本發(fā)明提供了與藥物rna制劑相關(guān)的技術(shù)。本發(fā)明尤其提供了用于提供適合于施用不同劑量rna的藥物rna制劑、適合于施用不同劑量rna的藥物rna制劑和系統(tǒng)的技術(shù)，以及使用用于施用不同劑量rna的藥物rna制劑的方法。本發(fā)明還提供了特定的藥物rna制劑，包括某些施用形式(例如，單位劑量形式、即用形式、運(yùn)輸形式等)。

背景技術(shù)：

1、除了眾所周知的編碼生物活性蛋白質(zhì)的能力之外，核酸(諸如dna和rna)還具有其他使它們成為有吸引力的治療劑的顯著特性?；诤怂岬闹委焺┮子谥圃烨蚁鄬?duì)便宜。

2、一般來(lái)說，dna比rna更穩(wěn)定，但具有一些潛在的安全風(fēng)險(xiǎn)，諸如誘導(dǎo)抗dna抗體和將轉(zhuǎn)基因整合到宿主基因組中。

3、使用rna將外來(lái)遺傳信息遞送至靶細(xì)胞中提供了有吸引力的dna的替代品。rna的優(yōu)勢(shì)包括瞬時(shí)表達(dá)和非轉(zhuǎn)化特征。rna不需要核浸潤(rùn)即可表達(dá)，而且不會(huì)整合到宿主基因組中，從而消除了腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

4、編碼抗原的mrna可用作疫苗，以激發(fā)針對(duì)感染性疾病的保護(hù)性免疫。covid-19大流行展現(xiàn)了用于疫苗接種的rna技術(shù)的實(shí)用性和優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樵谒姓陂_發(fā)的covid-19疫苗中，前兩種獲得fda緊急使用授權(quán)的疫苗都是基于rna的。針對(duì)covid-19大流行的生物技術(shù)突出了mrna疫苗的速度和靈活性，并揭示了mrna治療劑是解決由新出現(xiàn)的病毒引起的流行病爆發(fā)的有力工具。開發(fā)過程的相對(duì)簡(jiǎn)單和制造平臺(tái)的靈活性可顯著加速臨床開發(fā)。因此，基于mrna的疫苗技術(shù)在covid-19大流行期間引起了廣泛關(guān)注。

5、第一種授權(quán)疫苗是由biontech與pfizer合作開發(fā)的。此疫苗的rna?bnt162b2編碼由兩個(gè)脯氨酸突變修飾以穩(wěn)定融合前構(gòu)象的全長(zhǎng)刺突蛋白。所述rna并入1-甲基-假尿苷，其抑制先天免疫感應(yīng)并增加體內(nèi)mrna翻譯，并配制在脂質(zhì)納米顆粒(lnp)中。bnt162b2以兩次30μg的劑量肌內(nèi)注射(im)施用于成人，間隔21天。

6、2/3期試驗(yàn)的結(jié)果示出了使用間隔21天施用的10μg的兩個(gè)劑量的方案在5至11歲兒童中的良好的安全性和強(qiáng)大的中和抗體反應(yīng)，此劑量比用于12歲及以上的人的30μg劑量小。接受10μg劑量的參與者的抗體反應(yīng)與之前pfizer-biontech研究中記錄的用30μg劑量免疫的16至25歲人群的抗體反應(yīng)相當(dāng)?？紤]到在5至11歲兒童中的安全性、耐受性和免疫原性，小心選擇10μg劑量作為優(yōu)選劑量。

7、因此可能出現(xiàn)這樣的情況：rna治療劑(諸如rna疫苗)將以不同劑量施用于例如不同組的患者(諸如不同年齡的患者)。與成人相比，較小的劑量的施用對(duì)于施用于較年輕的患者(諸如兒童)可能就足夠了。

8、原則上可以生產(chǎn)不同的rna制劑，其各自適合于施用不同劑量的rna。然而，這使得制造過程變得復(fù)雜，特別是因?yàn)楸仨氈苽洳煌幕旌衔铩?/p>

