多項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種多項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)有的七項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)試劑盒(免疫熒光法)是熒光素標(biāo)記的抗體與細(xì)胞上的病毒抗原結(jié)合，形成抗體抗原復(fù)合物，在熒光顯微鏡下觀察呈現(xiàn)綠色熒光的細(xì)胞個(gè)數(shù)。
[0003]主要技術(shù)缺陷:(I)樣本處理過(guò)程復(fù)雜，樣本需要多次離心、洗滌去除黏液層，制成細(xì)胞懸濁液；(2)檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，時(shí)間比較長(zhǎng)需要1-2個(gè)小時(shí)。(3)需要使用熒光顯微鏡，儀器昂貴，并且需要技術(shù)人員操作。(4)定性檢測(cè)到樣本中的有無(wú)病毒，不能確定病毒數(shù)量。(5)只能檢測(cè)感染細(xì)胞的病毒，不能檢測(cè)到樣本中游離的病毒；當(dāng)少數(shù)病毒感染細(xì)胞時(shí)，可能因感染的病毒數(shù)量較少，未能觀察到綠色熒光細(xì)胞，出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種新的多項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)操作簡(jiǎn)單；檢測(cè)用時(shí)短，操作簡(jiǎn)便；檢測(cè)特異性強(qiáng)；靈敏度高的目的。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取下述技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
多項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)試劑盒，包括樣品抽提液，樣品管和多聯(lián)檢試劑板，
多聯(lián)檢試劑板包括連接板和至少一個(gè)單一試劑板；
單一試劑板包括卡板和試劑條，試劑板的外殼為卡板，試劑條位于卡板內(nèi)部；
卡板的一端設(shè)有連接部，連接部與連接板可拆卸連接；
卡板上表面設(shè)有加樣孔和檢測(cè)窗口；
每個(gè)試劑條包括PVC板，層析膜，樣品墊，結(jié)合墊和吸水材料；
卡板上的加樣孔位于樣品墊之上，
每個(gè)試劑條的結(jié)合墊上固定有至少一種熒光標(biāo)記的呼吸道病原體的單克隆抗體，層析膜上包含有質(zhì)控C線，至少一條檢測(cè)T線，質(zhì)控線和檢測(cè)線均位于卡板的檢測(cè)窗口內(nèi)，C線固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體，每條T線均含有一種與結(jié)合墊上熒光標(biāo)記抗體相對(duì)應(yīng)的抗體。
[0006]根據(jù)不同需要，本發(fā)明可以做成不同數(shù)目的多聯(lián)病原體試劑盒。
[0007]進(jìn)一步，試劑盒還包括樣品管支架和棉簽。
[0008]進(jìn)一步，卡板的連接部為一凹槽，所述凹槽設(shè)置在卡板一端的側(cè)表面上；連接板設(shè)有與凹槽相對(duì)應(yīng)的凸起。
[0009]進(jìn)一步，所述連接板的凸起長(zhǎng)度為凹槽長(zhǎng)度的至少一倍。
[0010]進(jìn)一步，樣品抽提液為磷酸緩沖液、Tris緩沖液、硼酸緩沖液中的一種。
[0011]進(jìn)一步，所述樣品抽提液中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的表面活性劑TritonX-100。
[0012]本發(fā)明還提供一種多項(xiàng)呼吸道病原體的檢測(cè)方法，包括以下步驟: 步驟a，采取待測(cè)樣本；
步驟b，使用上述的試劑盒，將取出的樣品放入樣品管中，并加入樣品抽提液混合均勻；
步驟C，分別在每個(gè)單一試劑板的加樣孔中滴加步驟b中混合均勻的待測(cè)樣品液進(jìn)行反應(yīng)；也可根據(jù)待測(cè)病原體的種類選取相應(yīng)數(shù)目的試劑板；
步驟d，將反應(yīng)后的試劑板插入熒光免疫分析儀器中進(jìn)行檢測(cè)，得到檢測(cè)結(jié)果。
[0013]進(jìn)一步，步驟b中加入的樣品抽提液體積與樣品體積比為1:1。
[0014]進(jìn)一步，步驟d中儀器的檢測(cè)波段為激發(fā)光波長(zhǎng)365nm，發(fā)射光波長(zhǎng)610nm。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明的試劑盒和檢測(cè)方法是采用熒光免疫層析技術(shù)，其基本原理是免疫層析檢測(cè)方法和熒光標(biāo)記技術(shù)的結(jié)合，產(chǎn)品是采用的是抗原抗體反應(yīng)方法，即將待測(cè)抗原相應(yīng)的抗體固定于載體T線上，同時(shí)將熒光標(biāo)記好的另一個(gè)抗體固定于結(jié)合墊上。當(dāng)樣本中含有待檢測(cè)物質(zhì)時(shí)，待檢測(cè)物質(zhì)和固定在結(jié)合墊上的熒光標(biāo)記抗體反應(yīng)，在層析至固定于T線位置上的抗體處，和該抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，在激發(fā)光的作用下，在T線位置有熒光條帶出現(xiàn)，熒光條帶的強(qiáng)弱與待測(cè)物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系。
