本發(fā)明涉及中藥提取，尤其涉及一種健脾清熱消痤方提取工藝的評(píng)價(jià)方法。

背景技術(shù)：

1、健脾清熱消痤方屬于臨床驗(yàn)方，經(jīng)多年臨床使用經(jīng)驗(yàn)，該方具健脾除濕，解毒消癰之效。但是，目前臨床驗(yàn)方開發(fā)為醫(yī)院制劑生產(chǎn)，很難形成大批量、上規(guī)模的量化生產(chǎn)，因此需要優(yōu)化提取工藝、提升提取工藝的穩(wěn)定性、保證其可行性。

2、中藥復(fù)方提取工藝研究多采用正交、均勻和box-behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)法選擇指標(biāo)成分含量較高的工藝參數(shù)。但是，中藥復(fù)方的化學(xué)成分、作用機(jī)理復(fù)雜，以指標(biāo)成分的含量為唯一評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，可能存在一定缺陷，因而亟需構(gòu)建科學(xué)全面的質(zhì)量控制體系。并且，現(xiàn)有技術(shù)中還未有針對(duì)健脾清熱消痤方提取液組方含量的具體檢測(cè)評(píng)估方法，難以實(shí)現(xiàn)針對(duì)臨床健脾清熱消痤方提取工藝的優(yōu)化或大規(guī)模量化。

3、因此，開發(fā)一種能夠結(jié)合主觀及客觀因素、克服單一賦權(quán)法缺點(diǎn)，全面分析健脾清熱消痤方提取手段、優(yōu)化其提取工藝的評(píng)價(jià)體系，可為該臨床驗(yàn)方的后續(xù)醫(yī)院制劑研發(fā)、生產(chǎn)提供重要依據(jù)，具有較高的實(shí)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種健脾清熱消痤方提取工藝的評(píng)價(jià)方法。本發(fā)明所提供的評(píng)價(jià)及優(yōu)化方法結(jié)合主觀賦權(quán)和客觀賦權(quán)，全面建立對(duì)健脾清熱消痤方的提取工藝及提取液的檢測(cè)分析及結(jié)果評(píng)估體系，對(duì)其提取工藝的優(yōu)化、量化生產(chǎn)有重要實(shí)用意義。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種健脾清熱消痤方提取工藝的評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟：

4、(1)對(duì)健脾清熱消痤方進(jìn)行提取，得到提取液，并測(cè)定所述提取液的干膏率；

5、(2)采用高效液相色譜法分析所述提取液的指標(biāo)成分，并建立所述健脾清熱消痤方的基準(zhǔn)指紋圖譜，得到所述提取液的指標(biāo)成分的含量及指紋圖譜相似度；

6、所述指標(biāo)成分包括：綠原酸、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、落新婦苷、丹酚酸b、橙皮苷、芍藥苷、歐前胡素、甘草苷、甘草酸銨；

7、(3)根據(jù)以下綜合評(píng)分公式(ⅰ)評(píng)價(jià)所述健脾清熱消痤方的提取工藝：

8、

9、所述n代表評(píng)價(jià)指標(biāo)的數(shù)量，所述評(píng)價(jià)指標(biāo)包括所述指標(biāo)成分的含量、指紋圖譜相似度和干膏率；所述xij代表第i個(gè)實(shí)驗(yàn)中j評(píng)價(jià)指標(biāo)的值；代表第i個(gè)實(shí)驗(yàn)中j評(píng)價(jià)指標(biāo)的最大值；所述wj為j評(píng)價(jià)指標(biāo)的綜合權(quán)重，所述wj的計(jì)算公式如公式(ⅱ)：

10、

11、其中，wjs和wjo分別為j指標(biāo)的主觀權(quán)重系數(shù)和客觀權(quán)重系數(shù)；所述主觀權(quán)重系數(shù)通過層次分析法賦權(quán)，所述客觀權(quán)重系數(shù)通過熵值法賦權(quán)。

12、本發(fā)明所提及的健脾清熱消痤方包括以下重量份的組分：白術(shù)8-12份、枇杷葉8-12份、土茯苓8-12份、黃芩8-12份、漏蘆10-11份、桑白皮8-12份、南沙參8-12份、赤芍8-12份、白芷4-6份、陳皮4-6份、丹參8-12份、甘草4-6份。該方具有健脾除濕，解毒消癰之效。

