本公開涉及組織處理領域及其方法，例如，用于組織學的可在高通量應用中使用的方法。

背景技術(shù)：

1、傳統(tǒng)的組織學處理方案由用于提供固定、脫水、清洗和浸蠟的四組試劑組成。其中，這些方案通常由12個步驟組成，其通常會使用熱、壓力和/或真空等催化手段。一些處理機通過配備攪拌器或某種配件以攪拌流體。傳統(tǒng)處理機的缺點使得消除熱或提高流體灌注速率極其困難。因此，仍然需要改進的組織處理方法，其在提供可比的甚至更好的結(jié)果并仍然與標準試劑、設備和染色方案保持兼容的同時，解決并克服了這些缺點。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本文提供了一種用于在組織學中使用的處理組織樣品的方法，例如一種快捷的方案。

2、例如，本公開的處理組織樣品的方法包括步驟(i)至(xii)：

3、(i)(a)在約18℃至約27℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(pressure/vacuum，p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與中性緩沖福爾馬林(neutral-buffered?formalin，nbf)接觸，和(i)(b)從所述組織樣品去除所述nbf，任選地，在進一步處理前預留約5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述nbf的濃度為約6％至14％之間的nbf溶液、約7％至13％之間的nbf溶液、約8％至12％之間的nbf溶液、或約9％至11％之間的nbf溶液；任選地，其中所述nbf的濃度為約10％的nbf溶液。在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。并且，在一些特定實施例中，使所述組織樣品與所述nbf接觸約1分鐘，并在所述約1分鐘后從所述組織樣品去除所述nbf。在一些特定實施例中，可以使用除nbf之外的組織固定介質(zhì)，例如多聚甲醛。

4、(ii)(a)在約18℃至約27℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與乙醇接觸約20分鐘至約45分鐘、任選地約30分鐘，和(ii)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述乙醇，任選地在進一步處理前預留約5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述乙醇為約65％至75％之間的乙醇、約66％至74％之間的乙醇、約67％至73％之間的乙醇、約68％至72％之間的乙醇或約69％至71％的乙醇；任選地，其中所述乙醇為約70％的乙醇。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

5、(iii)(a)在約18℃至約27℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與乙醇接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(iii)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述乙醇，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述乙醇為約85％至95％之間的乙醇、約86％至94％之間的乙醇、約87％至93％之間的乙醇、約88％至92％之間的乙醇或約89％至91％之間的乙醇；任選地，其中所述乙醇為約90％的乙醇。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

6、(iv)(a)在約18℃至約27℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與乙醇接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(iv)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述乙醇，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述乙醇為至少約95％的乙醇、至少約96％的乙醇、至少約97％的乙醇、至少約98％的乙醇或至少約99％的乙醇；任選地，其中所述乙醇為約100％的乙醇。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

7、(v)(a)在約18℃至約27℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與乙醇接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(v)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述乙醇，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述乙醇為至少約95％的乙醇、至少約96％的乙醇、至少約97％的乙醇、至少約98％的乙醇或至少約99％的乙醇；任選地，其中所述乙醇為約100％的乙醇。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

8、(vi)(a)在約18℃至約27℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與乙醇接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(vi)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述乙醇，任選地在進一步處理前預留約5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述乙醇為至少約95％的乙醇、至少約96％的乙醇、至少約97％的乙醇、至少約98％的乙醇或至少約99％的乙醇；任選地，其中所述乙醇為約100％的乙醇。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

9、(vii)(a)在約43℃至約47℃的溫度、任選地在約45℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與二甲苯接觸約10分鐘至約45分鐘、任選地約20分鐘，和(vii)(b)在約10分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述二甲苯，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述二甲苯為至少約95％的二甲苯、至少約96％的二甲苯、至少約97％的二甲苯、至少約98％的二甲苯或至少約99％的二甲苯；任選地，其中所述二甲苯為約100％的二甲苯。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

10、(viii)(a)在約43℃至約47℃的溫度、任選地在約45℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與二甲苯接觸約10分鐘至約45分鐘、任選地約20分鐘，和(viii)(b)在約10分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述二甲苯，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述二甲苯為至少約95％的二甲苯、至少約96％的二甲苯、至少約97％的二甲苯、至少約98％的二甲苯或至少約99％的二甲苯；任選地，其中所述二甲苯為約100％的二甲苯。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

11、(ix)(a)在約43℃至約47℃的溫度/任選地在約45℃的溫度，任選地在-70kpa(g)至0kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與二甲苯接觸約25分鐘至約50分鐘、任選地約40分鐘，和(ix)(b)在約20分鐘至約50分鐘后，從所述組織樣品去除所述二甲苯，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述二甲苯為至少約95％的二甲苯、至少約96％的二甲苯、至少約97％的二甲苯、至少約98％的二甲苯或至少約99％的二甲苯；任選地，其中所述二甲苯為約100％的二甲苯。并且，在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

12、(x)(a)在約60℃至約70℃的溫度、任選地在約65℃的溫度，在真空中、任選地在0kpa(g)至+45kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與石蠟接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(x)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述石蠟，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

13、(xi)(a)在約60℃至約70℃的溫度、任選地在約65℃的溫度，在真空中、任選地在0kpa(g)至+45kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與石蠟接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(x)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述石蠟，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。

14、(xii)(a)在約60℃至約70℃的溫度、任選地在約65℃的溫度，在真空中、任選地在0kpa(g)至+45kpa(g)的壓力/真空(p/v)中，伴隨攪拌，使所述組織樣品與石蠟接觸約15分鐘至約45分鐘、任選地約25分鐘，和(xii)(b)在約15分鐘至約45分鐘后，從所述組織樣品去除所述石蠟，任選地在進一步處理前預留約為5、10、15、20、25或30秒的流滴時間。在一些特定實施例中，所述攪拌為中度或高度攪拌。