檢測(cè)IgM抗體的膠體金試紙條及試紙卡、制備和檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種試紙條，具體涉及一種檢測(cè)九項(xiàng)呼吸道感染病原體特異性IgM抗 體的膠體金試紙條，以及包括該膠體金試紙條的膠體金試紙卡及膠體金試劑盒，該膠體金 試紙條的制備方法，和使用該膠體金試紙條、膠體金試紙卡或膠體金試劑盒進(jìn)行檢測(cè)的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前通過(guò)免疫熒光試劑盒檢測(cè)樣品中的九項(xiàng)呼吸道病原體的特異性IgM抗體是 一種成熟的技術(shù)，但是所需時(shí)間較長(zhǎng)。例如，安圖生物公司九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體 檢測(cè)試劑盒采用間接免疫熒光法原理，在載玻片上（10孔/片）分別包被：1孔包被嗜肺軍 團(tuán)菌血清I型，2孔包被McCoy細(xì)胞中的肺炎支原體，3孔包被Q熱立克次體II相，4孔包被 肺炎衣原體（原生小體），5孔包被HEp-2細(xì)胞中的腺病毒，6孔包被HEp-2細(xì)胞中的呼吸道 合胞病毒，7孔包被LLC-MK2細(xì)胞中的甲型流感病毒，8孔包被LLC-MK2細(xì)胞中的乙型流感 病毒，9孔包被LLC-MK2細(xì)胞中的副流感病毒1，2和3型，10孔為質(zhì)控孔。除嗜肺軍團(tuán)菌， 載玻片中所有抗原都是從細(xì)胞培養(yǎng)物中獲得。簡(jiǎn)單步驟為：稀釋血清樣本（5min)-加入抗 人IgG吸附劑處理血清樣本，并離心，（20min)-在載玻片中加入所檢測(cè)血清樣本，并37°C 孵育90min -清洗并晾干15min -加兔抗人IgM-FITC結(jié)合物，并7°C孵育30min -清洗并 瞭干15min-加入封閉介質(zhì)并置于顯微鏡下觀察結(jié)果15min，所以檢測(cè)時(shí)間需要約3小時(shí)以 上。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中還有其他的檢測(cè)呼吸道病原體的試劑盒，但這些試劑盒及相關(guān)檢測(cè)方 法常需要擴(kuò)增樣品的核酸片段，有的需培養(yǎng)或制備相應(yīng)的探針溶液，有的還需使用大型儀 器設(shè)備，如質(zhì)譜儀、GeXP遺傳分析儀等進(jìn)行檢測(cè)。這會(huì)付出額外的培養(yǎng)時(shí)間和反應(yīng)時(shí)間，并 且要求有專(zhuān)業(yè)人員和昂貴的專(zhuān)業(yè)設(shè)備相配合才能得以實(shí)施，因而檢測(cè)成本高且效率較低。
[0004] 膠體金試紙條作為一種快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)技術(shù)，操作簡(jiǎn)便，一般15分鐘內(nèi)即可肉眼讀 出結(jié)果。然而，目前還未見(jiàn)在一個(gè)膠體金試紙條上同時(shí)檢測(cè)九項(xiàng)呼吸道病原體的特異性IgM 抗體的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 因此，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的上述缺陷，提供了一種特異性強(qiáng)、檢測(cè) 便捷、價(jià)格低廉的檢測(cè)九項(xiàng)呼吸道感染病原體特異性IgM抗體的膠體金試紙條，還提供了 包括該膠體金試紙條的膠體金試紙卡及膠體金試劑盒，以及該膠體金試紙條的制備方法和 使用該膠體金試紙條、試紙卡或試劑盒進(jìn)行檢測(cè)的方法。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)IgM抗體的膠體金試紙條，所述IgM抗 體為九項(xiàng)呼吸道感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試紙條包括在聚氯乙烯（PVC)底 板上依次貼附的樣品墊、結(jié)合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；所述結(jié)合物墊為包覆有兔抗人 IgM抗體-膠體金結(jié)合物的玻璃纖維膜；所述硝酸纖維素膜依次包被有9條檢測(cè)線和1條 質(zhì)控線，所述9條檢測(cè)線分別為肺炎支原體重組抗原、肺炎衣原體重組抗原、甲型流感病毒 抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺軍團(tuán)菌抗原、Q熱立克次體抗原、呼吸道合 胞病毒抗原和腺病毒抗原（下文中可分別簡(jiǎn)稱(chēng)為T(mén)l~T9線），所述質(zhì)控線為二抗（下文中 可簡(jiǎn)稱(chēng)為C線）。以上9條檢測(cè)線可以以任意順序排列而不影響檢測(cè)結(jié)果。
[0007] 本發(fā)明涉及的呼吸道感染病原體的相關(guān)介紹如下：
