用于治療乙肝的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞和富含血小板的血漿組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及脂肪干細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種脂肪干細(xì)胞用于治 療乙肝的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝病分為病毒性肝病和非病毒性肝炎。病毒性肝炎主要包括甲、乙、丙、丁、戊型病 毒性肝炎，非病毒性肝病主要包括酒精性肝病、藥物或毒物性肝病、新陳代謝異常性肝病、 脂肪性肝病。慢性乙型肝炎呈全球分布，可能導(dǎo)致包括肝功能失代償、肝硬化以及肝細(xì)胞癌 等疾病?；顒?dòng)性乙肝病毒（HBV)復(fù)制是肝損傷和疾病進(jìn)展的主要驅(qū)動(dòng)因素。
[0003] 重型乙型肝炎是感染HBV后導(dǎo)致的重型肝炎，其發(fā)病兇險(xiǎn)，進(jìn)展迅速，絕大部分患 者預(yù)后不良，可迅速出現(xiàn)大面積肝細(xì)胞壞死導(dǎo)致肝功能嚴(yán)重受損，肝臟代謝、排泄和解讀的 功能減退。從而導(dǎo)致機(jī)體免疫能力下降，造成惡性循環(huán)。目前臨床上缺乏有效的治療手段， 主要是血漿置換和肝移植，但由于供體缺乏，很多患者在等待移植供體期間死亡。因此，及 時(shí)有效的肝功能支持和促進(jìn)肝細(xì)胞再生可能幫助肝功能衰竭患者無(wú)需肝移植而自行恢復(fù) 或者度過(guò)等待移植的難關(guān)。
[0004] 傳統(tǒng)藥物a干擾素能夠有效地抑制病毒復(fù)制，療效相對(duì)持久，但其適用的人群范 圍窄，不良反應(yīng)發(fā)生率較高。而新一代的干擾素-聚乙醇化干擾素，它的療效略優(yōu)于普通干 擾素，但其仍然具有使用患者群窄，不良反應(yīng)發(fā)生率較高，價(jià)格較貴的缺點(diǎn)。拉夫米定是第 一個(gè)核苷類似物，能夠快速、持久抑制病毒復(fù)制，改善肝功能，延緩乙肝疾病進(jìn)展的藥物，但 其HBeAg血清轉(zhuǎn)陰率低。文獻(xiàn)報(bào)道服用拉米夫定1年HBeAg血清轉(zhuǎn)陰率為16 %左右，停藥 后容易復(fù)發(fā)、病毒不能徹底清除隨治療時(shí)間延長(zhǎng)，病毒耐藥突變的發(fā)生率增高（第1、2、3、 4年分別為14%、38%、49%、66% )。阿德福韋酯長(zhǎng)期治療耐藥發(fā)生率低，對(duì)拉米夫定耐藥 者仍有效，但其抗病毒作用較弱，起效慢，有潛在的腎毒性。恩替卡韋的抗病毒作用強(qiáng)，耐藥 率低，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)致癌性，且價(jià)格較貴。替比夫定抗病毒作用強(qiáng)，HBeAg轉(zhuǎn)換率高，但其 變異率較高，有肌酸激酶升高等副作用，上市時(shí)間短，抗病毒作用，長(zhǎng)期療效和安全性都有 待證實(shí)。核苷（酸）類似藥物均不能隨便停藥，長(zhǎng)期服用乙肝病毒輕易發(fā)生變異耐藥，也會(huì) 出現(xiàn)像流感樣、厭食、惡心、腹瀉、抑郁、心絞痛等副作用。而且，抗病毒治療只能抑制HBV復(fù) 制，不能徹底清除病毒，也無(wú)法修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細(xì)胞壞死。
[0005] 目前，乙肝的治療主要是抗病毒治療。而現(xiàn)階段的抗病毒藥物只能抑制HBV復(fù)制， 尚不能徹底清除病毒，也無(wú)法修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細(xì)胞壞死。因此感染乙肝病毒后容易形成 慢性乙肝，有可能導(dǎo)致肝硬化、肝癌等發(fā)生。
[0006] 綜上所述，本領(lǐng)域尚缺乏一種能夠有效治療乙型肝炎，特別是能夠徹底清除乙肝 病毒，修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細(xì)胞壞死的手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠有效治療乙型肝炎，特別是能夠徹底清除乙肝病 毒，修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細(xì)胞壞死的手段。
[0008] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞和富含血小板的血漿組合物的 用途，用于制備治療乙肝的藥物組合物。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞的含量為IXlO6/ ml-1 X 108/ml 〇
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞與所述富含血小板的 血漿的體積比為1:9~2:8。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞是傳代培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，在所述組合物中，主要活性成分僅為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞和富含 血小板的血漿。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括：脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、富含血小板的血 漿，和藥學(xué)上可接受的載體。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的載體是輸液劑載體和/或注射劑載體。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的治療包括選自下組的一項(xiàng)或多項(xiàng)指標(biāo)改善：
[0016] 乙肝表面抗原、乙肝表面抗體、乙肝e抗原、乙肝e抗體、乙肝核心抗體、乙肝病毒 DNA，和 ALT。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0018] (i) 80%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29 ;