9、此外，提供具有高濃度rna的rna制劑對(duì)于較低劑量可能需要太多稀釋，而提供具有低濃度rna的rna制劑對(duì)于較高劑量可能需要施用高體積并且可能無(wú)法提供所需的rna穩(wěn)定性。

10、因此，需要提供適合以不同劑量施用rna而不必制備不同混合物的藥物rna制劑。此類藥物rna制劑、其制造和臨床醫(yī)生的使用還應(yīng)滿足藥物在生產(chǎn)、灌裝、穩(wěn)定性、處理和施用方面的現(xiàn)有要求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、根據(jù)本發(fā)明已經(jīng)觀察到，可以提供具有適合于施用不同劑量(劑量量)的rna并滿足藥物在生產(chǎn)、灌裝、穩(wěn)定性、處理和施用方面的現(xiàn)有要求的rna濃度(例如，在如本文所述的某些rna濃度范圍內(nèi))的單一藥物rna制劑。特別地，根據(jù)本發(fā)明已經(jīng)觀察到，可以提供這樣的單一藥物rna制劑：其允許施用不同劑量的rna，同時(shí)施用體積在適合于施用rna藥物的范圍內(nèi)，并且其提供rna所需的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，此類單一藥物rna制劑可具有一種或多種期望的穩(wěn)定性特征，例如，在一些實(shí)施方案中顯示出通過冷凍/解凍循環(huán)的穩(wěn)定性。此外，此類單一藥物rna制劑可滿足關(guān)于藥物灌裝過程的要求，并且可以允許從單一容器(諸如小瓶)施用合適的劑量數(shù)的體積提供。本發(fā)明提供了一種提供用于施用不同劑量的rna的藥物rna制劑的方法，所述方法包括以下步驟：

2、(i)確定rna施用的不同劑量，

3、(ii)確定藥物rna制劑中rna的濃度，其允許以合適的施用體積和任選藥物rna制劑的合適稀釋來(lái)施用不同劑量的rna，以及

4、(iii)確定藥物rna制劑的合適配方以確保藥物rna制劑中的rna在確定濃度下具有所需儲(chǔ)存穩(wěn)定性。

5、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差2倍或更多，并且一個(gè)劑量的最小施用體積和另一劑量的最大施用體積相差2倍或更少。

6、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差2倍或更多，并且合適的施用體積是100至400μl。

7、在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括至少兩個(gè)劑量。

8、在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括至少三個(gè)劑量。

9、在一些實(shí)施方案中，將不同劑量的rna施用于不同年齡組。

10、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差2倍或更多。

11、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差3倍或更多。

12、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差5倍或更多。

13、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差10倍或更多。

14、在一些實(shí)施方案中，一個(gè)劑量的最小施用體積和另一劑量的最大施用體積相差2倍或更少。

15、在一些實(shí)施方案中，一個(gè)劑量的最小施用體積和另一劑量的最大施用體積相差1.5倍或更少。

16、在一些實(shí)施方案中，合適的施用體積是100至400μl。

17、在一些實(shí)施方案中，合適的施用體積是150至350μl。

18、在一些實(shí)施方案中，合適的施用體積是200至300μl。

19、在一些實(shí)施方案中，任選地對(duì)于至少一個(gè)劑量以1:10或更少的倍數(shù)進(jìn)行藥物rna制劑的稀釋。

20、在一些實(shí)施方案中，任選地對(duì)于至少一個(gè)劑量以1:8或更少的倍數(shù)進(jìn)行藥物rna制劑的稀釋。

21、在一些實(shí)施方案中，任選地對(duì)于至少一個(gè)劑量以1:6或更少的倍數(shù)進(jìn)行藥物rna制劑的稀釋。

22、在一些實(shí)施方案中，在不稀釋rna的情況下施用至少一個(gè)劑量rna。

23、在一些實(shí)施方案中，在不稀釋rna的情況下施用的至少一個(gè)劑量rna包括rna的最大劑量。

24、在一些實(shí)施方案中，在稀釋rna的情況下施用至少一個(gè)劑量rna。

25、在一些實(shí)施方案中，在稀釋rna的情況下施用的至少一個(gè)劑量rna包括rna的最低劑量。

26、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑提供為多劑量制劑，其中每個(gè)多劑量制劑允許多次施用一個(gè)劑量的rna。