13、根據(jù)健脾清熱消痤方的處方，結(jié)合各成分的實(shí)測(cè)穩(wěn)定性，本發(fā)明選擇了上述11種功效成分作為用于評(píng)價(jià)的指標(biāo)成分，可直觀反應(yīng)提取工藝對(duì)組方中功效組分的提取效果。其中，白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯、枇杷葉的齊墩果酸和熊果酸、漏蘆的β-蛻皮甾酮以及白芷的異歐前胡素在提取液樣品中無法被測(cè)出，且β-蛻皮甾酮高溫下不穩(wěn)定易分解，而枇杷葉中的綠原酸經(jīng)提取后能夠被穩(wěn)定檢測(cè)、無干擾，將綠原酸作為提取工藝的指標(biāo)性成分。其他指標(biāo)成分分別對(duì)應(yīng)為：臣藥黃芩中的黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素，臣藥土茯苓中的落新婦苷；佐藥赤芍中的芍藥苷，佐藥白芷中的歐前胡素，佐藥陳皮中的橙皮苷，佐藥丹參中的丹酚酸b；使藥甘草中的甘草苷和甘草酸銨。

14、同時(shí)，本發(fā)明綜合權(quán)重的評(píng)價(jià)指標(biāo)還包括干膏率，干膏率可反映提取工藝的穩(wěn)定性，有利于通過評(píng)價(jià)篩選得到穩(wěn)定性高的提取工藝；另一評(píng)價(jià)指標(biāo)為提取液組分與指紋圖譜的相似度，通過對(duì)指紋圖譜的比對(duì)，分析提取制劑過程中的小分子成分輪廓及定性特征，提高評(píng)價(jià)體系的準(zhǔn)確性和可靠性。

15、對(duì)于上述的13種評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用ahp(層次分析法)-熵值混合加權(quán)法確定各評(píng)價(jià)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)。其中ahp為主觀賦權(quán)法，人為確定各評(píng)價(jià)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，單獨(dú)使用受人影響較大、具有主觀隨意性。熵值法為客觀賦權(quán)法，根據(jù)數(shù)據(jù)變化規(guī)律得出權(quán)重系數(shù)，但單獨(dú)使用不能體現(xiàn)中藥復(fù)方的君臣佐使關(guān)系。聯(lián)用上述兩種方法進(jìn)行混合加權(quán)，可以互相彌補(bǔ)不足，使得綜合評(píng)價(jià)更具有科學(xué)性和合理性。

16、本發(fā)明通過確定健脾清熱消痤方適宜的指標(biāo)成分，對(duì)健脾清熱消痤方的指標(biāo)成分進(jìn)行高效液相色譜分析，構(gòu)建得到健脾清熱消痤方的基準(zhǔn)指紋圖譜，為健脾清熱消痤方提取液的檢測(cè)分析及提取工藝的科學(xué)評(píng)估、優(yōu)化提供可行性；所選用的評(píng)價(jià)指標(biāo)兼顧對(duì)組方提取的有效性和工藝本身的穩(wěn)定性；且在評(píng)價(jià)綜合評(píng)分中結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的ahp-熵值混合加權(quán)法，明確各個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)在質(zhì)量控制體系中的權(quán)重系數(shù)，從而獲得便捷準(zhǔn)確，可靠性更高的工藝評(píng)價(jià)體系，對(duì)健脾清熱消痤方提取工藝的優(yōu)化有重要意義。

17、優(yōu)選地，所述步驟(1)中，提取的工藝為：

18、s1.向所述健脾清熱消痤方中加水浸泡，然后煎煮，過濾得到濾液和藥渣；

19、s2.對(duì)所述藥渣重復(fù)s1所述的加水浸泡、煎煮和過濾操作至少一次，合并所述濾液，得到提取液。

20、優(yōu)選地，所述步驟(1)中，提取工藝中，所述加水量為所述健脾清熱消痤方重量的8-12倍，所述浸泡的時(shí)間為28-32min，所述煎煮的時(shí)間為30-90min，所述重復(fù)操作的次數(shù)為1-2次。

21、提取工藝選用水提法，對(duì)不同加水量、浸泡時(shí)間、煎煮提取時(shí)間及重復(fù)提取的次數(shù)方面進(jìn)行初步優(yōu)化。上述提取工藝參數(shù)下各指標(biāo)成分及干膏率含量較優(yōu)。

22、優(yōu)選地，所述步驟(2)中，高效液相色譜法的洗脫條件為：流動(dòng)相為乙腈和0.1％磷酸水溶液，體積流量為1ml/min，洗脫梯度為：0-5min，10％乙腈；5-25min，10％-20％乙腈；25-30min，20％-24％乙腈；30-45min，24％-37％乙腈；45-75min，37％-85％乙腈。