[0016]試劑板可以拆卸，即可同時(shí)檢測(cè)多種呼吸道病原體，也可檢測(cè)單一一種病原體。且拆卸下單一的試劑板檢測(cè)時(shí)，不會(huì)對(duì)其他的試劑板造成交叉污染。
[0017]應(yīng)用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法時(shí)，樣本無(wú)需特殊處理，只需要抽提液稀釋樣本即可。且通過(guò)抽提液處理可以釋放出細(xì)胞中的病原體。檢測(cè)用時(shí)僅需要15-20min，時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便。使用的配套儀器價(jià)格低廉，操作方便。
[0018]本產(chǎn)品以病原體的抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，加之熒光物質(zhì)強(qiáng)化特異性反應(yīng)效果，大大提高了產(chǎn)品的性能，特異性強(qiáng)，靈敏度高。
[0019]在患者感染的初期(2-3天左右)，僅有少量的病原體時(shí)。本試劑盒較高的特異性和靈敏度，能夠準(zhǔn)確判斷病原體的陽(yáng)性感染情況，在感染初期即可確定是否感染各種病原體，同時(shí)可以定量檢測(cè)樣本中的病原體數(shù)量，為治療提供依據(jù)。
【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中七聯(lián)檢試劑板的立體示意圖；
圖2是比較例的檢測(cè)結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)闡述。
[0022]實(shí)施例1
一種七項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)試劑盒
該試劑盒包括七聯(lián)檢試劑板，樣品抽提液，樣品管，棉簽和樣品管架。
[0023]其中樣品抽提液為磷酸緩沖液，其濃度是ΙΟηΜ，并含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的表面活性劑TritonX-1OO0
[0024]樣品管為普通樣品管即可，無(wú)特殊要求。
[0025]棉簽用于輔助樣本的采集，適用于鼻腔取樣。
[0026]樣品管架用于支撐樣品管，便于操作。
[0027]七聯(lián)檢試劑板如圖1所示，包括試劑板I，試劑板2，試劑板3和連接板4 ;三個(gè)試劑板結(jié)構(gòu)相同，均一端與連接板4相連。
[0028]每個(gè)單一試劑板包括卡板和試劑條。
[0029]其中卡板包括上下兩塊，兩塊卡板合在一起形成試劑板的外殼，試劑條位于兩塊卡板中間的空腔內(nèi)。
[0030]卡板的一端設(shè)有連接部31，連接部31與連接板4可拆卸連接。本實(shí)施例中，卡板的連接部31為一凹槽，所述凹槽設(shè)置在卡板一端的側(cè)表面上。凹槽的開口寬度小于凹槽底部寬度，可以保證卡板與連接板4穩(wěn)固連接，而不會(huì)輕易脫離。
[0031]連接板4設(shè)有與凹槽相匹配的凸起，凸起長(zhǎng)度為單個(gè)凹槽長(zhǎng)度的三倍。通過(guò)凹槽與凸起的配合，實(shí)現(xiàn)卡板和連接板4的可拆卸連接。
[0032]為了便于握持，連接板4上表面開設(shè)多個(gè)握持槽41。
[0033]卡板的上表面設(shè)有加樣孔12和檢測(cè)窗口 13。
[0034]其中加樣孔12對(duì)應(yīng)試紙條的加樣位置，檢測(cè)窗口 13對(duì)應(yīng)試紙條的檢測(cè)位置。
[0035]試劑條為免疫層析試紙條，包括PVC板，層析膜，樣品墊，結(jié)合墊和吸水材料。
[0036]吸水材料位于層析膜樣品流動(dòng)方向的末端，確保產(chǎn)品能夠順利快速的通過(guò)層析膜。
[0037]結(jié)合墊為玻璃纖維，每個(gè)試劑板的結(jié)合墊上面固定有兩種或者三種熒光標(biāo)記的呼吸道病原體單克隆抗體。
[0038]層析膜為硝酸纖維素膜，層析膜上包含檢測(cè)線T和質(zhì)控線C，檢測(cè)線T和質(zhì)控線C均位于卡板的檢測(cè)窗口內(nèi)，其中每個(gè)試劑板T線位置固定有一種與結(jié)合墊上熒光標(biāo)記的病毒抗體相對(duì)應(yīng)的另一個(gè)病毒單克隆抗體，C線位置固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體。
[0039]具體的，本試劑盒可以檢測(cè)的病毒分別為:人流感病毒A (FluA)，人流感病毒B (FluB)，腺病毒(ADV)，呼吸道合胞病毒(RSV)，人副流感病毒(HPIV1)，人副流感病毒(即1￥2)，人副流感病毒(即1￥3)。
[0040]試劑板I中的試劑條上的結(jié)合墊固定有焚光標(biāo)記的甲型流感(FluA)單克隆抗體和熒光標(biāo)記乙型流感(FluB)單克隆抗體。層析膜上包含有質(zhì)控C線，檢測(cè)Tl線和檢測(cè)T2線，質(zhì)控線和檢測(cè)線均位于卡板的檢測(cè)窗口內(nèi)。C線固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體。Tl線含有另一個(gè)FluA抗體，T2線含有另一個(gè)FluB抗體。
[0041]試劑板2的試劑條上的結(jié)合墊固定有熒光標(biāo)記的腺病毒(ADV)單克隆抗體和熒光標(biāo)記合胞病毒(RSV)單克隆抗體。層