27、在一些實(shí)施方案中，多劑量制劑具有適合于藥物制造的灌裝體積。

28、在一些實(shí)施方案中，多劑量制劑允許施用rna的所需劑量數(shù)。

29、在一些實(shí)施方案中，rna的所需劑量數(shù)是5或更多，例如，5-20、5-15或5-10。

30、在一些實(shí)施方案中，多劑量制劑允許藥物rna制劑的任選稀釋。

31、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑以小瓶形式提供。

32、在一些實(shí)施方案中，用于施用不同劑量rna的小瓶被不同地標(biāo)記。

33、在一些實(shí)施方案中，不同的標(biāo)簽包括不同顏色的蓋子。

34、在一些實(shí)施方案中，用于施用不同劑量rna的藥物rna制劑具有均勻的rna濃度。

35、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑是疫苗。

36、在一些實(shí)施方案中，rna編碼包含抗原、其免疫原性變體，或抗原或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列。

37、在一些實(shí)施方案中，rna編碼包含sars-cov-2s蛋白、其免疫原性變體，或sars-cov-2s蛋白或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列。

38、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑用于誘導(dǎo)針對(duì)sars-cov-2的免疫反應(yīng)。

39、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑用于針對(duì)sars-cov-2的疫苗接種。

40、本發(fā)明還提供了一種用于施用不同劑量rna的藥物rna制劑的用途(或：一種用于施用來(lái)自藥物rna制劑的不同劑量rna的方法)，其包括以下步驟：

41、(i)提供藥物rna制劑，

42、(ii)施用不同劑量的rna，其中所述不同劑量的rna通過施用相同和/或不同體積的任選稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用，其中

43、選擇藥物rna制劑中rna的濃度，使得其允許以合適的施用體積和任選藥物rna制劑的合適稀釋來(lái)施用不同劑量的rna，并且

44、配制藥物rna制劑以確保藥物rna制劑中rna的所需穩(wěn)定性。

45、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差2倍或更多，并且一個(gè)劑量的最小施用體積和另一劑量的最大施用體積相差2倍或更少。

46、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差2倍或更多，并且合適的施用體積是100至400μl。

47、在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括至少兩個(gè)劑量。

48、在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括至少三個(gè)劑量。

49、在一些實(shí)施方案中，將不同劑量的rna施用于不同年齡組。

50、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差2倍或更多。

51、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差3倍或更多。

52、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差5倍或更多。

53、在一些實(shí)施方案中，rna的最低劑量和rna的最大劑量相差10倍或更多。

54、在一些實(shí)施方案中，一個(gè)劑量的最小施用體積和另一劑量的最大施用體積相差2倍或更少。

55、在一些實(shí)施方案中，一個(gè)劑量的最小施用體積和另一劑量的最大施用體積相差1.5倍或更少。

56、在一些實(shí)施方案中，合適的施用體積是100至400μl。

57、在一些實(shí)施方案中，合適的施用體積是150至350μl。

58、在一些實(shí)施方案中，合適的施用體積是200至300μl。

59、在一些實(shí)施方案中，任選地對(duì)于至少一個(gè)劑量以1:10或更少的倍數(shù)進(jìn)行藥物rna制劑的稀釋。

60、在一些實(shí)施方案中，任選地對(duì)于至少一個(gè)劑量以1:8或更少的倍數(shù)進(jìn)行藥物rna制劑的稀釋。

61、在一些實(shí)施方案中，任選地對(duì)于至少一個(gè)劑量以1:6或更少的倍數(shù)進(jìn)行藥物rna制劑的稀釋。

62、在一些實(shí)施方案中，在不稀釋rna的情況下施用至少一個(gè)劑量rna。

63、在一些實(shí)施方案中，在不稀釋rna的情況下施用的至少一個(gè)劑量rna包括rna的最大劑量。

64、在一些實(shí)施方案中，在稀釋rna的情況下施用至少一個(gè)劑量rna。

65、在一些實(shí)施方案中，在稀釋rna的情況下施用的至少一個(gè)劑量rna包括rna的最低劑量。

66、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑提供為多劑量制劑，其中每個(gè)多劑量制劑允許多次施用一個(gè)劑量的rna。

