本發(fā)明涉及使用豬螺桿菌外膜組分的測定豬螺桿菌抗體的方法。

背景技術(shù)：

1、目前，已知由helicobacter?pylori(寄生在人胃中的微好氧性革蘭氏陰性螺桿菌，以下，稱為“幽門螺桿菌”)導(dǎo)致的感染與慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、胃粘膜相關(guān)淋巴組織(malt)淋巴瘤、彌漫性大細胞型b細胞淋巴瘤等相關(guān)。作為幽門螺桿菌的感染檢查方法，主要采用分離培養(yǎng)法、尿素呼氣試驗(ubt)、血清、尿中的幽門螺桿菌抗體效價的測定(elisa和乳膠凝集法)、便中的幽門螺桿菌抗原測定(免疫層析法)、胃活組織檢查檢體的快速尿素酶試驗(rut)。

2、但是，近年來，隨著由幽門螺桿菌診斷、除菌的普及帶來的幽門螺桿菌感染率降低，作為幽門螺桿菌以外的對人誘發(fā)嚴重胃病的螺桿菌，nhph(非幽門螺桿菌螺桿菌(non-helicobacter?pylori?hericobacters)；幽門螺桿菌以外的螺桿菌)逐漸成為問題。nhph包括helicobacter?suis(以下為豬螺桿菌(h.suis))、畢氏螺桿菌(h.bizzozeronnii)、貓螺桿菌(h.felis)、h.salmonis、h.ailurogastricus、h.cynogasticus、h.baculiformis、鼬鼠螺桿菌(h.mustelae)、h.acinonychls、h.cetorum及海爾曼螺桿菌(h.heilmannii)，其中，從人胃中發(fā)現(xiàn)的大部分為豬螺桿菌。

3、幽門螺桿菌僅感染靈長類，只有在嬰幼兒期可設(shè)想來自近親屬的感染，而豬螺桿菌則與年齡無關(guān)，自豬、猴等動物感染。

4、豬螺桿菌在約10萬年前就已寄生于猴的胃中。之后，在1.5萬年前變?yōu)橐部筛腥矩i。伴隨豬的家畜化，感染爆發(fā)性擴散，變?yōu)橐部筛腥救?非專利文獻1)。對從世界各地分離的181株豬螺桿菌基因的mlst(多位點序列分型，multi?locus?sequencing?typing)進行了分析，結(jié)果，基于感染宿主動物而形成了獨立的簇，但從人分離的株未形成獨立的簇，而是包含于豬的簇，因此將針對人的感染源判定為豬(非專利文獻2)。因此，就豬和人而言，需要感染診斷和除菌劑。

5、作為豬螺桿菌的感染檢查方法，報道了血清中豬螺桿菌抗體效價的測定(elisa和乳膠凝集法)(專利文獻1、2)。

6、現(xiàn)有技術(shù)文獻

7、專利文獻

8、專利文獻1：日本特開2016-10331號公報

9、專利文獻2：國際公開wo2019/225639號

10、非專利文獻

11、非專利文獻1：flahou等，ismj.，jan；12(1)：77-86.doi:10.1038/ismej.2017.145

12、非專利文獻2：e.rimbara等，proc?natl?acad?sci?usa?2021vol.118issue13e2026337118.doi:10.1073/pnas.2026337118.

13、非專利文獻3：haesebrouck?f.等，helicobacter，16(4)，339-340，2011doi:10.1111/j.1523-5378.2011.00849.x

14、非專利文獻4：a.d.augustin等，front.med.，2019，6，188，doi:10.3389/fmed.2019.00188

15、(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31555648)

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、發(fā)明所要解決的課題

2、本發(fā)明的目的為提供使用豬螺桿菌外膜組分的測定豬螺桿菌抗體的方法及試劑。

3、用于解決課題的手段

4、專利文獻1公開了將豬螺桿菌的f2r2蛋白固定于板，測定血清中的抗體。并且，專利文獻2公開了將被認為抗體效價高于f2r2蛋白質(zhì)的hsva蛋白固定于板，測定血清中的抗體。

5、然而，期求較之現(xiàn)有方法而言靈敏度和特異性更高的方法。

6、本次，本技術(shù)發(fā)明人新發(fā)現(xiàn)了通過使用豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)能夠提高感染者體內(nèi)的抗豬螺桿菌抗體的測定靈敏度和特異性，從而發(fā)現(xiàn)了新的測定法。

7、更具體而言，本發(fā)明涉及以下的發(fā)明：

8、[1]試劑，用于檢測來源于受試體的檢體的與豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)進行結(jié)合的抗體，其特征在于，至少含有豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)、及抗ig抗體。

9、[2][1]的試劑，其特征在于，受試體為哺乳動物。

10、[3][1]或[2]的試劑，其特征在于，檢體來源于血液。

11、[4][1]～[3]中任一項的試劑，其特征在于，還含有幽門螺桿菌的菌體成分或針對幽門螺桿菌菌體成分的抗體，所述試劑還能夠?qū)碓从谑茉圀w的檢體的與幽門螺桿菌進行結(jié)合的抗體或幽門螺桿菌菌體成分的抗原進行檢測。

12、[5][1]～[4]中任一項的試劑，所述試劑為elisa或免疫層析用試劑。

13、[6]方法，用于檢測來源于受試體的檢體的與抗豬螺桿菌外膜組分或與豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)進行結(jié)合的抗體，其特征在于，包括以下步驟：

14、(a)使來源于受試體的檢體與豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)接觸的步驟；及

15、(b)檢測已與豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)結(jié)合的、所述檢體中的抗體的步驟。

16、[7][6]的方法，其特征在于，受試體為哺乳動物。

17、[8][6]或[7]的方法，其特征在于，檢體來源于血液。

18、[9][6]～[8]中任一項的方法，所述方法還能夠檢測來源于受試體的檢體的與幽門螺桿菌進行結(jié)合的抗體，其特征在于，還包括以下步驟：

19、(a)使來源于受試體的檢體與幽門螺桿菌菌體成分接觸的步驟；及

20、(b)檢測已與幽門螺桿菌菌體成分結(jié)合的、所述檢體中的抗體的步驟。

21、[10][6]～[8]中任一項的方法，所述方法還能夠檢測來源于受試體的檢體的幽門螺桿菌菌體成分的抗原，其特征在于，還包括以下步驟：

22、(a)使來源于受試體的檢體與針對幽門螺桿菌菌體成分的抗體接觸的步驟；及

23、(b)檢測已與針對幽門螺桿菌菌體成分的抗體結(jié)合的、所述檢體中的幽門螺桿菌菌體成分的抗原的步驟。

24、[11]豬螺桿菌感染的檢測方法，其將通過使用[1]～[5]中任一項的試劑的測定及/或通過[6]～[10]中任一項的方法檢測到抗體的受試體判定為感染了豬螺桿菌。

25、本說明書包括作為本技術(shù)的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本專利申請?zhí)?022-009302號的公開內(nèi)容。

26、發(fā)明效果

27、通過使用豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)，能夠以高靈敏度測定感染者體內(nèi)的抗豬螺桿菌抗體。豬螺桿菌外膜組分或豬螺桿菌外膜組分中所含的蛋白質(zhì)可用于測定來源于豬螺桿菌感染診斷對象體的血液中抗豬螺桿菌抗體的有無或抗體效價。