一種不完全抗體篩查膠體金試劑盒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于抗體檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種不完全抗體篩查膠體金試劑盒及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著輸血技術(shù)的發(fā)展，由AB0血型鑒定錯誤引起的速發(fā)性溶血反應發(fā)生率顯著減 少，而由于輸血或妊娠免疫產(chǎn)生的免疫抗體引起的遲發(fā)性溶血反應還時有發(fā)生。為了保證 患者的臨床輸血安全，患者輸血前需進行抗體篩查，借W發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不完全抗體，對 臨床安全輸血具有重要的意義。
[0003] 不完全抗體篩查臨床意義；雖然不規(guī)則抗體在正常人群中檢出率為0. 3%?2%， 但它是引起遲發(fā)性免疫反應的主要原因。患者一旦輸入具有相應抗原的紅細胞，抗原、抗體 發(fā)生免疫性結(jié)合，使輸入的紅細胞發(fā)生溶解，即發(fā)生溶血性輸血反應?；颊叱霈F(xiàn)發(fā)熱、貧血、 黃痘和血紅蛋白尿，嚴重時甚至危及其生命。
[0004] 不規(guī)則抗體篩查方法有多種，目前市面上的主要檢測方法有；鹽水法，酶法，抗人 球蛋白法，微柱凝膠法，上述方法大多具有檢測時間長，操作不方便的缺點（通常先37C水 浴30分鐘，再生理鹽水洗涂3次，然后離也觀察。），因為都要用到篩查紅細胞，試劑要保存 在2-8C下，隨著保存時間延長，紅細胞抗原活性會降低且出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，導致篩查紅細胞 試劑的質(zhì)量極其不穩(wěn)定，且有效期不超過3個月。另外還有比較相近的方法是磁珠酶免疫 分析法進行血型抗體篩檢，將新鮮篩檢紅細胞制備成磁化篩檢細胞試劑，檢測時將待檢血 清和磁化篩檢細胞賠育后，然后再與堿性磯酸酶標記的抗人球蛋白賠育，加入底物顯色，終 止后借助酶標儀讀值，判斷結(jié)果，其過程需要洗涂至少6次和賠育3次，同樣檢測時間較長 (60分鐘W上），操作繁雜（需要反復賠育及洗涂），且需要大型輔助設備（酶標儀），其試 劑由磁化的篩檢細胞試劑組成，因此也需2-8C保存，有效期通常也不超過3個月。上述檢 測方法的缺陷極大地限制了該些方法在實際臨床中的應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種不完全抗體篩查膠體金試劑盒。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述不完全抗體篩查膠體金試劑盒的制備方法
[0007] 本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：
[0008] -種不完全抗體篩查膠體金試劑盒，包括：第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、第二紅 細胞膜抗原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗原金粒子溶液，第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、 第二紅細胞膜抗原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜可W有交叉，但不 能完全一致，共包括 D、C、E、C、e、化a、JK\ M、N、S、S、巧a、Fyb、Di。、K、k、Le。、Leb和 P1 抗 原，但不局限于此；且第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、第二紅細胞膜抗原金粒子溶液和第H 紅細胞膜抗原金粒子溶液所源自的紅細胞為在直接抗人球蛋白試驗為陰性的健康人成人0 型紅細胞；
[0009] 第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、第二紅細胞膜抗原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗 原金粒子溶液的溶劑均為如下配方的基礎(chǔ)液：
[0010] Iris 3.5 ?4.5g 巧樣酸鋼 2.0?3.0g 濃鹽酸 1.5?2.0niL 酪蛋白 3.0?8.0g 聚乙?guī)⒒?1.0?2.0g 庶糖 10.0?30.0g PEG20000 0.5?2.0g 疊氮鋼 0.5?l.Og
[0011] 超純水定容至1L。
[0012] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述第一紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜為 D、C、E、e、化a、jk\ M、N、S、巧3、Di。、k、Leb和 P1 抗原。
[0013] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述第二紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜為 D、E、C、化a、M、S、巧。、K、k、Le。和 Le b抗原。
[0014] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述第H紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜為 D、C、E、C、e、N、S、Fya、Fyb、k、Le。和 P1 抗原。
