一種茶葉或茶青中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種茶葉或茶青中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前可查閱的茶葉中的農(nóng)藥快速檢測(cè)方法有以下兩種，但都存在著檢測(cè)步驟煩 瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，及所用試劑有毒有害的問(wèn)題，因此無(wú)法在基層實(shí)驗(yàn)室和種植、生產(chǎn)、銷售現(xiàn)場(chǎng)推 廣應(yīng)用。下面簡(jiǎn)單介紹兩種方法的操作步驟加以說(shuō)明： 1. 2002年發(fā)布了一個(gè)推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《茶中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的簡(jiǎn)易 檢驗(yàn)方法酶抑制法》GB/T18625-2002,但因?yàn)椴枞~樣品會(huì)對(duì)測(cè)試產(chǎn)生特殊的干擾，分析方 法中仍無(wú)法避免冗長(zhǎng)繁雜、并且耗費(fèi)大量有機(jī)試劑的提取、凈化等前處理步驟，其分析操作 時(shí)間甚至不會(huì)少于在實(shí)驗(yàn)室儀器分析方法。因此這個(gè)分析方法并不能很好解決實(shí)際應(yīng)用中 的問(wèn)題。
[0003] 其分析步驟是： (1)樣品提?。憨? 5g茶加5ml丙酮浸泡5分鐘再加0. 2g碳酸鈣。
[0004] (2)氧化：取0. 5mL丙酮提取液于5mL燒杯中，吹干后加入0. 3mL緩沖液溶解。加 入氧化劑(預(yù)先配制）〇. lmL，搖勾后放置lOmin，再加入還原劑(預(yù)先配制）0. 3mL搖勾。
[0005] (3)酶解：加入酶液(預(yù)先制備）0. 2mL搖勾，放置lOmin，再加入底物0. 2mL，顯色 劑(預(yù)先配制）〇. lmL，放置5min后測(cè)定。
[0006] (4)測(cè)定：在分光光度計(jì)波長(zhǎng)調(diào)至600nm測(cè)定，當(dāng)測(cè)定值在I. 0以下時(shí)，為未檢出。 當(dāng)測(cè)定值在I. 〇~1. 3之間時(shí)，為可能檢出，但殘留量較低。當(dāng)測(cè)定值為1. 3以上時(shí)，為檢 出。測(cè)定值越高，說(shuō)明農(nóng)藥殘留量越高。
[0007] 2、另有資料顯示使用農(nóng)藥速測(cè)卡測(cè)定茶葉中的農(nóng)藥殘留 操作作步驟如下： (1)樣品處理 綠茶樣品：取2g綠茶適當(dāng)剪碎，放入帶蓋瓶中，加入IOmL純凈水，充分搖勻后，靜止 15min〇
[0008] 鐵觀音、茉莉花、烏龍、普洱、紅茶樣品：取2g茶葉適當(dāng)剪碎，放入帶蓋瓶中，加入 IOmL純凈水，加入5滴試劑A充分搖勻，靜止15min。
[0009] (2)預(yù)反應(yīng) 綠茶樣品：取3mL浸泡液加入反應(yīng)管中，搖勻；直接過(guò)濾(或4000rpm離心3min)，取ImL 濾液或上清液于小燒杯中，用酸性調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值為4~5之間。
[0010] 鐵觀音、茉莉花、烏龍、普洱、紅茶樣品：取3mL浸泡液加入反應(yīng)管中，搖勻；靜置 3min，取ImL上清液或?yàn)V液于小燒杯中，用酸性調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值為4~5之間。
[0011] (3)過(guò)柱 先取ImL純凈水加入層析柱中，用針管加壓排空后，再取ImL上述處理液加入層析柱 中，用針管緩慢加壓，（棄去第一滴）收集無(wú)色澄清濾液即為待測(cè)液。滴2滴（SOul)待測(cè)液 于速測(cè)卡白色藥片上。
[0012] (4)反應(yīng) 將速測(cè)卡置于40°C恒溫裝置中放置IOmin進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，預(yù)反應(yīng)后恒溫裝置恒溫3min， 使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)，根據(jù)白色藥片的顏色變化判斷結(jié)果。每批測(cè)定應(yīng)設(shè) 一個(gè)純凈水或蒸餾水的空白對(duì)照卡。