67、在一些實(shí)施方案中，多劑量制劑具有適合于藥物制造的灌裝體積。

68、在一些實(shí)施方案中，多劑量制劑允許施用rna的所需劑量數(shù)。

69、在一些實(shí)施方案中，rna的所需劑量數(shù)是5或更多，例如，5-20、5-15或5-10。

70、在一些實(shí)施方案中，多劑量制劑允許藥物rna制劑的任選稀釋。

71、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑以小瓶形式提供。

72、在一些實(shí)施方案中，用于施用不同劑量rna的小瓶被不同地標(biāo)記。

73、在一些實(shí)施方案中，不同的標(biāo)簽包括不同顏色的蓋子。

74、在一些實(shí)施方案中，用于施用不同劑量rna的藥物rna制劑具有均勻的rna濃度。

75、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑是疫苗。

76、在一些實(shí)施方案中，rna編碼包含抗原、其免疫原性變體，或抗原或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列。

77、在一些實(shí)施方案中，rna編碼包含sars-cov-2s蛋白、其免疫原性變體，或sars-cov-2s蛋白或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列。

78、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑用于誘導(dǎo)針對(duì)sars-cov-2的免疫反應(yīng)。

79、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑用于針對(duì)sars-cov-2的疫苗接種。

80、在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括約10μg和約30μg的劑量。

81、在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括約3μg、約10μg和約30μg的劑量。在一些實(shí)施方案中，不同劑量包括約3μg、約10μg、約15μg、約25μg、約30μg、約50μg和約60μg的劑量。

82、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑中rna的濃度為約0.1mg/ml。在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑中rna的濃度為約30μg/ml至約100μg/ml。在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑中rna的濃度為約50μg/ml至約100μg/ml。

83、在一些實(shí)施方案中，施用體積在約200μl至約600μl之間。

84、在一些實(shí)施方案中，施用體積在約200μl至約300μl之間。

85、在一些實(shí)施方案中，藥物rna制劑中的rna配制在約10mm?tris緩沖液、約10％蔗糖中。

86、在一些實(shí)施方案中，rna編碼包含sars-cov-2s蛋白、其免疫原性變體，或sars-cov-2s蛋白或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列，藥物rna制劑中rna的濃度為約0.1mg/ml，并且藥物rna制劑中的rna配制在約10mm?tris緩沖液、約10％蔗糖中，并且其中

87、(i)通過施用約300μl未稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用約30μg的rna的第一劑量，并且

88、(ii)通過約1:1稀釋藥物rna制劑并施用約200μl稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用約10μg的rna的第二劑量。

89、在一些實(shí)施方案中，通過約1:5.75稀釋藥物rna制劑并施用約200μl稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用約3μg的rna的第三劑量。

90、本發(fā)明還提供了一種用于施用不同劑量rna的藥物rna制劑，其中選擇藥物rna制劑中rna的濃度，使得其允許以合適的施用體積和任選藥物rna制劑的合適稀釋來(lái)施用不同劑量的rna，并且配制藥物rna制劑以確保藥物rna制劑中rna的所需穩(wěn)定性。

91、藥物rna制劑的實(shí)施方案如上所述。

92、本發(fā)明還提供了一種用于施用不同劑量rna的藥物rna制劑，其中rna編碼包含sars-cov-2s蛋白、其免疫原性變體，或sars-cov-2s蛋白或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列，藥物rna制劑中rna的濃度為約0.1mg/ml，并且藥物rna制劑中的rna配制在約10mm?tris緩沖液、約10％蔗糖中。