23、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述步驟(2)中，高效液相色譜法的測(cè)試條件為：色譜柱為shimnexcs?c18色譜柱，所述色譜柱的尺寸為250mm×4.6mm，5μm；檢測(cè)的波長(zhǎng)為230nm和290nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣體積為10μl。

24、優(yōu)選地，所述基準(zhǔn)指紋圖譜具體為：以現(xiàn)有技術(shù)制劑的健脾清熱消痤方提取工藝得到的提取液為基準(zhǔn)樣品，經(jīng)上述的高效液相色譜檢測(cè)所述基準(zhǔn)樣品得到的、滿足對(duì)上述11種指標(biāo)成分定性要求的譜圖。采用該高效液相色譜法，得到的基準(zhǔn)指紋圖譜，與單一組分的陽性對(duì)照比較，可清晰識(shí)別出該組分指標(biāo)成分的特征峰；再與單一缺方組分的陰性對(duì)照比較，可觀察到僅該缺方組分的指標(biāo)成分的特征峰未檢出，符合指紋圖譜的定性要求。

25、本發(fā)明健脾清熱消痤方的指標(biāo)成分中，綠原酸、甘草苷、落新婦苷、橙皮苷、黃芩苷、丹酚酸b、黃芩素、漢黃芩素和歐前胡素在290nm下響應(yīng)值較大，芍藥苷和甘草酸銨在230nm下響應(yīng)值較大。在上述高效液相色譜方法條件下，分別單一建立11種指標(biāo)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)分析11種指標(biāo)成分的含量，方法的專屬性、重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性等評(píng)估均符合方法學(xué)驗(yàn)證要求。

26、上述的提取工藝、結(jié)合特定的高效液相色譜檢測(cè)方法，可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)健脾清熱消痤方中11種成分的準(zhǔn)確、精確的定性定量分析，方法準(zhǔn)確度、重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性均好，成功構(gòu)建了所述健脾清熱消痤方的指紋圖譜及提取液的質(zhì)控定量方法，為進(jìn)一步評(píng)估、優(yōu)化其提取工藝和質(zhì)控提供有效手段。

27、優(yōu)選地，所述步驟(3)中，主觀權(quán)重系數(shù)wjs的賦權(quán)方法如下：

28、對(duì)n個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)的相對(duì)重要程度進(jìn)行打分，根據(jù)以下公式(ⅲ)構(gòu)建矩陣a：

29、

30、其中aef代表評(píng)價(jià)指標(biāo)e相對(duì)于評(píng)價(jià)指標(biāo)f的重要性打分；

31、根據(jù)矩陣a和以下公式(ⅳ)計(jì)算得到初始權(quán)重系數(shù)wj′：

32、wj′＝(aj1aj2…ajn)1/n?????(ⅳ)；

33、進(jìn)一步根據(jù)公式(ⅴ)對(duì)wj′進(jìn)行歸一化：

34、

35、得到所述評(píng)價(jià)指標(biāo)的主觀權(quán)重系數(shù)wjs。

36、優(yōu)選地，所述步驟(3)中，所述評(píng)價(jià)指標(biāo)的重要性順序?yàn)椋壕G原酸>黃芩苷＝黃芩素＝漢黃芩素>落新婦苷>丹酚酸b＝橙皮苷＝芍藥苷>歐前胡素>甘草苷＝甘草酸銨>干膏率≈指紋圖譜相似度。

37、健脾清熱消痤方中，白術(shù)與枇杷葉共為君藥：生白術(shù)味苦、甘，善健脾益氣燥濕；枇杷葉味苦，性微寒，能清瀉肺熱。土茯苓、黃芩、桑白皮、漏蘆共為臣藥。土茯苓味甘、淡，性平，能解毒除濕；黃芩味苦，性寒，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效；桑白皮味甘，性寒，善清熱瀉肺；漏蘆味苦，性寒，能清熱解毒消癰；四者助君藥加強(qiáng)除濕清熱解毒消癰之力。南沙參、赤芍、白芷、陳皮、丹參共為佐藥：南沙參味甘，性寒，善益氣清肺；赤芍味苦，性微寒，具有清熱涼血和散瘀止痛的功效；白芷味辛，性溫，具有燥濕止痛和消腫排膿的功效；陳皮味苦、辛，具有理氣健脾和燥濕化痰的功效；丹參味苦，性微寒，善活血祛瘀以及涼血消癰止痛。此五味一則加強(qiáng)君臣藥益氣健脾除濕之力，一則加強(qiáng)理氣活血、涼血消癰之力。生甘草為使藥，既調(diào)和諸藥，又補(bǔ)脾益氣，清熱解毒。諸藥合用，共湊健脾除濕，清熱瀉肺，解毒消癰之效。根據(jù)健脾清熱消痤方所選指標(biāo)成分的含量，并結(jié)合君臣佐使原則，將評(píng)價(jià)指標(biāo)分為7個(gè)層次，確定上述的優(yōu)先順序。