[0015] 上述試劑盒的制備方法包括如下步驟：
[0016] (1)氯金酸在還原劑的作用下，聚合成大小為40?60nm的膠體金顆粒，上述還原 劑為構(gòu)稼酸軸、白磯、抗壞血酸和稼酸中的至少一種；
[0017] (2)通過通過單克隆IgM抗體或多克隆抗體對在直接抗人球蛋白試驗為陰性的健 康人成人0型紅細胞進行檢測鑒定，獲得共同覆蓋D、C、E、c、eJka、jK\M、N、S、s、Fya、Fyb、 Dia、K、k、Lea、Leb和P1抗原的第一紅細胞、第二紅細胞和第H紅細胞；
[0018] (3)采用0. 1%的化Cl2溶液分別破碎第一紅細胞、第二紅細胞和第H紅細胞，離 也棄上清、超純水洗涂，離也棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)，即分別得到第 一紅細胞膜抗原提取物、第二紅細胞膜抗原提取物和第二紅細胞膜抗原提取物；
[0019] (4)將步驟（1)所得的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)抑至5. 5?6. 5,再分別與步驟（3) 獲得的第一紅細胞膜抗原提取物、第二紅細胞膜抗原提取物和第二紅細胞膜抗原提取物反 應，反應結(jié)束后離也棄上清，所得沉淀分別為第一紅細胞膜抗原金粒子、第二紅細胞膜抗原 金粒子和第H紅細胞膜抗原金粒子；
[0020] (5)將步驟（4)所得的第一紅細胞膜抗原金粒子、第二紅細胞膜抗原金粒子和第 H紅細胞膜抗原金粒子分別用所述基礎(chǔ)液復溶，即得所述第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、 第二紅細胞膜抗原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗原金粒子溶液；
[0021] (6)用0. 1?0. 5%的Triton X-100溶液浸潰反應板后，將上述第一紅細胞膜抗 原金粒子溶液、第二紅細胞膜抗原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗原金粒子溶液分別分裝于 對應的反應孔中，密封保存。
[0022] 所述試劑盒為干式試劑盒，所述第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、第二紅細胞膜抗 原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗原金粒子溶液均干燥固定在反應孔上，其基礎(chǔ)液配方為：
[0023] Tris 3.5 ?4.5g 巧樣酸鋼 2.0~3.0g 濃鹽酸 1.5?2.0mL 酪蛋白 3.0?8.0g 聚乙?guī)⒒?1.0?2.0g 藤糖 40.0?60雌 PEG20000 0.5?2.0g 疊氮鋼 0.5?l.Og 牛血清白蛋白 2.0?6.0g
[0024] 超純水定容至1L。
[0025] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述第一紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜為 D、C、E、e、化a、jk\ M、N、S、巧3、Di。、k、Leb和 P1 抗原。
[0026] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述第二紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜為 D、E、C、化a、M、S、巧。、K、k、Le。和 Le b抗原。
[0027] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述第H紅細胞膜抗原金粒子溶液的抗原譜為 D、C、E、C、e、N、S、Fya、Fyb、k、Le。和 P1 抗原。
[0028] 上述干式試劑盒的制備方法包括如下步驟：
[002引 （1)氯金酸在還原劑的作用下，聚合成大小為40?60nm的膠體金顆粒，上述還原 劑為構(gòu)稼酸軸、白磯、抗壞血酸和稼酸中的至少一種；
[0030] (2)通過通過單克隆IgM抗體或多克隆抗體對在直接抗人球蛋白試驗為陰性的健 康人成人0型紅細胞進行檢測鑒定，獲得共同覆蓋D、C、E、c、eJka、jK\M、N、S、s、Fya、Fyb、 Dia、K、k、Lea、Leb和P1抗原的第一紅細胞、第二紅細胞和第H紅細胞；
[0031] (3)采用0. 1%的化Cl2溶液分別破碎第一紅細胞、第二紅細胞和第H紅細胞，離 也棄上清、超純水洗涂，離也棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)，即分別得到第 一紅細胞膜抗原提取物、第二紅細胞膜抗原提取物和第二紅細胞膜抗原提取物；
[0032] (4)將步驟（1)所得的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)抑至5. 5?6. 5,再分別與步驟（3) 獲得的第一紅細胞膜抗原提取物、第二紅細胞膜抗原提取物和第二紅細胞膜抗原提取物反 應，反應結(jié)束后離也棄上清，所得沉淀分別為第一紅細胞膜抗原金粒子、第二紅細胞膜抗原 金粒子和第H紅細胞膜抗原金粒子；
[0033] (5)將步驟（4)所得的第一紅細胞膜抗原金粒子、第二紅細胞膜抗原金粒子和第 H紅細胞膜抗原金粒子分別用所述基礎(chǔ)液復溶，即得所述第一紅細胞膜抗原金粒子溶液、 第二紅細胞膜抗原金粒子溶液和第H紅細胞膜抗原金粒子溶液；
[0034] 做用0. 1?0. 5%的Triton X-100溶液浸潰反應板后，將上述第一紅細胞膜抗 原金粒子溶液、第