93、藥物rna制劑的實(shí)施方案如上所述。

94、本發(fā)明還提供了用于施用不同劑量rna的系統(tǒng)，其中系統(tǒng)包括用于施用多個(gè)不同劑量rna的多個(gè)小瓶，其中多個(gè)小瓶中的每一個(gè)包含任選不同體積的藥物rna制劑，其中選擇藥物rna制劑中rna的濃度和小瓶中藥物rna制劑的體積，使得其允許以合適的施用體積和任選藥物rna制劑的合適稀釋來(lái)施用不同劑量的rna，并且配制藥物rna制劑以確保藥物rna制劑中rna的所需穩(wěn)定性。

95、系統(tǒng)的實(shí)施方案如上所述。

96、本發(fā)明還提供了用于施用不同劑量rna的系統(tǒng)，其中系統(tǒng)包括用于施用多個(gè)不同劑量rna的多個(gè)小瓶，其中多個(gè)小瓶中的每一個(gè)包含藥物rna制劑，其中

97、rna編碼包含sars-cov-2s蛋白、其免疫原性變體，或sars-cov-2s蛋白或其免疫原性變體的免疫原性片段的氨基酸序列，藥物rna制劑中rna的濃度為約0.1mg/ml，并且藥物rna制劑中的rna配制在約10mm?tris緩沖液、約10％蔗糖中，并且其中

98、多個(gè)小瓶中的第一個(gè)用于通過施用約300μl未稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用約30μg的rna的第一劑量，并且

99、多個(gè)小瓶中的第二個(gè)用于通過約1:1稀釋藥物rna制劑并施用約200μl稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用約10μg的rna的第二劑量。

100、在一些實(shí)施方案中：

101、多個(gè)小瓶中的第一個(gè)中的藥物rna制劑的體積為約2.25ml，用于施用總共至少約6個(gè)劑量，并且

102、多個(gè)小瓶中的第二個(gè)中的藥物rna制劑的體積為約1.3ml，用于施用總共至少約10個(gè)劑量。

103、在一些實(shí)施方案中，多個(gè)小瓶中的第三個(gè)用于通過約1:5.75稀釋藥物rna制劑并施用約200μl稀釋的藥物rna制劑來(lái)施用約3μg的rna的第三劑量。

104、在一些實(shí)施方案中，多個(gè)小瓶中的第三個(gè)中的藥物rna制劑的體積為約0.4ml，用于施用總共至少約10個(gè)劑量。

105、在一些實(shí)施方案中，用于施用不同劑量rna的小瓶被不同地標(biāo)記。

106、在一些實(shí)施方案中，不同的標(biāo)簽包括不同顏色的蓋子。

107、系統(tǒng)的另外的實(shí)施方案如上所述。

108、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了某些劑型(例如，用于施用的形式)，其可例如含有特定的緩沖液和/或特定劑量的rna；在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了多組此類劑型，例如具有彼此相關(guān)(例如，諸如可例如通過稀釋實(shí)現(xiàn)的倍數(shù))的緩沖液和rna濃度。

109、在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑包含tris緩沖液(例如，沒有氯化鈉和/或氯化鉀離子)。在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑包含蔗糖。在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑不包含防腐劑。

110、在一些實(shí)施方案中，在過濾步驟，例如切向流過濾(tff)步驟期間，將適當(dāng)?shù)木彌_液(例如，如本文所述的tris緩沖液)引入到提供的藥物rna制劑中；在一些實(shí)施方案中，此類引入在無(wú)菌過濾、無(wú)菌灌裝、加蓋/壓蓋、貼標(biāo)簽、冷凍等一個(gè)或多個(gè)步驟之前。

111、在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑或其組被置于容器(例如，小瓶)中；在一些此類實(shí)施方案中，此類容器易于用注射器(例如，用附接至注射器的針頭)例如通過膜進(jìn)入。在一些實(shí)施方案中，容器是例如用橡膠塞(諸如溴丁基橡膠塞(例如，13mm溴丁基塞)密封的玻璃小瓶(例如，i型硼硅酸鹽玻璃或鋁硅酸鹽玻璃)和/或具有翻轉(zhuǎn)塑料蓋的鋁制密封件。在一些實(shí)施方案中，容器可存在于包裝中，所述包裝例如含有約5至約500個(gè)小瓶，例如約5至約200個(gè)小瓶，例如約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、10、175、180、185、190、195、200或更多個(gè)小瓶，例如約10個(gè)小瓶或例如約195個(gè)小瓶。在一些實(shí)施方案中，容器是注射器(例如，腔室和/或附接到其上的針頭)。