38、采用上述7個(gè)層次的主觀賦權(quán)重要性順序，列出矩陣a，對(duì)矩陣a進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，得到的ci為0.033，一致性比例(cr＝ci/ri；ri為自由度指標(biāo))為0.021，均小于0.1。該矩陣具有一致性，矩陣合理，可用于健脾清熱消痤方提取工藝的評(píng)價(jià)指標(biāo)賦權(quán)。

39、優(yōu)選地，所述步驟(3)中，客觀權(quán)重系數(shù)wjo的賦權(quán)方法如下：

40、對(duì)m個(gè)提取實(shí)驗(yàn)建立原始數(shù)據(jù)矩陣將所述r根據(jù)以下公式(ⅵ)轉(zhuǎn)化為概率矩陣pij：

41、

42、根據(jù)以下公式(ⅶ)計(jì)算所述評(píng)價(jià)指標(biāo)的信息熵hj：

43、

44、進(jìn)一步根據(jù)以下公式(ⅷ)計(jì)算得到所述評(píng)價(jià)指標(biāo)的客觀權(quán)重系數(shù)wjo：

45、

46、優(yōu)選地，所述步驟(3)中，評(píng)價(jià)指標(biāo)的綜合權(quán)重分別為：綠原酸16.81％、芍藥苷3.95％、甘草苷2.5％、落新婦苷13.65％、橙皮苷4.42％、黃芩苷9.02％、丹酚酸b?4.25％、黃芩素12.95％、甘草酸銨3.55％、漢黃芩素20.93％、歐前胡素5.21％、指紋圖譜相似度1.83％、干膏得率0.93％。

47、經(jīng)過對(duì)加水量、煎煮提取的時(shí)間和提取總次數(shù)的正交實(shí)驗(yàn)，結(jié)合根據(jù)上述重要性順序進(jìn)行的ahp-熵值混合加權(quán)法，分析得到綜合權(quán)重。

48、第二方面，本發(fā)明提供了上健脾清熱消痤方提取工藝的評(píng)價(jià)方法得到的健脾清熱消痤方提取工藝，其包括以下步驟：

49、s1.向所述健脾清熱消痤方中加入10倍重量的水浸泡，然后煎煮30min，過濾得到濾液和藥渣；

50、s2.對(duì)所述藥渣重復(fù)s1所述的加水浸泡、煎煮和過濾操作2次，合并所述濾液，得到提取液。

51、根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果可知各因素對(duì)健脾清熱消痤方提取工藝的影響力為提取次數(shù)>加水量>提取時(shí)間，根據(jù)上述ahp-熵值混合加權(quán)法計(jì)算的綜合評(píng)分結(jié)果結(jié)合實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)需要節(jié)省物料和能耗的同時(shí)保證質(zhì)量，調(diào)整最優(yōu)提取工藝參數(shù)。

52、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

53、本發(fā)明通過確定健脾清熱消痤方適宜的指標(biāo)成分，對(duì)健脾清熱消痤方基準(zhǔn)樣品的指標(biāo)成分進(jìn)行高效液相色譜分析，構(gòu)建得到健脾清熱消痤方的指紋圖譜，為健脾清熱消痤方提取液的檢測(cè)分析及提取工藝的科學(xué)評(píng)估、優(yōu)化提供可行性；所選用的評(píng)價(jià)指標(biāo)兼顧對(duì)組方提取的有效性和工藝本身的穩(wěn)定性；且在評(píng)價(jià)綜合評(píng)分中結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的ahp-熵值混合加權(quán)法，明確各個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)在質(zhì)量控制體系中的權(quán)重系數(shù)，最終得到便捷準(zhǔn)確、可靠性高的綜合評(píng)價(jià)方法，建立評(píng)價(jià)及優(yōu)化體系。