[0019] (ii) 70%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73 ;
[0020] (iii) 60%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶105 ;
[0021] (iv) 70%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，90 %以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，80%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，70%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶105。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，80 %以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0027] (V)在細(xì)胞群中，10%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34 ;
[0028] (vi)在細(xì)胞群中，10%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，5%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，5%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，1%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，1%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述的富含血小板的血漿含有選自下組的細(xì)胞因子：干細(xì)胞 生長(zhǎng)因子（HGF)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)、血小板衍生因子（TOGF)、人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β (TGF-β)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF)、白介素-2 (IL-2)、白介素-10 (IL-10)、或其 任意組合。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，富含血小板的血漿中干細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF)的濃度彡0. 5ng/ ml 〇
[0035] 在另一優(yōu)選例中，富含血小板的血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)的濃度> 35pg/ ml，較佳地彡40pg/ml。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，富含血小板的血漿中人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGF-β)的濃度 > 150pg/ml，較佳地 > 180pg/ml。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，富含血小板的血漿中白介素-2(IL_2)的濃度彡15pg/ml，較佳 地彡20pg/ml，更佳地彡30pg/ml。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，富含血小板的血漿中白介素-IO(IL-IO)的濃度彡15pg/ml，較 佳地 > 20pg/ml，更佳地 > 30pg/ml，最佳地 > 40pg/ml。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述的富含血小板的血漿包括選自下組的一個(gè)或多個(gè)特征：
[0040] 紅細(xì)胞的濃度為彡5X 105/mL ;
[0041] 血小板濃度范圍為0. 5 X IO6-L 5 X IO1VmL ;
[0042] 白細(xì)胞和紅細(xì)胞的總濃度為彡10X105/mL。
[0043] 在另一優(yōu)選例中，所述富含血小板的血漿具有選自下組的一個(gè)或多個(gè)特征：
[0044] 血小板的濃度為5 X 107_5 X IOiVmL ;
[0045] 白細(xì)胞的濃度為彡5X IO5HiL ;
[0046] 紅細(xì)胞的濃度為彡5X105mL。
[0047] 在另一優(yōu)選例中，所述的富含血小板的血漿中含有一種或多種選自下組的細(xì)胞因 子：PDGF、TGF-3、VEGF。
[0048] 在另一優(yōu)選例中，所述的富含血小板的血漿中，
[0049] PDGF 的濃度為 400-700mg/ml ;較佳地為 500-600mg/ml。
[0050] TGF-β 為 1500-2300mg/ml ;較佳地為 1700-2100mg/ml ;更佳地為 1800-2000mg/ ml 〇
[0051] VEGF 為 700-1200pg/ml ;較佳地為 800-1100pg/ml ;更佳地為 900-1000pg/ml。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，所述的富含血小板的血漿中，
[0053] PDGF 的濃度為 543. 04±26· I (mg/ml);
[0054] TGF-β 為 1873. 03±81· 51 (mg/ml);
[0055] VEGF (pg/ml)為 937. 70 ± 27. 38。
[0056] 本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于預(yù)防或治療肝炎的藥物組合物，所述的藥物 組合物包括：有效量的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞和富含血小板的血漿，以及藥學(xué)上可接受的載體； 較佳地，所述的藥物組合物為靜脈注射試劑。
[0057] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的載體包括（但并不限于）：鹽水、緩沖液、 葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。
[0058] 在另一優(yōu)選例中，所述的靜脈注射試劑中脂肪間