112、在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑已儲(chǔ)存在容器中，其中它們被放置例如特定時(shí)間段和/或在特定條件下，在一些實(shí)施方案中同時(shí)維持某些穩(wěn)定性參數(shù)(例如，膠體穩(wěn)定性、多分散性、ζ電位、rna完整性等中的一種或多種)。在一些實(shí)施方案中，此類儲(chǔ)存條件可包括在約-20℃至約2-8℃范圍內(nèi)的溫度。在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑在儲(chǔ)存給定時(shí)間后(例如，儲(chǔ)存1、2、3或4周，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個(gè)月或1年或更長(zhǎng)時(shí)間后)和/或在一組給定條件下示出更高的穩(wěn)定性，這是在不同緩沖液(例如，pbs緩沖液)中的相同rna/lnp組合物的其他可比(例如，在相同濃度和/或溫度下，和/或在相同狀態(tài)下(例如，冷凍或液體))制劑中觀察到的。

113、在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑以約700至約1600l范圍內(nèi)的成品溶液的商業(yè)批量規(guī)模制造，其在一些實(shí)施方案中可對(duì)應(yīng)于大約300,000-700,000個(gè)小瓶(例如，在2.25ml灌裝體積的情況下)。

114、在一些實(shí)施方案中，含有提供的藥物rna制劑的小瓶(例如，單劑量小瓶或多劑量小瓶)可在冷凍狀態(tài)下運(yùn)輸，例如，在一些實(shí)施方案中，在具有干冰的保溫容器中的超冷條件下，或在一些實(shí)施方案中，在-25℃至-15℃(-13℉至5℉)下。在一些實(shí)施方案中，含有提供的藥物rna制劑的小瓶(例如，單劑量小瓶或多劑量小瓶)可在-90℃至-60℃(-130℉至-76℉)或在冷藏溫度(例如，2℃至8℃(35℉至46℉))下運(yùn)輸。

115、在一些實(shí)施方案中，本文所述的冷凍藥物rna制劑可在冷藏溫度(例如2℃至8℃)下儲(chǔ)存以例如解凍，并儲(chǔ)存延長(zhǎng)的時(shí)間段，例如至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周或更長(zhǎng)時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，本文所述的解凍的藥物rna制劑可儲(chǔ)存多至10周。或者，在一些實(shí)施方案中，本文所述的冷凍藥物rna制劑可儲(chǔ)存在-90℃至-60℃(-130℉至-76℉)的超低溫冰箱中。在一些實(shí)施方案中，可能需要避免將本文所述的冷凍藥物rna制劑儲(chǔ)存在-25℃至-15℃(-13℉至5℉)下。一旦解凍本文所述的冷凍藥物rna制劑，就不應(yīng)重新冷凍它們。在一些實(shí)施方案中，本文所述的冷凍藥物rna制劑可在室溫(例如，高達(dá)25℃(77℉))下解凍，例如在一些實(shí)施方案中解凍30分鐘。

116、在一些實(shí)施方案中，含有提供的藥物rna制劑的小瓶(例如，單劑量小瓶或多劑量小瓶)可在冷藏溫度(例如，2℃至8℃)下運(yùn)輸。在一些此類實(shí)施方案中，可能需要在此類小瓶到達(dá)時(shí)將其儲(chǔ)存在冷藏溫度(例如，2℃至8℃)下。