[0013] 以上兩種方法在具體操作時(shí)步驟煩瑣，國(guó)標(biāo)法使用的試劑繁多，既有有機(jī)溶劑，又 有氧化劑和還原劑。許多試劑還須預(yù)先配制。而用農(nóng)藥速測(cè)卡時(shí)其操作要過(guò)濾樣品提取液， 還須用酸調(diào)節(jié)待測(cè)液的PH，并且要經(jīng)過(guò)層析柱處理。因此在實(shí)際應(yīng)用中不能達(dá)到快速簡(jiǎn)便 的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的目的在于提供一種茶葉或茶青中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，針對(duì)茶葉或茶青 樣品中的內(nèi)源物質(zhì)對(duì)測(cè)試產(chǎn)生特殊干擾，研發(fā)出一種專用于提取茶葉中的殘留農(nóng)藥的農(nóng)藥 提取試劑，用此試劑提取茶葉中的農(nóng)藥殘留，無(wú)需調(diào)節(jié)PH、過(guò)層析柱以及氧化過(guò)程，所用 試劑安全環(huán)保且用量少。首創(chuàng)將膽堿酯酶與DTNB復(fù)合成Et試劑，在檢測(cè)時(shí)直接將其與樣 品待測(cè)液進(jìn)行酶抑制反應(yīng)，使得操作過(guò)程中少加一種試劑，檢測(cè)方法更加簡(jiǎn)便，并減少實(shí)驗(yàn) 器材的使用。該方法簡(jiǎn)單快速，從樣品處理到報(bào)告檢測(cè)結(jié)果全流程20分鐘，并可實(shí)現(xiàn)多通 道同時(shí)檢測(cè)。
[0015] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種茶葉或茶青中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，茶葉或茶青中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘 留的檢測(cè)步驟： (1) 試劑的配制： Et試劑：無(wú)需配制，直接開(kāi)封啟用； Sub試劑：在10 mL蒸餾水中加入10-60mg碘化硫代乙酰膽堿，搖勾使之溶解； 農(nóng)藥提取液：在20-80mL磷酸鹽或碳酸鹽緩沖溶液中加入50-300mL丙三醇，混勻后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混勻； 緩沖液：在500mL蒸餾水中加入5-15g磷酸氫二鈉和0. 2-0. 8g磷酸二氫鉀，混勻； (2) 檢測(cè) 樣品提?。?稱取0. 5克茶葉樣品，加入1.0 mL農(nóng)藥提取液，使樣品充分浸潤(rùn)并靜置10分鐘，底部溶 液即為待測(cè)液； 對(duì)照測(cè)定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L農(nóng)藥提取液，搖勻，靜置10 分鐘，加入100 μ L Sub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時(shí)放在農(nóng)藥殘留測(cè)試儀上進(jìn)行對(duì) 照測(cè)試； 樣品測(cè)定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L待測(cè)液，搖勻，靜置10分 鐘，加入100 μ LSub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時(shí)放在農(nóng)藥殘留測(cè)試儀上進(jìn)行樣品 測(cè)試； 測(cè)定結(jié)果的判定： 當(dāng)檢測(cè)結(jié)果的酶抑制率讀數(shù)超過(guò)50%時(shí)，表明樣品農(nóng)藥殘留毒性可能超過(guò)安全標(biāo)準(zhǔn)， 應(yīng)當(dāng)確認(rèn)操作步驟無(wú)誤、儀器工作正常、試劑沒(méi)有污染失效，重新進(jìn)行對(duì)照測(cè)試并對(duì)此樣品 進(jìn)行2次以上的重復(fù)檢測(cè)，如檢測(cè)結(jié)果重復(fù)并仍然超過(guò)50%，則需用氣相色譜作進(jìn)一步的確 認(rèn)。
[0016] 所述的Et試劑為膽堿酯酶和5, 5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）的混合液，兩者的 重量比為1 : 40~100。
[0017] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：針對(duì)茶葉或茶青樣品中的內(nèi)源物質(zhì)對(duì)測(cè)試產(chǎn)生特殊干 擾，研發(fā)出一種專用于提取茶葉中的殘留農(nóng)藥的農(nóng)藥提取試劑，用此試劑提取茶葉中的農(nóng) 藥殘留，無(wú)需調(diào)節(jié)pH、過(guò)層析柱以及氧化過(guò)程，所用試劑安全環(huán)保且用量少。首創(chuàng)將膽堿 酯酶與DTNB復(fù)合成Et試劑，在檢測(cè)時(shí)直接將其與樣品待測(cè)液進(jìn)行酶抑制反應(yīng)，使得操作過(guò) 程中少加一種試劑，檢測(cè)方法更加簡(jiǎn)便，并減少實(shí)驗(yàn)器材的使用。該方法簡(jiǎn)單快速，從樣品 處理到報(bào)告檢測(cè)結(jié)果全流程20分鐘，并可實(shí)現(xiàn)多通道同時(shí)檢測(cè)。以3~8通道為例，每樣品 平均檢測(cè)時(shí)間只有3-8分鐘。
【具體實(shí)施方式】
[0018] -種茶葉或茶青中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，茶葉或茶青中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng) 藥殘留的檢測(cè)步驟： (1) 試劑的配制： Et試劑：