[0008] 肺炎支原體：肺炎支原體引起的肺炎在兒童和青少年中最為常見(jiàn)，可在呼吸道粘 膜上皮內(nèi)潛伏，部分患者無(wú)明顯癥狀，但大部分患者為顯性感染，在3歲以下兒童呼吸道感 染多見(jiàn)，成人以肺炎表現(xiàn)為主。肺炎支原體肺炎潛伏期為14~21天，起病緩慢，IgM抗體 一般在感染后1周出現(xiàn)，3~4周達(dá)高峰期，可持續(xù)3~6個(gè)月。
[0009] 肺炎衣原體：肺炎衣原體極易造成呼吸系統(tǒng)感染，特別是支氣管炎和肺炎，在老年 人中發(fā)病率較高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%，肺炎衣原體所感染所致的肺炎， 癥狀和體征無(wú)特異性，多數(shù)起病緩慢，潛伏期一般為30天左右，IgM抗體在發(fā)病2~3周出 現(xiàn)，一般來(lái)說(shuō)可持續(xù)存在2~6個(gè)月。
[0010] 流感病毒：它是流感的病原體，在具有潛在病理學(xué)的患者中會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的并發(fā)癥。 由于它易與其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期間臨床診斷很困難，因此實(shí)驗(yàn)室診斷顯得 非常重要。流感病毒感染的潛伏期一般為1~7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù) 2~3個(gè)月。
[0011]副流感：副流感病毒在2~4歲兒童中能引起喉氣管支氣管炎，潛伏期一般為2~ 7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)2~3個(gè)月。
[0012] 嗜肺軍團(tuán)菌：人最易感染嗜肺軍團(tuán)菌1型，非典型性肺炎常伴隨有全身癥狀。10% 的肺炎是由嗜肺軍團(tuán)菌1型所引起的，潛伏期一般為2~10天，IgM抗體存在感染后1周 出現(xiàn)，并可持續(xù)3~6個(gè)月。
[0013] Q熱立克次體：Q熱是由Q熱立克次體引起的全身疾病，會(huì)造成發(fā)熱，非典型肺炎， 肝炎或者心內(nèi)膜炎，潛伏期為2~38天，通常為12~19天，IgM抗體一般在感染后2周出 現(xiàn)，4~8周達(dá)高峰，可持續(xù)存在3~4個(gè)月。
[0014] 呼吸道合胞病毒：是兩歲以下幼兒呼吸道感染的主要病原體，在冬季爆發(fā)流行。潛 伏期為3~7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)。
[0015] 腺病毒：腺病毒是一種重要的呼吸道病原體，能引起上呼吸道疾病，伴隨有急驟發(fā) 熱和輕度呼吸道感染。腺病毒感染的潛伏期為2~14天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)。 可持續(xù)2~3個(gè)月。
[0016] 免疫球蛋白M(IgM)是人類(lèi)或者動(dòng)物體內(nèi)最重要的一種免疫球蛋白。當(dāng)機(jī)體感染 病原體后，在體內(nèi)，最早出現(xiàn)的是該病原體的特異性的IgM抗體，之后IgM濃度降低，特異性 的IgG抗體升高。因此，通過(guò)檢測(cè)機(jī)體內(nèi)病原體特異性的IgM抗體的存在與否，可以診斷人 或者動(dòng)物對(duì)該病原體是否有早期感染的可能。血清內(nèi)若檢測(cè)出病原體的特異性的IgM抗 體，證明該機(jī)體有近期感染的發(fā)生，如果能夠?qū)崿F(xiàn)早診斷、早診療，無(wú)疑對(duì)臨床醫(yī)生和患者 都是具有重要的意義。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的膠體金試紙條，其中，所述樣品墊為玻璃纖維膜。優(yōu)選地，所述吸水 墊為吸水紙。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的膠體金試紙條，其中，所述檢測(cè)線和質(zhì)控線的各相鄰線的間隔為 3~4mm，優(yōu)選為3mm ;優(yōu)選地，所述膠體金試紙條的寬度為3~5mm，優(yōu)選為4mm。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的膠體金試紙條，其中，所述樣品墊與結(jié)合物墊之間重疊1~2_，優(yōu) 選為1mm，所述結(jié)合物墊與硝酸纖維素膜之間重疊1~2mm，優(yōu)選為1mm，所述硝酸纖維素膜 與吸水墊之間重疊1~2mm，優(yōu)選為1mm 0
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的膠體金試紙條，其中，選用的二抗為羊抗兔IgG抗體。
[0021] 該膠體金試紙條的檢測(cè)原理大體為：在樣品墊滴加入待測(cè)樣品后，通過(guò)毛細(xì)作用， 待測(cè)樣品將結(jié)合物墊中的兔抗人IgM抗體-膠體金結(jié)合物溶解釋放出來(lái)并向吸水墊一端 的方向移動(dòng)。如果被檢測(cè)樣品中含有針對(duì)肺炎支原體、衣原體、甲型流感、乙型流感、副流 感、嗜肺軍團(tuán)菌、Q熱立克次體、呼吸道合胞病毒、腺病毒中的任何一種或者多種病原體對(duì)應(yīng) 的特異性的IgM抗體，則與金納米顆粒-兔抗人IgM抗體