117、在一些實(shí)施方案中，本文所述的提供的藥物rna制劑可在稀釋或使用之前在室溫(例如，8℃至25℃(46℉至77℉))下儲(chǔ)存總共12小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，在稀釋或首次使用后，本文所述的此類藥物rna制劑可維持在冷藏溫度和室溫之間(例如，2℃至25℃(35℉至77℉)之間)。在一些實(shí)施方案中，提供的藥物rna制劑在稀釋或首次使用后(例如，在多劑量小瓶的情況下)可在它們被丟棄前在此類溫度下維持約12小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，如本文所述的稀釋的藥物rna制劑可在首次使用后在它們被丟棄前在此類溫度下維持約6小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)劑量的本文所述的rna組合物在如本文所述的條件下儲(chǔ)存和/或運(yùn)輸后施用。

118、在一些實(shí)施方案中，本文所述的rna是單鏈rna，其在進(jìn)入細(xì)胞(例如，接受者的細(xì)胞)后可翻譯成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。除了編碼包含具有生物活性的肽或多肽(例如，藥學(xué)活性肽或多肽，諸如抗原序列(包含表位的肽或多肽))的氨基酸序列的氨基酸序列的野生型或密碼子優(yōu)化的序列之外，rna可含有一種或多種優(yōu)化以實(shí)現(xiàn)rna在穩(wěn)定性和翻譯效率方面的最大功效的結(jié)構(gòu)元件(5'帽、5'utr、3'utr、poly(a)尾)。在一些實(shí)施方案中，rna含有所有這些元件。在一些實(shí)施方案中，β-s-arca(d1)(m27,2'-ogppspg)或m27,3'-ogppp(m12'-o)apg可用作rna原料藥的5'末端處的特定加帽結(jié)構(gòu)。作為5'-utr序列，在一些實(shí)施方案中，可使用人α-珠蛋白mrna的5'-utr序列，其任選地具有增加翻譯效率的優(yōu)化的“kozak序列”。作為3'-utr序列，在一些實(shí)施方案中，可使用放置在編碼序列與poly(a)尾之間以確保更高的最大蛋白質(zhì)水平和延續(xù)的mrna持久性的衍生自“分裂的氨基末端增強(qiáng)子”(aes)mrna(稱為f)和線粒體編碼的12s核糖體rna(稱為i)的兩個(gè)序列元件的組合(fi元件)。這些通過賦予rna穩(wěn)定性和增加總蛋白質(zhì)表達(dá)的序列的離體選擇過程來(lái)鑒定(參見wo?2017/060314，其以引用方式并入本文)?；蛘撸?'-utr可以是人β-珠蛋白mrna的兩個(gè)重新迭代的3'-utr。另外或或者，在一些實(shí)施方案中，poly(a)尾可包括至少100個(gè)腺苷殘基(包括例如，至少110個(gè)腺苷殘基、至少120個(gè)腺苷殘基、130個(gè)腺苷殘基或更長(zhǎng))的長(zhǎng)度。在一些實(shí)施方案中，poly(a)尾可包括約100至約150個(gè)腺苷殘基的長(zhǎng)度。在一些實(shí)施方案中，poly(a)尾可包括中斷的poly(a)尾。例如，在一些此類實(shí)施方案中，可使用長(zhǎng)度測(cè)量為110個(gè)核苷酸的poly(a)尾，其由一段30個(gè)腺苷殘基，然后是10個(gè)核苷酸的接頭序列(隨機(jī)核苷酸)和另外70個(gè)腺苷殘基組成。此poly(a)尾序列被設(shè)計(jì)以增強(qiáng)rna穩(wěn)定性和翻譯效率。

119、本文所述的rna可編碼包含具有生物活性的肽或多肽(例如，藥學(xué)活性肽或多肽，諸如抗原序列)的氨基酸序列的氨基酸序列。編碼的氨基酸序列可包含除具有生物活性的肽或多肽的氨基酸序列之外的氨基酸序列。此類其他氨基酸序列可支持具有生物活性的肽或多肽的功能或活性。在一些實(shí)施方案中，此類其他氨基酸序列包括增強(qiáng)抗原加工和/或呈遞的氨基酸序列?；蛘呋蛄硗?，此類其他氨基酸序列包括破壞免疫耐受性的氨基酸序列。