少溶劑進入樣品基體的阻止，增加了溶劑進入樣品基體的擴散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測物的容量增加；2、由于液體對溶質(zhì)的溶解能力遠大于氣體對溶質(zhì)的溶解能力，所以萃取液體的沸點隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態(tài)；3、本發(fā)明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，有論文提到使用70％乙醇提取斯皮諾素相對含量較高，雜質(zhì)較少，故對使用甲醇和70％乙醇進行了溶劑考察，結(jié)果顯示甲醇與70％乙醇提取斯皮諾素含量一致，且雜質(zhì)峰基本相同，故采用甲醇提取溶劑；4、本發(fā)明主要考察萃取次數(shù)對結(jié)果的影響，實驗中用ase單次萃取的方法對樣品重復(fù)提取三次，分別接收每次的樣品液，分析其結(jié)果，結(jié)果表明萃取一次幾乎完全，故萃取次數(shù)采用1次以節(jié)省時間；5、本發(fā)明所述的ase提取方法的重復(fù)性良好。附圖說明圖1為斯皮諾素對照品的色譜圖；圖2為采用ase法萃取所得的斯皮諾素的色譜圖；圖3為采用藥典方法萃取所得的斯皮諾素的色譜圖；圖4為以斯皮諾素對照品的濃度(mg)-峰面積進行的線性回歸圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施方式，對本發(fā)明的權(quán)利要求書做進一步的詳細說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護范圍內(nèi)所做的有限次修改，人在本發(fā)明的權(quán)利要求保護范圍之內(nèi)。實施例11、儀器設(shè)備及試劑1.1儀器：電子分析天平(xa205du)、ase350快速溶劑萃取儀(美國dionex公司)、thermou3000uhplc液相色譜儀。1.2試劑：水：符合gb/t6682規(guī)定的一級水；乙腈：色譜純；正己烷、甲醇：分析純。2、方法2.1對照品溶液的制備：取斯皮諾素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。2.2供試品溶液的制備2.2.1《中國藥典》2015年版一部制備供試品方法：取本品粉末(過四號篩)約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)適量，加熱回流4小時，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加入70％乙醇20ml，加熱回流2小時，濾過，濾渣用70％乙醇5ml洗滌，合并洗液與濾液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.2.2快速溶劑萃取法(ase)制備供試品方法：步驟s1：將酸棗仁樣品粉碎，過篩，取1g與1g硅藻土混合均勻；步驟s2：將步驟1所得的混合物裝于放有濾膜的10mlase萃取池中，加硅藻土至與池口平行；步驟s3：用25ml正己烷萃取除雜，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。2.3ase萃取條件所述的除雜步驟的參數(shù)為：溫度為80℃，時間為8min，次數(shù)為1次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s；所述的萃取步驟的參數(shù)為：溫度為100℃，時間為8min，次數(shù)為1次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s。2.4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。hplc法的檢測參數(shù)為：色譜柱為thermoaq，1.7μm，50×2.1mm；柱溫為40℃；流速為0.3ml/min；流動相為乙腈-水；檢測波長為335nm。優(yōu)選地，所述的流動相采用梯度洗脫的方法加入，其中具體的參數(shù)如下：洗脫總時間為30min；第0～10min，流動相中乙腈-水的體積比為12～19：88～81；第10～16min，流動相中乙腈-水的體積比為19～20：81～80；第16～22min，流動相中乙腈-水的體積比為20～100：80～0；第22～30min，流動相中乙腈-水的體積比為100：0。2.5測定法照高效液相色譜法(通則0512)測定；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。2.6標準限值要求本品按干燥品計算，含斯皮諾素(c28h32o15)不得少于0.080％。2.7計算(外標法)式中：cr—對照品溶液濃度，單位為微克每升(mg/l)；ax—供試品的峰面積；ar—對照品峰面積。注意：使用前萃取池底部應(yīng)拆卸清理干凈，否則容易引起壓力不穩(wěn)；萃取池底部的濾紙應(yīng)在密封圈內(nèi)，否則引起滲漏；萃取池裝樣時松緊適中，太松容易導(dǎo)致提取液過多；開機前檢查氣瓶氣壓是否達到1mpa；使用結(jié)束后清理干凈，萃取池要及時晾干(容易生銹)。3、結(jié)果3.1線性關(guān)系步驟ss1：取斯皮諾素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含0.2mg的溶液，即得；步驟ss2：然后分別精密吸取該溶液0.1μl、0.5μl、1μl、1.5μl、2μl進入hplc測定，并依照上述方法測定，結(jié)果詳見表1；步驟ss3：以濃度(mg)-峰面積進行線性回歸，詳見圖4；步驟ss4：求得回歸方程：y＝6685.2191x-7.7407，r2＝0.9999,即斯皮諾素在0.01439～0.2878mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。表1斯皮諾素的線性試驗結(jié)果3.2重復(fù)性試驗取相同批號的樣品(批號：1508015)1g，共4份，精密稱定，按上述的ase提取方法提取供試品溶液，進樣量為1μl，以上述的色譜條件平行實驗，測得樣品中斯皮諾素的含量見表2，rsd為0.8％，結(jié)果表明ase提取方法重復(fù)性良好。表2測得樣品中斯皮諾素的含量3.3精密度和穩(wěn)定性試驗取斯皮諾素對照品溶液(0.1439mg/ml)，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，峰面積rsd為0.7％，表明儀器精密度良好。取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0，2，4，8，12h依法測定，詳見圖1。結(jié)果顯示斯皮諾素峰面積的rsd為0.8％，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。另外，采用ase法提取的樣品中的斯皮諾素的測定色譜圖見圖2；采用藥典方法提取的樣品中的斯皮諾素的測定色譜圖見圖3。3.4樣品不同儀器提取結(jié)果及與藥典方法結(jié)果比較(3批)表3樣品分別使用不同的ase儀的提取結(jié)果對比表4樣品分別使用ase法與藥典方法的提取結(jié)果對比4討論：4.1ase提取溶劑的選擇：本發(fā)明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，有論文提到使用70％乙醇提取斯皮諾素相對含量較高，雜質(zhì)較少，故對使用甲醇和70％乙醇進行了溶劑考察，結(jié)果顯示甲醇與70％乙醇提取斯皮諾素含量一致，且雜質(zhì)峰基本相同，故采用甲醇提取溶劑。4.2ase提取條件的優(yōu)化本發(fā)明主要考察萃取次數(shù)對結(jié)果的影響，實驗中用ase單次萃取的方法對樣品重復(fù)提取三次，分別接收每次的樣品液，結(jié)果見表5，分析其結(jié)果，結(jié)果表明萃取一次幾乎完全，故萃取次數(shù)采用1次以節(jié)省時間。表5甲醇提取結(jié)果％萃取1次0.1311萃取2次0.0002萃取3次0.0008以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12